Nnwale yist na methylene blue: ịgụ mkpụrụ ndụ dị ndụ na ịtụ oge iku ume

Tube abụọ nọ n'elu tebụl ụlọ nyocha. Ha abụọ na-acha anụnụ anụnụ. N'otu, mkpụrụ ndụ na-acha anụnụ anụnụ a na-ahụ na maịkroskopu pụtara yist nwụrụ anwụ. Na nke ọzọ, tube nke na-esi n'acha anụnụ anụnụ ghọọ nke na-enweghị agba pụtara na yist dị ndụ ma na-eku ume. Otu ihe na-enye agba, ma nkọwa nsonaazụ abụọ megidere ibe ha. Ọ bụrụ na a gwakọta nnwale abụọ a, nkwubi okwu niile ga-agbanwe gaa n'akụkụ nke ọzọ.

Ọdịiche ahụ bụ isi isiokwu a niile. Methylene blue bụ ihe na-enye agba nke na-arụ ọrụ site na oksideshọn na mbelata kemịkal: mgbe e mere ya oksideshọn, ọ na-acha anụnụ anụnụ; mgbe e belatara ya, ọ bụ leucomethylene blue na-enweghị agba. Ịgụ mkpụrụ ndụ dị ndụ na-eji kemịkal a mee ihe n'oge nlele dị mkpirikpi na maịkroskopu. Nnwale iku ume na-eji ya mee ihe n'ime ngwakọta niile, na-atụ oge mmeghachi omume ya. Nke ọ bụla chọrọ usoro nke ya, nnwale njikwa nke ya, na ịkpachara anya nke ya n'ịkọwa nsonaazụ.

Ịgụ mkpụrụ ndụ dị ndụ: ịcha agba obere oge, gụọ ya ngwa ngwa

Usoro ndị na-emepụta biya na-eji bụ ụdị a haziri ka ọ bụrụ otu nke ọma karịa ndị ọzọ. Kwadebe methylene blue 0.01% w/v n'ime sodium citrate 2%, gwakọta ya 1:1 na ngwakọta yist kwụsara n'ime mmiri, ma nyochaa ngwakọta ahụ mgbe obere oge a kara aka gasịrị. Oge e bipụtara dịgasị iche site na 1 ruo 2 nkeji n'ime akwụkwọ ntuziaka Brewing Science Institute ruo ihe dị ka 5 nkeji n'usoro nyocha, ebe usoro OIV maka ụmụ ihe ndị dị ndụ pere mpe n'ime mmanya vaịn chọrọ ka e nyochaa ya n'ime 10 nkeji. Ịta ihe na-enye agba n'ime ngwakọta a na-agụ na-erute ihe dị ka 0.005%. Tinye ngwakọta ahụ n'ime ụlọ ịgụ Neubauer emelitere, ma mgbe a na-ebuwanye ihe ihe dị ka 400x, kewaa mkpụrụ ndụ na-acha anụnụ anụnụ gbara ọchịchịrị dị ka ndị na-adịghị ndụ, na mkpụrụ ndụ na-enweghị agba dị ka ndị dị ndụ. Usoro OIV na-agụ mkpụrụ ndụ na-acha anụnụ anụnụ dị fechaa dị ka ndị dị ndụ, nke na-egosilarị nsogbu nke ikpe dabere n'echiche onye na-agụ, nke a tụlere n'okpuru.

Ọnụọgụ mkpụrụ ndụ n'otu olu na-esite n'ụdị na nha ụlọ ịgụ ahụ. Mgbe a gụrụ akụkụ etiti dum nke bụ skwea 1 mm, mkpụrụ ndụ kwa mL hà N ugboro ihe ngụba ntụgharị ịta ngwakọta ugboro 10^4, ebe N bụ ọnụ ọgụgụ a gụrụ n'akụkụ ahụ, dịka e depụtara na usoro ASBC maka yist. Ịtụ ịdị ndụ dị mfe karịa: mkpụrụ ndụ na-enweghị agba kewara site na mkpụrụ ndụ niile, ugboro 100. Gụọ ihe dị ka mkpụrụ ndụ 400 iji tụọ ịdị ndụ, na-agbaso nnyocha ntụnyere FEMS n'ụlọ mmepụta biya na omume OIV. Jiri otu iwu oke mgbe niile; dịka ọmụmaatụ, tinye mkpụrụ ndụ nọ n'ahịrị grid ala na aka ekpe, ma hapụ ndị nọ n'ahịrị elu na aka nri.

Ọ dị mkpa ịtọ iwu maka ome tupu ịgụ amalite. Otu usoro a na-ejikarị na-agụ ome dị ka mkpụrụ ndụ dị iche mgbe nha ya ruru ihe dị ka ọkara nha mkpụrụ ndụ nne; mgbe ọ ka pere mpe karịa nke ahụ, a na-agụ ya na nne ya. Iwu ọ bụla a họọrọ, tinye ya n'akụkụ skwea niile ma dee ya na mpempe ndekọ ka onye ọzọ wee jiri otu iwu ahụ.

Mpempe ndekọ ịgụ mkpụrụ ndụ (bipụta nke a)

Mpempe ndekọ a bụ ihe e kere ọhụrụ maka isiokwu a. Detuo ya n'akwụkwọ ndetu ma ọ bụ bipụta otu maka nlele ọ bụla.

Viability (%) = 100 x unstained / (unstained + dark blue). Total cells per mL = N x dilution factor x 10^4, ebe N sitere n'akụkụ ụlọ ịgụ a kọwara. Dee oge ịcha agba n'akụkụ nsonaazụ, n'ihi na ọnụ ọgụgụ ịdị ndụ na-enweghị oge e ji nweta ya abụghị ihe a pụrụ imeghachi nweta otu nsonaazụ.

Ihe mere ọnụ ọgụgụ ịdị ndụ ji agbanwe

Oge bụ ihe mbụ na-emetụta nnwale, ọ na-emetụtakwa ya n'ụzọ abụọ megidere ibe ha. Mkpụrụ ndụ ndị mgbanwe kemịkal ndụ ha na-arụ ọrụ na-ebelata ihe na-enye agba; ya mere, ịgụ n'oge nwere ike ijide mkpụrụ ndụ dị ndụ tupu ha emechaa mbelata ahụ, wee kewaa ha n'ụzọ na-ezighị ezi dị ka ndị nwụrụ anwụ. Ma ịnọ ogologo oge n'ihe na-enye agba ahụ n'onwe ya na-emebi mkpụrụ ndụ, na-emepụta mkpụrụ ndụ na-acha anụnụ anụnụ ndị mebiri emebi n'ezie, nke na-eme ka agba gosi ọnwụ n'ụzọ na-eduhie eduhie. Ya mere, otu usoro nkuzi ụlọ nyocha kwuru ka a gụọ ha n'ime 5 nkeji, dịka e depụtara na usoro nkuzi yist nke Wisconsin. Nkwupụta a pụrụ ịdabere na ya bụ na ịgụ site na methylene blue dabere n'oge; ya mere, họrọ otu obere oge ma debe ya otu n'ofe nlele niile dị n'otu usoro nnwale.

Nlele nwere obere mkpụrụ ndụ dị ndụ nwere ụzọ nke abụọ nsonaazụ ha si agbagọ. Usoro a haziri ka ọ bụrụ otu na-adọ aka na ntị na methylene blue nwere ike ime ka ịdị ndụ a tụrụ dị elu karịa nke dị n'ezie mgbe ọ dị n'okpuru ihe dị ka 80%, n'ihi na mkpụrụ ndụ ndị ka na-ebelata ihe na-enye agba nwere ike ghara ịnọgide nwee ike ịmụba. Akwụkwọ gbasara ime biya na-akọwa otu enweghị ntụkwasị obi ahụ mgbe ịdị ndụ dara nke ukwuu. Were methylene blue dị ka ụzọ ngwa ngwa isi nweta atụmatụ dị nso, ma kwado mkpebi dị mkpa metụtara obere ịdị ndụ, dịka iji otu omenala yist malite ime biya ọzọ, site n'ịgụ koloni n'efere omenala ma ọ bụ ihe ọzọ na-enye agba nke na-emeju nnwale ahụ.

Mmetụta ngwakọta gbara mkpụrụ ndụ gburugburu bụ nke atọ. Usoro OIV na-arụ ọrụ nso pH 4.6 ma na-adọ aka na ntị na nlele nwere pH dị ala nke nwere ikike siri ike iguzogide mgbanwe pH na-egbochi ihe na-enye agba ịrụ ọrụ nke ọma. Ọ na-adụkwa ọdụ ka a ghara iji nnwale ahụ mgbe shuga karịrị 100 g/L, ebe mkpụrụ ndụ na-apụta anụnụ anụnụ dị fechaa n'ụzọ na-eduhie eduhie. Ntụnyere nnwale nke pH ịcha agba hụrụ na ikike nnwale ịchọpụta ọdịiche gbanwere nke ukwuu n'ofe oke pH a nwalere, nke kwekọrọ na nnyocha usoro methylene blue dabere na pH. Irighiri ihe bụ ọnyà ọzọ: ụmụ irighiri ihe e tere agba n'ime ngwakọta ọka ruru unyi na-adị ka mkpụrụ ndụ nwụrụ anwụ ma na-amụba ọdịiche n'etiti ndị na-agụ.

A tụọla ọdịiche ahụ n'ọnụọgụ; ọ bụghị naanị akụkọ ndị mmadụ na-akọ. N'ime nnwale ụlọ mmepụta biya were ọnwa isii, nke a kọrọ na ntụnyere yist nke FEMS, nha methylene blue e mere ugboro abụọ nwere nkezi ntụpụ ọkọlọtọ 6.1%, ma e jiri ya tụnyere 0.2% maka ịgụ mkpụrụ ndụ n'ọsọ mmiri na oxonol. Ndị ọrụ abụọ dị iche ruo isi pasent 13 n'otu nlele ahụ. Ntụnyere ụzọ ịtụ ịdị ndụ n'ọnụọgụ e mere na 2023 chọpụtara na nlele maịkroskopu fluorescence na ịgụ mkpụrụ ndụ n'ọsọ mmiri nwere izi ezi dị ukwuu karịa, ma gosikwa na arụmọrụ dabere n'ụdị ihe dị ndụ na ngwakọta gbara ha gburugburu. Nkọwa usoro ochie nke Painting na Kirsop (PMID 24430080) ka bụ ebe ntụaka, ebe nyocha sara mbara nke nnwale ịdị ndụ na ike ọrụ yist (PMID 25154541) debere methylene blue n'etiti nnwale ndị na-emeju ibe ha, ọ bụghị ndị na-enye mkpebi ikpeazụ. Trypan blue abụghị ihe ka mma n'onwe ya n'ebe a: ọ na-egosi mgbe mkpuchi mkpụrụ ndụ tụfuru izu oke ya, ebe methylene blue na-egosi ịbanye ihe na-enye agba na ọrụ mbelata kemịkal. Ya mere, a pụrụ ikewa mkpụrụ ndụ nọ n'okpuru nrụgide n'ụzọ dị iche mgbe e ji ihe abụọ ahụ na-enye agba.

Nnwale iku ume: tụọ oge agba anụnụ anụnụ ji apụ

Nnwale nke abụọ anaghị eji maịkroskopu ele ihe. A na-etinye yist na glucose na methylene blue a gwakọtara ka ịta ya dị ala n'ime tube mechiri emechi, elekere na-atụkwa oge agba anụnụ anụnụ ji apụ. Ka mkpụrụ ndụ na-eme mgbanwe kemịkal ndụ, ha na-emepụta ihe na-ebufe elektrọn maka mbelata, nke na-agbanwe ihe na-enye agba anụnụ anụnụ ka ọ bụrụ ụdị ya na-enweghị agba, ebe oxygen gbazere n'ime mmiri na-eme ya oksideshọn ọzọ ka ọ laghachi azụ. Mgbe mkpụrụ ndụ belatara oxygen dị na ngwakọta ahụ, mbelata kemịkal na-emeri n'ozuzu ya, agba apụọkwa na tube ahụ. Ya mere, njedebe nnwale na-egosipụta nguzozi dị n'etiti iku ume, ịta ihe na-enye agba, na oxygen dị. E kwesịrị ịkọ ya dị ka oge mbelata methylene blue ma ọ bụ oge ịpụ agba, ọ bụghị dị ka ọnụego ozugbo nke iri oxygen molekụla.

Jiri ihe na-enye agba a gwakọtara ka ịta ya dị nnọọ ala karịa nke a na-eji n'ịtụ ịdị ndụ, ka oge a ga-atụ dịrị mfe iji. Akwụkwọ ntuziaka AQA A level maka nnwale a chọrọ na-ahazi nke a nke ọma: glucose 1 g kwa mmiri 100 mL a kpooro ruo ihe dị ka 30 C, yist akọrọ 5 g a na-etinye ozugbo tupu e jiri ya mee ihe, na ihe na-enye agba maka nnwale nke ịta ya dị nso 0.001%, nke a kwadebere site n'ịgbakwụnye mmiri na 0.1 mL nke ngwakọta nchekwa 1% ruo mgbe olu ya ruru 100 mL. Gwakọta 2 mL nke ngwakọta yist na glucose na 2 mL nke ihe na-enye agba maka nnwale, hapụ ya ka ọ rute okpomọkụ nnwale, maa ya jijiji otu ugboro maka 10 sekọnd, malite elekere ịtụ oge, ma amakwala ya jijiji ọzọ. Ịma jijiji na-eweghachi oxygen ma mee ka tube ahụ laghachi n'acha anụnụ anụnụ; nke a bụ mmetụta ụgha kachasị ukwuu usoro nnwale na-akpata. AQA kwuru na agba ngwakọta a kwesịrị ịpụ n'ime ihe dị ka 5 nkeji na 35 C n'ọnọdụ nkịtị, na nkezi nnwale bụ 275 s na 20 C, 128 s na 35 C, na 145 s na 45 C. Ndị a bụ ihe atụ sitere n'otu nhazi nnwale, ọ bụghị ụkpụrụ ntụnyere maka ọnọdụ niile. Nnyocha pụrụ iche gbasara mbelata na-akwado njikọ ọnụọgụ dị n'etiti ọnụego mbelata na yist nke mgbanwe kemịkal ndụ ya na-arụ ọrụ n'okpuru ọnọdụ a na-achịkwa, gụnyere ọrụ e debanyere dịka PMID 25773544 na nnyocha usoro ọrụ ya na Yeast (2014).

Ihe ngosi mgbanwe ka oge na-aga (ihe e kere ọhụrụ)

Tebụl dị n'okpuru bụ ihe ngosi e kere ọhụrụ maka isiokwu a, na-eji nhazi ụdị AQA a kọwara n'elu: 2 mL ngwakọta yist na glucose tinyere 2 mL ihe na-enye agba maka nnwale nke ịta ya dị nso 0.001%, ịma jijiji otu ugboro maka 10 sekọnd, wee debe ya n'ọnọdụ nnwale n'enweghị nsogbu ọzọ. Ihe ndị e dere bụ nsonaazụ ihe atụ n'ụdị otu ụmụ akwụkwọ kwesịrị idekọ, ebe akara ọnụego bụ 1 kewara site n'oge ịpụ agba na sekọnd. Mee nnwale ahụ n'otu ụdị tube ndị ahụ ma jiri ọnụọgụ ị tụrụ dochie ihe ndị a e dere.

See eserese akara ọnụego megide okpomọkụ maka tube A, B, na C. Ahịrị ahụ na-arị elu, wee dị larịị ma ọ bụ daa; nke a bụ ụdị mgbanwe a na-atụ anya mgbe ensaim na-akwalite ọrụ, ọ bụghị ahịrị kwụ ọtọ. Tube D, E, na F abụghị ntụpọ data n'ahịrị ahụ. Ha bụ nnwale njikwa ndị na-eme ka a nwee ike ịkọwa ahịrị ahụ.

Nnwale njikwa ndị na-eme ka nnwale ọ bụla nwee ihe ọ pụtara

Nnwale iku ume ọ bụla chọrọ nnwale atọ na-eso ya. Yist e siri ma ọ bụ e gburu, tinyere glucose na ihe na-enye agba, kwesịrị ịnọgide na-acha anụnụ anụnụ, na-egosi na mbelata ngwa ngwa dabere na mgbanwe kemịkal nke mkpụrụ ndụ dị ndụ. Yist dị ndụ na ihe na-enye agba, na-enweghị glucose agbakwunyere, bụ nnwale njikwa maka ihe mkpụrụ ndụ ji arụ ọrụ; ma tụọ anya na agba ka ga-apụ nwayọọ, n'ihi na yist na-eji ihe o debere n'ime ya. Glucose na ihe na-enye agba, na-enweghị yist, bụ ngwakọta ntụaka kemịkal dị mkpa, n'ihi na glucose nọ n'ọnọdụ alkaline nwere ike ibelata methylene blue n'enweghị mkpụrụ ndụ ọ bụla.

Ịgụ mkpụrụ ndụ dị ndụ chọrọ ụdị njikwa ọzọ: idobe usoro otu. Otu ngwakọta nchekwa ihe na-enye agba, otu nha ngwakọta, otu oge ịcha agba, otu akụkụ ụlọ ịgụ, otu iwu ome na oke, na ịgụ n'enweghị ihe ọmụma banyere nlele ahụ ebe o kwere mee. Mgbe ndị ọrụ abụọ dị iche site n'isi pasent iri, mpempe ndekọ na-egosikarị ihe kpatara ya: oge dị iche, oke agba anụnụ anụnụ e ji ekewa mkpụrụ ndụ dị iche, ma ọ bụ iwu ome dị iche. Usoro ịkwadebe na ile mkpụrụ ndụ e tere agba jikọtara na ụzọ dị mfe isi tee nje bacteria agba, ebe nyocha sara mbara banyere ihe ihe na-enye agba a na-akara n'ụdị nlele dị iche dị na atlasi ịcha agba maka nlele maịkroskopu. Maka fisiks dị n'azụ ịtụ ịdị ike agba anụnụ anụnụ ọ bụla n'ọnụọgụ, ntụaka nnabata ìhè nke e depụtara ọnọdụ ya na-akọwa ihe mere ọnụ ọgụgụ ngụba ọ bụla ga-eji soro ihe mgbaze ya, pH ya, na ọnọdụ ịta ya.

Họrọ nnwale dabere n'ajụjụ ahụ. Ole mkpụrụ ndụ dị ndụ ugbu a bụ ajụjụ ịgụ, nke a na-aza na maịkroskopu site n'iji mpempe ndekọ. Olee otú omenala yist a si eku ume nke ọma bụ ajụjụ gbasara ọsọ mmeghachi omume, nke a na-aza site n'iji elekere ịtụ oge na tube ndị ọnọdụ ha dị n'okpuru njikwa. Methylene blue na-arụ ọrụ maka ha abụọ, ma ọ dịghị mgbe ọ na-arụ ha n'otu tube n'otu oge.