Pewarnaan prasaja biru metilena dibandhingake karo pewarnaan Gram: apa sing bisa dibuktekake saben metode

Sawijining siswa nyiyapake apusan saka kultur kanthi label E. coli, nutupi apusan kasebut nganggo biru metilena suwene sak menit, mbilas, banjur ngamati liwat lensa imersi lenga. Sel awujud batang warna biru ngebaki lapangan pandeleng. Laporan laboratorium kasebut unine: "Bakteri batang Gram-negatif diidentifikasi minangka E. coli." Asil pengamatane bener. Nanging preparat kasebut ora menehi bukti sing cukup kanggo kesimpulan mau.

Kaluputane ana ing konsep, dudu teknik. Siswa kasebut nganggep pewarnaan prasaja kaya-kaya sawijining uji diferensial. Pewarnaan prasaja lan pewarnaan Gram mangsuli pitakon sing beda amarga nggunakake konsep pewarnaan sing beda. Sing siji takon: wujud apa sing ana. Sing sijine takon: kepiye tanggapane tembok sel nalika diwenehi perlakuan uji. Yen loro iki kacampur, preparat sing diwarnani kanthi bener bisa ngasilake laporan sing ora didhukung bukti.

Bandhingan iki misahake loro metode kasebut, nuduhake pratelan apa sing bisa digawe saka saben asil, lan mangsuli rong pitakon sing paling kerep ditakokake siswa: apa biru metilena bisa digunakake ing pewarnaan Gram, lan apa sing sejatine dituduhake pewarnaan biru metilena ing E. coli.

Wangsulan cekak

Pewarnaan prasaja biru metilena menehi warna biru sing padha marang saben sel sing bisa diwarnani, mula mung nuduhake morfologi (batang, bunder, spiral) lan susunan (dhewe-dhewe, pasangan, rantai), tanpa nuduhake kategori Gram. Pewarnaan Gram nambah yodium, tahap pangilangan warna, lan pewarna tandhing, mula mbedakake bakteri dadi Gram-positif (ungu) lan Gram-negatif (jambon utawa abang) adhedhasar carane selubung sel nahan pewarna. Sel batang biru sawise diwenehi biru metilena tegese "ana sel awujud batang." Sel batang jambon sawise urutan Gram lengkap tegese "ana sel batang Gram-negatif." Pratelan kapindho luwih kuwat amarga tata carane nindakake uji tambahan.

Kanggo mangerteni kelompok metode bakteri nganggo siji pewarna sing luwih amba, sing kalebu metode ing artikel iki, delengen atlas pewarnaan mikroskopi.

Pewarnaan prasaja: siji pewarna, siji pitakon

Biru metilena yaiku pewarna basa (kationik). Ion sing menehi warna nduweni muatan positif lan kaiket ing struktur sel sing muatane negatif, kalebu asam nukleat lan gugus asam ing lumahing sel, mula sel katon biru ing latar mburi pucet. OpenStax nerangake prinsip pewarnaan positif iki ing bab pewarnaan. Kation pewarna kasebut yaiku ion fenotiazin cilik lan rata sing diterangake kanthi rinci ing rujukan kimia biru metilena; ion lawan klorida ora menehi warna.

Protokol standar kanggo pasinaon pancen digawe prasaja: gawe apusan tipis, garingake ing hawa, fiksasi nganggo panas, tutupi nganggo larutan biru metilena ing banyu watara 1% suwene kira-kira sak menit, bilas alon-alon nganggo banyu, garingake kanthi ditepuk nganggo kertas panyerap, banjur priksa nganggo imersi lenga. Protokol pasinaon LibreTexts menehi tata cara 1% sak menit persis kaya iki, lan nyathet yen sawetara laboratorium ndawakake wektune. Ora ana mordan, ora ana bahan pangilang warna, ora ana pewarna kapindho. Ora anane bahan kasebut pancen dadi inti metode iki. Kanthi mung siji pewarna lan tanpa pangilangan selektif, saben sel sing ngiket pewarna pungkasane duwe warna sing padha.

Kanggo E. coli, lapangan pandeleng sing dikarepake yaiku sel batang biru (basil), dhewe-dhewe utawa ing pasangan utawa kelompok cilik. Warna biru asale saka pewarna. Wujud batang asale saka organisme. Nanging gabungan kasebut ora ngenali organisme, amarga akeh spesies awujud batang lan akeh sel batang dadi biru ing pewarnaan prasaja. ATCC nerangake kanthi cetha wates sing mung nuduhake morfologi iki ing pandhuan kultur mikrobiologi. Laporan sing bener unine: "katon basil biru." Pratelan apa wae ngluwihi wujud lan susunan mbutuhake bukti liyane.

Pewarnaan Gram: papat reagen, siji uji tanggapan

Pewarnaan Gram yaiku pewarnaan diferensial. Kabeh sel ngalami urutan perlakuan sing padha, banjur diamati sel endi sing nahan pewarna kapisan lan sel endi sing kelangan pewarna kasebut. Protokol pewarnaan Gram saka American Society for Microbiology nemtokake urutan standar patang tahap: kristal violet (pewarna utama), yodium Gram (mordan), alkohol utawa campuran aseton-alkohol (pangilang warna), banjur safranin (pewarna tandhing).

Model standar kanggo pasinaon nerangake pambedane liwat struktur selubung sel. Sel Gram-positif nduweni tembok peptidoglikan kandel sing kelangan banyu lan nahan kompleks kristal violet-yodium nalika dicuci nganggo alkohol. Sel Gram-negatif nduweni lapisan peptidoglikan tipis lan membran njaba sing sugih lipid, sing dirusak dening pangilang warna, mula kompleks kasebut kaumbah metu lan sel banjur nyerep safranin. Ulasan pewarnaan Gram ing NCBI Bookshelf menehi katrangan babagan tembok sel iki. Para ahli nambahake yen sakabehing proses fisikokimia luwih rumit tinimbang mung kekandelan tembok, nanging kanggo interpretasi ing meja laboratorium, paugeran tanggapan iki tetep ditrapake: ungu tegese pewarna ditahan, jambon tegese pewarna ilang banjur diwenehi pewarna tandhing.

Panel ilustrasi. Gambar kanthi gaya ilustrasi kanggo mbandhingake metode, dudu mikrograf saka kamera. Werna disederhanakake kanggo mulang logikane: siji warna ing pewarnaan prasaja, rong warna sawise pangilangan warna Gram.

Apa biru metilena bisa digunakake ing pewarnaan Gram

Pitakon iki nduweni rong teges, lan saben teges mbutuhake wangsulan sing beda.

Teges kapisan: apa mung sapisan nutupi preparat nganggo biru metilena bisa ngganti kabeh urutan Gram. Ora bisa. Tanpa yodium, pangilang warna, lan pewarna tandhing, ora ana tahap diferensial, mula ora ana kategori Gram sing diuji. Lapangan biru sawise mung diwenehi biru metilena minangka asil pewarnaan prasaja, sanajan botole diselehake ing jejere reagen Gram. Aja dicathet minangka asil Gram.

Teges kapindho: apa biru metilena bisa ngganti safranin minangka pewarna tandhing ing tahap 4. Miturut fungsine, biru metilena bisa menehi warna marang sel sing wis ilang warnane, lan latihan ing buku ajar prakira sel Gram-positif bakal ungu lan sel Gram-negatif bakal biru sawise panggantian iki. Logikane bener amarga sel Gram-negatif sing diilangake warnane kanthi bener meh ora duwe warna lan bakal nyerep pewarna kationik liyane. Nanging iki dudu protokol standar. Protokol ASM nemtokake safranin, kanthi alternatif sing diakoni kayata fuksin basa ing sawetara varian, dudu biru metilena. Ana uga kekurangan praktis: mbedakake biru saka ungu luwih angel tinimbang mbedakake jambon saka ungu, utamane kanggo pamula lan nalika lampu mikroskop wis surem. Kanggo tugas pasinaon lan asil apa wae sing penting, gunakake pewarna tandhing sing kasebut ing protokolmu, biasane safranin, lan anggep pewarna tandhing biru metilena minangka varian demonstrasi, dudu standar sing padha drajate.

Pitakon gegayutan babagan bandhingan biru metilena karo pilihan pewarna tunggal liyane dirembug ing bandhingan pewarnaan prasaja bakteri.

Apa sing dibuktekake pewarnaan biru metilena ing E. coli, lan apa sing ora dibuktekake

E. coli yaiku bakteri batang Gram-negatif, nanging ukara kasebut nggabungake fakta saka sawetara metode: morfologi saka mikroskopi, reaksi Gram saka pewarnaan Gram, identitas saka kultur ditambah uji biokimia utawa molekuler. Apusan biru metilena mung menehi bagean kapisan. Apusan kasebut mbuktekake yen ana sel awujud batang ing sampel sing diwarnani lan nuduhake susunane. Apusan kasebut ora mbuktekake reaksi Gram, amarga ora ana uji pangilangan warna sing ditindakake. Apusan kasebut ora ngenali spesies, amarga sel batang saka akeh spesies katon padha ing resolusi iki.

Ing kene laporan kerep kliru kanthi pola sing bisa diprakirakake. Panulise nglebokake kawruh latar mburi ("kultur iki kudune E. coli, lan E. coli iku Gram-negatif") menyang bagean pengamatan, mula preparat katon mbuktekake bab sing sejatine mung dianggep bener. Laporan sing luwih cetha misahake lapisan kasebut: "Pewarnaan prasaja biru metilena: katon basil biru; mung morfologi, ora ana kategori Gram sing diuji." Banjur, yen pewarnaan Gram ditindakake kanthi bener nganggo kontrol: "Pewarnaan Gram: sel batang jambon, cocog karo Gram-negatif." Identitas spesies ditemtokake mengko, saka alur kerja identifikasi, dudu saka warna wae.

Pandhuan interpretasi praktis

Gunakake paugeran iki ing meja laboratorium. Yen kabeh sel duwe siji warna lan protokole nggunakake siji pewarna tanpa pangilang warna, sing koktindakake yaiku pewarnaan prasaja. Laporake wujud, prakiraan ukuran, lan susunan. Mungkasi nganti kono. Yen protokole nggunakake kristal violet, yodium, pangilang warna, lan pewarna tandhing kanthi kontrol positif lan negatif sing wis dingerteni, sing koktindakake yaiku pewarnaan Gram. Laporake warna lan morfologi: kokus ungu ing rantai, sel batang jambon, lan sapanunggalane.

Telung kaluputan dadi sumber utama kebingungan. Kapisan, narik kesimpulan kakehan saka sel batang biru minangka bukti E. coli. Kapindho, nyathet preparat biru metilena ing sangisore judhul "pewarnaan Gram" ing buku cathetan, sing bakal disalahtegesi dening pamaca sabanjure. Katelu, ngganti pewarna tandhing sakarepe banjur mbandhingake warna antarane laboratorium kaya-kaya pilihan warnane padha. Saben kaluputan nduweni cara mbenerake sing padha: sebutna metode sing tenan ditindakake, lan mung gawe pratelan bab sing diuji dening metode kasebut.

Pewarnaan prasaja nduweni papan dhewe amarga mung nggawe pratelan winates. Metode iki cepet, ora gampang kena pengaruh panyimpangan cilik, lan cukup nalika pitakone ngenani morfologi: apa ana sel, lan apa wujude. Yen pitakone ngenani klasifikasi, tindakna uji diferensial. Preparat biru ngandhani kaya apa tampilan sele. Preparat ungu utawa jambon ngandhani kepiye tanggapane tembok sele. Ora ana siji-sijia preparat kasebut sing, yen digunakake dhewe, bisa ngandhani spesiese.