Panjelasan pewarna metilen biru alkalin Loeffler lan polikrom

Telung botol bisa dijejer ing meja pewarnaan, saben botol diwenehi label salah siji varian metilen biru. Siji diwenehi label larutan metilen biru ing banyu 1%. Siji diwenehi label metilen biru alkalin Loeffler. Siji maneh diwenehi label metilen biru polikrom. Petugas sing sibuk njupuk botol sing paling cedhak. Apusan banjur kawernan samar banget, utawa kabeh katon biru kanthi rata banget, utawa nuduhake nuansa ungu sing ora dikarepake, lan sampel banjur dianggep minangka penyebabe.

Iki masalah formulasi, dudu masalah sampel. Telung larutan kasebut ngemot zat warna sing gegayutan, nanging ngetrapake konsep pewarnaan sing beda. Siji yaiku zat warna kationik biasa kanthi pH cedhak netral. Siji yaiku zat warna sing padha, nanging daya pewarnaane dikuwatake nganggo alkali. Siji maneh wis dudu zat warna tunggal, nanging campuran sing dioksidasi kanthi sengaja. Yen nggunakake larutan sing salah, prinsip pewarnaane uga owah nalika sampeyan nindakake pewarnaan.

Wangsulan cekak

Larutan metilen biru biasa ing banyu minangka patokan dhasar: watara 1% zat warna ing banyu, yaiku pewarna kationik prasaja kanggo morfologi bakteri lan mikroskopi umum. Metilen biru alkalin Loeffler digawe kanthi nambahake alkali encer kanthi jumlah cilik sing diukur menyang larutan stok alkohol sing diencerake nganggo banyu. Iki ngunggahake pH lan ndadekake zat warna kationik luwih kuwat ngiket struktur bakteri sing asam. Metilen biru polikrom yaiku metilen biru sing kanthi sengaja dimatengake liwat oksidasi ing alkali. Mula, botole ngemot campuran homolog sing wis ngalami demetilasi (azure A, azure B, azure C), tionin, lan metilen violet, bebarengan karo sisa metilen biru. Campuran kasebut menehi warna sing beda marang struktur sing beda.

Yen mung ngelingi siji ukara: alkalinisasi ngowahi intensitas pewarnaan, dene polikromisasi ngowahi warna asil pewarnaan.

Larutan metilen biru biasa ing banyu: titik patokan

Formulasi sing paling prasaja yaiku metilen biru sing dilarutake ing banyu, umume kanthi konsentrasi 1% w/v, tanpa alkali lan tanpa oksidasi. Spesies sing menehi warna yaiku kation metiltioninium kanthi ion lawan klorida, sawijining zat warna fenotiazin cilik kanthi struktur rata sing ing cathetan metilen biru PubChem diterangake minangka metiltioninium klorida. Minangka kation, zat iki ngiket kerangka fosfat ing asam nukleat lan gugus asam ing tembok sel bakteri, saengga sel katon biru kanthi latar mburi sing padhang.

Kauntungane yaiku asil sing bisa diprakirakake. Inti sel lan bakteri katon biru. Kontrase ora dhuwur. Organisme sing samar bisa kawernan kanthi ringkih, lan watesan iki pancen sing arep diatasi Loeffler. Kanggo mangerteni kelompok pewarna bakteri prasaja sing luwih amba lan nyakup larutan iki, delengen ringkesan pewarnaan bakteri prasaja. Ketelitian ngenali zat isih penting ing kene: metil biru iku molekul sing babar pisan beda, kaya sing diterangake ing metil biru dibandhingake karo metilen biru. Mula, nggoleki ing katalog mung adhedhasar jeneng warna bisa ngasilake kelas zat warna sing salah.

Metilen biru alkalin Loeffler: zat warna sing padha, kanthi daya luwih kuwat

Resep klasik Loeffler nyampur larutan stok metilen biru ing alkohol karo alkali encer ing banyu. Versi ing buku ajar nggunakake 0.3 g zat warna ing 30 mL etanol 95%, ditambah 100 mL larutan kalium hidroksida 0.01% ing banyu (utawa kanthi padanan 30 mL larutan metilen biru jenuh ing alkohol, 100 mL banyu distilasi, lan 1 mL KOH 1%). Iki ngasilake larutan kerja kanthi konsentrasi zat warna cedhak 0.3% lan pH sing cetha alkalin. Versi komersial ngetutake prinsip sing padha, lan katalog pewarna mikrobiologi Thermo Fisher nyathet metilen biru alkalin Loeffler, varian polikrom, lan varian larutan banyu minangka barang katalog sing kapisah kanthi tujuan panggunaan sing beda.

Alkali minangka unsur utama ing konsep iki. Ngunggahake pH mbusak proton saka gugus karboksil lan fosfat ing spesimen, saengga kerapatan situs bermuatan negatif mundhak. Sauntara kuwi, larutan stok etanol njaga zat warna supaya larut kanthi lengkap, mula zat kasebut tekan situs mau ing wujud monomer. Asile yaiku pewarnaan bakteri sing luwih cepet lan luwih kuwat tinimbang nganggo zat warna ing banyu kanthi pH netral, kanthi bakteri batang lan kokus biru tuwa sing lumrah katon ing apusan bakteriologis rutin. Wektu pewarnaan biasane siji nganti telung menit, banjur dibilas nganggo banyu.

Panggunaan klasik yaiku kanggo Corynebacterium diphtheriae sing dituwuhake ing medium serum Loeffler: bakteri batang ramping, kerep kanthi pucuk kaya gada, sing nduweni granula Babes-Ernst metakromatik saka simpenan polifosfat lan kawernan kanthi kuwat. Pasangan medium lan pewarna iki nduweni sejarah, amarga loro-lorone diakoni minangka karya bakteriolog sing padha, lan kontras granula menehi paedahe kanggo diagnosis. Saliyane kanggo pamriksan difteri, pewarna iki digunakake minangka pewarna bakteriologis umum kanggo apusan saka kultur, kanggo morfologi Neisseria ing apusan klinis, lan ing kahanan nalika pewarnaan Gram ora dibutuhake nanging larutan biru biasa ing banyu menehi asil sing samar banget. Iki pewarna monokrom. Kabeh struktur sing asam bakal nduweni salah siji nuansa biru. Nalika protokol mbutuhake pembedaan warna, alkali wae ora bisa nyedhiyakake.

Siji prakara praktis sing kudu digatekake: larutan zat warna alkalin bisa rusak lan mbentuk endapan sajrone panyimpenan lan amarga nyerep karbon dioksida. Laboratorium nyiyapake larutan kanthi volume winates utawa tuku larutan saka katalog lan netepi umur simpene, tinimbang terus nggunakake botol lawas sing saiki ninggalake endapan ing saben kaca objek.

Metilen biru polikrom: siji jeneng, sawetara zat warna

Metilen biru polikrom diwiwiti saka zat warna sing padha, nanging dioksidasi kanthi dikendhaleni ing alkali, sing biyen diarani pematangan utawa polikromisasi. Penuaan ing kahanan alkalin, pemanasan nganggo karbonat, utawa oksidasi nganggo agen kayata dikromat mbusak gugus metil saka substituen dimetilamino kanthi bertahap. Produk asile yaiku campuran: sisa metilen biru ditambah azure B (kelangan siji gugus metil), azure A lan azure C (demetilasi luwih lanjut), tionin (demetilasi lengkap), lan produk samping oksidatif saka kelompok metilen violet. Saben komponen nduweni nuansa warna lan afinitas marang jaringan dhewe-dhewe, mula campuran kasebut menehi pewarnaan metakromatik: inti sel, granula, musin, lan balung rawan saben-saben nduweni nada warna sing beda, saka biru nganti abang-ungu.

Proses kimia iki uga dadi dhasar pewarna getih sing misuwur. Para panaliti awal nemokake yen metilen biru sing digawe alkalin menehi warna kanthi nuansa ungu marang inti parasit malaria, nanging larutan ing banyu sing wis dimatengake kasebut ora stabil lan mbentuk endapan sajrone sawetara dina. Tinjauan babagan carane pewarna getih ungu ditemokake nglacak carane Malachowski lan Romanowsky kanthi mandiri nggunakake efek iki ing 1891, carane metanol banjur digunakake kanggo nyetabilake endapan zat warna lan ngfiksasi apusan tanpa panas, lan carane Giemsa sabanjure nggawe standar campuran adhedhasar azure B kanthi jumlah sing diukur ditambah eosin, kanthi gliserol kanggo stabilisasi. Pewarna jinis Giemsa modern asal langsung saka metilen biru polikrom ditambah eosin, yaiku kombinasi sing ngasilake efek Romanowsky. Kanggo katrangan rinci babagan pasangan eosin lan komponen azure B, delengen pewarna jinis Romanowsky lan interaksi azure B karo eosin.

Amarga arupa campuran, metilen biru polikrom kanthi alami nduweni standardisasi sing paling winates ing antarane telung formulasi kasebut. Imbangan nuansa warnane gumantung marang jalur lan tingkat oksidasi. Mula, pemasok histologi adol minangka produk sing kapisah kanthi uji kinerja dhewe, dudu minangka larutan Loeffler sing wis tuwa. Panggunaan sing lumrah kalebu kanggo nuduhake granula sel mast, musin, lan balung rawan kanthi pewarnaan metakromatik, kanggo rincian sel plasma, lan kanggo Helicobacter pylori ing irisan jaringan kanthi metode polikrom jinis Goodpasture. Iki pilihan sing trep nalika tujuwane yaiku mbedakake struktur adhedhasar warna, lan pilihan sing salah nalika protokol ngarepake siluet bakteri monokrom sing cetha.

Bandhingan formulasi lan tujuan

Wacanen tabel iki minangka pandhuan kanggo nemtokake pilihan. Yen spesimen kawernan samar banget, owahana pendekatan pH lan gunakna Loeffler. Yen kabeh kawernan nanging ora ana struktur sing bisa dibedakake, owahana pendekatan zat warna lan gunakna polikrom. Yen apusan Loeffler nuduhake granula kanthi cetha banget nanging supervisor takon kenapa inti sel lan sitoplasma padha-padha biru, wangsulane yaiku ora ana pewarna monokrom alkalin sing bisa nindakake pembedaan kasebut. Kabutuhan kuwi kalebu ing kelompok polikrom lan turunan pewarna getihe.

Nyingkiri kekeliruan sing umum

Rong kesalahan nyebabake akeh kebingungan. Sing pisanan yaiku nganggep larutan Loeffler bisa diijolake karo metilen biru biasa amarga loro-lorone katon biru ing botol. Loro larutan kasebut beda ing pH lan intensitas, lan ngganti larutan Loeffler sing ditemtokake ing protokol nganggo zat warna netral bakal ngilangi kontras granula sing dadi dhasar protokol kasebut. Sing kapindho yaiku nganggep kabeh larutan biru alkalin sing lawas utawa ora sengaja ngalami penuaan minangka polikrom. Penuaan tanpa kendhali ngasilake campuran sing komposisi lan kekuwatane ora dingerteni, dene larutan polikrom sejati disiyapake liwat jalur oksidasi sing ditemtokake lan, ing kelompok turunan pewarna getih, dicampur karo eosin kanthi jumlah sing diukur. Sejarah menehi piwulang ing kene: larutan ing banyu sing wis dimatengake lan ora stabil saka taun 1890-an banjur diganti karo formulasi metanol sing distabilake, amarga campuran tanpa kendhali ora bisa digawe maneh kanthi asil sing padha. Piwulang iki perlu dielingi sadurunge menehi warna kaca objek diagnostik nganggo larutan saka botol sing umur simpene ora cetha.

Ketelitian ngenali jeneng nglengkapi langkah iki. Pesthekna barang katalog kasebut (larutan banyu, Loeffler, utawa polikrom), kandhutan zat warna, lan tujuan panggunaane saka label, tinimbang nyimpulake saka warnane. Telung formulasi kasebut asale saka kromofor sing padha. Tujuan panggunaane beda.