EMB ಅಗರ್‌ನಲ್ಲಿ E. coli ಮತ್ತು ಇತರ ಕಾಲೊನಿಗಳ ನೋಟವನ್ನು ಅರ್ಥೈಸುವುದು

ಒಬ್ಬ ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿ ಗುರುತು ತಿಳಿಯದ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಇಯೋಸಿನ್ ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಅಗರ್ ಮೇಲೆ ಗೆರೆಗಳಾಗಿ ಹಚ್ಚಿ, ರಾತ್ರಿಯಿಡೀ ಇನ್‌ಕ್ಯುಬೇಟ್ ಮಾಡಿ, ಮರುದಿನ ಹಸಿರು ಮಿನುಗುಳ್ಳ ಗಾಢ ಬಣ್ಣದ ಕಾಲೊನಿಗಳಿರುವ ಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ನೋಡುತ್ತಾನೆ. ನೋಟ್‌ಬುಕ್‌ನಲ್ಲಿ "E. coli, ದೃಢೀಕೃತ" ಎಂದು ದಾಖಲಿಸುತ್ತಾನೆ. ಪ್ಲೇಟ್‌ನಿಂದ ಸಿಗುವ ಸಾಕ್ಷ್ಯಕ್ಕಿಂತಲೂ ಹೆಚ್ಚಿನದನ್ನು ಆ ದಾಖಲೆ ಪ್ರತಿಪಾದಿಸುತ್ತದೆ. ಪ್ಲೇಟ್ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಬೆಳವಣಿಗೆ ಮತ್ತು ಹುದುಗುವಿಕೆಯ ಲಕ್ಷಣರೂಪವನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ. ಪ್ರಜಾತಿಯ ಗುರುತು ಪ್ರತ್ಯೇಕ ನಿರ್ಣಯವಾಗಿದ್ದು, ಅದಕ್ಕೆ ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಸಾಕ್ಷ್ಯ ಬೇಕು.

ಈ ಮಾರ್ಗದರ್ಶಿ EMB ಅಗರ್ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಅರ್ಥೈಸಬೇಕಾದ ವಿಷಯವಾಗಿ ಪರಿಗಣಿಸುತ್ತದೆ. ಇದು ಅದರ ಮೂಲ ಪರಿಕಲ್ಪನೆಯನ್ನು ವಿವರಿಸುತ್ತದೆ, ನಿಯಂತ್ರಣಗಳೊಂದಿಗೆ ವಿವರಣಾತ್ಮಕ ಪ್ಲೇಟ್ ಚಿತ್ರಸಂಗ್ರಹವನ್ನು ಪರಿಚಯಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪಠ್ಯಪುಸ್ತಕದ ಚಿತ್ರಣ ದಾರಿತಪ್ಪಿಸಬಹುದಾದ ಸಂದರ್ಭಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸುತ್ತದೆ.

ಪ್ಲೇಟ್‌ನ ಹಿಂದಿರುವ ಪರಿಕಲ್ಪನೆ

EMB ಅಗರ್ ಆಯ್ಕಾತ್ಮಕವೂ ವಿಭೇದಕವೂ ಆಗಿದೆ. ಇಯೋಸಿನ್ Y ಮತ್ತು ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ವರ್ಣಕಗಳು ಅನೇಕ ಗ್ರಾಂ ಧನಾತ್ಮಕ ಜೀವಿಗಳ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ತಡೆಯುವುದರಿಂದ, ಈ ಮಾಧ್ಯಮ ಗ್ರಾಂ ಋಣಾತ್ಮಕ ಜೀವಿಗಳ ಬೆಳವಣಿಗೆಗೆ ಅನುಕೂಲವಾಗುತ್ತದೆ. ಇದೇ ವರ್ಣಕಗಳು ಸೂಚಕಗಳಾಗಿಯೂ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತವೆ: ಒಂದು ಜೀವಿ ಲಭ್ಯವಿರುವ ಸಕ್ಕರೆಯನ್ನು ಹುದುಗಿಸಿ, ಸ್ಥಳೀಯವಾಗಿ ಸಾಕಷ್ಟು ಆಮ್ಲವನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಿದಾಗ, ಕಾಲೊನಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರಮಾಣದಲ್ಲಿ ವರ್ಣಕವನ್ನು ಹೀರಿಕೊಂಡು ಗಾಢ ನೇರಳೆಯಿಂದ ನೀಲಿ ಮಿಶ್ರಿತ ಕಪ್ಪು ಬಣ್ಣಕ್ಕೆ ತಿರುಗುತ್ತದೆ. ತೀವ್ರವಾದ ಆಮ್ಲ ಉತ್ಪಾದನೆಯಿಂದ ಕಾಲೊನಿಯ ಮೇಲ್ಮೈಯಲ್ಲಿ ಲೋಹೀಯ ಹಸಿರು ವರ್ಣಮಿನುಗು ಕಾಣಿಸಬಹುದು. ಇಯೋಸಿನ್ ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಅಗರ್ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳಿಗಾಗಿ ASM ಕಾರ್ಯವಿಧಾನ ಈ ಆಯ್ಕೆ ಮತ್ತು ವಿಭೇದನೆಯ ಸಂಯೋಜನೆಯನ್ನು ವಿವರಿಸುತ್ತದೆ ಹಾಗೂ ಬೋಧನೆಗಾಗಿ ಉಲ್ಲೇಖ ಛಾಯಾಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ.

ಯಾವುದೇ ಫಲಿತಾಂಶವನ್ನು ಅರ್ಥೈಸುವ ಮೊದಲು ಒಂದು ವಿವರ ಮುಖ್ಯ: ಯಾವ ಸಂಯೋಜನೆಯ ಮಾಧ್ಯಮ ಬಳಸಲಾಗಿದೆ ಎಂಬುದನ್ನು ಪರಿಶೀಲಿಸಿ. ಹಳೆಯ Holt Harris Teague ಸಂಯೋಜನೆಯಲ್ಲಿ ಲ್ಯಾಕ್ಟೋಸ್ ಜೊತೆಗೆ ಸುಕ್ರೋಸ್ ಇರುತ್ತದೆ; Levine EMB ಯಲ್ಲಿ ಲ್ಯಾಕ್ಟೋಸ್ ಮಾತ್ರ ಇರುತ್ತದೆ. ಅನೇಕ Serratia marcescens ಪ್ರತ್ಯೇಕಿತ ತಳಿಗಳಂತೆ, ಸುಕ್ರೋಸ್ ಅನ್ನು ಹುದುಗಿಸುವ ಆದರೆ ಲ್ಯಾಕ್ಟೋಸ್ ಅನ್ನು ಹುದುಗಿಸದ ಜೀವಿ ಈ ಎರಡು ಆವೃತ್ತಿಗಳಲ್ಲಿ ವಿಭಿನ್ನವಾಗಿ ಕಾಣಬಹುದು. EMB ಮಾಧ್ಯಮಗಳ ತಯಾರಕರ ದಾಖಲೆ ಈ ಸಂಯೋಜನೆಯ ವ್ಯತ್ಯಾಸವನ್ನು ಸ್ಪಷ್ಟವಾಗಿ ಹೇಳುತ್ತದೆ. ಫಲಿತಾಂಶದ ಜೊತೆಗೆ ತಯಾರಕ ಮತ್ತು ಮಾಧ್ಯಮದ ಸಂಯೋಜನೆಯನ್ನು ನೋಟ್‌ಬುಕ್‌ನಲ್ಲಿ ದಾಖಲಿಸಿ.

ಸಿದ್ಧಪಡಿಸಿದ, ಸೂಕ್ಷ್ಮಜೀವಿಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸದ EMB ಅಗರ್ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಕೆಂಪು ಮಿಶ್ರಿತ ಕಂದು ಬಣ್ಣದಿಂದ ಕೆಂಪು ಮಿಶ್ರಿತ ನೇರಳೆ ಬಣ್ಣದವರೆಗೆ ಇರುತ್ತದೆ; ಕೆಲವೊಮ್ಮೆ ಹಸಿರು ಛಾಯೆ ಅಥವಾ ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಅವಕ್ಷೇಪವೂ ಇರಬಹುದು. ಆ ಹಿನ್ನೆಲೆ ಬಣ್ಣ ಬೆಳವಣಿಗೆಯಲ್ಲ. ಪ್ರತಿಯೊಂದು ಅವಲೋಕನವನ್ನು ಸೂಕ್ಷ್ಮಜೀವಿಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸದ ಪ್ಲೇಟ್ ಅಥವಾ ದಾಖಲಿಸಿದ ಮೂಲಸ್ಥಿತಿಯೊಂದಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿ. ಬೋಧನಾ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನದಲ್ಲಿ ಬೇರೆ ಸೂಚನೆ ಇಲ್ಲದಿದ್ದರೆ, 35 ರಿಂದ 37 C ನಲ್ಲಿ ಸುಮಾರು 18 ರಿಂದ 24 ಗಂಟೆಗಳ ವಾಯುಸಹಿತ ಇನ್‌ಕ್ಯುಬೇಶನ್ ನಂತರ ಪ್ರಾಥಮಿಕ ಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಪರಿಶೀಲಿಸಿ. ಇನ್‌ಕ್ಯುಬೇಶನ್ ಅವಧಿ ಹೆಚ್ಚಾದರೆ ಹುದುಗುವಿಕೆಯ ನೋಟ ಬದಲಾಗಬಹುದು.

ಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಹೇಗೆ ಪರಿಶೀಲಿಸಬೇಕು

ಎರಡು ರೀತಿಯ ಬೆಳಕನ್ನು ಬಳಸಿ. ಮೊದಲು ಪ್ರತಿಫಲಿತ ಅಥವಾ ಓರೆಯಾದ ಬೆಳಕಿನಲ್ಲಿ ಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಪರಿಶೀಲಿಸಿ, ಅದನ್ನು ಓರೆಯಾಗಿಸಿ: ಲೋಹೀಯ ಹೊಳಪು ವರ್ಣಮಿನುಗನ್ನು ಹೊಂದಿರುವುದರಿಂದ, ನೋಡುವ ಕೋನಕ್ಕೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ ಕಾಣಿಸಬಹುದು ಅಥವಾ ಮರೆಯಾಗಬಹುದು. ನಂತರ ಕಾಲೊನಿಯ ಬಣ್ಣ ಮತ್ತು ಗಾಢ ಕೇಂದ್ರಗಳನ್ನು ಅಳೆಯಲು ಅದರ ಮೂಲಕ ಹಾದುಬರುವ ಬೆಳಕಿನಲ್ಲಿ ಪರಿಶೀಲಿಸಿ. ಚೆನ್ನಾಗಿ ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾಗಿರುವ ಕಾಲೊನಿಗಳನ್ನು ಆಧರಿಸಿ ಪರಿಶೀಲನೆ ನಡೆಸಿ; ಏಕೆಂದರೆ ದಟ್ಟಣೆ ಮತ್ತು ನೆರೆಯ ಕಾಲೊನಿಗಳು ಸ್ಥಳೀಯ ಆಮ್ಲ ಸಂಗ್ರಹವನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸಿ ಬಣ್ಣವನ್ನು ಕುಗ್ಗಿಸಬಹುದು ಅಥವಾ ಹೆಚ್ಚಿಸಬಹುದು. ASM ಚಿತ್ರಸಂಗ್ರಹ ಇದನ್ನು ನೇರವಾಗಿ ತೋರಿಸುತ್ತದೆ: ಮಿಶ್ರ ಸಂವರ್ಧನೆಯಲ್ಲಿ ಸುತ್ತಲಿನ ಜೀವಿಗಳು ಆಮ್ಲೀಯ ಪರಿಸರವನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸುವುದರಿಂದ E. coli ಯ ನಿರೀಕ್ಷಿತ ಹೊಳಪು ಕಳೆದುಹೋಗಬಹುದು.

ಪ್ರಯೋಗದಲ್ಲಿ ಅವಕಾಶವಿದ್ದಾಗಲೆಲ್ಲ ನಿಯಂತ್ರಣಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸಿ. ಸಾಮಾನ್ಯ ಬೋಧನಾ ನಿಯಂತ್ರಣಗಳ ಗುಂಪಿನಲ್ಲಿ ನೀಲಿ ಮಿಶ್ರಿತ ಕಪ್ಪು ಬಣ್ಣ ಮತ್ತು ಲೋಹೀಯ ಹೊಳಪಿನ ಲಕ್ಷಣರೂಪಕ್ಕಾಗಿ E. coli ATCC 25922, ಬಣ್ಣರಹಿತ ಲಕ್ಷಣರೂಪಕ್ಕಾಗಿ Salmonella Typhimurium ATCC 14028 ಅಥವಾ Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 ನಂತಹ ಹುದುಗಿಸದ ಜೀವಿ, ಮತ್ತು ಬೆಳವಣಿಗೆ ತಡೆ ನಿಯಂತ್ರಣಕ್ಕಾಗಿ Enterococcus faecalis ಅಥವಾ Staphylococcus aureus ನಂತಹ ಗ್ರಾಂ ಧನಾತ್ಮಕ ಜೀವಿ ಸೇರಿರುತ್ತವೆ. ಇವುಗಳನ್ನು EMB ಮಾಧ್ಯಮಗಳ ಪ್ರಮಾಣಿತ ಗುಣಮಟ್ಟ ನಿಯಂತ್ರಣ ಕೋಷ್ಟಕಗಳಲ್ಲಿ ಪಟ್ಟಿಮಾಡಲಾಗಿದೆ. ಧನಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣದಲ್ಲಿ ಹೊಳಪು ಇಲ್ಲದಿದ್ದರೆ, ಗುರುತು ತಿಳಿಯದ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಅನುಮಾನಿಸುವ ಮೊದಲು ಇನ್‌ಕ್ಯುಬೇಶನ್, ದಟ್ಟಣೆ ಅಥವಾ ಮಾಧ್ಯಮದ ಸಂಯೋಜನೆಯನ್ನು ಅನುಮಾನಿಸಿ.

ವಿವರಣಾತ್ಮಕ ಪ್ಲೇಟ್ ಚಿತ್ರಸಂಗ್ರಹ

ಕೆಳಗಿನ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳು ರಚಿಸಲಾದ ವಿವರಣಾತ್ಮಕ ಚಿತ್ರಗಳು; ನೈಜ ಸಂವರ್ಧನೆಗಳ ಛಾಯಾಚಿತ್ರಗಳಲ್ಲ. ಅವು ಗಮನಿಸಬೇಕಾದ ಮಾದರಿಯನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತವೆ, ಯಾವುದೇ ಒಂದು ತಳಿಯ ನಿಖರ ಬಣ್ಣದ ಛಾಯೆಯನ್ನು ಅಲ್ಲ. ಅವುಗಳನ್ನು ASM ಉಲ್ಲೇಖ ಛಾಯಾಚಿತ್ರಗಳೊಂದಿಗೆ ಮತ್ತು ಬೋಧನಾ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದ ನೈಜ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿ.

ಪ್ಲೇಟ್ 1: EMB ಅಗರ್‌ನಲ್ಲಿ Escherichia coli, ಲ್ಯಾಕ್ಟೋಸ್ ಅನ್ನು ತೀವ್ರವಾಗಿ ಹುದುಗಿಸುವ ಜೀವಿ

EMB ಅಗರ್‌ನಲ್ಲಿ E. coli ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಗಾಢ ನೇರಳೆಯಿಂದ ನೀಲಿ ಮಿಶ್ರಿತ ಕಪ್ಪು ಬಣ್ಣದವರೆಗೆ ಇರುತ್ತದೆ. ತೀವ್ರವಾದ ಆಮ್ಲ ಉತ್ಪಾದನೆಯಿಂದ ಅದು ಅನೇಕ ವೇಳೆ ಗಾಢ ಕೇಂದ್ರ ಮತ್ತು ಲೋಹೀಯ ಹಸಿರು ಹೊಳಪನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ. ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿಗಳು ಹುಡುಕುವ ಪ್ರಸಿದ್ಧ ಲಕ್ಷಣ ಈ ಹೊಳಪೇ ಆಗಿದ್ದರೂ, ಅದನ್ನು ವ್ಯಾಖ್ಯಾನವೆಂದು ಪರಿಗಣಿಸದೆ ಪೂರಕ ಸಾಕ್ಷ್ಯವೆಂದು ಪರಿಗಣಿಸಿ. ಹೊಳಪಿನ ತೀವ್ರತೆ ತಳಿ, ಇನ್‌ಕ್ಯುಬೇಶನ್ ಅವಧಿ, ಕಾಲೊನಿಗಳ ಸಾಂದ್ರತೆ ಮತ್ತು ನೋಡುವ ಕೋನಕ್ಕೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ ಬದಲಾಗುತ್ತದೆ. ಹೊಳಪು ಇಲ್ಲದಿರುವುದರಿಂದ E. coli ಯನ್ನು ತಳ್ಳಿಹಾಕಲಾಗುವುದಿಲ್ಲ; ಹೊಳಪಿಲ್ಲದ ಗಾಢ ಕಾಲೊನಿ ಇತರ ಹಲವು ಹುದುಗಿಸುವ ಜೀವಿಗಳ ಸಾಧ್ಯತೆಯನ್ನೂ ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಮುಂದಿನ ಯಾವುದೇ ಕೆಲಸಕ್ಕೆ ದಟ್ಟವಾದ ಭಾಗದ ಅವಲೋಕನವನ್ನು ಆಧರಿಸುವ ಬದಲು ಚೆನ್ನಾಗಿ ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾಗಿರುವ ಕಾಲೊನಿಯನ್ನು ಆಯ್ಕೆಮಾಡಿ.

ಪ್ಲೇಟ್ 2: EMB ಅಗರ್‌ನಲ್ಲಿ Klebsiella pneumoniae, ಲೋಳೆಯಂಥ ಹುದುಗಿಸುವ ಜೀವಿ

EMB ಅಗರ್‌ನಲ್ಲಿ Klebsiella pneumoniae ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಗುಲಾಬಿ ಮಿಶ್ರಿತ ನೇರಳೆಯಿಂದ ಕಂದು ಮಿಶ್ರಿತ ನೇರಳೆ ಛಾಯೆಗಳವರೆಗೆ ಇರುವ ದೊಡ್ಡ, ಮಿನುಗುವ, ಲೋಳೆಯಂಥ ಕಾಲೊನಿಗಳನ್ನು ರೂಪಿಸುತ್ತದೆ. ಅವುಗಳಲ್ಲಿ ಅನೇಕ ವೇಳೆ ಗಾಢ ಕೇಂದ್ರಗಳಿರುತ್ತವೆ, ಆದರೆ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ತೀವ್ರವಾದ ಲೋಹೀಯ ಹೊಳಪು ಇರುವುದಿಲ್ಲ. Enterobacter ನಂತಹ ಸಂಬಂಧಿತ ಹುದುಗಿಸುವ ಜೀವಿಗಳಲ್ಲೂ ಇದೇ ರೀತಿಯ ಆಕಾರಲಕ್ಷಣಗಳು ಕಂಡುಬರುತ್ತವೆ. ಲೋಳೆಯಂಥ ಮೇಲ್ಮೈ ಸ್ವರೂಪ ಮತ್ತು ಕಾಲೊನಿಯ ಗಾತ್ರವೂ ಅರ್ಥೈಸುವಿಕೆಯ ಭಾಗಗಳಾಗಿವೆ: ಸಣ್ಣದಾಗಿ, ಚಪ್ಪಟೆಯಾಗಿರುವ ಗುಲಾಬಿ ಕಾಲೊನಿಯ ಸೂಚನಾತ್ಮಕ ಮಹತ್ವವು ದೊಡ್ಡದಾಗಿ, ಗುಮ್ಮಟಾಕಾರದಲ್ಲಿರುವ ಲೋಳೆಯಂಥ ಕಾಲೊನಿಗಿಂತ ಭಿನ್ನವಾಗಿರುತ್ತದೆ. E. coli ಯಂತೆಯೇ, ಪ್ಲೇಟ್ ಹುದುಗುವಿಕೆಯ ಲಕ್ಷಣರೂಪವನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ; ಪ್ರಜಾತಿ ಮಟ್ಟದಲ್ಲಿ ಹೆಸರು ನೀಡಲು ಕೆಳಗೆ ವಿವರಿಸಿರುವ ಜೀವರಾಸಾಯನಿಕ ದೃಢೀಕರಣ ಅಗತ್ಯ.

ಪ್ಲೇಟ್ 3: EMB ಅಗರ್‌ನಲ್ಲಿ Salmonella ಮತ್ತು ಇತರ ಹುದುಗಿಸದ ಜೀವಿಗಳು, ಬಣ್ಣರಹಿತ ಕಾಲೊನಿಗಳು

EMB ಅಗರ್‌ನಲ್ಲಿ Salmonella ಮತ್ತು Shigella ಹಾಗೂ ಅನೇಕ Pseudomonas ಪ್ರತ್ಯೇಕಿತ ತಳಿಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡ ಇತರ ಲ್ಯಾಕ್ಟೋಸ್ ಹುದುಗಿಸದ ಜೀವಿಗಳು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಬಣ್ಣರಹಿತ, ಅರೆಪಾರದರ್ಶಕ ಅಥವಾ ತಿಳಿ ಅಂಬರ್ ಬಣ್ಣದ ಕಾಲೊನಿಗಳಾಗಿ ಬೆಳೆಯುತ್ತವೆ. ಕೆಲವು ಸಂಯೋಜನೆಗಳು ಮತ್ತು ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳು ಮಸುಕಾದ ಗುಲಾಬಿ ಛಾಯೆಯನ್ನು ನೀಡುತ್ತವೆ; ಆದ್ದರಿಂದ ತಿಳಿ ಗುಲಾಬಿ ಕಾಲೊನಿಯನ್ನು ಸ್ವಯಂಚಾಲಿತವಾಗಿ ಹುದುಗಿಸುವ ಜೀವಿಯೆಂದು ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗುವುದಿಲ್ಲ. EMB, Salmonella ವನ್ನು Shigella ದಿಂದ ಅಥವಾ ಇತರ ಹುದುಗಿಸದ ಜೀವಿಗಳಿಂದ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸುವುದಿಲ್ಲ; ಆ ವ್ಯತ್ಯಾಸವನ್ನು ನಂತರದ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳು ನಿರ್ಧರಿಸಬೇಕು. E. coli ಯಂತೆಯೇ ಲೋಹೀಯ ಕಾಲೊನಿಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಲ್ಯಾಕ್ಟೋಸ್ ಧನಾತ್ಮಕ Salmonella ತಳಿಗಳೂ ದಾಖಲಾಗಿವೆ ಎಂಬುದನ್ನು ಗಮನಿಸಿ. ಒಂದೇ ಪ್ಲೇಟ್‌ನಿಂದ ಅಂತಿಮ ನಿರ್ಣಯಕ್ಕೆ ಬರಲಾಗುವುದಿಲ್ಲ ಎಂಬುದಕ್ಕೆ ಇದು ಮತ್ತೊಂದು ಕಾರಣ.

ಪ್ಲೇಟ್ 4: Serratia marcescens ಮತ್ತು ಸಂಯೋಜನೆಯಿಂದ ಉಂಟಾಗುವ ತಪ್ಪುಗ್ರಹಿಕೆ

Serratia marcescens ಗೆ ಪ್ರತ್ಯೇಕ ವಿಭಾಗ ನೀಡಲಾಗಿದೆ, ಏಕೆಂದರೆ ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿಗಳು ಬಹುಮಟ್ಟಿಗೆ ಕೆಂಪು ಕಾಲೊನಿಗಳನ್ನು ನಿರೀಕ್ಷಿಸಿ ಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ತಪ್ಪಾಗಿ ಅರ್ಥೈಸುತ್ತಾರೆ. ಬಹುತೇಕ ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿತ ತಳಿಗಳು ಲ್ಯಾಕ್ಟೋಸ್ ಅನ್ನು ಹುದುಗಿಸುವುದಿಲ್ಲ; ಆದ್ದರಿಂದ Levine EMB ಯಲ್ಲಿ ಅವು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ತಿಳಿಯಾಗಿ ಅಥವಾ ಮಂದ ಬಣ್ಣದಲ್ಲಿ ಕಾಣಿಸುತ್ತವೆ. ಅನೇಕ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿತ ತಳಿಗಳು ಸುಕ್ರೋಸ್ ಅನ್ನು ಹುದುಗಿಸುವುದರಿಂದ, ಸುಕ್ರೋಸ್ ಒಳಗೊಂಡ ಸಂಯೋಜನೆಯು ಹೆಚ್ಚು ಗಾಢವಾದ ಅಥವಾ ಆಮ್ಲಕ್ಕೆ ಹೆಚ್ಚು ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ನೀಡಬಹುದು. 35 ರಿಂದ 37 C ನಲ್ಲೂ ಪರಿಚಿತ ಕೆಂಪು ಪ್ರೊಡಿಜಿಯೋಸಿನ್ ವರ್ಣದ್ರವ್ಯವನ್ನು ನಿರೀಕ್ಷಿಸಬೇಡಿ; ಇನ್‌ಕ್ಯುಬೇಟರ್ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ ವರ್ಣದ್ರವ್ಯದ ಉತ್ಪಾದನೆ ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹವಾಗಿರುವುದಿಲ್ಲ. ಕಾರ್ಯವಿಧಾನದಲ್ಲಿ EMB ಅಗರ್‌ನಲ್ಲಿರುವ Serratia marcescens ಅನ್ನು ಉಲ್ಲೇಖಿಸಿದಾಗ, ಆ ಹೇಳಿಕೆ ಯಾವ ಸಂಯೋಜನೆಯನ್ನು ಆಧರಿಸಿದೆ ಎಂಬುದನ್ನು ಪರಿಶೀಲಿಸಿ. Serratia ಚಯಾಪಚಯದ ವಿಮರ್ಶೆ ಈ ತಪ್ಪುಗ್ರಹಿಕೆಯ ಹಿಂದಿರುವ ಲ್ಯಾಕ್ಟೋಸ್ ಋಣಾತ್ಮಕ ಮತ್ತು ಸುಕ್ರೋಸ್ ಹುದುಗುವಿಕೆಯಲ್ಲಿ ವ್ಯತ್ಯಾಸವಿರುವ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಸಂಕ್ಷೇಪಿಸುತ್ತದೆ.

ಪ್ಲೇಟ್ 5: ನಿಯಂತ್ರಣಗಳು ಮತ್ತು ಬೆಳವಣಿಗೆ ತಡೆಯಲ್ಪಟ್ಟ ಜೀವಿಗಳು

Staphylococcus, Enterococcus, Streptococcus ಮತ್ತು Bacillus ನಂತಹ ಗ್ರಾಂ ಧನಾತ್ಮಕ ಜೀವಿಗಳ ಬೆಳವಣಿಗೆ EMB ಅಗರ್‌ನಲ್ಲಿ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ತಡೆಯಲ್ಪಡುತ್ತದೆ ಅಥವಾ ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಕುಗ್ಗುತ್ತದೆ; ಆದರೆ ಪ್ರತಿಯೊಂದು ತಳಿಯಲ್ಲೂ ಬೆಳವಣಿಗೆ ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ತಡೆಯಲ್ಪಡುವುದಿಲ್ಲ. ನಿಯಂತ್ರಣಗಳ ಗುಂಪು ಅರ್ಥೈಸುವಿಕೆಯನ್ನು ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹವಾಗಿಸುತ್ತದೆ: E. coli ನಿಯಂತ್ರಣವು ನೀಲಿ ಮಿಶ್ರಿತ ಕಪ್ಪು ಬಣ್ಣ ಮತ್ತು ಹೊಳಪಿನೊಂದಿಗೆ ಉತ್ತಮ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ತೋರಿಸಬೇಕು; ಹುದುಗಿಸದ ಜೀವಿಯ ನಿಯಂತ್ರಣವು ಬಣ್ಣರಹಿತ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ತೋರಿಸಬೇಕು; ಬೆಳವಣಿಗೆ ತಡೆ ನಿಯಂತ್ರಣದಲ್ಲಿ ಅಲ್ಪ ಬೆಳವಣಿಗೆ ಇರಬೇಕು ಅಥವಾ ಬೆಳವಣಿಗೆಯೇ ಇರಬಾರದು. ಬೆಳವಣಿಗೆ ತಡೆ ನಿಯಂತ್ರಣ ಚೆನ್ನಾಗಿ ಬೆಳೆದರೆ, ಆಯ್ಕಾತ್ಮಕ ಹಂತ ವಿಫಲವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಆ ಬ್ಯಾಚ್‌ನ ಇತರ ಪ್ರತಿಯೊಂದು ಅವಲೋಕನವೂ ಸಂಶಯಾಸ್ಪದವಾಗಿದೆ. ಸಂವರ್ಧನಾ ಮಾಧ್ಯಮಗಳು ಉತ್ತರಿಸುವ ಪ್ರಶ್ನೆಗಿಂತ ಬೇರೆ ಪ್ರಶ್ನೆಗೆ ಬಣ್ಣಿಸುವ ವಿಧಾನಗಳು ಉತ್ತರಿಸುತ್ತವೆ; ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದಲ್ಲಿ ಸ್ಲೈಡ್ ಬಣ್ಣಿಸುವಿಕೆಯ ಬಗ್ಗೆ ತಿಳಿಯಲು ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಬಣ್ಣಿಸುವಿಕೆಯ ಚಿತ್ರಸಂಗ್ರಹವನ್ನು ನೋಡಿ.

ಮಿತಿಗಳೊಳಗಿನ ಹೋಲಿಕೆ

ದಾರಿತಪ್ಪಿಸುವ ನೋಟಗಳನ್ನು ಮೂರು ವಾಕ್ಯಗಳು ಸಂಕ್ಷೇಪಿಸುತ್ತವೆ. ಗಾಢ ಬಣ್ಣ ಎಂದರೆ E. coli ಎಂದಲ್ಲ; ಏಕೆಂದರೆ Klebsiella, Enterobacter ಮತ್ತು ಇತರ ಹುದುಗಿಸುವ ಜೀವಿಗಳು ಹೊಳಪಿಲ್ಲದೆ ಗಾಢ ಕೇಂದ್ರಗಳನ್ನು ಬೆಳೆಸಿಕೊಳ್ಳುತ್ತವೆ. ಗುಲಾಬಿ ಬಣ್ಣ ಎಂದರೆ Klebsiella ಎಂದಲ್ಲ; ಏಕೆಂದರೆ ಮಧ್ಯಮವಾಗಿ ಅಥವಾ ನಿಧಾನವಾಗಿ ಹುದುಗಿಸುವ ಜೀವಿಗಳು ಮತ್ತು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಹುದುಗಿಸದವುಗಳೆಂದು ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗುವ ಕೆಲವು ಜೀವಿಗಳು ಗುಲಾಬಿ ಅಥವಾ ತಿಳಿ ನೇರಳೆ ಬಣ್ಣದಲ್ಲಿ ಕಾಣಿಸುತ್ತವೆ. ಹೊಳಪು ಎಂದರೆ ಖಚಿತವಾದ E. coli ಎಂದಲ್ಲ; ಏಕೆಂದರೆ ಇತರ ತೀವ್ರ ಹುದುಗಿಸುವ ಜೀವಿಗಳೂ ಅದನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡಬಹುದು. ಬೋಧನಾ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನ ಮತ್ತು ಅದರ ಮಿಶ್ರ ಸಂವರ್ಧನೆಯ ಚಿತ್ರಗಳು ಈ ಪ್ರತಿಯೊಂದು ತಪ್ಪು ನಿರ್ಣಯದ ಉದಾಹರಣೆಗಳನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತವೆ.

ದೃಢೀಕರಣದ ಮಿತಿಗಳು

EMB ಅಗರ್ ಲಕ್ಷಣರೂಪವನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ, ಪ್ರಜಾತಿಯನ್ನು ಅಲ್ಲ. ವಿಭಿನ್ನ ಜೀವಿಗಳು ಒಂದೇ ಕಾಲೊನಿ ನೋಟವನ್ನು ಹೊಂದಿರಬಹುದು; ಮತ್ತು ಒಂದೇ ಜೀವಿಯು ತಳಿ, ವಯಸ್ಸು, ದಟ್ಟಣೆ, ಸಂಯೋಜನೆ ಹಾಗೂ ಇನ್‌ಕ್ಯುಬೇಶನ್‌ಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ ತನ್ನ ಪಠ್ಯಪುಸ್ತಕದ ಚಿತ್ರಣಕ್ಕಿಂತ ಭಿನ್ನವಾಗಿರಬಹುದು. ಅದಕ್ಕಾಗಿಯೇ ಬೋಧನಾ ಮತ್ತು ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಕಾರ್ಯಪ್ರವಾಹಗಳು EMB ಆಕಾರಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ತಾತ್ಕಾಲಿಕ ಗುರುತಿಸುವಿಕೆಯ ಸೂಚನೆಗಳಾಗಿ ಪರಿಗಣಿಸುತ್ತವೆ.

ಸಾಕ್ಷ್ಯಾಧಾರಿತ ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿ ಕಾರ್ಯಪ್ರವಾಹ ಹೀಗಿರುತ್ತದೆ: ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾಗಿರುವ ಕಾಲೊನಿಯನ್ನು ವಿವರಿಸಿ (ಗಾತ್ರ, ಬಣ್ಣ, ಕೇಂದ್ರ, ಓರೆಯಾದ ಬೆಳಕಿನಲ್ಲಿನ ಹೊಳಪು, ಲೋಳೆಯಂಥ ಸ್ವರೂಪ), ಸಂಯೋಜನೆ, ಇನ್‌ಕ್ಯುಬೇಶನ್ ಅವಧಿ ಮತ್ತು ತಾಪಮಾನ ಹಾಗೂ ನಿಯಂತ್ರಣಗಳನ್ನು ದಾಖಲಿಸಿ; ನಂತರ ಯಾವುದೇ ದೃಢೀಕರಣ ಪರೀಕ್ಷೆಗೆ ಮೊದಲು ಚೆನ್ನಾಗಿ ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾಗಿರುವ ಕಾಲೊನಿಯನ್ನು ಉಪಸಂವರ್ಧನೆ ಮಾಡಿ ಶುದ್ಧ ಸಂವರ್ಧನೆ ಪಡೆಯಿರಿ. ಸಾಮಾನ್ಯ ಮುಂದಿನ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳಲ್ಲಿ E. coli ಮತ್ತು ಕೋಲಿಫಾರ್ಮ್‌ಗಳ ತಾತ್ಕಾಲಿಕ ಗುರುತಿಸುವಿಕೆಗಾಗಿ ಗ್ರಾಂ ಬಣ್ಣಿಸುವಿಕೆ ಜೊತೆಗೆ IMViC ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳು, ಕರುಳಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಜೀವಿಗಳಿಗಾಗಿ TSI ಅಥವಾ KIA ಹಾಗೂ ಜೀವಿ-ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಜೀವರಾಸಾಯನಿಕ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳ ಗುಂಪುಗಳು ಸೇರಿವೆ. ಕಾರ್ಯಕ್ಕೆ ಅಗತ್ಯವಿದ್ದಲ್ಲಿ ಸೀರಾಲಾಜಿಕಲ್, MALDI TOF ಅಥವಾ ಇತರ ಮೌಲ್ಯೀಕರಿಸಿದ ಗುರುತಿಸುವಿಕೆಯನ್ನೂ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಕರುಳಿನ ಜೀವಿಗಳ ಆಯ್ಕಾತ್ಮಕ ಮತ್ತು ವಿಭೇದಕ ಮಾಧ್ಯಮಗಳ ನಡುವೆ EMB ಹೇಗೆ ಹೊಂದಿಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ ಎಂಬ ಹಿನ್ನೆಲೆಗಾಗಿ, ಕರುಳಿನ ಜೀವಿಗಳ ಸಂವರ್ಧನಾ ಮಾಧ್ಯಮಗಳ ಪರಿಚಯಗಳನ್ನು ಮತ್ತು ಗ್ರಾಂ ಬಣ್ಣಿಸುವಿಕೆಯ ನಂತರದ ಪರಿಶೀಲನೆಯನ್ನು ನೋಡಿ. ನೀಲಿ ಸ್ಲೈಡ್ ಬಣ್ಣಿಸುವಿಕೆ ಏನನ್ನು ಸಾಬೀತುಪಡಿಸಬಲ್ಲದು ಮತ್ತು ಏನನ್ನು ಸಾಬೀತುಪಡಿಸಲಾರದು ಎಂಬ ಸಂಬಂಧಿತ ಪ್ರಶ್ನೆಗೆ, ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಬಣ್ಣಿಸುವಿಕೆಯ ಚಿತ್ರಸಂಗ್ರಹ ಇದೇ ದೃಷ್ಟಿಕೋನದಲ್ಲಿ ಅವಲೋಕನ ಮತ್ತು ನಿರ್ಣಯವನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾಗಿಡುತ್ತದೆ.

ನಿರ್ಣಯಕ್ಕಿಂತ ಮೊದಲು ಅವಲೋಕನವನ್ನು ಬರೆಯಿರಿ. "24 ಗಂಟೆಗಳ ನಂತರ Levine EMB ಯಲ್ಲಿ ನೋಡುವ ಕೋನಕ್ಕೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ ಬದಲಾಗುವ ಹಸಿರು ಹೊಳಪುಳ್ಳ ಗಾಢ ನೀಲಿ ಮಿಶ್ರಿತ ಕಪ್ಪು ಕಾಲೊನಿಗಳು; ತೀವ್ರವಾದ ಲ್ಯಾಕ್ಟೋಸ್ ಹುದುಗುವಿಕೆಗೆ ಹೊಂದಿಕೆಯಾಗುತ್ತವೆ" ಎಂಬ ಹೇಳಿಕೆ ಸಾಕ್ಷ್ಯಾಧಾರಿತವಾಗಿದೆ. "E. coli, ದೃಢೀಕೃತ" ಎನ್ನಲು ಪ್ಲೇಟ್ ಒಂದರಿಂದಲೇ ಒದಗಿಸಲಾಗದ ದೃಢೀಕರಣ ಹಂತ ಅಗತ್ಯ.