Ngapa metilen biru digunakake minangka pewarna tandhing ing pewarnaan tahan asam

Sawijining teknisi mriksa preparat apusan dahak sawise kabeh urutan pewarnaan rampung. Basil abang katon cetha ing lapangan pandeleng biru, lan laporan ditulis yen katon basil tahan asam. Dina sabanjure, preparat liyane nuduhake lapangan pandeleng biru sing rata tanpa basil abang, banjur dilaporake minangka negatif tuberkulosis. Salah siji saka laporan iki menehi kesimpulan sing ngluwihi bukti saka preparat, lan dudu laporan sing kapisan.

Pangertene sing kliru. Teknisi nganggep pewarna biru minangka bagean saka proses kimia kanggo deteksi, kaya-kaya metilen biru mbantu nemokake mikobakteri. Nyatane ora. Nalika metilen biru kena preparat, tes kasebut wis rampung. Pewarna iki mung menehi warna ing latar mburi supaya asile bisa diwaca. Artikel iki nerangake tujuwan metilen biru ing pewarnaan tahan asam, ngapa sing digunakake warna biru lan dudu warna liyane, sarta kesimpulan apa sing bisa dijupuk saka warna abang ing latar biru.

Wangsulan cekak

Pewarnaan tahan asam yaiku tes diferensial sing adhedhasar telung gagasan. Karbol fuksin, pewarna utama, dipeksa mlebu ing saben sel, kalebu mikobakteri sing nduweni lapisan kaya lilin. Asam-alkohol, bahan pangilang warna, mbusak pewarna abang saka sel biasa nanging ora bisa njupuk pewarna kasebut saka sel tahan asam. Metilen biru, pewarna tandhing, banjur menehi warna ing kabeh bahan sing pewarnane wis dibusak, mula sel sing ora tahan asam, sel inang, lan reruntuhan katon biru, dene basil tahan asam tetep abang. Pewarna tandhing menehi kontras. Pewarna iki ora melu proses kimia sing ndadekake sel tahan asam.

Pakaryan saben langkah

Diagram ing ngisor iki nuduhake pambagean pakaryane. Wacanen saka kiwa menyang tengen minangka urutan prosedur, lan wacanen bagean ngisor minangka pangeling yen saben golongan pewarnaan mangsuli pitakon sing beda.

Penetrasi ditindakake luwih dhisik. Mikobakteri tahan marang pewarna biasa sing adhedhasar banyu amarga selubunge nduweni sipat hidrofobik sing dhuwur banget, mula protokol meksa pewarna mlebu. Ing metode Ziehl-Neelsen, pemanasan nganti metu uap nyurung karbol fuksin sing ngandhut fenol liwat tembok sel kaya lilin. Ing metode adhem Kinyoun, panas diganti nganggo formulasi pewarna utama sing luwih kuwat, lan sawetara versi modifikasi tanpa panas nambah surfaktan. Protokol pewarnaan tahan asam saka American Society for Microbiology nyathet loro formulasi kasebut kanthi jejer, lan bedane konsentrasi gedhe banget: watara 0.3 g fuksin basa saben 100 mL kanggo metode nganggo panas, dibandhingake watara 4 g kanggo metode adhem.

Diferensiasi ditindakake kapindho. Asam-alkohol, lumrahe 3 mL asam klorida pekat ing 97 mL etanol 95 persen, ngumbah pewarna abang saka saben sel sing temboke ora nduweni ketahanan khusus. Sel kanthi selubung lipid mikobakteri sing isih utuh tetep nahan pewarna. Iki langkah sing dadi dhasar kabeh metode, lan langkah sing paling kena pengaruh teknik, kaya sing dirembug ing ngisor.

Kontras diwenehake paling pungkasan. Saiki preparat ngemot sel tahan asam abang ing latar mburi sel sing meh ora ana warnane amarga pewarnane wis dibusak. Metilen biru kanthi konsentrasi 0.3 persen w/v ndadekake latar kasebut katon maneh kanthi warna sing kontras banget karo abang. Pewarnaan tandhing ditindakake sedhela, lumrahe 20 nganti 30 detik ing metode nganggo panas lan nganti sawetara menit ing sawetara varian metode adhem. Suwene gumantung marang protokol, dudu sipat pewarna kasebut dhewe.

Ngapa pewarna iki, lan ngapa biru

Metilen biru yaiku pewarna basa kationik, tegese ion sing menehi warna nggawa muatan positif lan nempel ing permukaan bakteri sing wis diilangake warnane, sel inang, lan reruntuhan sing mawa muatan negatif. Mikrobiologi OpenStax nerangake logika muatan iki minangka prinsip umum sing ndhasari pewarna basa. Nanging ing kene metilen biru ora nduweni sipat kimia sing mligi. Kristal violet lan safranin uga pewarna basa. Pilihane adhedhasar optik, dudu kimia.

Basil abang mbutuhake latar mburi kanthi warna sing kontras, lan biru menehi kontras marang abang kanthi cara sing paling migunani kanggo mikroskopi lapangan padhang. Safranin kurang cocog minangka pewarna tandhing amarga warna pungkasane, jambon abang, cedhak banget karo karbol fuksin sing isih ditahan, saengga prabédan sing wis digawe dening prosedur dadi ora cetha. Kristal violet bakal menehi latar mburi ungu peteng sing saingan karo basil abang tipis kanggo narik kawigaten. Bukti paling kuwat yen pakaryane yaiku menehi kontras lan dudu proses kimia katon saka panggantine: pewarna tandhing ijo kayata ijo malakit lan ijo brilian digunakake ing sawetara protokol veteriner lan protokol modifikasi, lan tes kasebut tetep makarya, amarga warna apa wae sing cetha bedane nindakake pakaryan sing padha.

Ana rong akibat praktis. Kapisan, resep baku ora nemtokake pangaturan pH; aja nyaruake larutan banyu prasaja 0.3 persen iki karo formulasi alkalin kayata metilen biru Loeffler, sing kalebu konsep pewarnaan liyane. Kapindho, panggunaan sing kakehan malah ngrugekake. Literatur histologi kanthi mligi ngelingake yen latar biru sing peteng banget bisa nutupi basil sing sithik, mula nggenangi preparat luwih suwe tinimbang sing diidinake protokol nyuda kajelasan tanpa menehi paedah.

Kimia tembok sel sing ndadekake tes iki bisa ditindakake

Alesan asam-alkohol bisa mbedakake sel dumunung ing selubung mikobakteri. Inti strukture yaiku kompleks mikolil-arabinogalaktan-peptidoglikan: peptidoglikan sing disambungake karo arabinogalaktan, kanthi pucuk njabane nggawa asam mikolat kanthi rantai dawa banget, mbentuk mikomembran njaba sing sugih lipid lan nduweni permeabilitas sithik banget. Tinjauan babagan membran njaba mikobakteri nerangake struktur iki kanthi rinci. Alangan kasebut makarya ing loro arah. Alangan iki ngalangi mlebune pewarna, mula penetrasi mbutuhake panas utawa pewarna utama sing dikuatake, lan uga ngalangi metune pewarna, mula asam-alkohol ora bisa mbusak karbol fuksin yen wis ana ing njero. Bakteri biasa ora nduweni selubung iki lan kelangan pewarnane. Mula sipat tahan asam luwih trep dipahami minangka fenomena alangan lipid, dudu minangka ikatan kimia fuksin karo asam mikolat.

Kimia iki uga nerangake kedadeyan sing kerep mbingungake: mikobakteri angel diwarnani lan asile ora mesthi kanthi metode Gram, kadhangkala katon samar awujud rerangken manik-manik utawa bayangan sel tanpa warna. Tembok sel sing hidrofobik mbatesi penetrasi kristal violet. Pewarnaan tahan asam dudu pewarnaan Gram sing dimodifikasi. Iki prinsip diferensial liyane sing adhedhasar sipat tembok sel sing beda, kaya sing dituduhake ing perbandingan pewarnaan prasaja lan pewarnaan Gram kanggo rong metode liyane.

Telung metode, telung pitakon

Kanggo golongan metode bakteri kanthi siji pewarna sing luwih jembar, delengen atlas pewarnaan mikroskopi.

Apa sing ora bisa dibuktekake saka abang ing latar biru

Basil abang tegese organisme kasebut nahan karbol fuksin nalika kena asam-alkohol. Temuan iki cocog karo Mycobacterium tuberculosis, nanging pandhuan diagnosis tuberkulosis CDC kanthi cetha nyebutake yen mikobakteri liyane uga tahan asam, mula identifikasi spesies mbutuhake kultur lan tes asam nukleat, dudu warna.

Kesalahan teknik akeh dumadi ing rong langkah pangumbahan. Pangilangan warna sing kurang ninggalake bahan latar mburi tetep abang lan bisa nyebabake pamacan positif palsu. Pangilangan warna sing kakehan mbusak pewarna utama sing ditahan kanthi ringkih lan bisa nyebabake negatif palsu. Pewarna tandhing sing diwenehake kakehan nutupi basil sing sithik ing warna biru. Apusan sing kandel, reagen sing ngendhep, lan banyu kanggo mbilas sing kena kontaminasi nambah artefak dhewe-dhewe.

Sensitivitas diwatesi dening cacahe organisme, sepira becike teknik sing ditindakake. Mikroskopi apusan konvensional mbutuhake watara 5,000 nganti 10,000 basil saben mililiter dahak, lan tinjauan bukti CDC sadurunge nyathet sensitivitas apusan watara 45 nganti 80 persen ing kasus tuberkulosis paru sing dikonfirmasi kanthi kultur. Mula apusan negatif ora tau bisa nyingkirake kemungkinan tuberkulosis. Pandhuan CDC saiki tetep mbutuhake kultur bebarengan karo saben apusan lan menehi rekomendasi tes amplifikasi asam nukleat ing paling ora siji spesimen saluran ambegan nalika tuberkulosis paru dianggep bisa kedadeyan lan asile bakal ngowahi tata laksana.

Pakaryan praktis kudu manut protokol sing sah

Panjelasan kanggo pasinaon, kalebu artikel iki, ora menehi wewenang kanggo nindakake pakaryan klinis. Kanggo praktik ing laboratorium, tututi prosedur operasional baku laboratorium sing wis divalidasi lan selaras karo dokumen CDC, APHL, utawa CLSI sing paling anyar; referensi pewarnaan tahan asam CDC sing disimpen ing arsip Stacks nuduhake carane prosedur kasebut nemtokake reagen lan cara maca asil. Pakaryan karo spesimen tuberkulosis mbutuhake pangendhalian supaya bahan ora nyebar: apusan disiapake ing kabinet keamanan biologis amarga proses nyiapake ngasilake aerosol lan cipratan, lan pandhuan keamanan laboratorium CDC nyatakake yen apusan sing wis difiksasi nganggo panas isih bisa ngemot basil tuberkulosis sing urip lan kudu tetep ditangani minangka bahan sing kena kontaminasi. Entri CDC Public Health Image Library kanggo apusan karbol fuksin lan metilen biru sing dipriksa kanggo M. leprae dadi pangeling sing migunani yen panggunaan metode iki luwih jembar tinimbang tuberkulosis: kontras abang ing latar biru sing padha digunakake ing ngendi wae organisme tahan asam digoleki, lan pamacan negatif sing ditindakake kanthi tliti uga minangka asil sing pantes dicathet.

Maca preparat sing wis rampung

Paedah pewarna tandhing katon nalika skrining. Ahli mikroskopi sing mindhai kanthi perbesaran cilik luwih dhisik nggunakake latar biru kanggo mbiji mutu apusan: sebaran sel sing rata, sel inang sing utuh kanggo nyetel fokus, lan ora ana endhepan sing akeh. Calon basil abang banjur narik kawigaten amarga ora ana bahan liyane ing preparat sing abang. Konfirmasi ditindakake nganggo imersi lenga, nalika basil sing sejati nuduhake wujud batang tipis kaya sing dikarepake, kadhangkala rada mlengkung utawa kaya rerangken manik-manik, dudu reruntuhan pewarna sing seragam.

Pewarnaan latar mburi uga nemtokake tembung sing digunakake ing laporan. Preparat kanthi basil abang dilaporake minangka katon basil tahan asam, kerep kanthi tingkat semikuantitatif manut skala laboratorium. Preparat tanpa organisme abang dilaporake minangka ora katon basil tahan asam, ora tau minangka negatif tuberkulosis. Prabédan iki wigati amarga lapangan biru mbuktekake yen pewarnaan makarya, sel nyerep pewarna tandhing lan optike cukup, nanging ora menehi katrangan babagan organisme sing cacahe ana ing sangisore wates deteksi. Lapangan biru tanpa basil yaiku asil sing sah babagan preparat, dudu putusan babagan pasien.

Elinga pambagean pakaryane supaya laporan bisa ditulis kanthi trep. Karbol fuksin ndeteksi calon organisme. Asam-alkohol nindakake tes. Metilen biru mung ndadekake wangsulane bisa diwaca: abang nahan pewarna nalika kena asam, biru kelangan pewarna kasebut. Kat­rangan liyane, spesies, cacahe organisme, lan makna klinis, asale saka pakaryan ing sanjabane preparat.