Marani sel pipi nganggo metilena biru: apa sing kudu diamati

Sawijining siswa netesake suspensi sel pipi ing kaca preparat, ndeleng liwat mikroskop, lan meh ora weruh apa-apa. Sawetara wujud samar katon ngambang ing lapangan pandang sing padhang. Dheweke nyetel fokus, banjur nambah cahya, banjur nyimpulake yen kaca preparate kosong. Kaca preparat kasebut ora kosong. Sel-sele ana ing kono. Sel-sel mau meh transparan, lan sifat transparan iki pancen masalah sing arep diatasi dening pewarna iki.

Bedane antarane pangarep-arep lan gambar iki perlu diterangake sadurunge protokol diwiwiti. Wong sing lagi sinau ngarepake mikroskop bisa nuduhake rincian kaya zoom kamera sing ndadekake tulisan ing papan adoh katon cetha. Mikroskop lapangan padhang nindakake perkara sing luwih winates: nuduhake bedane panyerepan cahya. Sel pipi sing durung diwernani meh ora nyerep cahya, mula meh ora menehi prabédan. Metilena biru nambah prabédan kasebut. Pewarna iki kaiket ing njero sel kanthi ora rata lan ngowahi struktur dadi kontras. Sawise siswa mangerteni konsep kasebut, saben langkah sabanjure bisa dimangerteni minangka akibat sing logis, dudu mung resep.

Katrangan dhasar babagan carane pewarna prasaja nambah kontras ing laboratorium sekolah migunani ing kene, lan pangeling babagan nyiyapake mikroskop lapangan padhang sadurunge pewarnaan bisa nyegah separo preparat sing gagal. Kimia sing njalari werna kasebut dirembug ing pambuka babagan metilena biru ing mikroskopi, sing nerangake apa sebabe pewarna iki kerep ana ing meja laboratorium.

Protokol kelas

Versi preparat teles ing ngisor iki minangka pilihan baku sing luwih prasaja kanggo kelas umum. Ora mbutuhake geni lan ora ana langkah fiksasi. Varian apusan sing difiksasi, sing digunakake ing sawetara pandhuan perguruan tinggi, nambah langkah pangatusan ing hawa lan fiksasi panas sedhela, kaya ing kegiatan apusan pipi North Central Texas College sing diterbitake liwat Biology LibreTexts, nanging fiksasi panas iku pakulinan ing mikrobiologi, dudu syarat kanggo ndeleng sel epitel.

Sing dibutuhake: kaca preparat lan kaca panutup sing resik, swab steril sapisan pakai (luwih dianjurake) utawa tusuk untu pipih anyar, botol penetes isi larutan metilena biru ing banyu kanthi konsentrasi 0.5 nganti 1 persen, banyu suling utawa banyu deionisasi, kertas panyerep, sarung tangan, lan mikroskop majemuk kanthi perbesaran total 100x lan 400x.

1. Kumur nganggo banyu biasa. Iki ngilangake partikel panganan sing mengko bakal kewernan banget lan ngganggu pengamatan sel.
2. Saben siswa mung njupuk sampel saka pipine dhewe. Usap sisih njero pipi kanthi alon nganggo swab steril anyar. Pencet, aja dikerok. Mungkasi sadurunge ana rasa ora kepenak utawa getihen.
3. Gulungake swab ing tengah kaca preparat sing resik supaya ninggalake lapisan tipis. Lapisan tipis minangka faktor paling wigati kanggo nemtokake apa preparat bisa diamati kanthi cetha. Endapan putih sing kandel bakal kewernan dadi gumpalan biru sing ora bisa diwaca.
4. Tambahake setetes metilena biru ing ndhuwur apusan. Enteni 1 nganti 3 menit. Siji menit wis cukup ing akeh protokol perguruan tinggi; pandhuan laboratorium sains NCERT Kelas IX nggunakake kira-kira 3 menit kanggo preparat sementara. Luwih suwe ora ateges luwih apik, lan pewarnaan kelewihan minangka kesalahan wektu sing paling umum.
5. Bilas alon-alon nganggo banyu suling utawa serep pewarna sing keluwihan nganggo kertas panyerep, manut protokol setempat. Latar mburi kudune dadi biru pucet, dudu biru tuwa banget.
6. Mudhunake kaca panutup kanthi miring supaya siji sisih ndemek dhisik, banjur lebokake alon-alon. Iki nyegah gelembung hawa mlebu.
7. Wiwiti nganggo perbesaran cilik kanggo nemokake sel, pesthekake fokus lan posisine ing tengah, banjur pindhah menyang 100x lan pungkasane 400x. Ing 400x, mung gunakake pangatur fokus alus.

Konsentrasi pewarna perlu diterangake kanthi trep ing siji ukara. Protokol sekolah umume nggunakake larutan metilena biru ing banyu kanthi konsentrasi watara 1 persen. Larutan stok sing luwih pekat utawa wektu paparan sing dawa bakal ndadekake latar mburi luwih peteng kanthi luwih cepet tinimbang inti sel, saengga mbalikke kontras sing dadi dhasar kegiatan iki.

Nangani bahan saka pipi kanthi aman

Sampel pipi ngemot idu lan mikroorganisme normal saka tutuk, mula anggep saben apusan seger minangka bahan sing bisa nularake infeksi, sanajan sing menehi sampel yaiku kanca sakelas sing sehat. Pandhuan kaslametan biologis American Society for Microbiology kanggo laboratorium piwulangan nerangake prinsip umum: pambiji risiko sadurunge sesi, nganggo sarung tangan, nglindhungi mripat yen ana kemungkinan cipratan, ngumbah tangan sawise rampung, menehi disinfektan ing meja laboratorium, lan mbuwang barang sapisan pakai sing kena kontaminasi liwat jalur limbah biologis sing wis disetujoni.

Papat aturan kelas nyakup sapérangan gedhe risiko. Siji panyumbang sampel kanggo saben swab lan saben kaca preparat, ora kena dienggo bebarengan. Mung njupuk sampel dhewe, aja njupuk sampel saka kanca. Swab lan tusuk untu sapisan pakai langsung dilebokake ing wadhah limbah sing wis ditemtokake, aja dibalekake menyang meja laboratorium. Metilena biru dhewe bisa ninggalake werna ing kulit lan sandhangan sarta nyebabake iritasi mripat, mula sarung tangan lan tata cara karesikan lumrah kanggo pewarna tetep ditrapake. Aja ngembangake kegiatan iki dadi ngultur apa wae saka apusan, lan aja nyoba fiksasi panas bahan manungsa seger ing sanjabane prosedur kaslametan sekolah.

Apa sing kudu diamati, lan apa sebabe katon mangkono

Ing 100x, goleki sel sing amba lan pipih, biru pucet, kanthi garis njaba oval utawa poligonal sing ora ajeg. Sel kasebut katon dhewe-dhewe utawa minangka lembaran sing tumpang tindih kanthi renggang. Saben sel biasane duwe siji titik biru sing luwih peteng. Titik kasebut yaiku inti sel. Gatekna uga susunane: sel epitel pipih iku kaya ubin tipis, dudu bal, mula pinggirane katon kaya lapisan glasir sing retak, dudu balon bunder.

Ing 400x, telung ciri katon cetha. Wates sel katon minangka garis tipis sing luwih peteng ngubengi sel. Sitoplasma ngisi njero sel kanthi werna biru enom sing rata. Inti sel katon luwih peteng lan luwih padhet, asring oval, biasane cedhak tengah nanging ora mesthi. Jaluken siswa nyathet telu-telune, uga wujud lan perbesarane, amarga iku pancen sing dijaluk ing lembar kerja.

Ana siji bab ngenani akurasi sing wigati ing kene, lan akeh lembar kerja sing salah nerangake. Wates sing katon cocog karo wilayah membran plasma, nanging membran kasebut dhewe, yaiku lapisan ganda lipid sing kandhele kira-kira 7 nganti 10 nanometer, adoh luwih cilik tinimbang sing bisa dipisahake kanthi cetha dening mikroskop sekolah. Sing dideleng siswa yaiku pinggir optis sel lan pewarna sing nglumpuk ing kono. Kawigaten sing padha uga ditrapake kanggo organel. Mitokondria, retikulum endoplasma, badan Golgi, lan ribosom ora katon ing preparat iki. Mikroskop cahya konvensional bisa mbedakake rincian nganti kira-kira 0.2 mikrometer ing kahanan sing apik, kaya sing diterangake ing katrangan dhasar biologi sel NCBI babagan piranti mikroskopi, lan sapérangan gedhe ultrastruktur ukurane ana ing ngisor utawa cedhak wates kasebut. Perbesaran kosong sing luwih dhuwur mung ndadekake gambar luwih gedhe tanpa nambah rincian.

Apa sebabe inti sel kewernan paling peteng? Metilena biru iku pewarna kationik, nduweni muatan positif ing larutan, lan sesambungan karo bahan sing nduweni muatan negatif ing sel, utamane asam nukleat. Kromatin nglumpukake DNA ing inti sel, mula inti sel nglumpukake pewarna paling akeh. Sitoplasma ngemot RNA lan molekul liyane sing nduweni muatan, mula uga kewernan, nanging luwih sumebar lan luwih pucet. Cathetan wigati: metilena biru dudu pewarna sing spesifik kanggo DNA. Panaliten babagan panyebaran metilena biru ing pencitraan inti sel njlentrehake yen kation kasebut sesambungan karo wilayah sing akeh asam nukleate, lan panaliten kuantitatif lawas babagan ikatan metilena biru ing preparat sel nemokake manawa sapérangan gedhe pewarna sing kaiket ana gandhengane karo asam nukleat. Mula, inti sel peteng lan sitoplasma padhang iku pola kontras, dudu uji molekuler.

Kesalahan sing bakal ditindakake siswa, lan carane mangerteni

Meh saben preparat sing gagal kalebu ing salah siji saka limang pola. Wulangana siswa ngenali masalah ing preparat tinimbang mung mbaleni tanpa mangerteni sebabe.

Pewarnaan kelewihan ndadekake sel lan latar mburi peteng rata, mula inti sel ora bisa dibedakake saka lapangan pandang. Ndandani kanthi nyuda wektu pewarnaan utawa mbilas luwih tenanan. Pewarnaan sing kurang ninggalake wujud samar sing ilang nalika cahya ditambah; tambah wektu kanthi undhakan telung puluh detik. Apusan kandel ngasilake gumpalan padhet sing tumpang tindih nganti ora ana garis njaba sing bisa dilacak; ndandanine kudu kanthi cara mekanis, yaiku gawe apusan luwih tipis ing percobaan sabanjure, amarga bilasan ora bisa mbenerake tumpukan sel. Gelembung hawa katon minangka bunderan sampurna kanthi pinggir peteng sing cetha lan ngganggu siswa anyar sing nganggep iku struktur sel; pasang maneh kaca panutup kanthi alon lan miring. Titik-titik peteng cilik sing sumebar ing ndhuwur utawa sakupenge sel biasane bakteri normal saka tutuk, kaya sing dicathet ing protokol sekolah kayata prosedur sel pipi Ingrid Science. Titik kasebut negesake yen tutuk dienggoni mikroorganisme, sing bisa dadi bab sing gampang dielingi siswa, nanging spesiese ora bisa diidentifikasi ing kegiatan iki lan ora kena digambar minangka bagean sel. Sisa panganan lan untaian lendir kewernan kanthi ora rata lan pekat; kumur sadurunge njupuk sampel ditindakake kanggo nyuda bahan kasebut.

Apa sing ora bisa ditindakake kegiatan iki

Iki pengamatan kanggo pendhidhikan, dudu tes diagnostik. Ora ana apa-apa saka rupa sel ing pewarnaan kelas sing bisa digunakake kanggo diagnosa infeksi, kanker, utawa penyakit apa wae, lan artikel iki ora kena diwaca minangka pratelan kosok baline. Preparat iki nuduhake wujud, wates, sitoplasma, lan inti sel ing rong perbesaran. Preparat iki ora nuduhake ultrastruktur membran, rincian organel, utawa identitas molekuler. Nerangake wates kasebut kanthi cetha nglindhungi ilmu pengetahuan lan siswa: asil sing apik yaiku gambar kanthi label sing bener lan cathetan perbesaran sarta pewarna, dudu kesimpulan babagan kesehatan.

Lembar kerja siswa lan mikrograf mawa label

Rong aset proyek kanggo kaca iki yaiku mikrograf mawa label ing ndhuwur lan lembar kerja ing ngisor iki. Cetaken siji lembar kerja kanggo saben siswa utawa tampilake nganggo proyektor lan jaluken siswa nyalin kothak-kothake menyang buku cathetan.

Cara nggunakake ing sesi patang puluh lima menit: sepuluh menit kanggo pengarahan kaslametan lan njupuk sampel, sepuluh menit kanggo pewarnaan lan nyiyapake preparat, limalas menit kanggo pengamatan lan nggambar sketsa ing loro perbesaran, sepuluh menit kanggo dhaptar priksa lan mbandhingake karo mikrograf mawa label. Bab-bab ing dhaptar priksa sengaja digawe praktis lan langsung. Apusan tipis, wektu pewarnaan bener, inti sel luwih peteng tinimbang sitoplasma, perbesaran dicathet. Siswa sing bisa menehi tandha ing papat bab kasebut wis mangerteni konsep sing arep diwulangake ing pelajaran iki: mikroskop nuduhake prabédan, lan pewarna nggawe prabédan sing migunani kanggo dituduhake.