ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಯೀಸ್ಟ್ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳು: ಜೀವಂತ ಕೋಶಗಳ ಎಣಿಕೆ ಮತ್ತು ಉಸಿರಾಟದ ಸಮಯಮಾಪನ

ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದ ಮೇಜಿನ ಮೇಲೆ ಎರಡು ನಳಿಕೆಗಳಿವೆ. ಎರಡೂ ನೀಲಿಯಾಗಿವೆ. ಒಂದರಲ್ಲಿ, ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದಲ್ಲಿ ಕಾಣುವ ನೀಲಿ ಕೋಶಗಳು ಸತ್ತ ಯೀಸ್ಟ್ ಅನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ. ಇನ್ನೊಂದರಲ್ಲಿ, ನೀಲಿಯಿಂದ ವರ್ಣರಹಿತವಾಗುವ ನಳಿಕೆ ಯೀಸ್ಟ್ ಜೀವಂತವಾಗಿದ್ದು ಉಸಿರಾಟ ನಡೆಸುತ್ತಿದೆ ಎಂಬುದನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಬಣ್ಣಕ ಒಂದೇ, ಆದರೆ ಫಲಿತಾಂಶಗಳ ಅರ್ಥ ಪರಸ್ಪರ ವಿರುದ್ಧ. ಈ ಎರಡು ಪರೀಕ್ಷೆಗಳನ್ನು ಗೊಂದಲಗೊಳಿಸಿದರೆ ಪ್ರತಿಯೊಂದು ತೀರ್ಮಾನವೂ ತಲೆಕೆಳಗಾಗುತ್ತದೆ.

ಈ ವ್ಯತ್ಯಾಸವೇ ಇಡೀ ಲೇಖನದ ಸಾರ. ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಒಂದು ಉತ್ಕರ್ಷಣ–ಅಪಚಯ ಬಣ್ಣಕ: ಉತ್ಕರ್ಷಿತ ಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ ಅದು ನೀಲಿಯಾಗಿರುತ್ತದೆ; ಅಪಚಯಗೊಂಡಾಗ ವರ್ಣರಹಿತ ಲ್ಯೂಕೊಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಆಗುತ್ತದೆ. ಜೀವಕ್ಷಮತೆ ಎಣಿಕೆಯು ಈ ರಸಾಯನಿಕ ಗುಣವನ್ನು ಅಲ್ಪಾವಧಿಯ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕ ವೀಕ್ಷಣೆಯಲ್ಲಿ ಬಳಸುತ್ತದೆ. ಉಸಿರಾಟ ಪ್ರಯೋಗವು ಅದನ್ನೇ ಒಟ್ಟು ಮಿಶ್ರಣದಲ್ಲಿ ಸಮಯವನ್ನು ಅಳೆಯುವ ಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಬಳಸುತ್ತದೆ. ಪ್ರತಿಯೊಂದಕ್ಕೂ ಅದರದೇ ವಿಧಾನ, ನಿಯಂತ್ರಣಗಳು ಮತ್ತು ವಿಮರ್ಶಾತ್ಮಕ ಪರಿಶೀಲನೆ ಬೇಕು.

ಜೀವಕ್ಷಮತೆ ಎಣಿಕೆ: ಅಲ್ಪಕಾಲ ಬಣ್ಣ ಹಚ್ಚಿ, ತಕ್ಷಣ ವೀಕ್ಷಿಸಿ

ಬಿಯರ್ ತಯಾರಿಕೆಯಲ್ಲಿ ಬಳಸುವ ವಿಧಾನವು ಅತ್ಯಂತ ಪ್ರಮಾಣೀಕೃತ ರೂಪವಾಗಿದೆ. 2% ಸೋಡಿಯಂ ಸಿಟ್ರೇಟ್‌ನಲ್ಲಿ 0.01% w/v ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ತಯಾರಿಸಿ, ಅದನ್ನು ಯೀಸ್ಟ್ ನಿಲಂಬನದೊಂದಿಗೆ 1:1 ಅನುಪಾತದಲ್ಲಿ ಬೆರೆಸಿ, ನಿಗದಿತ ಅಲ್ಪಾವಧಿಯ ನಂತರ ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಿ. ಪ್ರಕಟಿತ ಸಮಯಾವಧಿಗಳು Brewing Science Institute ಕೈಪಿಡಿಯಲ್ಲಿ 1 ರಿಂದ 2 ನಿಮಿಷಗಳಾಗಿದ್ದರೆ, ಸಂಶೋಧನಾ ವಿಧಾನಗಳಲ್ಲಿ ಸುಮಾರು 5 ನಿಮಿಷಗಳಾಗಿವೆ; OIV ವೈನ್ ಸೂಕ್ಷ್ಮಜೀವಶಾಸ್ತ್ರ ವಿಧಾನವು 10 ನಿಮಿಷಗಳೊಳಗೆ ಪರೀಕ್ಷಿಸಲು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಎಣಿಕೆ ಮಿಶ್ರಣದಲ್ಲಿ ಬಣ್ಣಕದ ಅಂತಿಮ ಸಾಂದ್ರತೆ ಸುಮಾರು 0.005% ಆಗುತ್ತದೆ. ಸುಧಾರಿತ Neubauer ಎಣಿಕೆ ಕೋಷ್ಠಕ್ಕೆ ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು ತುಂಬಿ, ಸುಮಾರು 400x ವರ್ಧನೆಯಲ್ಲಿ ಗಾಢ ನೀಲಿ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಜೀವಕ್ಷಮವಲ್ಲದವುಗಳೆಂದೂ, ಬಣ್ಣ ಹತ್ತದ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಜೀವಕ್ಷಮವುಗಳೆಂದೂ ವರ್ಗೀಕರಿಸಿ. OIV ವಿಧಾನದಲ್ಲಿ ತಿಳಿ ನೀಲಿ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಜೀವಂತವೆಂದು ಎಣಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ; ಇದು ಕೆಳಗೆ ಚರ್ಚಿಸಲಾದ ವೈಯಕ್ತಿಕ ನಿರ್ಣಯದ ಸಮಸ್ಯೆಯ ಸುಳಿವನ್ನು ಈಗಾಗಲೇ ನೀಡುತ್ತದೆ.

ಕೋಶ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಕೋಷ್ಠದ ಜ್ಯಾಮಿತಿಯಿಂದ ಲೆಕ್ಕಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಮಧ್ಯದಲ್ಲಿರುವ ಸಂಪೂರ್ಣ 1 mm ಚೌಕವನ್ನು ಎಣಿಸಿದಾಗ, ಪ್ರತಿ mL ಗೆ ಕೋಶಗಳ ಸಂಖ್ಯೆ N ಗುಣಿಸು ದುರ್ಬಲೀಕರಣ ಗುಣಕ ಗುಣಿಸು 10^4 ಆಗುತ್ತದೆ; ಇಲ್ಲಿ N ಎಂದರೆ ಆ ಪ್ರದೇಶದಲ್ಲಿ ಎಣಿಸಿದ ಕೋಶಗಳ ಸಂಖ್ಯೆ. ಇದನ್ನು ASBC ಯೀಸ್ಟ್ ವಿಧಾನಗಳಲ್ಲಿ ವಿವರಿಸಲಾಗಿದೆ. ಜೀವಕ್ಷಮತೆಯ ಲೆಕ್ಕ ಇನ್ನೂ ಸರಳ: ಬಣ್ಣ ಹತ್ತದ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಒಟ್ಟು ಕೋಶಗಳಿಂದ ಭಾಗಿಸಿ, 100 ರಿಂದ ಗುಣಿಸಿ. FEMS ಬಿಯರ್ ತಯಾರಿಕಾ ಹೋಲಿಕೆ ಅಧ್ಯಯನ ಮತ್ತು OIV ಪದ್ಧತಿಯಂತೆ, ಜೀವಕ್ಷಮತೆಯ ಅಂದಾಜಿಗಾಗಿ ಸುಮಾರು 400 ಕೋಶಗಳನ್ನು ಎಣಿಸಿ. ಒಂದೇ ಗಡಿ ನಿಯಮವನ್ನು ನಿರಂತರವಾಗಿ ಅನುಸರಿಸಿ; ಉದಾಹರಣೆಗೆ, ಕೆಳಗಿನ ಮತ್ತು ಎಡಗಿನ ಜಾಲರೇಖೆಗಳ ಮೇಲಿರುವ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸಿ, ಮೇಲಿನ ಮತ್ತು ಬಲಗಿನ ರೇಖೆಗಳ ಮೇಲಿರುವ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಹೊರಗಿಡಿ.

ಎಣಿಕೆ ಆರಂಭಿಸುವ ಮೊದಲು ಮೊಗ್ಗುಗಳಿಗೆ ಒಂದು ನಿಯಮ ಬೇಕು. ಸಾಮಾನ್ಯ ಪದ್ಧತಿಯಲ್ಲಿ, ಮೊಗ್ಗು ಮಾತೃಕೋಶದ ಸುಮಾರು ಅರ್ಧದಷ್ಟು ಗಾತ್ರವನ್ನು ತಲುಪಿದಾಗ ಅದನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಕೋಶವಾಗಿ ಎಣಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ; ಅದಕ್ಕಿಂತ ಚಿಕ್ಕದಿದ್ದರೆ ಮಾತೃಕೋಶದೊಂದಿಗೆ ಎಣಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಯಾವ ನಿಯಮವನ್ನು ಆರಿಸಿದರೂ, ಅದನ್ನು ಪ್ರತಿಯೊಂದು ಚೌಕಕ್ಕೂ ಅನ್ವಯಿಸಿ ಮತ್ತು ಮುಂದಿನ ವ್ಯಕ್ತಿಯೂ ಅದನ್ನೇ ಅನುಸರಿಸುವಂತೆ ಕಾರ್ಯಪತ್ರದಲ್ಲಿ ಬರೆಯಿರಿ.

ಎಣಿಕೆ ಕಾರ್ಯಪತ್ರ (ಇದನ್ನು ಮುದ್ರಿಸಿ)

ಈ ಕಾರ್ಯಪತ್ರವನ್ನು ಈ ಲೇಖನಕ್ಕಾಗಿ ಮೂಲತಃ ರಚಿಸಲಾಗಿದೆ. ಅದನ್ನು ನೋಟ್‌ಪುಸ್ತಕದಲ್ಲಿ ನಕಲಿಸಿ ಅಥವಾ ಪ್ರತಿ ಮಾದರಿಗೆ ಒಂದನ್ನು ಮುದ್ರಿಸಿ.

ಜೀವಕ್ಷಮತೆ (%) = 100 x ಬಣ್ಣ ಹತ್ತದವು / (ಬಣ್ಣ ಹತ್ತದವು + ಗಾಢ ನೀಲಿ). ಪ್ರತಿ mL ಗೆ ಒಟ್ಟು ಕೋಶಗಳು = N x ದುರ್ಬಲೀಕರಣ ಗುಣಕ x 10^4; ಇಲ್ಲಿ N ಅನ್ನು ನಿಗದಿತ ಕೋಷ್ಠ ಪ್ರದೇಶದಿಂದ ಪಡೆಯಬೇಕು. ಫಲಿತಾಂಶದ ಪಕ್ಕದಲ್ಲಿ ಬಣ್ಣ ಹಚ್ಚುವ ಅವಧಿಯನ್ನು ದಾಖಲಿಸಿ, ಏಕೆಂದರೆ ಸಮಯದ ವಿವರ ಇಲ್ಲದ ಜೀವಕ್ಷಮತೆಯ ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಪುನರುತ್ಪಾದಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಿಲ್ಲ.

ಜೀವಕ್ಷಮತೆಯ ಸಂಖ್ಯೆಗಳು ಏಕೆ ಬದಲಾಗುತ್ತವೆ

ಸಮಯವು ಮೊದಲ ಅಡ್ಡಿಪರಿಣಾಮ, ಮತ್ತು ಅದು ಎರಡೂ ದಿಕ್ಕುಗಳಲ್ಲಿ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ. ಚಯಾಪಚಯದಲ್ಲಿ ಸಕ್ರಿಯವಾಗಿರುವ ಕೋಶಗಳು ಬಣ್ಣಕವನ್ನು ಅಪಚಯಗೊಳಿಸುತ್ತವೆ. ಆದ್ದರಿಂದ ಬೇಗನೆ ವೀಕ್ಷಿಸಿದರೆ, ಜೀವಂತ ಕೋಶಗಳು ಅಪಚಯವನ್ನು ಪೂರ್ಣಗೊಳಿಸುವ ಮೊದಲೇ ಅವುಗಳನ್ನು ಸತ್ತವುಗಳೆಂದು ತಪ್ಪಾಗಿ ವರ್ಗೀಕರಿಸಬಹುದು. ಆದರೆ ದೀರ್ಘಕಾಲದ ಸಂಪರ್ಕವೇ ವಿಷಕಾರಿಯಾಗಿದ್ದು, ನಿಜವಾಗಿಯೂ ಹಾನಿಗೊಂಡ ನೀಲಿ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ; ಹೀಗಾಗಿ ಅದು ಸಾವನ್ನು ತಪ್ಪಾಗಿ ಸೂಚಿಸುವ ಬಣ್ಣ ಹತ್ತುವಿಕೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ. ಆದ್ದರಿಂದ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯ ಬೋಧನಾ ವಿಧಾನವೊಂದು 5 ನಿಮಿಷಗಳೊಳಗೆ ಎಣಿಕೆ ಮಾಡಲು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ; ಇದನ್ನು ವಿಸ್ಕಾನ್ಸಿನ್ ಯೀಸ್ಟ್ ಬೋಧನಾ ವಿಧಾನದಲ್ಲಿ ದಾಖಲಿಸಲಾಗಿದೆ. ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಆಧಾರಿತ ವರ್ಗೀಕರಣವು ಸಮಯವನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿದೆ ಎಂಬುದೇ ಎಚ್ಚರಿಕೆಯ ನಿರೂಪಣೆ; ಆದ್ದರಿಂದ ಒಂದು ಅಲ್ಪಾವಧಿಯನ್ನು ನಿಗದಿಪಡಿಸಿ, ಸರಣಿಯ ಪ್ರತಿಯೊಂದು ಮಾದರಿಗೂ ಅದನ್ನೇ ಸ್ಥಿರವಾಗಿ ಪಾಲಿಸಿ.

ಕಡಿಮೆ ಜೀವಕ್ಷಮತೆಯ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ ಎರಡನೆಯ ಪಕ್ಷಪಾತವಿದೆ. ಸುಮಾರು 80% ಕ್ಕಿಂತ ಕಡಿಮೆ ಜೀವಕ್ಷಮತೆಯಿರುವಾಗ ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ನಿಜವಾದ ಜೀವಕ್ಷಮತೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಾಗಿ ಅಂದಾಜಿಸಬಹುದು ಎಂದು ಪ್ರಮಾಣೀಕೃತ ವಿಧಾನ ಎಚ್ಚರಿಸುತ್ತದೆ, ಏಕೆಂದರೆ ಇನ್ನೂ ಬಣ್ಣಕವನ್ನು ಅಪಚಯಗೊಳಿಸಬಲ್ಲ ಕೋಶಗಳು ಸಂತಾನೋತ್ಪತ್ತಿ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಉಳಿಸಿಕೊಂಡಿರಬೇಕೆಂದಿಲ್ಲ. ಜೀವಕ್ಷಮತೆ ಬಹಳ ಕುಸಿದಾಗ ಇದೇ ಅವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹತೆ ಕಂಡುಬರುತ್ತದೆ ಎಂದು ಬಿಯರ್ ತಯಾರಿಕಾ ಸಾಹಿತ್ಯವೂ ವಿವರಿಸುತ್ತದೆ. ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಅನ್ನು ತ್ವರಿತವಾದ, ಸರಿಸುಮಾರು ಅಂದಾಜು ಎಂದು ಪರಿಗಣಿಸಿ. ಕಲ್ಚರ್ ಅನ್ನು ಮತ್ತೆ ಬಿಯರ್ ತಯಾರಿಕೆಗೆ ಸೇರಿಸುವಂತಹ ಕಡಿಮೆ ಜೀವಕ್ಷಮತೆಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಪ್ರಮುಖ ನಿರ್ಧಾರಗಳನ್ನು ಪ್ಲೇಟ್ ಎಣಿಕೆಗಳು ಅಥವಾ ಪೂರಕ ಬಣ್ಣಕದಿಂದ ದೃಢಪಡಿಸಿ.

ಮಾದರಿ ಮಾಧ್ಯಮದ ಪರಿಣಾಮಗಳು ಮೂರನೆಯವು. OIV ವಿಧಾನವು ಸುಮಾರು pH 4.6 ನಲ್ಲಿ ನಡೆಯುತ್ತದೆ. ಕಡಿಮೆ pH ಇರುವ, ಬಲವಾದ ಬಫರ್ ಸಾಮರ್ಥ್ಯದ ಮಾದರಿಗಳು ಬಣ್ಣಕದ ಸರಿಯಾದ ವರ್ತನೆಯನ್ನು ತಡೆಯುತ್ತವೆ ಎಂದು ಅದು ಎಚ್ಚರಿಸುತ್ತದೆ. ಸಕ್ಕರೆ 100 g/L ಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿರುವಾಗ ಕೋಶಗಳು ತಪ್ಪು ಅಭಿಪ್ರಾಯ ನೀಡುವಷ್ಟು ತಿಳಿ ನೀಲಿಯಾಗಿ ಕಾಣುವುದರಿಂದ, ಅಂಥ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ ಈ ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ಬಳಸದಂತೆ ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಬಣ್ಣ ಹಚ್ಚುವಿಕೆಯ pH ಅನ್ನು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕವಾಗಿ ಹೋಲಿಸಿದಾಗ, ಪರೀಕ್ಷಿಸಿದ ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿ ಸಂವೇದನಶೀಲತೆ ಗಣನೀಯವಾಗಿ ಬದಲಾಗಿತ್ತು; ಇದು pH ಅವಲಂಬಿತ ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ವಿಧಾನದ ಅಧ್ಯಯನಕ್ಕೆ ಹೊಂದಿಕೆಯಾಗುತ್ತದೆ. ಅವಶೇಷಗಳು ಮತ್ತೊಂದು ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಬಲೆ: ಅಶುದ್ಧ ಮ್ಯಾಶ್‌ಗಳಲ್ಲಿನ ಬಣ್ಣ ಹತ್ತಿದ ಕಣಗಳು ಸತ್ತ ಕೋಶಗಳಂತೆ ಕಾಣುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಪರೀಕ್ಷಕರ ನಡುವಿನ ವ್ಯತ್ಯಾಸವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತವೆ.

ಈ ವ್ಯತ್ಯಾಸವನ್ನು ಅಳೆಯಲಾಗಿದೆ; ಇದು ಕೇವಲ ಅನುಭವಾಧಾರಿತ ಹೇಳಿಕೆಯಲ್ಲ. FEMS ಯೀಸ್ಟ್ ಹೋಲಿಕೆಯಲ್ಲಿ ವರದಿಯಾದ ಆರು ತಿಂಗಳ ಬಿಯರ್ ತಯಾರಿಕಾ ಪ್ರಯೋಗದಲ್ಲಿ, ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಬಳಸಿ ಮಾಡಿದ ಜೋಡಿ ಅಳತೆಗಳ ಸರಾಸರಿ ಪ್ರಮಾಣಿತ ವಿಚಲನ 6.1% ಆಗಿತ್ತು; ಆಕ್ಸೊನಾಲ್ ಫ್ಲೋ ಸೈಟೊಮೆಟ್ರಿಯಲ್ಲಿ ಅದು 0.2% ಆಗಿತ್ತು. ಒಂದೇ ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ ಇಬ್ಬರು ಪರೀಕ್ಷಕರ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು 13 ಶೇಕಡಾವಾರು ಅಂಶಗಳವರೆಗೆ ಭಿನ್ನವಾಗಿದ್ದವು. ಜೀವಕ್ಷಮತೆ ವಿಧಾನಗಳ 2023 ರ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ ಹೋಲಿಕೆಯು ಫ್ಲೂರೆಸೆನ್ಸ್ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕ ವೀಕ್ಷಣೆ ಮತ್ತು ಫ್ಲೋ ಸೈಟೊಮೆಟ್ರಿ ಗಣನೀಯವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚು ನಿಖರವೆಂದು ಕಂಡುಕೊಂಡಿತು; ಜೊತೆಗೆ ಕಾರ್ಯಕ್ಷಮತೆ ಪ್ರಭೇದ ಮತ್ತು ಮಾದರಿ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿದೆ ಎಂಬುದನ್ನೂ ತೋರಿಸಿತು. Painting ಮತ್ತು Kirsop (PMID 24430080) ಅವರ ಮೂಲಭೂತ ವಿಧಾನ ವಿವರಣೆಯು ಇನ್ನೂ ಆಧಾರ ಉಲ್ಲೇಖವಾಗಿದೆ. ಇನ್ನಷ್ಟು ವ್ಯಾಪಕವಾದ ಯೀಸ್ಟ್ ಜೀವಕ್ಷಮತೆ ಮತ್ತು ಜೀವಚಟುವಟಿಕೆ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳ ವಿಮರ್ಶೆಯು (PMID 25154541) ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಅನ್ನು ನಿರ್ಣಾಯಕ ಪರೀಕ್ಷೆಯ ಬದಲು ಪೂರಕ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳ ನಡುವೆ ಇರಿಸುತ್ತದೆ. ಇಲ್ಲಿ ಟ್ರೈಪಾನ್ ಬ್ಲೂ ಬಳಸುವುದೇ ಸ್ವಯಂ ಉತ್ತಮ ಆಯ್ಕೆಯಾಗುವುದಿಲ್ಲ: ಅದು ಪೊರೆಯ ಸಮಗ್ರತೆ ಕಳೆದುಹೋಗಿರುವುದನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ; ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಬಣ್ಣಕದ ಒಳಗ್ರಹಣ ಮತ್ತು ಅಪಚಯ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಆದ್ದರಿಂದ ಒತ್ತಡಕ್ಕೆ ಒಳಗಾದ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಈ ಎರಡು ಬಣ್ಣಕಗಳು ವಿಭಿನ್ನವಾಗಿ ವರ್ಗೀಕರಿಸಬಹುದು.

ಉಸಿರಾಟ ಪ್ರಯೋಗ: ನೀಲಿ ಬಣ್ಣ ಕಣ್ಮರೆಯಾಗುವ ಸಮಯವನ್ನು ಅಳೆಯಿರಿ

ಎರಡನೆಯ ಪರೀಕ್ಷೆಯಲ್ಲಿ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕವನ್ನು ಬಳಸುವುದೇ ಇಲ್ಲ. ಯೀಸ್ಟ್, ಗ್ಲೂಕೋಸ್ ಮತ್ತು ದುರ್ಬಲ ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಮುಚ್ಚಿದ ನಳಿಕೆಯಲ್ಲಿ ಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ; ನೀಲಿ ಬಣ್ಣ ಕಣ್ಮರೆಯಾಗಲು ಎಷ್ಟು ಸಮಯ ಬೇಕು ಎಂಬುದನ್ನು ಗಡಿಯಾರದಿಂದ ಅಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ. ಕೋಶಗಳು ಚಯಾಪಚಯ ನಡೆಸಿದಂತೆ, ನೀಲಿ ಬಣ್ಣಕವನ್ನು ಅದರ ವರ್ಣರಹಿತ ರೂಪಕ್ಕೆ ಪರಿವರ್ತಿಸುವ ಅಪಚಾಯಕ ಸಮತುಲ್ಯಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುತ್ತವೆ; ಅದೇ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಕರಗಿರುವ ಆಮ್ಲಜನಕವು ಅದನ್ನು ಮತ್ತೆ ಉತ್ಕರ್ಷಿಸುತ್ತದೆ. ಕೋಶಗಳು ಆಮ್ಲಜನಕದ ಮಟ್ಟವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿದ ನಂತರ, ಒಟ್ಟು ಅಪಚಯವು ಮೇಲುಗೈ ಸಾಧಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನಳಿಕೆಯ ಬಣ್ಣ ಕಳೆದುಹೋಗುತ್ತದೆ. ಆದ್ದರಿಂದ ಅಂತಿಮ ಬಿಂದುವು ಉಸಿರಾಟ, ಬಣ್ಣಕದ ಸಾಂದ್ರತೆ ಮತ್ತು ಆಮ್ಲಜನಕದ ಲಭ್ಯತೆಯ ನಡುವಿನ ಸಮತೋಲನವನ್ನು ಪ್ರತಿಬಿಂಬಿಸುತ್ತದೆ. ಅದನ್ನು ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಅಪಚಯ ಅಥವಾ ಬಣ್ಣ ನಿವಾರಣೆಯ ಸಮಯ ಎಂದು ವರದಿ ಮಾಡಬೇಕು; ನೇರವಾದ ಅಣು ಆಮ್ಲಜನಕ ಬಳಕೆಯ ದರ ಎಂದು ಅಲ್ಲ.

ಸಮಯವು ಅನುಕೂಲಕರ ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿರಲು, ಜೀವಕ್ಷಮತೆ ಪರೀಕ್ಷೆಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ದುರ್ಬಲ ಬಣ್ಣಕವನ್ನು ಬಳಸಿ. AQA A ಮಟ್ಟದ ಅಗತ್ಯ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಕೈಪಿಡಿಯು ಇದನ್ನು ಚೆನ್ನಾಗಿ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸುತ್ತದೆ: ಸುಮಾರು 30 C ಗೆ ಬಿಸಿಮಾಡಿದ 100 mL ನೀರಿಗೆ 1 g ಗ್ಲೂಕೋಸ್, ಬಳಕೆಗೆ ತಕ್ಷಣ ಮೊದಲು ಸೇರಿಸುವ 5 g ಒಣ ಯೀಸ್ಟ್, ಮತ್ತು 1% ಮೂಲ ದ್ರಾವಣದ 0.1 mL ಅನ್ನು 100 mL ಗೆ ದುರ್ಬಲೀಕರಿಸಿ ತಯಾರಿಸಿದ ಸುಮಾರು 0.001% ಕಾರ್ಯ ಬಣ್ಣಕ ದ್ರಾವಣ. 2 mL ಯೀಸ್ಟ್–ಗ್ಲೂಕೋಸ್ ನಿಲಂಬನವನ್ನು 2 mL ಕಾರ್ಯ ಬಣ್ಣಕ ದ್ರಾವಣದೊಂದಿಗೆ ಬೆರೆಸಿ, ಪರೀಕ್ಷಾ ತಾಪಮಾನಕ್ಕೆ ಸಮತೋಲನಗೊಳಿಸಿ, ಒಮ್ಮೆ 10 ಸೆಕೆಂಡುಗಳ ಕಾಲ ಅಲುಗಾಡಿಸಿ, ಸಮಯಮಾಪಕವನ್ನು ಆರಂಭಿಸಿ, ಮತ್ತೆ ಅಲುಗಾಡಿಸಬೇಡಿ. ಅಲುಗಾಡಿಸುವುದು ಆಮ್ಲಜನಕವನ್ನು ಮತ್ತೆ ಸೇರಿಸಿ ನಳಿಕೆಯನ್ನು ಪುನಃ ನೀಲಿಯಾಗಿಸುತ್ತದೆ; ಇದು ವಿಧಾನದಿಂದ ಉಂಟಾಗುವ ಅತಿದೊಡ್ಡ ಕೃತಕ ಪರಿಣಾಮ. ಈ ತಯಾರಿಕೆಯ ಬಣ್ಣವು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ 35 C ನಲ್ಲಿ ಸುಮಾರು 5 ನಿಮಿಷಗಳೊಳಗೆ ಕಳೆದುಹೋಗಬೇಕು ಎಂದು AQA ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಪ್ರಯೋಗದ ಸರಾಸರಿ ಸಮಯಗಳು 20 C ನಲ್ಲಿ 275 s, 35 C ನಲ್ಲಿ 128 s ಮತ್ತು 45 C ನಲ್ಲಿ 145 s ಆಗಿದ್ದವು. ಇವು ಒಂದು ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ಉದಾಹರಣೆಗಳೇ ಹೊರತು ಸಾರ್ವತ್ರಿಕ ಮಾನದಂಡಗಳಲ್ಲ. ನಿಯಂತ್ರಿತ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಅಪಚಯ ದರ ಮತ್ತು ಚಯಾಪಚಯದಲ್ಲಿ ಸಕ್ರಿಯವಾಗಿರುವ ಯೀಸ್ಟ್ ನಡುವಿನ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ ಸಂಬಂಧಕ್ಕೆ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಅಪಚಯ ಅಧ್ಯಯನಗಳು ಬೆಂಬಲ ನೀಡುತ್ತವೆ. ಅವುಗಳಲ್ಲಿ PMID 25773544 ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಸೂಚಿಸಲಾದ ಅಧ್ಯಯನ ಮತ್ತು Yeast (2014) ನಲ್ಲಿನ ಕ್ರಿಯಾವಿಧಿಯ ಅಧ್ಯಯನವೂ ಸೇರಿವೆ.

ಸಮಯಾನುಸಾರ ಪ್ರಾತ್ಯಕ್ಷಿಕೆ (ಮೂಲ ರಚನೆ)

ಕೆಳಗಿನ ಕೋಷ್ಟಕವು ಮೇಲೆ ವಿವರಿಸಿದ AQA ಶೈಲಿಯ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಬಳಸಿ ಈ ಲೇಖನಕ್ಕಾಗಿ ಸಿದ್ಧಪಡಿಸಿದ ಮೂಲ ಪ್ರಾತ್ಯಕ್ಷಿಕೆಯಾಗಿದೆ: 2 mL ಯೀಸ್ಟ್–ಗ್ಲೂಕೋಸ್ ಮಿಶ್ರಣಕ್ಕೆ ಸುಮಾರು 0.001% ಸಾಂದ್ರತೆಯ 2 mL ಕಾರ್ಯ ಬಣ್ಣಕ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ, ಒಮ್ಮೆ 10 ಸೆಕೆಂಡುಗಳ ಕಾಲ ಅಲುಗಾಡಿಸಿ, ನಂತರ ಅಲುಗಾಡಿಸದೆ ಕಾವುಕೊಡುವುದು. ನಮೂದುಗಳು ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿಗಳ ತಂಡ ದಾಖಲಿಸಬೇಕಾದ ಸ್ವರೂಪದಲ್ಲಿರುವ ಉದಾಹರಣೆಯ ಅಳತೆಗಳಾಗಿವೆ; ದರ ಸೂಚ್ಯಂಕವನ್ನು 1 ಅನ್ನು ಸೆಕೆಂಡುಗಳಲ್ಲಿ ಬಣ್ಣ ನಿವಾರಣೆಗೆ ಬೇಕಾದ ಸಮಯದಿಂದ ಭಾಗಿಸಿದ ಮೌಲ್ಯವೆಂದು ವ್ಯಾಖ್ಯಾನಿಸಲಾಗಿದೆ. ಇದೇ ನಳಿಕೆಗಳೊಂದಿಗೆ ಪ್ರಯೋಗ ನಡೆಸಿ, ಈ ನಮೂದುಗಳ ಬದಲು ಅಳೆಯಲಾದ ಮೌಲ್ಯಗಳನ್ನು ದಾಖಲಿಸಿ.

A, B ಮತ್ತು C ನಳಿಕೆಗಳಿಗಾಗಿ ತಾಪಮಾನಕ್ಕೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ ದರ ಸೂಚ್ಯಂಕದ ಗ್ರಾಫ್ ರಚಿಸಿ. ವಕ್ರವು ಮೊದಲು ಏರಿ, ನಂತರ ಸಮತಟ್ಟಾಗುತ್ತದೆ ಅಥವಾ ಇಳಿಯುತ್ತದೆ; ಇದು ಕಿಣ್ವಗಳಿಂದ ಚಾಲಿತವಾಗುವ ನಿರೀಕ್ಷಿತ ಮಾದರಿಯೇ ಹೊರತು ಸರಳರೇಖೆಯಲ್ಲ. D, E ಮತ್ತು F ನಳಿಕೆಗಳು ಆ ವಕ್ರದ ದತ್ತಾಂಶ ಬಿಂದುಗಳಲ್ಲ. ಅವು ವಕ್ರವನ್ನು ಅರ್ಥೈಸಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗಿಸುವ ನಿಯಂತ್ರಣಗಳು.

ಪ್ರತಿಯೊಂದು ಪರೀಕ್ಷೆಯ ಫಲಿತಾಂಶಕ್ಕೂ ಅರ್ಥ ನೀಡುವ ನಿಯಂತ್ರಣಗಳು

ಪ್ರತಿಯೊಂದು ಉಸಿರಾಟ ಪ್ರಯೋಗಕ್ಕೂ ಮೂರು ಸಹವರ್ತಿ ಮಾದರಿಗಳು ಬೇಕು. ಕುದಿಸಿದ ಅಥವಾ ಕೊಲ್ಲಲಾದ ಯೀಸ್ಟ್, ಗ್ಲೂಕೋಸ್ ಮತ್ತು ಬಣ್ಣಕದ ಮಿಶ್ರಣ ನೀಲಿಯಾಗಿಯೇ ಉಳಿಯಬೇಕು; ಇದು ವೇಗವಾದ ಅಪಚಯವು ಜೀವಂತ ಚಯಾಪಚಯವನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿದೆ ಎಂಬುದನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ. ಹೆಚ್ಚುವರಿ ಗ್ಲೂಕೋಸ್ ಸೇರಿಸದ ಜೀವಂತ ಯೀಸ್ಟ್ ಮತ್ತು ಬಣ್ಣಕದ ಮಿಶ್ರಣವು ಕ್ರಿಯಾಧಾರ ನಿಯಂತ್ರಣವಾಗಿದೆ. ಆದರೆ ಯೀಸ್ಟ್ ತನ್ನ ಆಂತರಿಕ ಸಂಗ್ರಹಗಳನ್ನು ಬಳಸುವುದರಿಂದ, ಅದಲ್ಲಿಯೂ ನಿಧಾನವಾದ ಬಣ್ಣ ನಿವಾರಣೆಯನ್ನು ನಿರೀಕ್ಷಿಸಿ. ಯೀಸ್ಟ್ ಇಲ್ಲದ ಗ್ಲೂಕೋಸ್ ಮತ್ತು ಬಣ್ಣಕದ ಮಿಶ್ರಣವು ರಾಸಾಯನಿಕ ಖಾಲಿ ಮಾದರಿಯಾಗಿದೆ. ಇದು ಅತ್ಯಗತ್ಯ, ಏಕೆಂದರೆ ಕ್ಷಾರೀಯ ಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿರುವ ಗ್ಲೂಕೋಸ್ ಯಾವುದೇ ಕೋಶಗಳಿಲ್ಲದೆಯೂ ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಅನ್ನು ಅಪಚಯಗೊಳಿಸಬಲ್ಲದು.

ಜೀವಕ್ಷಮತೆ ಎಣಿಕೆಗೆ ಬೇರೊಂದು ರೀತಿಯ ನಿಯಂತ್ರಣ ಬೇಕು: ವಿಧಾನದಲ್ಲಿ ಸ್ಥಿರತೆ. ಒಂದೇ ಮೂಲ ಬಣ್ಣಕ ದ್ರಾವಣ, ಒಂದೇ ಮಿಶ್ರಣ ಅನುಪಾತ, ಒಂದೇ ಬಣ್ಣ ಹಚ್ಚುವ ಅವಧಿ, ಒಂದೇ ಕೋಷ್ಠ ಪ್ರದೇಶ, ಒಂದೇ ಮೊಗ್ಗು ಮತ್ತು ಗಡಿ ನಿಯಮಗಳನ್ನು ಬಳಸಿ; ಸಾಧ್ಯವಾದಲ್ಲಿ ಮಾದರಿಯ ವಿವರ ತಿಳಿಯದಂತೆ ಎಣಿಕೆ ಮಾಡಿ. ಇಬ್ಬರು ಪರೀಕ್ಷಕರ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಹತ್ತು ಶೇಕಡಾವಾರು ಅಂಶಗಳಷ್ಟು ಭಿನ್ನವಾದಾಗ, ಕಾರ್ಯಪತ್ರವು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಕಾರಣವನ್ನು ತಿಳಿಸುತ್ತದೆ: ಬೇರೆ ಸಮಯಾವಧಿ, ನೀಲಿ ಎಂದು ಪರಿಗಣಿಸುವ ಬೇರೆ ಮಿತಿ, ಅಥವಾ ಬೇರೆ ಮೊಗ್ಗಿನ ನಿಯಮಗಳು. ಬಣ್ಣ ಹಚ್ಚಿದ ಕೋಶಗಳನ್ನು ತಯಾರಿಸಿ ವೀಕ್ಷಿಸುವ ತಂತ್ರಗಳು ಸರಳ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾ ಬಣ್ಣ ಹಚ್ಚುವ ವಿಧಾನಗಳಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿವೆ. ವಿವಿಧ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ ಈ ಬಣ್ಣಕ ಏನನ್ನು ಗುರುತಿಸುತ್ತದೆ ಎಂಬ ವ್ಯಾಪಕ ಸಮೀಕ್ಷೆಯು ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕ ಬಣ್ಣ ಹಚ್ಚುವ ಅಟ್ಲಾಸ್‌ನಲ್ಲಿ ಇದೆ. ಯಾವುದೇ ನೀಲಿ ಬಣ್ಣದ ತೀವ್ರತೆಯನ್ನು ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಅಳೆಯುವುದರ ಹಿಂದಿನ ಭೌತಶಾಸ್ತ್ರಕ್ಕೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದಂತೆ, ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸಿರುವ ಹೀರಿಕೆ ಉಲ್ಲೇಖವು ಪ್ರತಿಯೊಂದು ಗುಣಾಂಕದೊಂದಿಗೆ ಅದರ ದ್ರಾವಕ, pH ಮತ್ತು ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳನ್ನು ಏಕೆ ನೀಡಬೇಕು ಎಂಬುದನ್ನು ವಿವರಿಸುತ್ತದೆ.

ಪ್ರಶ್ನೆಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ಆರಿಸಿ. ಈ ಕ್ಷಣದಲ್ಲಿ ಎಷ್ಟು ಕೋಶಗಳು ಜೀವಂತವಾಗಿವೆ ಎಂಬುದು ಎಣಿಕೆಯ ಪ್ರಶ್ನೆ; ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕ ಮತ್ತು ಕಾರ್ಯಪತ್ರದ ಮೂಲಕ ಅದಕ್ಕೆ ಉತ್ತರ ಸಿಗುತ್ತದೆ. ಈ ಕಲ್ಚರ್ ಎಷ್ಟು ಸಕ್ರಿಯವಾಗಿ ಉಸಿರಾಟ ನಡೆಸುತ್ತಿದೆ ಎಂಬುದು ಕ್ರಿಯಾವೇಗದ ಪ್ರಶ್ನೆ; ಸ್ಟಾಪ್‌ವಾಚ್ ಮತ್ತು ನಿಯಂತ್ರಿತ ನಳಿಕೆಗಳ ಮೂಲಕ ಅದಕ್ಕೆ ಉತ್ತರ ಸಿಗುತ್ತದೆ. ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಎರಡಕ್ಕೂ ಉಪಯೋಗವಾಗುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ಒಂದೇ ನಳಿಕೆಯಲ್ಲಿ ಒಂದೇ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಎಂದಿಗೂ ಅಲ್ಲ.