Methylene blue na nyocha zebrafish: ihe mgbakwunye n'ịzụ azụ na ihe na-agbagwoju nnwale anya

Mmiri akwa zebrafish na-achakarị anụnụ anụnụ ntakịrị, ọ dịkwa ụkọ ka mmadụ dee ihe kpatara ya. Ihe na-enye ya agba bụ methylene blue, nke a na-agbakwunye iji gbochie ero, ọtụtụ usoro nnwale na-ewerekwa ya dịka ihe dị n'azụ ihe a na-enyocha. Nke ahụ abụghị ụzọ kwesịrị ekwesị isi were ya ebe a. Ihe ka mma bụ ịkpọ ya ihe na-emetụta nnwale nke a na-edeghị ndepụta: ihe dị n'efere ndị a na-emeso ma na-adịghị n'efere ntụnyere, nke nwere ọrụ ọgwụ na mkpokọta a na-eji, ma nwee ike ịgbanwe kpọmkwem ihe nnwale ahụ na-atụ.

Ọdịiche ahụ bụ ihe na-ahazi ihe niile dị n'okpuru. Iji ihe egbochi ero n'ịzụ azụ dịka a na-emekarị bụ otu ajụjụ. Ma ihe mgbakwunye ahụ ọ naghị emetụta nnwale gị bụ ajụjụ ọzọ. Akwụkwọ nyocha zebrafish ndị e bipụtara n'oge na-adịbeghị anya na-enye azịza na-emesi obi ike nye nke mbụ, ma na-enye azịza na-akpata nchegbu nye nke abụọ.

Ihe ntuziaka ndị ahụ na-ekwu n'ezie

Ọ dịghị otu ụkpụrụ onye ọ bụla na-agbaso, nke ahụ sokwa n'ihe na-akpata nsogbu. Ntuziaka Canadian Council on Animal Care na-enye ohere iji 0.5 mg/L, ma ọ bụ 0.00005%, n'ime mmiri e ji ebu akwa na ụmụ azụ iji belata uto ero. Ntuziaka Europe maka anụmanụ ụlọ nyocha na-akọwa embrayo ndị a na-edobe n'ime mmiri uto nke na-enwekarị otu 0.00005% ahụ. Usoro nkwadebe E3 nke Cold Spring Harbor kwuru okpukpu abụọ nke ahụ, 1 mg/L ma ọ bụ 0.0001%, dịka otu ihe e ji akwadebe ya. Ma e nwere ihe pụtara ìhè nke a hapụrụ: ntuziaka OECD maka nnwale nsí na embrayo azụ kwuru ka e jiri mmiri e dozigharịrị ihe ndị dị n'ime ya maka ịgwakọta na kemịkalụ a na-anwale, ma ọ naghị atụ aro methylene blue na mbipụta ya nke 2013 ma ọ bụ na nsụgharị e dezigharịrị mgbe e mesịrị. Ya mere, otu ụlọ nyocha na-azụ embrayo zebrafish nwere methylene blue n'ime mmiri anụnụ anụnụ site n'awa mbụ nke ndụ ha, ebe ọzọ na-eme nnwale embrayo nke iwu chọrọ n'ime mmiri na-enweghị agba, ha abụọ na-akpọkwa mmiri uto ha ihe nkịtị. Onye ọ bụla na-atụnyere nsonaazụ n'etiti ụlọ nyocha, ma ọ bụ na-achịkọta data ìgwè ntụnyere sitere n'oge gara aga, na-eketa enweghị nkwekọrịta ahụ.

Iji kọwaa mkpokọta ndị a nke ọma, 0.00005% bụ ihe dị ka 1.56 micromolar, ebe 0.0001% bụ ihe dị ka 3.13 micromolar. Ọnụọgụ ndị a dị obere, ọ dịkwa mfe iche na ha dị obere nke ukwuu nke na ha agaghị enwe mmetụta. Ọmụmụ ndị dị n'okpuru nwalere kpọmkwem echiche ahụ, na kpọmkwem mkpokọta ndị ahụ.

Ndị na-agụ nke si n'ịzụ azụ bịa kama isi n'ụlọ nyocha bịa na-ahụ otu molekul ahụ n'ọnọdụ ọzọ, nke a kọwara na ntuziaka aquarium maka methylene blue. Kemịstrị ya bụ otu; nkọwa banyere otú ihe agba ahụ si ebufe elektrọn n'ime sel na-akọwa ihe mere ihe na-arụ ọrụ redọks ji na-apụta ugboro ugboro n'akwụkwọ nyocha metabọlizim. Ihe na-esote metụtara kpọmkwem mmiri akwa zebrafish nwere methylene blue.

Metabọlizim: mmetụta ya na-agbanwe ntụziaka dabere n'ọkwa mmepe

Ọmụmụ kacha nye nghọta doro anya tinyere zebrafish ndị na-etolite n'ụzọ nkịtị na methylene blue site n'ụbọchị mbụ nke ndụ ha ruo ụbọchị 5 mgbe njikọta spam na akwa gasịrị, ma tụọ metabọlizim nke na-eji oksijen n'ọkwa ọ bụla, dịka akụkọ e bipụtara banyere nnwale metabọlizim embrayo kọwara. Ọ dị mkpa ịkọwa usoro nsonaazụ ahụ nke ọma n'ihi na ntụziaka ya na-agbanwe.

N'ụbọchị 1 mgbe njikọta spam na akwa gasịrị, oriri oksijen n'ọnọdụ izu ike mụbara n'embrayo ndị nọ na methylene blue na mkpokọta abụọ a na-eji azụ azụ. N'ụbọchị 2, ọdịiche voltaji gafee akpụkpọ mitọkọndria n'oyi akwa elu ụmụ azụ dị elu mgbe ha nọ na 0.00005%, 0.0001%, na 0.0003%. Mgbe ụbọchị 4 ruo 5 ruru, mgbe ha si n'akwa pụta, ntụziaka ahụ agbanweela: ike a na-emefu site na metabọlizim na-eji oksijen belatara, ma ha nọgidere na methylene blue site n'oge njikọta spam na akwa ma ọ bụ ha nọrọ na ya naanị obere oge site n'ụbọchị 3 ruo ụbọchị 4. N'otu oge ahụ, mbipụta RNA maka akụkụ kọmpleks iku ume nke mitọkọndria belatara ma n'ụbọchị 1 ma n'ụbọchị 4, tinyere mbipụta RNA metụtara mmepụta steroid na mmepụta glukos ọhụrụ.

Ihe abụọ ọzọ a hụrụ mere ka nghọta ahụ dokwuo anya. Ịpụ n'akwa mere ntakịrị tupu oge ya na mkpokọta dị elu nke a na-eji azụ azụ: embrayo ndị nọ na methylene blue gara n'ihu n'ụbọchị 2, ndị ìgwè ntụnyere wee ruo ha n'ụbọchị 3. Usoro ahụ nke na-anabata nrụgide yiri ka ọ nọkwa na-arụ ọrụ nke ọma: mgbe e tinyere ụmụ azụ dị ụbọchị 5 n'ọnọdụ nrụgide site n'ịgbagharị mmiri, cortisol n'ahụ dum mụbara n'ụzọ nkịtị n'ìgwè abụọ ahụ. Ya mere, ihe agba ahụ abụghị nsí na-emebi mmepe n'ozuzu na mkpokọta ndị a, ọ naghịkwa egbochi nzaghachi ọrụ ahụ niile. Ọ na-agbanwe metabọlizim ike n'ụzọ dabere n'ọkwa mmepe: ọ na-abawanye ya tupu ịpụ n'akwa ma na-ebelata ya mgbe ịpụ n'akwa gasịrị.

Omume: ihe mere ọmụmụ abụọ ji dị iche, na ihe mere ha abụọ ji nwee ike ịbụ eziokwu

Akwụkwọ nyocha gbasara omume na-adị ka ha na-emegide ibe ha ruo mgbe a tụnyere nhazi nke otú e si tinye azụ na ihe agba ahụ. Otu ọmụmụ nchekwa gbasara mmepe na omume tinyere embrayo na methylene blue site n'ihe dị ka awa 6 mgbe njikọta spam na akwa gasịrị, na mkpokọta ruru 10 micromolar. A na-agbanwe mmiri ndị ahụ kwa ụbọchị ruo ụbọchị 4, e mesịa bufee ụmụ azụ n'ime mmiri uto na-enweghị ihe agba ahụ maka ụbọchị 5 na 6, wee nwalee mmegharị ha n'nnwale ọkụ na ọchịchịrị n'ụbọchị 6. Nsonaazụ ya: enweghị mmetụta pụtara ìhè na ọnwụ, ịpụ n'akwa, ma ọ bụ ọdịdị ahụ, enweghịkwa mmetụta nke methylene blue na mmegharị. Ndị dere ya tụrụ aro n'ụzọ ezi uche dị na ya ka 10 micromolar bụrụ oke elu n'okpuru ọnọdụ ọmụmụ ha.

Ìgwè nke abụọ, nke ụfọdụ ndị dere ya sokwa dee ọmụmụ metabọlizim ahụ, tinyere azụ na ihe agba ahụ dịka a na-eme n'ịzụ azụ n'ezie: ihe agba ahụ dị n'ime mmiri site n'awa 2 ruo 3 mgbe njikọta spam na akwa gasịrị, a na-agbanwekwa akụkụ mmiri kwa ụbọchị, a na-atụkwa omume mgbe azụ ka nọ na ya ma ọ bụ obere oge mgbe e wepụrụ ha na ya. Na otu mkpokọta ndị a na-ejikarị, ụmụ azụ gosiri mmegharị belatara n'nnwale were awa 24; enwere ike imeghachi nsonaazụ ahụ n'ụdị mkpụrụ ndụ ihe nketa azụ dị iche iche na n'ụlọ nyocha dị iche iche. Ọmụmụ banyere mgbagwoju anya n'nnwale omume jikọtara mmetụta ahụ na ọkwa ọrụ serotonin, nke kwekọrọ na ikike a maara na ihe agba ahụ nwere igbochi monoamine oxidase. Ihe kacha gosipụta nke a bụ na mmiri uto embrayo nwere methylene blue kpuchiri nzaghachi mmegharị a tụrụ anya na fluoxetine, nke bụ SSRI, ga-akpata. Ya mere, nnwale nyocha a na-eme n'ime mmiri anụnụ anụnụ nwere ike ghara ịchọpụta mmetụta ọgwụ nke mmiri na-enweghị agba ga-ekpughe.

Enweghị ezigbo esemokwu ebe a. Ihe nwere ike ghara ịhapụ mmetụta fọdụrụ nke a pụrụ ịchọpụta n'otu nnwale ụbọchị abụọ mgbe e wepụchara ya, ma ka na-arụ ọrụ mgbe ọ ka dị na nnwale ọzọ. Ihe nke a pụtara n'omume bụ na nsonaazụ na-egosighị mmetụta na-akwado oke elu nke mkpokọta, ọ bụghị nkwupụta na ihe ahụ anaghị emetụta nnwale. Nsonaazụ gosiri mmetụta na-akọwa ihe ize ndụ dị mkpa: ịnọ na ihe ahụ na-arụ ọrụ n'oge a na-atụ ihe, n'ime kpọmkwem nhazi ọtụtụ ụlọ nyocha na-eji.

Ihe agba redọks n'ime nnwale redọks

Otu ọnyà ọzọ kwesịrị inwe paragraf nke ya n'ihi na ọ na-emebi ụzọ e si atụ ihe kama imetụta anụmanụ ahụ. Nnwale Alamar Blue maka ike a na-emefu bụ n'onwe ya kemịstrị redọks: resazurin na-anata elektrọn wee ghọọ resorufin nke na-amụpụta ìhè. Methylene blue na-arụkwa ọrụ site na kemịstrị redọks. N'nnwale ntụnyere na-enweghị sel, mkpokọta abụọ a na-eji azụ azụ belatara ìhè Alamar Blue ntakịrị, ma n'ụzọ pụtara ìhè n'ọnụ ọgụgụ nyocha, mgbe awa 24 gasịrị. N'nnwale anụmanụ, a sachara embrayo ndị nọ na methylene blue opekata mpe ugboro atọ n'ime mmiri uto na-enweghị ihe agba ahụ tupu nnwale ahụ, mmetụta dị ndụ a hụrụ n'ụmụ azụ si n'akwa pụta karịrị nnyonye anya a hụrụ n'nnwale na-enweghị sel. Ya mere, ihe abụọ ahụ bụ eziokwu: anụmanụ a sachara nwere ezigbo mmetụta metabọlizim, ebe ihe agba a na-asaghị na-agbakwụnye mmetụta kemịkalụ ozugbo nke na-eme ka nha ahụ ghara ịbụ nke ziri ezi. Nnwale ntụnyere ga-ekewapụ ihe abụọ ahụ; ma ọ bụghị ya, ọnụọgụ ọ bụla n'ime ha enweghị ihe ọ pụtara. Ntuziaka izugbe banyere ịkọwa nsonaazụ nnwale ndị na-eji ihe agba dị mkpa karịsịa ebe a.

Usoro oge nke ọkwa mmepe

Ihe mbụ e mepụtara kpọmkwem maka isiokwu a. Mkpokọta ndị a bụ ụkpụrụ abụọ a na-eji azụ azụ, 0.00005% na 0.0001%, ma e wezụga ebe e kwuru ihe ọzọ.

Ihe a ga-echeta bụ ịrị elu n'oge mbụ na ịda n'oge ikpeazụ n'ihe a na-atụ gbasara metabọlizim, yana mmetụta n'omume mgbe azụ nọ na ihe ahụ, nke a na-apụghị ịchọpụta mgbe ihe ahụ pụchara n'ahụ n'otu nnwale nyochara ya.

Ndepụta ihe a ga-enyocha n'ịhazi ìgwè ntụnyere

Ihe nke abụọ e mepụtara kpọmkwem maka isiokwu a. Jiri ya mgbe usoro ịzụ zebrafish na methylene blue jikọtara na nnwale.

1. Kọọ ihe agba ahụ dịka kemịkalụ nnwale, ọ bụghị dịka mmiri. Kwuo mkpokọta ya na pasent nakwa micromolar, oge ịmalite na ịkwụsị ya n'awa ma ọ bụ ụbọchị mgbe njikọta spam na akwa gasịrị, usoro ịgbanwe mmiri, na oge e nyere ka ihe agba ahụ pụọ tupu nha ọ bụla.
2. Mee ka ìgwè ntụnyere kwekọọ n'ajụjụ nyocha. Ọmụmụ kemịkalụ a na-anwale chọrọ ìgwè ntụnyere na-enweghị ihe agba ahụ; ọmụmụ gbasara ịzụ azụ chọrọ ìgwè na-enweghị ihe agba ahụ na ìgwè nwere ya, a ga-edekọkwa nsonaazụ igbochi ero, ebe ọ dịghị nke ọ bụla n'ime ọmụmụ abụọ e zoro aka na ha tụrụ irè igbochi ero.
3. Saa azụ tupu nnwale redọks, wee nyochaa na usoro ahụ ziri ezi. Saa ha opekata mpe ugboro atọ n'ime mmiri uto na-enweghị ihe agba ahụ, ma mee nnwale ntụnyere ọzọ na-enweghị sel nke nwere ihe agba ahụ na kemịkalụ nnwale, n'ihi na ihe agba ahụ na-ebelata mgbaàmà Alamar Blue ozugbo.
4. Were ihe a na-atụ gbasara omume na monoamine dịka ndị nwere nnukwu ihe ize ndụ nke nnyonye anya. Ọmụmụ mmegharị, nzaghachi ịma jijiji n'ihe mberede, omume yiri nchegbu, ihe na-egbochi ịda mba, na ihe na-egbochi MAO kwesịrị izere ihe agba ahụ n'oge nha ma ọ bụ gosipụta na ọ naghị emetụta ihe ọ bụla ha chọrọ ịtụ; iwepụ ya ruo otu ụbọchị ma ọ bụ ụbọchị abụọ wepụrụ otu mmetụta mmegharị, ma egosibeghị na nke ahụ na-arụ ọrụ n'ụdị nnwale ndị ọzọ.
5. Were ihe a na-atụ gbasara metabọlizim na mitọkọndria dịka ndị nwere nnukwu ihe ize ndụ n'ọkwa mmepe ọ bụla. Oriri oksijen, ike a na-emefu, ọdịiche voltaji gafee akpụkpọ, na mbipụta RNA nke agbụ iku ume na-agbanwe na mkpokọta a na-eji azụ azụ, n'ụzọ ndị na-emegide ibe ha tupu ịpụ n'akwa na mgbe ọ gasịrị.
6. Ejila enweghị mmetụta n'otu nhazi nnwale were kwado nke ọzọ. Nsonaazụ na-egosighị mmetụta mgbe e wepụchara ihe ahụ anaghị akọwa ọnọdụ mgbe azụ ka nọ na ya; nsonaazụ na-egosighị mgbanwe n'ọdịdị ahụ anaghị akọwa metabọlizim ma ọ bụ mmekọrịta ya na ọgwụ; nsonaazụ n'otu ụdị mkpụrụ ndụ ihe nketa azụ, okpomọkụ, ma ọ bụ ogologo oge nnwale anaghị akọwa ndị ọzọ.
7. Kwuo ntuziaka ị gbasoro na nke ọzọ e nwere. Kpọọ mkpokọta CCAC, Europe, ma ọ bụ Cold Spring Harbor aha n'ụzọ doro anya, ma kọwaa ebe nnwale embrayo OECD hapụrụ ihe agba ahụ, ka onye na-agụ wee mata ọnọdụ e ji zụlite anụmanụ gị.

Ọ dịghị nke ọ bụla n'ime ihe ndị a na-ekwu ka a kwụsị iji ihe agba ahụ mee ka akwa dịrị ndụ. Ihe ha na-ekwu bụ ka a ghara ikwe ka nhọrọ e mere n'ịzụ azụ banye na data n'enweghị nyocha. Ihe anụnụ anụnụ dị n'efere bụ molekul nwere ọrụ ọgwụ, nnwale ndị kacha nwee ike ịgbanwe n'ihi ya bụ kpọmkwem nnwale nyocha metabọlizim na omume metụtara usoro akwara nke a na-eme n'ọtụtụ ngwa ngwa, bụ ndị a na-ahọrọzi ụmụ zebrafish maka ha. Dekọọ ya, hazie nnwale ntụnyere maka ya, sachapụ ya tupu ị tụọ ihe, ma lelee nnwale ọ pụrụ ịbụ na ọ na-esonye na ya nwayọ n'enweghị onye na-achọpụta.