Ịtụ ụdị ọksịjen na-emeghachi omume na nnwale methylene blue

Ụlọ nyocha abụọ na-eme ihe nke ọ bụla na-akpọ nnwale methylene blue maka igbochi ọksideshọn. Otu na-akọ na ihe e ji agba agba a na-ebelata ụdị ọksịjen na-emeghachi omume. Nke ọzọ na-akọ na ọ na-emepụta ha. Ha abụọ na-egosi eserese doro anya nke mmekọrịta dị n'etiti oke e ji mee nnwale na nzaghachi. Ha abụọ na-ekwu eziokwu dịka ha si hụ ya. Ihe dị iche abụghị aghụghọ ma ọ bụ amaghị ọrụ. Ọ bụ na ìgwè abụọ ahụ tụrụ ihe dị iche iche n'okpuru ìhè dị iche iche, jiri ihe nyocha na-aza ajụjụ dị iche iche, ma kọwaa azịza abụọ ahụ n'otu okwu: ROS.

Methylene blue bụ molekul siri ike ịtụ nke ọma n'ihi na ọ na-esonye na mmeghachi omume kemịkalụ e bu n'uche ka ọ na-ekiri. N'ọchịchịrị, ọ na-ebufe eletrọn n'etiti ndị na-enye na ndị na-anata ha, wee laghachi n'ụdị ọ malitere na ya, dị njikere ịmalite okirikiri ọzọ. N'okpuru ìhè, ọ na-aghọ ihe na-akpali mmeghachi omume site n'ìhè, na-eru ọnọdụ triplet nke ike ya arịgoro elu. Site n'ọnọdụ ahụ, ọ pụrụ inyefe ọksịjen ike iji mepụta ọksịjen singlet, ma ọ bụ bufee eletrọn iji mepụta radịkal na haịdrọjen perọksaịd. Ihe nyocha ọ bụla etinyere n'usoro ahụ nwere ike ịnata ọksideshọn, nweta mbelata kemịkalụ, tufuo agba ya, ma ọ bụ mee ka ihe e ji agba agba ahụ kpuchie akara ìhè ya. Ya mere, ajụjụ mbụ banyere nsonaazụ ROS ọ bụla abụghị ihe ọnụ ọgụgụ ahụ bụ. Ọ bụ ihe ule ahụ na-achọpụta n'ezie, na ihe methylene blue na-eme ule ahụ.

Amplex Red: ule haịdrọjen perọksaịd nwere nhazi nha

Ngwakọta methylene blue na Amplex Red bụ njikọ kacha nwee ihe akaebe siri ike n'akwụkwọ nyocha ndị a, ma ọ bụrụ na a hazie ya nke ọma. Mmeghachi omume kemịkalụ ya kpọmkwem bụ nke a: horseradish peroxidase na-eji haịdrọjen perọksaịd ọksidaịzị ihe Amplex na-emeghachi omume na ya ka ọ bụrụ resorufin, ihe na-ewepụta ìhè fluọresens, n'ihe dịka nhata otu na otu n'ọnụ ọgụgụ molekul. Perọksaịd dị n'ihe nlele na-aghọ ìhè fluọresens n'igwe nchọpụta. Ọ dịghị ihe ọzọ n'ìgwè ROS a na-ahụkarị na-akpali mmeghachi omume ahụ ozugbo.

Uru kacha mkpa bụ nhazi nha. Onye nyocha na-akpachapụ anya na-eji ihe ọkọlọtọ perọksaịd a maara oke ha eme ule n'otu mmiri buffer, na-eji otu oke peroxidase na ihe ọ na-emeghachi omume na ya, otu oge a na-ahapụ ha ka ha meghachi omume, na otu ntọala ngwaọrụ ìhè; ọ na-ejizi eserese ahụ kọwaa nsonaazụ ihe nlele. N'ọmụmụ gbasara mitochondria e kewapụrụ n'ụbụrụ nke bụ ntọala usoro a, ndị dere ya mere kpọmkwem otu ahụ: ha tinyere oke perọksaịd a maara na njedebe ule ọ bụla. Ha kọkwara ọnụọgụ ahụ dịka ọsọ mmepụta na picomoles kwa nkeji kwa milligram nke protein, kama dịka nkeji ìhè fluọresens na-enweghị nhazi nha. Nke ahụ bụ ihe na-eme ka ìhè na-enwu ghọọ ihe a tụrụ.

Nkọwa atọ sitere n'ọmụmụ ahụ kwesịrị ka ndị ọzọ soro. Nke mbụ, ndị dere ya jiri catalase, nke na-emebi perọksaịd, chọpụta na akara ahụ bụ ihe ziri ezi. Mmụba ìhè fluọresens nke methylene blue kpatara kwụsịrị mgbe e tinyere catalase, na-egosi na akara ahụ sitere na perọksaịd kama ịbụ ihe efu nke usoro ìhè mepụtara. Nke abụọ, ha nwalere mmetụta ìhè ozugbo site n'imechi ụzarị ìhè e ji akpali fluọresens, ka ihe nlele nata naanị otu ụzọ n'ime asatọ nke oke ìhè a na-ejikarị; akara ahụ belatara naanị pasent itoolu. Ihe karịrị pasent iri itoolu nke perọksaịd ha kọọrọ adabereghị n'ìhè e ji atụ ihe. Nke atọ, ha jiri eletrọd tụọ mwepụ perọksaịd iche, wee chọpụta na methylene blue mụbara mmepụta ya ma mee ka mwepụ ya daa nwayọọ. Ihe nyocha na-akọ naanị mkpokọta ìhè fluọresens fọdụrụ gaara agwakọta mmetụta abụọ ahụ.

Ule ahụ ka nwere ụzọ ọ pụrụ isi nye nsonaazụ na-ezighị ezi, methylene blue na-emekwa ka ọtụtụ n'ime ha pụta. Ihe e ji agba agba ahụ na-amịkọrọ ìhè n'akụkụ mpaghara uhie sara mbara ebe resorufin na-ewepụta ìhè. Ya mere, mgbe oke methylene blue dị elu, ihe nlele ahụ nwere ike ikpuchi akara nke ya site na mmetụta nzacha ìhè n'ime ya. N'ihi nke a, ihe ọkọlọtọ kwesịrị ịnwe otu oke methylene blue dị n'ihe nlele. Amplex Red nwekwara ike ịnata ọksideshọn site n'ìhè n'onwe ya, ngwaahịa ya bụ resorufin nwekwara ike ịbanye n'okirikiri redox nke ìhè na-akpali, nke na-emepụta superoxide na perọksaịd. Nke a dị ezigbo mkpa mgbe nnwale ahụ na-enyekwa ihe na-akpali mmeghachi omume site n'ìhè ìhè. Ụzọ bara uru isi dozie ya bụ ibu ụzọ nye ihe nlele methylene blue ìhè, wee jiri ihe Amplex eme ule n'obere akụkụ ihe nlele ahụ n'ọchịchịrị, kama inye methylene blue na ihe nyocha ìhè ọnụ. N'ikpeazụ, superoxide dismutase anaghị ebelata akara Amplex mgbe niile: ịgbanwe superoxide ka ọ bụrụ perọksaịd nwere ike ịmụba ya. Nnwale njikwa SOD nke na-amụba ìhè fluọresens adịghị ada. Ọ chọpụtala na superoxide bụ ụdị kemịkalụ dị n'isi usoro mmeghachi omume ahụ.

DCFDA: ihe na-egosi ọksideshọn na-enweghị ịmata ụdị kpọmkwem

Njikọ methylene blue na DCFDA bụ ebe ọtụtụ mgbagwoju anya si abịa. DCFH-DA bụ ihe mmalite a na-etinye n'ime mkpụrụ ndụ. Esterase dị n'ime mkpụrụ ndụ na-ewepụ otu acetate ya, hapụ DCFH nke na-adịghị ewepụta ìhè fluọresens; ọksideshọn nke DCFH na-emepụtakwa DCF nke na-ewepụta ìhè fluọresens. Ihe ndị na-ọksidaịzị ya dị ọtụtụ: radịkal hydroxyl, ihe etiti nke peroxidase na heme, nitrogen dioxide, hypochlorous acid, na radịkal sitere na peroxynitrite. Haịdrọjen perọksaịd naanị ya anaghị ọksidaịzị ya ozugbo n'ọsọ ọ bụla bara uru; ìhè fluọresens dabere na perọksaịd na-achọkarị ígwè, protein heme, ma ọ bụ mmeghachi omume peroxidase n'usoro ahụ.

Nkatọ nke ngalaba usoro nyocha ọ bụla kwesịrị ịkpọtụrụ sitere na nyocha Kalyanaraman na ndị ọrụ ibe ya mere banyere DCFH dịka ihe nyocha, dịka a chịkọtara na ọmụmụ mitochondria ụbụrụ nke jụrụ iji DCFDA n'ihi nke a. Ha gosiri na ihe e ji agba agba a na-emeghachi omume nwayọọ, na nhata nke oke ihe ndị na-emeghachi omume amabeghị, na-enweghị nhazi nha ziri ezi, nakwa na ọ na-emeghachi omume na ihe ndị na-abụghị ROS. Ihe nyocha ahụ na-amụbakwa ihe ọ na-atụ: ọksideshọn DCFH site n'iwepụ otu eletrọn na-emepụta radịkal DCF nke na-emeghachi omume na ọksịjen iji mepụta superoxide; superoxide ahụ na-agbanwe site na dismutation ka ọ bụrụ perọksaịd ọzọ. Nsonaazụ ahụ na-emepụta ụfọdụ mmeghachi omume kemịkalụ ọ na-akọ.

Ọ dịghị nke a na-eme ka DCFDA ghara ịba uru. Ọ na-eme ka ọ bụrụ ule mbụ iji hụ ma ihe ọ bụla na-eme, ọ bụghị iji mata ihe ahụ kpọmkwem. Mmụba ìhè fluọresens DCF pụtara na ọksideshọn nke ihe nyocha dabere na ihe na-ọksidaịzị amụbala. Ọ pụtaghị na perọksaịd amụbala, ọ pụtaghịkwa na mkpokọta ROS amụbala, n'ihi na ọ dịghị otu ihe nyocha na-atụ mkpokọta ahụ. Ọrụ methylene blue ndị mbụ dabere na ọksideshọn DCF mgbe oke ya karịrị otu micromolar kọọrọ mmetụta na-akwalite ọksideshọn, ebe usoro ndị ọzọ n'otu oge ahụ kọọrọ nchebe megide ọnwụ mkpụrụ ndụ nke perọksaịd kpatara. Nchọpụta abụọ ahụ nwere ike ịbụ eziokwu banyere otu ihe e ji agba agba n'ọnọdụ redox dị iche iche, nsonaazụ DCF naanị ya enweghịkwa ike ikwu ụdị ihe na-ọksidaịzị kpatara akara ahụ. Ihe mere ọrụ mbụ gbasara mitochondria ụbụrụ ji dị mkpa bụ na ọ dochiri ule mbụ a na nha perọksaịd a haziri nke ọma, wee chọpụta oke nrụgide ahụ ozugbo: ọbụna methylene blue dị naanị otu narị nanomolar mụbara mwepụta perọksaịd ọtụtụ okpukpu n'ihe niile e ji mee mmeghachi omume na ọnọdụ iku ume niile a nwalere.

DCFDA nwere ọnyà ọzọ metụtara methylene blue kpọmkwem. Ihe e ji agba agba ahụ nwere agba siri ike ma na-arụ ọrụ redox, ya mere ọ nwere ike ime ka ìhè fluọresens daa, kwụsị mwepụta ìhè, ma ọ bụ ọksidaịzị ihe nyocha ahụ n'enweghị njikọ na ROS nke mkpụrụ ndụ. Nnwale njikwa nwere methylene blue na ihe nyocha, ma na-enweghị mkpụrụ ndụ, abụghị ihe ịchọ mma a pụrụ ịhapụ. Ọ bụ nnwale na-agwa gị ma methylene blue na ihe nyocha ahụ na-emekọrịta ihe.

Ijide radịkal site na spin trapping na oriri ọksịjen: njirimara na ọsọ mmeghachi omume

Ebe ihe nyocha fluọresens na-egosi na ihe a pụrụ ịọksidaịzị apụtala, electron spin resonance nwere ihe ọnyà spin na-egosi ihe dị nso n'ịmata ihe ahụ bụ. Ọmụmụ a ma ama banyere mmeghachi omume methylene blue nke ìhè na-akpali jiri ESR chọpụta radịkal ascorbate sitere na methylene blue, ascorbate na ìhè, wee gosi mmepụta perọksaịd n'nnwale oriri ọksịjen na mmepụta radịkal hydroxyl nke ígwè na-akpali n'nnwale spin trapping. Usoro ọ bụla zara ajụjụ ndị ọzọ enweghị ike ịza: ESR nyere njirimara radịkal, oriri ọksịjen nyere ọsọ mmeghachi omume na-adabereghị n'ihe nyocha fluọresens ọ bụla, ngwakọta ha gosikwara na ụzọ ọksịjen singlet na ụzọ radịkal na-arụ ọrụ n'otu usoro a na-enye ìhè.

Nsonaazụ ahụ nke 1984 ka dị dịka ihe ịdọ aka ná ntị. Mgbe ìhè na ihe na-enye eletrọn nọ, methylene blue mepụtara perọksaịd; mgbe ígwè nọkwa, usoro ahụ mepụtara radịkal hydroxyl, nke kacha emeghachi omume n'ìgwè ahụ. Ndị dere ya jikọtara nke a na ascorbate dị n'anya ma jụọ ma iji ya n'anya n'enweghị ezigbo nlezianya ò kwesịrị ekwesị. Ndị na-agụ ya taa kwesịrị ileba anya n'ọnọdụ ndị ahụ: ìhè tinyere ihe na-enye eletrọn tinyere ígwè. Wepụ otu n'ime ha, ụzọ mmeghachi omume ahụ ga-ada mbà ma ọ bụ kwụsị.

Eletrọd ọksịjen na-egosi uru ha n'ụzọ ọzọ. Eletrọd ụdị Clark na-atụ mkpokọta ọksịjen a riri mgbe e wepụchara mgbanwe ndị ọzọ. Nke a na-egosi na mmeghachi omume redox methylene blue na-akpali na-eri ọksịjen molekul, ma na-enye data banyere ọsọ mmeghachi omume nke ihe efu sitere na fluọresens enweghị ike iṅomi. Ọ naghị amata ngwaahịa ahụ. Perọksaịd, superoxide, mmiri, na mbibi ọksịjen singlet niile na-eri ọksịjen. Ịmata ọsọ na-enweghị ịmata njirimara ezughị ezu dịka ịmata njirimara na-enweghị ịmata ọsọ. Ọ bụ ya mere akwụkwọ nyocha ndị siri ike ji ejikọ eletrọd na ule perọksaịd nwere nhazi nha ma ọ bụ ihe ọnyà radịkal.

Ihe mere nsonaazụ igbochi ọksideshọn ji emegiderịta onwe ha

Tinye nsonaazụ usoro atọ ahụ n'akụkụ ibe ha, ihe ndị yiri mmegide n'akwụkwọ nyocha methylene blue ga-apụta dịka ọdịiche usoro tinyere eziokwu atọ gbasara ihe ndị dị ndụ.

Nke mbụ, ihe e ji agba agba ahụ bụ ma ihe na-ebufe eletrọn ma isi iyi perọksaịd. Site n'ịtụgharị eletrọn pụọ n'ebe iku ume nke ọksịjen gaara aghọ superoxide, ọ nwere ike ibelata otu ROS, ebe ụdị ya natara eletrọn na-ebelata ọksịjen ozugbo ka ọ bụrụ perọksaịd, na-amụba nke ọzọ. Ya mere, ụlọ nyocha na-arụ ọrụ na mmeghachi omume redox nke mitochondria na ọrụ ya dịka ụzọ ọzọ kwesịrị ịtụ anya azịza dabere n'ihe nyocha: nsonaazụ na-anabata superoxide na-ada, ebe nsonaazụ perọksaịd na-arị elu n'otu cuvette.

Nke abụọ, perọksaịd n'oke dị ala bụ ihe mgbaàmà, ọ bụghị naanị ihe na-akpata mmebi. Ọmụmụ mitochondria ụbụrụ òké nke sochiri ọrụ mbụ ahụ chọpụtara mmepụta perọksaịd site na methylene blue dị naanị iri ise nanomolar, na-enweghị mmerụ DNA mitochondria n'oke a na-eji eme ọgwụgwọ, yana nchebe megide mmerụ rotenone kpatara mgbe e buru ụzọ tinye methylene blue. Ọ bụ naanị mgbe oke ya ruru otu narị micromolar, nke dị elu karịa oke a na-eji eme ọgwụgwọ, ka ihe e ji agba agba ahụ mebiri ụfọdụ akụkụ DNA ahọpụtara; ìhè uhie tinyere methylene blue dị iri abụọ micromolar mepụtakwara ọksịjen singlet nke mebiri akụkụ niile a nwalere. Usoro a tụrụ aro bụ hormesis: obere mmepụta perọksaịd na-akpali usoro nchebe megide ọksideshọn metụtara Nrf2 na mmepụta mitochondria ọhụrụ, nke mere na nsonaazụ na-egosi ịkwalite ọksideshọn n'obere oge na-ebute nsonaazụ igbochi ọksideshọn n'ogologo oge. Ule a gụrụ mgbe otu awa gachara na ule a gụrụ mgbe otu ụbọchị gachara nwere ike inye nsonaazụ na-emegiderịta onwe ha n'ihi na ihe na-eme n'ime ihe ndị dị ndụ agbanweela n'etiti oge abụọ ahụ.

Nke atọ, ìhè na-ekpebi ọbụna molekul dị n'ebe ahụ. Ịnye methylene blue ìhè na-ewepụ otu methyl na ya, na-agbanwe ya gaa na Azure B na ngwaahịa ndị yiri ya; ìhè oriọna maịkroskopu dị n'elu efere nnwale ezuwokwa ime ka ọ malite mmeghachi omume sitere n'ìhè. Nnwale n'ọchịchịrị na nnwale n'okpuru ìhè bụ nnwale dị iche iche, ngalaba njikwa ìhè na njikwa ihe e ji agba agba n'usoro nnwale ọ bụla kwesịkwara ile ha anya otu ahụ.

Nnwale njikwa kacha nta dị mkpa, na otu esi agụ nkwupụta ọ bụla

Ntụnyere dị n'okpuru bụ ihe ntụaka izizi e mere maka edemede a. Tupu ịnabata nsonaazụ ROS methylene blue ọ bụla, lelee ahịrị ndị ndị dere ya mere na ndị ha hapụrụ.

Ụkpụrụ bara uru maka ịgụ nsonaazụ na-esote nke a. Amplex nwere peroxidase, nke a haziri nha ya ma jiri catalase nyochaa ya, bụ ihe akaebe gbasara perọksaịd. DCFDA bụ ihe akaebe gbasara ọksideshọn nke ihe nyocha na-enweghị ịmata ụdị kpọmkwem, ọ dịghịkwa ihe ọzọ. Spin trapping nwere nnwale njikwa ihe na-ewepụ radịkal bụ ihe akaebe gbasara njirimara radịkal. Oriri ọksịjen bụ ihe akaebe gbasara ọsọ mmeghachi omume. Ahịrịokwu na-ekwu karịa ihe ule ya nwere ike ịkwado, n'agbanyeghị otú e si dee ya n'obi ike, bụ ahịrịokwu gbasara ihe nyocha ahụ, ọ bụghị gbasara methylene blue. Mkparịta ụka ndị metụtara ịdabere n'oke e ji eme nnwale na oke hormesis, ngagharị eletrọn mitochondria, mgbagha ule nyocha n'ihe nlele a gbara agba, na ihe efu sitere n'ìhè maịkroskopu na-agbasawanye isi ihe ndị a; nke ọ bụla ka ga-adịkwa irè mgbe e dochiri ntụaka nwa oge ya.