ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಮಾಪನಾಂಕನ ವಕ್ರರೇಖೆಯ ನಿರ್ಮಾಣ: ಬ್ಲ್ಯಾಂಕ್‌ಗಳು, ವ್ಯಾಪ್ತಿ ಮತ್ತು ರೇಖೀಯತೆ

ಇಬ್ಬರು ವಿಶ್ಲೇಷಕರು ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂನ ಒಂದೇ ಮೂಲ ದ್ರಾವಣದ ಬಾಟಲಿಯನ್ನು ಹಂಚಿಕೊಂಡು, ಪ್ರತಿಯೊಬ್ಬರೂ ಮಾಪನಾಂಕನ ವಕ್ರರೇಖೆಯನ್ನು ನಿರ್ಮಿಸುತ್ತಾರೆ. ಮೊದಲನೆಯವರಿಗೆ ಮೂಲಬಿಂದುವಿನ ಮೂಲಕ ಹಾದುಹೋಗುವ ಸರಳರೇಖೆ ಸಿಗುತ್ತದೆ; ಅವರು ಅಜ್ಞಾತ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ವಿಶ್ವಾಸದಿಂದ ಅಳೆಯುತ್ತಾರೆ. ಎರಡನೆಯವರಿಗೆ ಮೇಲಿನ ತುದಿಯಲ್ಲಿ ಬಾಗುವ ರೇಖೆ, ಶೂನ್ಯಕ್ಕೆ ಹತ್ತಿರವಾಗದ ಛೇದಾಂಕ ಮತ್ತು ದುರ್ಬಲೀಕರಣದೊಂದಿಗೆ ಬದಲಾಗುವ ಮಾದರಿ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಸಿಗುತ್ತವೆ. ಅದೇ ವರ್ಣದ್ರವ್ಯ, ಅದೇ ಉಪಕರಣ, ಅದೇ ತರಂಗಾಂತರ. ವ್ಯತ್ಯಾಸ ಕೌಶಲದಲ್ಲಿಲ್ಲ. ಅದು ವಿನ್ಯಾಸದಲ್ಲಿದೆ: ಬ್ಲ್ಯಾಂಕ್‌ನಲ್ಲಿ ಏನಿತ್ತು, ಯಾವ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳನ್ನು ಆರಿಸಲಾಗಿತ್ತು ಮತ್ತು ಪರಿಶೀಲಿಸಿದ ವ್ಯಾಪ್ತಿಯು ಒಂದು ಸರಳ ಮಾದರಿ ಇನ್ನೂ ಅನ್ವಯಿಸುವ ಪ್ರದೇಶದೊಳಗೇ ಉಳಿದಿತ್ತೇ ಎಂಬುದರಲ್ಲಿ.

ಮಾಪನಾಂಕನ ವಕ್ರರೇಖೆಯು ಉಪಕರಣದ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಮತ್ತು ಸಾಂದ್ರತೆಯ ನಡುವಿನ ಒಪ್ಪಂದದಂತಿದೆ; ಅದನ್ನು ನಿರ್ಮಿಸಿದ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಮಾತ್ರ ಅದು ಮಾನ್ಯವಾಗಿರುತ್ತದೆ. ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದಂತೆ ಈ ಒಪ್ಪಂದದಲ್ಲಿ ಒಂದು ತಿಳಿದಿರುವ ದುರ್ಬಲ ಅಂಶವಿದೆ. ನೀರಿನಲ್ಲಿ ವರ್ಣದ್ರವ್ಯದ ಅಣುಗಳು ಪರಸ್ಪರ ಸೇರಿಕೊಳ್ಳುತ್ತವೆ; ಹೀಗಾಗಿ ಬೆಳಕನ್ನು ಅವಶೋಷಿಸುವ ರಾಸಾಯನಿಕ ಪ್ರಭೇದವು ಸಾಂದ್ರತೆಯೊಂದಿಗೆ ಬದಲಾಗುತ್ತದೆ. ಈ ಬದಲಾವಣೆಯನ್ನು ವ್ಯಾಪಿಸುವಂತೆ ನಿರ್ಮಿಸಿದ ವಕ್ರರೇಖೆ ನೇರವಾಗಿರುವುದಿಲ್ಲ; ಎಷ್ಟೇ ಸಂಖ್ಯಾಶಾಸ್ತ್ರೀಯ ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಬಳಸಿದರೂ ಅದನ್ನು ಸರಿಪಡಿಸಲಾಗುವುದಿಲ್ಲ. ರೇಖೆಗೆ ಅರ್ಥವಿರುವಂತೆ ವಕ್ರರೇಖೆಯನ್ನು ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸುವುದು ಹೇಗೆ ಎಂಬುದನ್ನು ಈ ಲೇಖನ ವಿವರಿಸುತ್ತದೆ: ಸರಿಯಾದ ಬ್ಲ್ಯಾಂಕ್ ಆರಿಸಿ, ವ್ಯಾಪ್ತಿಯನ್ನು ಮೊನೊಮರ್ ಪ್ರಧಾನ ಪ್ರದೇಶದೊಳಗೆ ಇರಿಸಿ, ಪುನರಾವರ್ತಿತ ಮಾಪನಗಳನ್ನು ಪ್ರಾಮಾಣಿಕವಾಗಿ ನಡೆಸಿ ಮತ್ತು ವಕ್ರತೆಯನ್ನು ಶಬ್ದವೆಂದು ಅಲ್ಲ, ಮಾಹಿತಿಯೆಂದು ಅರ್ಥೈಸಿ.

ಪ್ರಮಾಣಿತ ದ್ರಾವಣಗಳಿಂದಲ್ಲ, ಬ್ಲ್ಯಾಂಕ್‌ನಿಂದ ಆರಂಭಿಸಿ

ಬ್ಲ್ಯಾಂಕ್ ಶೂನ್ಯವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸುತ್ತದೆ; ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂಗಾಗಿ ಅದು ವರ್ಣದ್ರವ್ಯವನ್ನು ಹೊರತುಪಡಿಸಿ ಉಳಿದೆಲ್ಲವನ್ನೂ ಹೊಂದಿರಬೇಕು. ನೀರಿನ ದರ್ಜೆ, ಬಫರ್ ಮತ್ತು pH, ಲವಣಗಳು, ಸಹದ್ರಾವಕದ ಪ್ರಮಾಣ ಹಾಗೂ ತಾಪಮಾನ ಎಲ್ಲವೂ ಒಂದೇ ಆಗಿರಬೇಕು. ಮಾಪನಾಂಕನ ದ್ರಾವಣಗಳನ್ನು ಅದೇ ಮಾತೃಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ತಯಾರಿಸಿ. ಇದಕ್ಕೆ ಕಾರಣ ರಾಸಾಯನಿಕವಾಗಿದೆ, ಕೇವಲ ನಿಯಮಪಾಲನೆಯಲ್ಲ. ಲವಣ ಮತ್ತು ದ್ರಾವಕವು ಮೊನೊಮರ್, ಡೈಮರ್ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ ಅಣುಗಳ ಸಮೂಹಗಳ ನಡುವಿನ ಸಮತೋಲನವನ್ನು ಬದಲಿಸುತ್ತವೆ; ಇದರಿಂದ ಮಾಪನದ ತರಂಗಾಂತರದಲ್ಲಿನ ವರ್ಣಪಟಲ ಬದಲಾಗುತ್ತದೆ. ಕೇವಲ ನೀರಿರುವ ಬ್ಲ್ಯಾಂಕ್, ಮಾತೃಮಾಧ್ಯಮದಿಂದ ಉಂಟಾಗುವ ರಾಸಾಯನಿಕ ಪ್ರಭೇದಗಳ ಹಂಚಿಕೆಯ ಬದಲಾವಣೆಯನ್ನು ಸರಿಪಡಿಸಲಾರದು. ನೀರಿನಲ್ಲಿನ ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ವರ್ಣಪಟಲಗಳ ಸಮಗ್ರ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ, ಅದರ ಮುಕ್ತ ಪ್ರವೇಶ ದಾಖಲೆಯ ಮೂಲಕ ಲಭ್ಯವಿದ್ದು, ಸೋಡಿಯಂ ಕ್ಲೋರೈಡ್ ಅನ್ನು 0 ರಿಂದ 0.15 M ವರೆಗೆ ಬದಲಾಯಿಸಿತು. ಅಯಾನಿಕ ಬಲವು ಸಮತೋಲನವನ್ನು ಬದಲಿಸುವುದೇ ಇದಕ್ಕೆ ಕಾರಣ; ಲವಣ ಹೆಚ್ಚಿದಂತೆ ಅಣುಗಳ ಸಮೂಹೀಕರಣವೂ ಹೆಚ್ಚಿತು.

ಇದರ ಒಂದು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಪರಿಣಾಮ: ಎಂದಿಗೂ ಡೀಅಯನೀಕೃತ ನೀರಿನಲ್ಲಿ ಮಾಪನಾಂಕನ ಮಾಡಿ, ನಂತರ ಫಾಸ್ಫೇಟ್ ಬಫರ್ ಅಥವಾ ತ್ಯಾಜ್ಯನೀರಿನ ಶೋಧಿತ ದ್ರವದಲ್ಲಿ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಅಳೆಯಬೇಡಿ. ವಿಶ್ಲೇಷ್ಯವಸ್ತು ಇಲ್ಲದ ಮಾತೃಮಾಧ್ಯಮ ಲಭ್ಯವಿಲ್ಲದಾಗ, ಹೊಂದಿಕೆಯಾಗದ ಬಾಹ್ಯ ವಕ್ರರೇಖೆಗಿಂತ ಮಾದರಿಗೇ ಪ್ರಮಾಣಿತ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಸೇರಿಸುವ ವಿಧಾನ ಉತ್ತಮ. ಜಲೀಯ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳ ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹತೆಯನ್ನು ಕಾಪಾಡುವ ಸಂಬಂಧಿತ ಮಾರ್ಗದರ್ಶನವು ಮಾತೃಮಾಧ್ಯಮ ಮತ್ತು ಹಸ್ತಕ್ಷೇಪದ ಚರ್ಚೆಯಲ್ಲಿದೆ; ಪ್ರಮಾಣಾತ್ಮಕ ವರ್ಣದ್ರವ್ಯ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳ ಸಾಮಾನ್ಯ ತತ್ವಗಳನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಾ ವಿನ್ಯಾಸದ ಅವಲೋಕನದಲ್ಲಿ ವಿವರಿಸಲಾಗಿದೆ.

ಒಂದೇ ರಾಸಾಯನಿಕ ಪ್ರಭೇದ ಪ್ರಧಾನವಾಗಿರುವ ವ್ಯಾಪ್ತಿಯನ್ನು ಆರಿಸಿ

664 nm ಸಮೀಪದ ದೀರ್ಘ ತರಂಗಾಂತರದ ಪಟ್ಟಿಯಲ್ಲಿ ಪ್ರಮಾಣ ನಿರ್ಧರಿಸುವಾಗ, ವರ್ಣದ್ರವ್ಯದ ಹೆಚ್ಚಿನ ಭಾಗ ಮೊನೊಮರ್ ರೂಪದಲ್ಲಿದೆ ಎಂದು ಊಹಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಸಾಮಾನ್ಯ ನೀರಿನಲ್ಲಿ ದ್ರಾವಣಗಳು ಕಡಿಮೆ ಸಾಂದ್ರತೆಯಲ್ಲಿರುವವರೆಗೆ ಮಾತ್ರ, ಅಂದರೆ ಸರಿಸುಮಾರು ಕಡಿಮೆ ಮೈಕ್ರೋಮೋಲಾರ್ ಪ್ರದೇಶದಲ್ಲಿ, ಈ ಊಹೆ ಅನ್ವಯಿಸುತ್ತದೆ. ಪ್ರಕಟಿತ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಇಳಿಜಾರುಗಳು ಈ ಮಿತಿಯನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತವೆ: 1 cm ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಸುಮಾರು 7 ಮೈಕ್ರೋಮೋಲಾರ್‌ಗಿಂತ ಕಡಿಮೆ ಸಾಂದ್ರತೆಯಲ್ಲಿ ನಡೆಸಿದ ಮಾಪನಾಂಕನಗಳು ಸುಮಾರು 82,000 M-1 cm-1 ಇಳಿಜಾರನ್ನು ನೀಡುತ್ತವೆ. ಆದರೆ ಸುಮಾರು 37 ಮೈಕ್ರೋಮೋಲಾರ್‌ವರೆಗೆ ವಿಸ್ತರಿಸಿದ ಮಾಪನಾಂಕನದಲ್ಲಿ ಅದು ಸರಿಸುಮಾರು 67,100ಕ್ಕೆ ಇಳಿಯುತ್ತದೆ, ಏಕೆಂದರೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಪ್ರಮಾಣಿತ ದ್ರಾವಣಗಳಲ್ಲಿ ಆಗಲೇ ಗಮನಾರ್ಹ ಪ್ರಮಾಣದ ಡೈಮರ್ ಇರುತ್ತದೆ. ಇಲ್ಲಿ ಉಲ್ಲೇಖಿಸಿದ ಪ್ರತಿಯೊಂದು ಗುಣಾಂಕಕ್ಕೂ ಅದರ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳನ್ನು ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂನ ವರ್ಣಪಟಲ ಉಲ್ಲೇಖದಲ್ಲಿ ಸೂಚಿಸಲಾಗಿದೆ; ಸಂಖ್ಯೆಗಳ ಹೋಲಿಕೆಗೆ ಅದೇ ಸರಿಯಾದ ಸ್ಥಳ. ಈ ಲೇಖನವು ಅವುಗಳನ್ನು ವ್ಯಾಪ್ತಿಯನ್ನು ನಿಗದಿಪಡಿಸಲು ಮಾತ್ರ ಬಳಸುತ್ತದೆ.

ಇದರಿಂದ ವಿನ್ಯಾಸದ ನಿಯಮಗಳು ನೇರವಾಗಿ ದೊರೆಯುತ್ತವೆ:

1. ಅತಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಪ್ರಮಾಣಿತ ದ್ರಾವಣವೂ ವರ್ಣಪಟಲದ ಆಕಾರ ಸ್ಥಿರವಾಗಿರುವಷ್ಟು ದುರ್ಬಲವಾಗಿರಲಿ. ವಿಧಾನವನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸುವಾಗ, ಪ್ರತಿ ಮಟ್ಟದಲ್ಲೂ ಒಂದೇ ತರಂಗಾಂತರದಲ್ಲಿ ಓದುವ ಬದಲು ಸಂಪೂರ್ಣ ದೃಶ್ಯ ವ್ಯಾಪ್ತಿಯನ್ನು (ಸುಮಾರು 550 ರಿಂದ 750 nm) ಸ್ಕ್ಯಾನ್ ಮಾಡಿ. ಸಾಮಾನ್ಯೀಕರಿಸಿದ ವರ್ಣಪಟಲಗಳ ಆಕಾರ ಸಾಂದ್ರತೆಯೊಂದಿಗೆ ಬದಲಾದರೆ, ರಾಸಾಯನಿಕ ಸ್ಥಿತಿ ಬದಲಾಗುತ್ತಿದೆ ಮತ್ತು ವ್ಯಾಪ್ತಿ ಅತಿಯಾಗಿ ವಿಸ್ತರಿಸಿದೆ ಎಂದರ್ಥ.
2. ಪ್ರತಿ ಮಟ್ಟದಲ್ಲೂ 610 nm ಸಮೀಪದ ಅವಶೋಷಣ ಮತ್ತು 665 nm ಸಮೀಪದ ಅವಶೋಷಣದ ಅನುಪಾತವನ್ನು ಗಮನಿಸಿ. ಸಾಂದ್ರತೆಯೊಂದಿಗೆ ಅನುಪಾತ ಹೆಚ್ಚಾದರೆ, ಡೈಮರ್‌ನ ವರ್ಣಪಟಲ ಭುಜಭಾಗ ಬೆಳೆಯುತ್ತಿದೆ ಮತ್ತು ಮೊನೊಮರ್ ಮಾದರಿ ವಿಫಲವಾಗುತ್ತಿದೆ ಎಂದರ್ಥ. ಈ ರೋಗನಿರ್ಣಯಸಮಾನ ಸೂಚಕವನ್ನು ಸಮೂಹೀಕರಣ ಮತ್ತು ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಪರಿಣಾಮಗಳ ಮಾರ್ಗದರ್ಶಿಯಲ್ಲಿ ಇನ್ನಷ್ಟು ವಿವರಿಸಲಾಗಿದೆ.
3. ಕಡಿಮೆ ಮೈಕ್ರೋಮೋಲಾರ್ ಮಟ್ಟದ ಕೆಲಸಕ್ಕೆ 1 cm ಕೋಶ ಬಳಸಿ. ಸುಮಾರು 82,000 ಇಳಿಜಾರಿನಲ್ಲಿ, 5 ಮೈಕ್ರೋಮೋಲಾರ್ ಸುಮಾರು 0.41 ಅವಶೋಷಣವನ್ನು ಮತ್ತು 10 ಮೈಕ್ರೋಮೋಲಾರ್ ಸುಮಾರು 0.82 ಅವಶೋಷಣವನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ; ಎರಡೂ ಹೆಚ್ಚಿನ ಉಪಕರಣಗಳಿಗೆ ಸೂಕ್ತವಾಗಿವೆ.
4. ಹೆಚ್ಚು ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಮೂಲ ದ್ರಾವಣಗಳಿಗೆ, 1ಕ್ಕಿಂತ ಬಹಳ ಹೆಚ್ಚಿನ ಅವಶೋಷಣವನ್ನು ಒಪ್ಪಿಕೊಳ್ಳುವ ಬದಲು ಪಥವನ್ನು ಚಿಕ್ಕದಾಗಿಸಿ. ಆದರೆ ಚಿಕ್ಕ ಪಥವು ಬೆಳಕಿನ ಮಾಪನವನ್ನು ಸರಿಪಡಿಸುತ್ತದೆ, ರಾಸಾಯನಿಕ ಸ್ಥಿತಿಯನ್ನಲ್ಲ ಎಂಬುದನ್ನು ನೆನಪಿಡಿ. ಸಮೂಹೀಕರಣವು ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿದೆ, ಪಥದ ಉದ್ದವನ್ನಲ್ಲ. ಆದ್ದರಿಂದ ಹೆಚ್ಚು ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಮೂಲ ದ್ರಾವಣಕ್ಕೆ ಕಡಿಮೆ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಮೊನೊಮರ್ ವಕ್ರರೇಖೆಗಿಂತ, ಅದರ ರಾಸಾಯನಿಕ ಪ್ರಭೇದಗಳ ಹಂಚಿಕೆಯನ್ನು ಪರಿಗಣಿಸುವ ಪ್ರತ್ಯೇಕ ವಿಧಾನವೇ ಬೇಕು.

ಈ ವಿವರಣೆಯ ಬಹುಭಾಗಕ್ಕೆ ಆಧಾರವಾದ ಸಮಗ್ರ ಹೊಂದಾಣಿಕೆ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯು 1.1 ಮೈಕ್ರೋಮೋಲಾರ್‌ನಿಂದ 3.4 ಮಿಲಿಮೋಲಾರ್‌ವರೆಗಿನ 224 ವರ್ಣಪಟಲಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿತ್ತು; 34 ಮೈಕ್ರೋಮೋಲಾರ್‌ಗಿಂತ ಕಡಿಮೆ ಸಾಂದ್ರತೆಯಲ್ಲೇ ಟೆಟ್ರಾಮರ್ ಸಂಕೇತವನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಬಹುದೆಂದು ಕಂಡುಬಂದಿತು. ಈ ಫಲಿತಾಂಶ ಎಚ್ಚರಿಕೆಯನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ: ರೇಖೀಯ ವ್ಯಾಪ್ತಿಯು ಊಹಿಸುವುದಕ್ಕಿಂತ ಕಿರಿದಾಗಿದೆ; ಆದ್ದರಿಂದ ಅದನ್ನು ಊಹಿಸದೆ ಪರಿಶೀಲಿಸಿ.

ಮಟ್ಟಗಳು, ಪುನರಾವರ್ತಿತ ಮಾಪನಗಳು ಮತ್ತು ಕ್ರಮ

ಮೂರು ಬಿಂದುಗಳಿರುವ ವಕ್ರರೇಖೆ ಏನನ್ನೂ ಸಾಬೀತುಪಡಿಸುವುದಿಲ್ಲ. ICH Q2(R2)ಯ ಮಾನ್ಯೀಕರಣ ಮಾರ್ಗದರ್ಶನವು ರೇಖೀಯತೆಯನ್ನು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಲು ಕನಿಷ್ಠ ಐದು ಸಾಂದ್ರತೆಗಳನ್ನು ಕೇಳುತ್ತದೆ. ಶೂನ್ಯವಲ್ಲದ ಆರು ರಿಂದ ಎಂಟು ಮಟ್ಟಗಳು ಹೆಚ್ಚು ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹ ಕಾರ್ಯವಕ್ರರೇಖೆಯನ್ನು ನೀಡುತ್ತವೆ, ವಿಶೇಷವಾಗಿ ಸಮೂಹೀಕರಣ ಆರಂಭವಾಗುವ ಮೇಲಿನ ತುದಿಯಲ್ಲಿ. ಅನುಕೂಲಕ್ಕಾಗಿ ಆರಿಸಿದ ಗುಣೋತ್ತರ ಶ್ರೇಣಿಯ ಬದಲು, ಉದ್ದೇಶಿತ ಮಾದರಿ ವ್ಯಾಪ್ತಿಯನ್ನು ಆವರಿಸುವಂತೆ ಮಟ್ಟಗಳನ್ನು ಇರಿಸಿ; ವಕ್ರತೆ ಸಂಭವಿಸುವ ಸಾಧ್ಯತೆ ಹೆಚ್ಚು ಇರುವ ಪ್ರದೇಶದಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚುವರಿ ಮಟ್ಟಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸಿ.

ಒಂದೇ ಫ್ಲಾಸ್ಕ್‌ನಿಂದ ಮೂರು ಬಾರಿ ಓದುವ ಬದಲು, ಸ್ವತಂತ್ರವಾಗಿ ತಯಾರಿಸಿದ ದ್ರಾವಣಗಳನ್ನು ಬಳಸಿ ಪ್ರತಿ ಮಟ್ಟವನ್ನು ಎರಡು ಅಥವಾ ಮೂರು ಬಾರಿ ಅಳೆಯಿರಿ. ಸ್ವತಂತ್ರ ಪುನರಾವರ್ತಿತ ಮಾಪನಗಳು ತಯಾರಿಕೆಯ ದೋಷವನ್ನು ಬಹಿರಂಗಪಡಿಸುತ್ತವೆ; ಒಂದೇ ಫ್ಲಾಸ್ಕ್‌ನ ಪುನಃ ಓದುಗಳು ಉಪಕರಣದ ಶಬ್ದವನ್ನು ಮಾತ್ರ ತೋರಿಸುತ್ತವೆ. 2020ರ ಸಮಗ್ರ ಅಧ್ಯಯನವು ಪ್ರತಿ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಮೂರು ಬಾರಿ ಅಳೆಯಿತು; ಇದು ಇನ್ನೂ ಸಮಂಜಸವಾದ ಸಾಮಾನ್ಯ ಆಯ್ಕೆಯಾಗಿದೆ. ಕಾಲಕ್ರಮೇಣ ಉಂಟಾಗುವ ಬದಲಾವಣೆ, ಗಾಜಿನ ಮೇಲ್ಮೈಗೆ ಅಧಿಶೋಷಣೆ ಅಥವಾ ತಾಪಮಾನ ಬದಲಾವಣೆಗಳು ವಕ್ರತೆಯಂತೆ ಕಾಣದಂತೆ ಓದುವ ಕ್ರಮವನ್ನು ಯಾದೃಚ್ಛಿಕಗೊಳಿಸಿ. ಕ್ವಾರ್ಟ್ಜ್ ಕ್ಯೂವೆಟ್ ಅಧ್ಯಯನವೊಂದರಲ್ಲಿ 34 ಮೈಕ್ರೋಮೋಲಾರ್ ದ್ರಾವಣದಿಂದ ಸುಮಾರು 3 ಪ್ರತಿಶತ ವರ್ಣದ್ರವ್ಯವು 10 ನಿಮಿಷಗಳೊಳಗೆ ಮೇಲ್ಮೈಗೆ ಅಧಿಶೋಷಿತವಾಗಿರುವುದು ಕಂಡುಬಂದಿತು. ಆದ್ದರಿಂದ ಮಾಪನಗಳ ಸರಣಿಯುದ್ದಕ್ಕೂ ಸಂಪರ್ಕ ಸಮಯ, ಕ್ಯೂವೆಟ್, ಸ್ವಚ್ಛಗೊಳಿಸುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಕ್ರಮವನ್ನು ಒಂದೇ ರೀತಿಯಲ್ಲಿ ಇರಿಸಿ.

ವಿವರಣಾತ್ಮಕ ಲೆಕ್ಕಾಚಾರದ ಉದಾಹರಣೆ (ಅಳೆಯಲಾದ ದತ್ತಾಂಶವಲ್ಲ)

ಕೆಳಗಿನ ಸಂಖ್ಯೆಗಳು ಲೆಕ್ಕಾಚಾರವನ್ನು ತೋರಿಸಲು ಕಲ್ಪಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿವೆ. ಅವು ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದ ಮಾಪನಗಳಲ್ಲ; ಅವುಗಳನ್ನು ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ದತ್ತಾಂಶವೆಂದು ಉಲ್ಲೇಖಿಸಬಾರದು. ಅವುಗಳ ಸುತ್ತಲಿನ ಪರಿಶೀಲನೆಗಳ ವಿಧಾನವೇ ಮುಖ್ಯ.

ಹೊಂದಿಕೆಯಾಗುವ ಬಫರ್‌ನಲ್ಲಿ ಆರು ಪ್ರಮಾಣಿತ ದ್ರಾವಣಗಳಿವೆ, ಪಥ 1 cm ಆಗಿದೆ ಮತ್ತು ಹೊಂದಿಕೆಯಾಗುವ ಬ್ಲ್ಯಾಂಕ್‌ಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದಂತೆ 665 nmನಲ್ಲಿ ಓದಲಾಗಿದೆ ಎಂದು ಭಾವಿಸೋಣ:

ಸಾಂದ್ರತೆಗೆ ಎದುರಾಗಿ ಸರಾಸರಿ ಅವಶೋಷಣಕ್ಕೆ ಸರಳರೇಖೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿಸಿದಾಗ, ಪ್ರತಿ ಮೈಕ್ರೋಮೋಲಾರ್‌ಗೆ ಸುಮಾರು 0.0805 ಅವಶೋಷಣ ಘಟಕಗಳ ಇಳಿಜಾರು ಮತ್ತು ಶೂನ್ಯದಿಂದ ಕೆಲವೇ ಮಿಲಿಅವಶೋಷಣ ಘಟಕಗಳ ಅಂತರದಲ್ಲಿರುವ ಛೇದಾಂಕ ಸಿಗುತ್ತದೆ. ಇಳಿಜಾರನ್ನು ಪಥದ ಉದ್ದದಿಂದ ಭಾಗಿಸಿದರೆ ಅದನ್ನು ಗೋಚರ ಅವಶೋಷಣ ಗುಣಾಂಕವಾಗಿ ಪರಿವರ್ತಿಸಬಹುದು: ಪ್ರತಿ ಮೈಕ್ರೋಮೋಲಾರ್‌ಗೆ 0.0805 ಎಂದರೆ ಸುಮಾರು 80,500 M-1 cm-1, ಇದು ನೀರಿನಲ್ಲಿ ಮೊನೊಮರ್ ಪ್ರಧಾನವಾಗಿರುವ ವ್ಯಾಪ್ತಿಗೆ ಹೊಂದಿಕೆಯಾಗುತ್ತದೆ. ಇಲ್ಲಿ ಮುಖ್ಯವಾದ ಪರಿಶೀಲನೆ R ವರ್ಗವಲ್ಲ; ಅದು ಎರಡೂ ಸಂದರ್ಭಗಳಲ್ಲೂ ಅತ್ಯುತ್ತಮವಾಗಿ ಕಾಣಬಹುದು. ಮುಖ್ಯವಾದವು ಶೂನ್ಯಕ್ಕೆ ಹತ್ತಿರದ ಛೇದಾಂಕ, S2 ರಿಂದ S5ವರೆಗೆ ಸ್ಥಿರವಾಗಿರುವ A610/A665 ಅನುಪಾತ ಮತ್ತು ಯಾವುದೇ ಪ್ರವೃತ್ತಿಯಿಲ್ಲದೆ ಚದುರಿರುವ ಉಳಿಕೆಗಳು. S6ನಲ್ಲಿ ಅನುಪಾತದ ಏರಿಕೆಯು ಆ ಮಟ್ಟವನ್ನು ಕೈಬಿಡಲು ಅಥವಾ 7 ಮೈಕ್ರೋಮೋಲಾರ್ ಅನ್ನು ಈ ಮಾತೃಮಾಧ್ಯಮ ಮತ್ತು ಉಪಕರಣದ ಸಂಯೋಜನೆಯ ತಾತ್ಕಾಲಿಕ ಮೇಲ್ಮಿತಿಯಾಗಿ ಗುರುತಿಸಲು ನೀಡುವ ನೈಜ ಸೂಚನೆಯಾಗಿದೆ.

ಒಂದೇ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ 0.245 ಎಂದು ಓದಲಾದ ಅಜ್ಞಾತ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಮಾದರಿಯನ್ನು ನೇರವಾಗಿ ಪರಿವರ್ತಿಸಬಹುದು: 0.245 ಅನ್ನು ಪ್ರತಿ ಮೈಕ್ರೋಮೋಲಾರ್‌ಗೆ 0.0805ರಿಂದ ಭಾಗಿಸಿದರೆ ಸುಮಾರು 3.0 ಮೈಕ್ರೋಮೋಲಾರ್ ಸಿಗುತ್ತದೆ; ಇದು ಮಾದರಿಯ ಯಾವುದೇ ದುರ್ಬಲೀಕರಣ ಗುಣಕವನ್ನು ಅನ್ವಯಿಸುವ ಮೊದಲು ಇರುವ ಮೌಲ್ಯ. ಫಲಿತಾಂಶವನ್ನು ಅದರ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳೊಂದಿಗೆ ವರದಿ ಮಾಡಿ: ತರಂಗಾಂತರ, ಪಥ, ಬ್ಲ್ಯಾಂಕ್‌ನ ಮಾತೃಮಾಧ್ಯಮ, ಮಾಪನಾಂಕನ ವ್ಯಾಪ್ತಿ ಮತ್ತು ದಿನಾಂಕ.

ಭರ್ತಿ ಮಾಡಬಹುದಾದ ಮಾಪನಾಂಕನ ಕಾರ್ಯಪತ್ರ

ಪ್ರತಿ ಹೊಸ ಮಾತೃಮಾಧ್ಯಮಕ್ಕಾಗಿ ಈ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದ ದಾಖಲೆಗೆ ನಕಲಿಸಿ. ಒಂದು ಮಾತೃಮಾಧ್ಯಮ, ಒಂದು ಹಾಳೆ, ಒಂದು ವಕ್ರರೇಖೆ.

ಕಾರಕದ ರೂಪದ ಸಾಲು ಇಲ್ಲಿ ಇರಲು ಸರಿಯಾದ ಕಾರಣವಿದೆ. ವಾಣಿಜ್ಯ ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಜಲರಹಿತ ಲವಣವಾಗಿರಬಹುದು ಅಥವಾ ಟ್ರೈಹೈಡ್ರೇಟ್‌ನಂತಹ ಹೈಡ್ರೇಟ್ ಆಗಿರಬಹುದು; ತಪ್ಪು ಮೋಲಾರ್ ದ್ರವ್ಯರಾಶಿಯು ಪ್ರತಿಯೊಂದು ನಾಮಮಾತ್ರ ಸಾಂದ್ರತೆಯಲ್ಲೂ ಗಮನಕ್ಕೆ ಬಾರದ ವ್ಯವಸ್ಥಿತ ದೋಷವನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ. ಆರಂಭಿಕ ವಸ್ತುವಿನ ಶುದ್ಧತೆ ಮತ್ತು ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಗಳ ಪರಿಶೀಲನೆಗಳನ್ನು ಗುಣಮಟ್ಟ ಮತ್ತು ದರ್ಜೆಯ ಮಾರ್ಗದರ್ಶಿಯಲ್ಲಿ ವಿವರಿಸಲಾಗಿದೆ.

ಸ್ವತಂತ್ರ ಪರಿಶೀಲನಾ ಪ್ರಮಾಣಿತ ದ್ರಾವಣದೊಂದಿಗೆ ದೃಢೀಕರಿಸಿ

ಮಾಪನಾಂಕನ ವಕ್ರರೇಖೆಯು ತನ್ನದೇ ಕೆಲಸವನ್ನು ತಾನೇ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಬಾರದು. ರೇಖೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿಸಿದ ನಂತರ, ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾಗಿ ತೂಗಿ ತಯಾರಿಸಿದ ಮೂಲ ದ್ರಾವಣದಿಂದ, ಸ್ವೀಕರಿಸಿದ ವ್ಯಾಪ್ತಿಯ ಮಧ್ಯಭಾಗದ ಸಮೀಪದ ಸಾಂದ್ರತೆಯಲ್ಲಿ ಒಂದು ಪರಿಶೀಲನಾ ಪ್ರಮಾಣಿತ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ತಯಾರಿಸಿ; ಅದನ್ನು ಅಜ್ಞಾತ ಮಾದರಿಯಂತೆ ಓದಿ. ಕೆಲವೇ ಪ್ರತಿಶತಗಳೊಳಗಿನ ಹೊಂದಾಣಿಕೆಯು ತಯಾರಿಕೆಯ ಸರಪಳಿಯನ್ನು ದೃಢೀಕರಿಸುತ್ತದೆ; ಹೊಂದಿಕೆಯಾಗದ ಫಲಿತಾಂಶವು ಉಪಕರಣಕ್ಕಿಂತ ಮೂಲ ದ್ರಾವಣ ಅಥವಾ ದುರ್ಬಲೀಕರಣಗಳ ಸಮಸ್ಯೆಯನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಪ್ರತಿ ಮಾದರಿ ಬ್ಯಾಚ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಪರಿಶೀಲನಾ ಪ್ರಮಾಣಿತ ದ್ರಾವಣದ ಮಾಪನವನ್ನು ಪುನರಾವರ್ತಿಸಿ. ವಕ್ರರೇಖೆ ಬದಲಾಗದೆ ಇದ್ದರೂ ಅದರ ಫಲಿತಾಂಶ ಬದಲಾಗುತ್ತಿದ್ದರೆ, ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಅನುಮಾನಿಸುವ ಮೊದಲು ಕಾರ್ಯದ್ರಾವಣಗಳು ಅಥವಾ ಕ್ಯೂವೆಟ್ ಅನ್ನು ಅನುಮಾನಿಸಿ. ಈ ಒಂದೇ ಅಭ್ಯಾಸವು ಗಮನಕ್ಕೆ ಬಾರದ ಹೆಚ್ಚಿನ ದೋಷಗಳನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚುತ್ತದೆ: ಜಲರಹಿತ ವಸ್ತುವಿನ ಬಾಟಲಿಗೆ ಹೈಡ್ರೇಟ್‌ನ ಮೋಲಾರ್ ದ್ರವ್ಯರಾಶಿ ಬಳಸುವುದು, ಮಾಪನಾಂಕನ ಸರಿಯಾಗಿಲ್ಲದ ಮೈಕ್ರೋಪಿಪೆಟ್ ಅಥವಾ ತಪ್ಪಾದ ಅಯಾನಿಕ ಬಲದಲ್ಲಿ ತಯಾರಿಸಿದ ಬಫರ್. ಕಾರ್ಯಪತ್ರದಲ್ಲಿ ಇಳಿಜಾರಿನ ಪಕ್ಕದಲ್ಲೇ ಪರಿಶೀಲನಾ ದ್ರಾವಣದ ಮರುಪಡೆಯುವಿಕೆ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ದಾಖಲಿಸಿ; ಹೀಗಾಗಿ ನಂತರ ಓದುವವರಿಗೆ ರೇಖೆಯನ್ನು ಕೇವಲ ಎಳೆಯಲಾಗಿಲ್ಲ, ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಗಿದೆ ಎಂಬುದು ತಿಳಿಯುತ್ತದೆ.

ಅರೇಖೀಯತೆಯನ್ನು ಕಾರಣ ಗುರುತಿಸುವ ಸೂಚನೆಯಾಗಿ ಅರ್ಥೈಸುವುದು

ವಕ್ರರೇಖೆ ಬಾಗಿದಾಗ, ವೈಫಲ್ಯದ ಆಕಾರವು ಕಾರಣವನ್ನು ಗುರುತಿಸುತ್ತದೆ. ವರ್ಣಪಟಲದ ಆಕಾರ ಬದಲಾಗದೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ಅವಶೋಷಣದಲ್ಲಿ ಕೆಳಮುಖ ವಕ್ರತೆ ಕಂಡುಬಂದರೆ ಅದು ಉಪಕರಣದ ಸಮಸ್ಯೆಯನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ; ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಅಲೆದಾಡುವ ಬೆಳಕು ಹೆಚ್ಚಿನ ಅವಶೋಷಣ ಮೌಲ್ಯಗಳನ್ನು ಕಡಿಮೆಯಾಗಿ ತೋರಿಸುತ್ತದೆ. ವಕ್ರತೆಯೊಂದಿಗೆ 610 nm ಭುಜಭಾಗ ಏರುತ್ತಿದ್ದರೆ ಅದು ರಾಸಾಯನಿಕ ಸ್ಥಿತಿಯ ಸಮಸ್ಯೆಯನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ: ಡೈಮರ್ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ ಅಣುಗಳ ಸಮೂಹಗಳು ಮೊನೊಮರ್‌ಗಿಂತ ವಿಭಿನ್ನವಾಗಿ ಅವಶೋಷಿಸುತ್ತಿವೆ. ಶೂನ್ಯಕ್ಕೆ ಬರದ ಬ್ಲ್ಯಾಂಕ್ ಅಥವಾ ಕಾಲಕ್ರಮೇಣ ಮೌಲ್ಯ ಕಡಿಮೆಯಾಗುವ ಪ್ರಮಾಣಿತ ದ್ರಾವಣಗಳು ಪಾತ್ರೆಯ ಸಮಸ್ಯೆಯನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ: ಗಾಜು ಅಥವಾ ಕ್ಯೂವೆಟ್‌ಗಳಿಗೆ ಅಧಿಶೋಷಣೆ, ವಿಶೇಷವಾಗಿ ಮಾಪನಗಳ ಸರಣಿಯಲ್ಲಿ ಸಂಪರ್ಕ ಸಮಯಗಳು ಬದಲಾಗಿದ್ದರೆ. ಬಿಂದುಗಳ ಮೂಲಕ ಸ್ಪಷ್ಟವಾದ ಸರಳರೇಖೆ ಬಂದರೂ ಮಾದರಿ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ತಪ್ಪಾಗಿದ್ದರೆ ಅದು ಮಾತೃಮಾಧ್ಯಮದ ಸಮಸ್ಯೆಯನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ: ಮಾದರಿಗಳು ಮಾಪನಾಂಕನ ದ್ರಾವಣಗಳಿಂದ ಭಿನ್ನವಾಗಿವೆ. ಆದ್ದರಿಂದ ಮಾದರಿಯ ಮಾತೃಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲೇ ವಕ್ರರೇಖೆಯನ್ನು ಮರುನಿರ್ಮಿಸಿ ಅಥವಾ ಪ್ರಮಾಣಿತ ದ್ರಾವಣ ಸೇರ್ಪಡೆ ವಿಧಾನಕ್ಕೆ ಬದಲಿಸಿ. ಪ್ರತಿಯೊಂದು ಸಂದರ್ಭದಲ್ಲೂ ಸಾಂದ್ರತೆಗೆ ಎದುರಾಗಿ ಉಳಿಕೆಗಳ ನಕ್ಷೆಯನ್ನು ರಚಿಸಿ. ಯಾದೃಚ್ಛಿಕ ಚದುರುವಿಕೆ ಸರಳರೇಖಾ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಬೆಂಬಲಿಸುತ್ತದೆ; ನಗುವಿನ ಅಥವಾ ಹುಬ್ಬುಗಟ್ಟಿದ ಮುಖದಂತಿರುವ ವಕ್ರ ವಿನ್ಯಾಸವು ಯಾವುದೇ R ವರ್ಗದ ಮಿತಿಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹವಾಗಿ ಅದನ್ನು ತಳ್ಳಿಹಾಕುತ್ತದೆ. ಮಾನ್ಯೀಕರಣ ಮಾರ್ಗದರ್ಶನವೂ ಈ ಅಂಶವನ್ನು ಸ್ಪಷ್ಟವಾಗಿ ಸಮರ್ಥಿಸುತ್ತದೆ.

ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂನಲ್ಲಿ ಈ ಶಿಸ್ತಿನ ಫಲ ಸ್ಪಷ್ಟವಾಗುತ್ತದೆ. ಅದರ ಮೊನೊಮರ್ ಪಟ್ಟಿ ಪ್ರಬಲವಾಗಿದೆ, ಅದರ ರಾಸಾಯನಿಕ ವರ್ತನೆ ಚೆನ್ನಾಗಿ ವಿವರಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿದೆ ಮತ್ತು ಅದರ ವೈಫಲ್ಯದ ವಿಧಾನಗಳು ಸಂಖ್ಯೆಗಳನ್ನು ತಪ್ಪಾಗಿಸುವ ಮೊದಲೇ ವರ್ಣಪಟಲದಲ್ಲಿ ಕಾಣಿಸಿಕೊಳ್ಳುತ್ತವೆ. ವಕ್ರರೇಖೆಯನ್ನು ಕಿರಿದಾದ ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿ ನಿರ್ಮಿಸಿ, ಸರಿಯಾದ ಬ್ಲ್ಯಾಂಕ್ ಬಳಸಿ, ಸ್ವತಂತ್ರವಾಗಿ ಪುನರಾವರ್ತಿತ ಮಾಪನಗಳನ್ನು ಮಾಡಿ ಮತ್ತು ವ್ಯಾಪ್ತಿಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ವರ್ಣಪಟಲಗಳ ಆಕಾರಕ್ಕೆ ಆದ್ಯತೆ ನೀಡಿ. ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ದೊರೆಯುವ ರೇಖೆ ಚಿಕ್ಕದಾಗಿರುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ಅದರ ಪ್ರತಿಯೊಂದು ಬಿಂದುವೂ ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹವಾಗಿರುತ್ತದೆ.

ಈ ಲೇಖನದಲ್ಲಿನ ವಿವರಣಾತ್ಮಕ ಲೆಕ್ಕಾಚಾರಗಳು ವಿಧಾನವನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಲು ಕಲ್ಪಿತ ಸಂಖ್ಯೆಗಳನ್ನು ಬಳಸುತ್ತವೆ. ಸಂಪೂರ್ಣ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳೊಂದಿಗೆ ಅಳೆಯಲಾದ ಉಲ್ಲೇಖ ಗುಣಾಂಕಗಳು ಲಿಂಕ್ ಮಾಡಲಾದ ವರ್ಣಪಟಲ ಉಲ್ಲೇಖದಲ್ಲಿವೆ; ಆಧಾರವಾಗಿರುವ ಸಮೂಹೀಕರಣ ಅಧ್ಯಯನವನ್ನು PMID 33251415 ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಸೂಚಿಸಲಾಗಿದೆ.