ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಮತ್ತು ಉರಿಯೂತದ ಸಂಕೇತ ಪ್ರಸರಣ: ಇನ್‌ಫ್ಲಮಸೋಮ್‌ಗಳು, IL-6, ಮತ್ತು STAT3

ಒಂದೇ ನೀಲಿ ಸಂಯುಕ್ತವು ಉರಿಯೂತವನ್ನು ತಗ್ಗಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಮೂರು ಪ್ರಯೋಗಾಲಯಗಳು ವರದಿ ಮಾಡಿವೆ ಎಂದು ಊಹಿಸಿ. ಒಂದು ಪ್ರಯೋಗಾಲಯವು ಮ್ಯಾಕ್ರೋಫೇಜ್‌ಗಳಿಂದ ಕಡಿಮೆ IL-1beta ಬಿಡುಗಡೆಯಾಗುವುದನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ. ಮತ್ತೊಂದು ಅದೇ ಕೋಶ ಪ್ರಕಾರದಲ್ಲಿ ಕಡಿಮೆ iNOS ಕಿಣ್ವ ಇರುವುದನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ. ಇನ್ನೊಂದು ರಕ್ತದಲ್ಲಿ ಕಡಿಮೆ IL-6 ಮತ್ತು ಮೆದುಳಿನಲ್ಲಿ ಕಡಿಮೆ STAT3 ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ. ಈ ಮೂರನ್ನೂ ಒಂದೇ ಪ್ರತಿಪಾದನೆಯಾಗಿ ಒಗ್ಗೂಡಿಸುವ ಪ್ರಲೋಭನೆ ಉಂಟಾಗುತ್ತದೆ. ಹಾಗೆ ಒಗ್ಗೂಡಿಸುವುದರಿಂದ ಕಂಡುಬಂದ ಅಂಶಗಳ ನಿಜಸ್ವರೂಪ ಮರೆಮಾಚುತ್ತದೆ.

ಪ್ರತಿಯೊಂದು ಫಲಿತಾಂಶವೂ ತನ್ನದೇ ಪ್ರಚೋದಕ, ಜೋಡಣೆಯ ಹಂತ, ಮತ್ತು ಅಳತೆ ಸೂಚಕವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ವಿಭಿನ್ನ ಸಂಕೇತ ಪ್ರಸರಣ ಪರಿಕಲ್ಪನೆಗೆ ಸೇರಿದೆ. ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಪ್ರತಿಯೊಂದು ಪರಿಕಲ್ಪನೆಯಲ್ಲೂ ಬೇರೆ ಹಂತದಲ್ಲಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ. ಇವುಗಳಲ್ಲಿ ಯಾವುದಾದರೂ ಆರೋಗ್ಯದ ಫಲಿತಾಂಶವನ್ನು ಸುಧಾರಿಸುತ್ತದೆಯೇ ಎಂಬುದು ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಪ್ರಶ್ನೆ; ಅದನ್ನು ನಮ್ಮ ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಮತ್ತು ಉರಿಯೂತದ ಅವಲೋಕನದಲ್ಲಿ ಚರ್ಚಿಸಲಾಗಿದೆ. ಈ ಪುಟವು ಸಂಕೇತ ಮಾರ್ಗಗಳಿಗಷ್ಟೇ ಸೀಮಿತವಾಗಿದೆ.

ಮಾರ್ಗ 1: ಇನ್‌ಫ್ಲಮಸೋಮ್ ಜೋಡಣೆ ಮತ್ತು caspase-1

ಇನ್‌ಫ್ಲಮಸೋಮ್ ಎಂದರೆ ಮೈಯೆಲಾಯ್ಡ್ ಕೋಶದ ಒಳಗೆ ಅಗತ್ಯಕ್ಕೆ ತಕ್ಕಂತೆ ನಿರ್ಮಾಣವಾಗುವ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಆಧಾರರಚನೆ. ಇದರ ಭಾಗಗಳು ಒಂದು ಸಂವೇದಕ, ASC ಎಂಬ ಸಂಯೋಜಕ, ಮತ್ತು caspase-1 ಎಂಬ ಕಾರ್ಯಕಾರಿ ಕಿಣ್ವ. ಜೋಡಣೆಗೊಂಡ ನಂತರ, caspase-1 ಎಂಬುದು pro-IL-1beta ಮತ್ತು pro-IL-18 ಅನ್ನು ಕತ್ತರಿಸಿ ಅವುಗಳ ಸ್ರವಿತ ರೂಪಗಳನ್ನಾಗಿ ಮಾಡುತ್ತದೆ; ಇದು ಉರಿಯೂತದ ಕೋಶಮರಣದ ರೂಪವಾದ ಪೈರಾಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಅನ್ನೂ ಪ್ರಚೋದಿಸಬಹುದು. ಸಂವೇದಕವು ಇದರ ಪ್ರಕಾರವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸುತ್ತದೆ: NLRP3 ಸ್ಫಟಿಕಗಳಿಗೆ ಮತ್ತು ನೈಜೆರಿಸಿನ್ ಹಾಗೂ ATP ಯಂತಹ ರಂಧ್ರ ರೂಪಿಸುವ ವಿಷಪದಾರ್ಥಗಳಿಗೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಿಸುತ್ತದೆ, NLRC4 ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾದ ಫ್ಲ್ಯಾಜೆಲಿನ್‌ಗೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಿಸುತ್ತದೆ, AIM2 ಸೈಟೋಸಾಲ್‌ನಲ್ಲಿರುವ ದ್ವಿಸರಣಿ DNA ಗೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಿಸುತ್ತದೆ, ಮತ್ತು ನಾನ್-ಕ್ಯಾನಾನಿಕಲ್ ಮಾರ್ಗವು ಕೋಶದೊಳಗಿನ ಲಿಪೋಪಾಲಿಸ್ಯಾಕರೈಡ್‌ಗೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಿಸುತ್ತದೆ.

ಸಕ್ರಿಯಗೊಳ್ಳಲು ಎರಡು ಸಂಕೇತಗಳು ಬೇಕಾಗುತ್ತವೆ. ಮೊದಲ ಸಂಕೇತವು ಪೂರ್ವಸಿದ್ಧತೆ: ಟೋಲ್-ಲೈಕ್ ಗ್ರಾಹಕದ ಲಿಗ್ಯಾಂಡ್, NF-kB ಅವಲಂಬಿತ NLRP3 ಮತ್ತು pro-IL-1beta ಪ್ರತಿಲೇಖನವನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತದೆ; ಹೀಗಾಗಿ ಅಗತ್ಯ ಭಾಗಗಳು ಲಭ್ಯವಾಗುತ್ತವೆ. ಎರಡನೇ ಸಂಕೇತವು ಜೋಡಣೆ: ಮತ್ತೊಂದು ಪ್ರಚೋದಕವು ASC ಯನ್ನು ಒಲಿಗೊಮರ್‌ಗಳಾಗಿ ಒಗ್ಗೂಡಿಸಿ ಚುಕ್ಕೆಗಳಂತಹ ಸಮೂಹಗಳನ್ನು ರೂಪಿಸುವಂತೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ, caspase-1 ಅನ್ನು ಅದರ p20 ತುಣುಕಾಗಿ ಕತ್ತರಿಸುವಂತೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ, ಮತ್ತು ಪರಿಪಕ್ವ IL-1beta p17 ಬಿಡುಗಡೆಯಾಗುವಂತೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ಮೈಟೋಕಾಂಡ್ರಿಯಾದ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಾಶೀಲ ಆಮ್ಲಜನಕ ಪ್ರಭೇದಗಳು ಮತ್ತು ಸ್ಫಟಿಕಗಳ ಒಳಗ್ರಹಣವು NLRP3 ಯ ಎರಡನೇ ಸಂಕೇತಕ್ಕೆ ಕೊಡುಗೆ ನೀಡುವ ಅಂಶಗಳೆಂದು ತಿಳಿದುಬಂದಿದೆ.

ಇನ್‌ಫ್ಲಮಸೋಮ್‌ಗಳ ವ್ಯಾಪಕ ನಿರೋಧನೆಯ ಕುರಿತ 2017 ರ ಮ್ಯಾಕ್ರೋಫೇಜ್ ಅಧ್ಯಯನವು ಎರಡೂ ಸಂಕೇತಗಳಲ್ಲಿ ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಅನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಿತು. ಲಿಪೋಪಾಲಿಸ್ಯಾಕರೈಡ್‌ನಿಂದ ಪೂರ್ವಸಿದ್ಧಗೊಳಿಸಿದ ಇಲಿಯ ಅಸ್ಥಿಮಜ್ಜೆಯ ಮ್ಯಾಕ್ರೋಫೇಜ್‌ಗಳಲ್ಲಿ, ನೈಜೆರಿಸಿನ್, ATP, ಮತ್ತು ಮೊನೋಸೋಡಿಯಂ ಯೂರೇಟ್ ಸ್ಫಟಿಕಗಳು ಪ್ರತಿಯೊಂದೂ IL-1beta ಮತ್ತು caspase-1 ಬಿಡುಗಡೆ ಹಾಗೂ ASC ಚುಕ್ಕೆಗಳ ರಚನೆಯನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸಿದವು. 20 ರಿಂದ 200 micromolar ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ, ಕೋಶಗಳನ್ನು ಕೊಲ್ಲದೆ, ಪ್ರಮಾಣಕ್ಕೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ ಈ ಮೂರನ್ನೂ ತಗ್ಗಿಸಿತು. NLRC4 ಗಾಗಿ ಫ್ಲ್ಯಾಜೆಲಿನ್ ಮತ್ತು ಸಾಲ್ಮೊನೆಲ್ಲಾ, AIM2 ಗಾಗಿ ದ್ವಿಸರಣಿ DNA ಮತ್ತು ಲಿಸ್ಟೀರಿಯಾ, ಹಾಗೂ ನಾನ್-ಕ್ಯಾನಾನಿಕಲ್ ಮಾರ್ಗಕ್ಕಾಗಿ ಕೋಶದೊಳಗೆ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಫೆಕ್ಷನ್ ಮೂಲಕ ಸೇರಿಸಿದ ಲಿಪೋಪಾಲಿಸ್ಯಾಕರೈಡ್ ಅಥವಾ ಜೀವಂತ E. coli ಬಳಸಿದಾಗಲೂ ಇದೇ ಮಾದರಿ ಕಂಡುಬಂತು. ಸಂಯುಕ್ತವು ಏಕಾಂಗಿಯಾಗಿ ಬಿಡುಗಡೆಯನ್ನು ಪ್ರಚೋದಿಸಲಿಲ್ಲ, ಮತ್ತು ನಿಯಂತ್ರಣ ಪರೀಕ್ಷಾ ಫಲಕಗಳಲ್ಲಿ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾ-ವಿರೋಧಿ ಪರಿಣಾಮ ಕಂಡುಬರಲಿಲ್ಲ. ಆದ್ದರಿಂದ ಈ ಫಲಿತಾಂಶವು ಆತಿಥೇಯದ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ.

ಮೇಲಿನ ಹಂತಗಳಲ್ಲಿ ಮೂರು ಹಸ್ತಕ್ಷೇಪಗಳನ್ನು ಅಳೆಯಲಾಯಿತು. ರೋಟೆನೋನ್‌ನಿಂದ ಪ್ರೇರಿತವಾದ ಮೈಟೋಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಸೂಪರ್‌ಆಕ್ಸೈಡ್ ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಜೊತೆಗೆ ಕಡಿಮೆಯಾಯಿತು; ಅದರೊಂದಿಗೆ ರೋಟೆನೋನ್‌ನಿಂದ ಪ್ರೇರಿತ IL-1beta ಬಿಡುಗಡೆಯೂ ಕಡಿಮೆಯಾಯಿತು. ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಮಣಿಗಳ ಒಳಗ್ರಹಣ ಕಡಿಮೆಯಾಯಿತು; ಇದು ಸ್ಫಟಿಕಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸುವುದಕ್ಕೂ ಮುಂಚೆಯೇ ಫ್ಯಾಗೋಸೈಟೋಸಿಸ್ ಕಡಿಮೆಯಾದುದಕ್ಕೆ ಹೊಂದಿಕೆಯಾಗುತ್ತದೆ. ಎರಡು NF-kB ಸ್ಥಾನಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ NLRP3 ಪ್ರೊಮೋಟರ್‌ನಿಂದ ನಿಯಂತ್ರಿತ ವರದಿಕಾರಕವು ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಜೊತೆಗೆ ಕಡಿಮೆ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ತೋರಿಸಿತು; ಆದರೆ ಆ ಸ್ಥಾನಗಳಿಲ್ಲದ ಮೊಟಕುಗೊಳಿಸಿದ ಪ್ರೊಮೋಟರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಿಸಲಿಲ್ಲ. ಕೋಶರಹಿತ ಪರೀಕ್ಷಾ ನಳಿಕೆಯಲ್ಲಿ, ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಮರುಸಂಯೋಜಿತ ಮಾನವ caspase-1 ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನೂ ನೇರವಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿತು. ಸಂಯುಕ್ತವನ್ನು ಪೂರ್ವಸಿದ್ಧತೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಮಾತ್ರ ಅಥವಾ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಮಾತ್ರ ಸೇರಿಸಿದಾಗಲೂ IL-1beta, IL-18, ಮತ್ತು caspase-1 ಬಿಡುಗಡೆ ಕಡಿಮೆಯಾಯಿತು. ಹೀಗಾಗಿ ಎರಡೂ ಹಂತಗಳು ಇದರಲ್ಲಿ ಒಳಗೊಂಡಿವೆ.

ಇಲಿಗಳಲ್ಲಿನ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳೂ ಈ ಆಯ್ದ ಪರಿಣಾಮಕ್ಕೆ ಹೊಂದಿಕೆಯಾಗಿದ್ದವು. ಲಿಪೋಪಾಲಿಸ್ಯಾಕರೈಡ್‌ನ ಮಾರಕ ಪ್ರಮಾಣವು ನಿಯಂತ್ರಣ ಗುಂಪಿನ ಇಲಿಗಳನ್ನು ಕೆಲವೇ ಗಂಟೆಗಳಲ್ಲಿ ಕೊಂದಿತು, ಆದರೆ ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಬದುಕುಳಿಯುವಿಕೆಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಿತು; ಪೆರಿಟೋನಿಯಲ್ IL-1beta ಕಡಿಮೆಯಾಯಿತು, ಆದರೆ ಅದೇ ದ್ರವದಲ್ಲಿನ IL-6 ಕಡಿಮೆಯಾಗಲಿಲ್ಲ. ಲಿಸ್ಟೀರಿಯಾ ಪೆರಿಟೋನೈಟಿಸ್ ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ, ಪೆರಿಟೋನಿಯಲ್ IL-1beta ಕಡಿಮೆಯಾದರೂ ಒಟ್ಟು ಕೋಶಗಳ ಸಂಖ್ಯೆ ಬದಲಾಗಲಿಲ್ಲ. ಮಾನವ THP-1 ಮೊನೋಸೈಟ್‌ಗಳು ನಾಲ್ಕೂ ಇನ್‌ಫ್ಲಮಸೋಮ್ ಪ್ರಕಾರಗಳಲ್ಲಿ ಇಲಿಯ ಮ್ಯಾಕ್ರೋಫೇಜ್‌ಗಳಂತೆಯೇ ವರ್ತಿಸಿದವು. ಇನ್‌ಫ್ಲಮಸೋಮ್ ಫಲಿತಾಂಶವು IL-1beta ಮತ್ತು IL-18 ಪರಿಪಕ್ವಗೊಳ್ಳುವುದನ್ನು ವಿವರಿಸುತ್ತದೆ, ಪ್ರತಿಯೊಂದು ಸೈಟೋಕೈನ್‌ನ ವರ್ತನೆಯನ್ನು ಅಲ್ಲ. ಇದೇ ಕಾರಣಕ್ಕೆ ಮೈಕ್ರೋಗ್ಲಿಯಾ ಮತ್ತು ಆಸ್ಟ್ರೋಸೈಟ್ ಪ್ರಯೋಗಗಳಲ್ಲಿ ಮೆದುಳಿನ ರೋಗನಿರೋಧಕ ಕೋಶಗಳ ಆಕಾರವು, ಆಧಾರರಚನೆಯ ಜೋಡಣೆಗಿಂತ ಭಿನ್ನವಾದ ಪ್ರಶ್ನೆಗೆ ಉತ್ತರಿಸುತ್ತದೆ.

ಮಾರ್ಗ 2: NF-kB ಮತ್ತು STAT1 ಬಂಧನದ ಮೂಲಕ iNOS ಪ್ರತಿಲೇಖನ

ಪ್ರೇರಣೀಯ ನೈಟ್ರಿಕ್ ಆಕ್ಸೈಡ್ ಸಿಂಥೇಸ್, ಅಥವಾ iNOS, ವಿಶ್ರಾಂತ ಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ ಬಹಳ ಕಡಿಮೆ ಪ್ರಮಾಣದಲ್ಲಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಅಗತ್ಯಕ್ಕೆ ತಕ್ಕಂತೆ ಪ್ರತಿಲೇಖನಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ. ಲಿಪೋಪಾಲಿಸ್ಯಾಕರೈಡ್ ಮುಖ್ಯವಾಗಿ IkB-alpha ವಿಘಟನೆಯ ಮೂಲಕ, ನಂತರ NF-kB ಫಾಸ್ಫೋರಿಲೇಶನ್ ಮತ್ತು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್ ಪ್ರವೇಶದ ಮೂಲಕ ಇದನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತದೆ. ಇಂಟರ್‌ಫೆರಾನ್-ಗಾಮಾ ಮುಖ್ಯವಾಗಿ ಜೇನಸ್ ಕೈನೇಸ್‌ನಿಂದ STAT1 ಫಾಸ್ಫೋರಿಲೇಶನ್, ನಂತರ STAT1 ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್ ಪ್ರವೇಶದ ಮೂಲಕ ಇದನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತದೆ. ನಂತರ ಪ್ರತಿಯೊಂದು ಅಂಶವೂ iNOS ಪ್ರೊಮೋಟರ್‌ನಲ್ಲಿರುವ ತನ್ನ ಸ್ಥಾನಕ್ಕೆ ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ. ಕಿಣ್ವ ಚಟುವಟಿಕೆ ಮತ್ತು ಜೀನ್ ಪ್ರೇರಣೆ ಪ್ರತ್ಯೇಕ ನಿಯಂತ್ರಣ ಬಿಂದುಗಳು; ಒಂದು ಔಷಧವು ಯಾವುದಾದರೂ ಒಂದರಲ್ಲಿ ಅಥವಾ ಎರಡರಲ್ಲೂ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸಬಹುದು.

ಮ್ಯಾಕ್ರೋಫೇಜ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಎಂಡೋಟಾಕ್ಸೀಮಿಯಾ ಉಂಟುಮಾಡಿದ ಇಲಿಗಳಲ್ಲಿ iNOS ಪ್ರೇರಣೆಯ ಕುರಿತ 2015 ರ ಅಧ್ಯಯನವು ಪರಿಣಾಮವು ಸಂದೇಶದ ಮಟ್ಟದಲ್ಲಿದೆ ಎಂದು ಗುರುತಿಸಿತು. RAW 264.7 ಕೋಶಗಳು ಮತ್ತು ಇಲಿಯ ಪ್ರಾಥಮಿಕ ಮ್ಯಾಕ್ರೋಫೇಜ್‌ಗಳಲ್ಲಿ, ಲಿಪೋಪಾಲಿಸ್ಯಾಕರೈಡ್, ಇಂಟರ್‌ಫೆರಾನ್-ಗಾಮಾ, ಅಥವಾ ಎರಡನ್ನೂ ನೀಡುವ 30 minutes ಮೊದಲು ನೀಡಿದ 1 micromolar ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ, 8 ರಿಂದ 24 hours ಅವಧಿಯಲ್ಲಿ iNOS ಪ್ರೋಟೀನ್ ಮತ್ತು mRNA ಅನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿತು. ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ನೈಟ್ರೈಟ್ ಕಡಿಮೆಯಿತ್ತು ಮತ್ತು ಕೋಶಗಳ ಜೀವಕ್ಷಮತೆ ಕುಂದಲಿಲ್ಲ. 25 mg per kg ಲಿಪೋಪಾಲಿಸ್ಯಾಕರೈಡ್ ನೀಡಿದ ಇಲಿಗಳಲ್ಲಿ, ಒಂದು hour ಮೊದಲು ನೀಡಿದ ಒಂದೇ 5 mg per kg ಪ್ರಮಾಣವು ಶ್ವಾಸಕೋಶ, ಯಕೃತ್ತು, ಮತ್ತು ಹೃದಯದಲ್ಲಿನ iNOS ಪ್ರೋಟೀನ್ ಮತ್ತು mRNA ಅನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿತು.

ಇಲ್ಲಿನ ವಿಶಿಷ್ಟ ವಿವರವೆಂದರೆ ಬದಲಾಗದೆ ಉಳಿದ ಅಂಶಗಳು. IkB-alpha ವಿಘಟನೆ, NF-kB ಫಾಸ್ಫೋರಿಲೇಶನ್, STAT1 ಫಾಸ್ಫೋರಿಲೇಶನ್, ಮತ್ತು ಎರಡೂ ಅಂಶಗಳ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್‌ನಲ್ಲಿನ ಸಂಗ್ರಹಣೆ ಯಥಾಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲೇ ಉಳಿದವು. ವ್ಯತ್ಯಯವು ಅದರ ಮುಂದಿನ ಹಂತದಲ್ಲಿ ಸಂಭವಿಸಿತು: ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯರ್ ಸಾರಗಳಲ್ಲಿ, ಲಿಪೋಪಾಲಿಸ್ಯಾಕರೈಡ್ ನಂತರ NF-kB ತನ್ನ DNA ಅಂಶಕ್ಕೆ ಕಡಿಮೆ ಬಂಧಿಸುವುದು ಮತ್ತು ಇಂಟರ್‌ಫೆರಾನ್-ಗಾಮಾ ನಂತರ STAT1 ಕಡಿಮೆ ಬಂಧಿಸುವುದು ಕಂಡುಬಂತು. ಕ್ರೊಮಾಟಿನ್ ಇಮ್ಯುನೊಪ್ರೆಸಿಪಿಟೇಶನ್ ಪರೀಕ್ಷೆಯು ಕೋಶಗಳೊಳಗಿನ iNOS ಪ್ರೊಮೋಟರ್‌ನಲ್ಲಿ ಎರಡೂ ಅಂಶಗಳ ಆಕ್ರಮಣ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿರುವುದನ್ನು ದೃಢಪಡಿಸಿತು. ತನ್ನ ಪ್ರೊಮೋಟರ್‌ನಲ್ಲಿ NF-kB ಬಳಸುವ ಟ್ಯೂಮರ್ ನೆಕ್ರೋಸಿಸ್ ಫ್ಯಾಕ್ಟರ್ ಆಲ್ಫಾ ಕೂಡ ಕಡಿಮೆಯಾಯಿತು. ಅಂಶಗಳು ಸಕ್ರಿಯಗೊಂಡು ಅಲ್ಲಿಗೆ ತಲುಪಿದ್ದವು, ಆದರೆ ತಮ್ಮ ಗುರಿ DNA ಯೊಂದಿಗೆ ಸರಿಯಾಗಿ ಬಂಧಿಸಲಿಲ್ಲ.

ಮಾರ್ಗ 1 ರೊಂದಿಗಿನ ವ್ಯತ್ಯಾಸವನ್ನು ಗಮನಿಸಿ. ಇದು ಅಂಶವು DNA ಗೆ ಬಂಧಿಸುವುದಕ್ಕೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ, STAT3 ಬದಲು STAT1 ಅನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ, ಮತ್ತು ASC ಚುಕ್ಕೆಗಳು ಹಾಗೂ caspase-1 ತುಣುಕುಗಳ ಬದಲು mRNA, ಪ್ರೋಟೀನ್, ಮತ್ತು ನೈಟ್ರೈಟ್ ಅನ್ನು ಅಳೆಯುತ್ತದೆ. ನಮ್ಮ ಕೋಶ ಮಾದರಿಗಳಾದ್ಯಂತ ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಗುರಿಗಳ ನಕ್ಷೆಯು ಈ ಪ್ರತಿಲೇಖನ ಮಟ್ಟವನ್ನು ನೇರ ಕಿಣ್ವ ಮತ್ತು ಮೈಟೋಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಅಳತೆಗಳಿಂದ ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾಗಿ ಇಡುತ್ತದೆ.

ಮಾರ್ಗ 3: ಸೀರಮ್ IL-6 ಮತ್ತು ಅಂಗಾಂಶದ STAT3 ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆ

IL-6, gp130 ಗ್ರಾಹಕ ಕುಟುಂಬದ ಮೂಲಕ ಜೇನಸ್ ಕೈನೇಸ್‌ನಿಂದ STAT3 ಗೆ ಸಾಗುವ ಸರಣಿ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗೆ ಸಂಕೇತವನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ. ಫಾಸ್ಫೋರಿಲೀಕೃತ STAT3 ಡೈಮರ್ ಆಗುತ್ತದೆ, ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್ ಪ್ರವೇಶಿಸುತ್ತದೆ, ಮತ್ತು ಉರಿಯೂತದ ಕಾರ್ಯಕ್ರಮಗಳನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತದೆ. IL-6 ಸ್ವತಃ NF-kB ಯ ಗುರಿಯಾಗಿರುವುದರಿಂದ, ಇವೆರಡೂ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಾ ಚಕ್ರವನ್ನು ರೂಪಿಸುತ್ತವೆ; ಇದನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ IL-6 ನಿಂದ STAT3 ಗೆ ಸಾಗುವ ಅಕ್ಷವೆಂದು ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ. ಮೇಲಿನ ಹಂತದ ಸೀರಮ್ IL-6, ಫಾಸ್ಫೋರಿಲೀಕೃತ STAT3 ಮತ್ತು ಒಟ್ಟು STAT3 ನಡುವಿನ ಅನುಪಾತ, ಹಾಗೂ ಕೆಳಗಿನ ಹಂತದ iNOS ಮತ್ತು COX2 ಯಂತಹ ಕಾರ್ಯಕಾರಿ ಕಿಣ್ವಗಳು ಪ್ರಮಾಣಿತ ಅಳತೆ ಸೂಚಕಗಳಾಗಿವೆ.

ಲಿಪೋಪಾಲಿಸ್ಯಾಕರೈಡ್ ನಂತರ IL-6 ಮತ್ತು STAT3 ಕುರಿತು 2023 ರ ಇಲಿ ಅಧ್ಯಯನವು ವಿವಿಧ ವಿಭಾಗಗಳಲ್ಲಿ ಈ ಅಕ್ಷವನ್ನು ಅಳೆಯಿತು. ಗಂಡು C57BL/6 ಇಲಿಗಳಿಗೆ ಮೂರು ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಪ್ರತಿದಿನ 1 mg per kg ಲಿಪೋಪಾಲಿಸ್ಯಾಕರೈಡ್ ನೀಡಲಾಯಿತು; ಪ್ರತಿ ಪ್ರಮಾಣದ 30 minutes ನಂತರ 5 ಅಥವಾ 10 mg per kg ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ನೀಡಲಾಯಿತು. ಮೂರನೇ ದಿನ, ಲಿಪೋಪಾಲಿಸ್ಯಾಕರೈಡ್ ಮಾತ್ರ ನೀಡಿದ ಗುಂಪಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಎರಡೂ ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಗುಂಪುಗಳಲ್ಲಿ ಸೀರಮ್ IL-6 ಕಡಿಮೆಯಿತ್ತು. ಆದರೆ ಪರೀಕ್ಷಾ ಗುಚ್ಛದಲ್ಲಿನ ಹೆಚ್ಚಿನ ಇತರ ಸೈಟೋಕೈನ್‌ಗಳು ಚಿಕಿತ್ಸೆಯೊಂದಿಗೆ ಬದಲಾಗಲಿಲ್ಲ. ಕಾರ್ಟೆಕ್ಸ್, ಹಿಪ್ಪೋಕ್ಯಾಂಪಸ್, ಮತ್ತು ಕಿವಿಯ ಚರ್ಮದಲ್ಲಿ ಫಾಸ್ಫೋರಿಲೀಕೃತ STAT3 ಮತ್ತು ಒಟ್ಟು STAT3 ನಡುವಿನ ಅನುಪಾತಗಳು ಕಡಿಮೆಯಿದ್ದವು. ಜೊತೆಗೆ Iba-1 ಮೈಕ್ರೋಗ್ಲಿಯಲ್ ರಂಜನೆ, iNOS ಮತ್ತು COX2 ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದ್ದವು, ಮತ್ತು ತೂಕ ಇಳಿಕೆಯು ಭಾಗಶಃ ತಗ್ಗಿತ್ತು.

ಇಲ್ಲಿ ಎರಡು ಎಚ್ಚರಿಕೆಗಳು ಅಗತ್ಯ. ಸೀರಮ್ IL-6 ಕಡಿಮೆಯಾಗುವುದು ಮತ್ತು ಅಂಗಾಂಶದ STAT3 ಫಾಸ್ಫೋರಿಲೇಶನ್ ಕಡಿಮೆಯಾಗುವುದು ಅಕ್ಷದ ಮಾರ್ಪಾಡಿಗೆ ಹೊಂದಿಕೆಯಾಗುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ಪ್ರಾಥಮಿಕ ನಿಯಂತ್ರಣ ಬಿಂದುವನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾಗಿ ಗುರುತಿಸುವುದಿಲ್ಲ. ಏಕೆಂದರೆ ಮೇಲಿನ ಹಂತದ ಸೈಟೋಕೈನ್ ಕಡಿಮೆಯಾಗುವುದು, ಗ್ರಾಹಕದ ಸಂಕೇತ ಪ್ರಸರಣ ಕಡಿಮೆಯಾಗುವುದು, ಅಥವಾ ಫಾಸ್ಫಟೇಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆ ಬದಲಾಗುವುದು—ಇವುಗಳಲ್ಲಿ ಪ್ರತಿಯೊಂದೂ ಅದೇ ಅನುಪಾತವನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡಬಹುದು. ಹಾಗೆಯೇ, ತೀವ್ರ ಪ್ರಚೋದನೆಯ ಮೂರು ದಿನಗಳ ಅವಧಿಯ ತೂಕವು ಸಂಪೂರ್ಣ ಪ್ರಾಣಿಯ ಅಳತೆ ಸೂಚಕವೇ ಹೊರತು ಲಕ್ಷಣ ಅಥವಾ ಉಪಶಮನದ ಅಂಕವಲ್ಲ. ಇದು ಸಂಕೇತ ಪ್ರಸರಣದ ಫಲಿತಾಂಶವನ್ನು ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ಪ್ರತಿಪಾದನೆಯಾಗಿ ಪರಿವರ್ತಿಸದೆ, ಬ್ಲಾಟ್ ಪರೀಕ್ಷೆಯಾಚೆಗಿನ ಸಂದರ್ಭವನ್ನು ಸೇರಿಸುತ್ತದೆ. ಮೈಟೋಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ರೆಡಾಕ್ಸ್ ನಿರ್ವಹಣೆಯ ಪ್ರತ್ಯೇಕ ರಸಾಯನಿಕ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯು ಈ ಸೈಟೋಕೈನ್ ವಿವರಣೆಗೆ ಸಮಾನಾಂತರವಾಗಿ ನಡೆಯುತ್ತದೆ; ಅದನ್ನು ಇದರೊಂದಿಗೆ ಒಗ್ಗೂಡಿಸಬಾರದು.

ಮಾರ್ಗಗಳ ಹೋಲಿಕೆ: ಹಸ್ತಕ್ಷೇಪದ ಬಿಂದುಗಳು ಮತ್ತು ಅಳತೆ ಸೂಚಕಗಳು

ಈ ಕೋಷ್ಟಕವು ಮೂರು ಅಮಾನ್ಯ ನಿರ್ಣಯಗಳನ್ನು ತಡೆಯುತ್ತದೆ. ASC ಚುಕ್ಕೆಗಳ ಫಲಿತಾಂಶವು STAT3 ಫಲಿತಾಂಶವನ್ನು ಸಾಬೀತುಪಡಿಸುವುದಿಲ್ಲ. STAT1 ನಿಂದ iNOS ಪ್ರೊಮೋಟರ್‌ಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಫಲಿತಾಂಶವು STAT3 ಫಲಿತಾಂಶವನ್ನು ಸಾಬೀತುಪಡಿಸುವುದಿಲ್ಲ, ಎರಡೂ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳು STAT ಕುಟುಂಬದ ಸದಸ್ಯರಾಗಿದ್ದರೂ ಸಹ. ಸೀರಮ್ IL-6 ಫಲಿತಾಂಶವು ಇನ್‌ಫ್ಲಮಸೋಮ್ ಜೋಡಣೆ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ ಎಂದು ಸಾಬೀತುಪಡಿಸುವುದಿಲ್ಲ: ಪೆರಿಟೋನಿಯಲ್ ಪ್ರಯೋಗದಲ್ಲಿ IL-1beta ಕಡಿಮೆಯಾದರೂ IL-6 ಕಡಿಮೆಯಾಗಲಿಲ್ಲ. ಪ್ರತಿಯೊಂದು ಸಾಲಿಗೂ ತನ್ನದೇ ಪ್ರಚೋದಕ ಮತ್ತು ಅಳತೆ ಸೂಚಕ ಅಗತ್ಯ. ಆದ್ದರಿಂದ ಕೋಶ, ಪ್ರಾಣಿ, ಮತ್ತು ಮಾನವರಲ್ಲಿನ ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಅಧ್ಯಯನಗಳನ್ನು ಓದುವಾಗ, ಪ್ರತಿಯೊಂದು ಪ್ರತಿಪಾದನೆಯನ್ನು ಅದನ್ನು ಅಳೆಯಲಾದ ಮಟ್ಟಕ್ಕೆ ಹೊಂದಿಸುವುದು ಅಗತ್ಯ.

ಇವುಗಳಲ್ಲಿ ಯಾವುದೂ ಮಾನವರಲ್ಲಿನ ಬಳಕೆಯ ಪ್ರಮಾಣ, ಸುರಕ್ಷತೆ, ಅಥವಾ ಪ್ರಯೋಜನವನ್ನು ಸ್ಥಾಪಿಸುವುದಿಲ್ಲ. ಲಿಪೋಪಾಲಿಸ್ಯಾಕರೈಡ್ ಮಾದರಿಗಳು ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಲು ಬಳಸುವ ನಿಯಂತ್ರಿತ ಪ್ರಚೋದಕಗಳೇ ಹೊರತು ದೀರ್ಘಕಾಲೀನ ಅನಾರೋಗ್ಯದ ಪ್ರತಿರೂಪಗಳಲ್ಲ. ಪ್ರಚೋದಕದ ಜೊತೆಗೆ ಸಂಯುಕ್ತವನ್ನು ನೀಡುವುದು, ಈಗಾಗಲೇ ಸ್ಥಾಪಿತವಾದ ರೋಗವನ್ನು ಹಿಮ್ಮೆಟ್ಟಿಸುವುದಕ್ಕಿಂತ ಪ್ರೇರಿತ ಬದಲಾವಣೆಯನ್ನು ತಡೆಯುವುದನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸುತ್ತದೆ. ಈ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನದ ವಿವರಣೆಯನ್ನು ರೋಗಿಗಳ ಫಲಿತಾಂಶಗಳಿಂದ ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾಗಿ ಇಡಿ, ಮತ್ತು ಯಾವುದೇ ಆರೋಗ್ಯ ಪ್ರತಿಪಾದನೆಯನ್ನು ಅದರ ಆಧಾರವಾಗಿರುವ ರೋಗಿಗಳ ಅಧ್ಯಯನದ ಮೂಲಕ ನಿರ್ಣಯಿಸಿ.