Kolorasyon senp ak ble metilèn kont kolorasyon Gram: sa chak metòd ka pwouve

Yon etidyan prepare yon fwoti ak yon kilti ki gen etikèt E. coli, kouvri l ak ble metilèn pandan yon minit, rense l, epi gade l ak objektif imèsyon nan lwil la. Bakteri ble ki gen fòm baton kouvri chan vizyon an. Rapò laboratwa a di: "Bakteri Gram-negatif ki gen fòm baton idantifye kòm E. coli." Obsèvasyon an kòrèk. Lam sa a pa bay ase prèv pou konklizyon an.

Erè a se nan konsèp la, pa nan teknik la. Etidyan an trete yon kolorasyon senp tankou se te yon tès diferansyèl. Yon kolorasyon senp ak yon kolorasyon Gram reponn kesyon diferan paske yo baze sou konsèp kolorasyon diferan. Youn mande: ki fòm ki prezan. Lòt la mande: ki jan miray selil la reyaji lè yo mete l anba yon tès. Si ou konfonn de metòd yo, yon lam ki byen kolore ap mennen nan yon rapò ki pa jistifye.

Konparezon sa a kenbe de metòd yo separe, montre sa chak rezilta pèmèt ou afime, epi reponn de kesyon etidyan yo poze pi souvan: èske yo ka itilize ble metilèn nan kolorasyon Gram, epi ki sa yon kolorasyon E. coli ak ble metilèn montre toutbon.

Repons kout la

Kolorasyon senp ak ble metilèn bay tout selil ki ka pran koloran menm koulè ble a. Konsa, li montre mòfoloji (baton, esfè, espiral) ak aranjman (poukont yo, an pè, an chèn), men li pa di anyen sou kategori Gram. Kolorasyon Gram ajoute yòd, yon etap dekolorasyon, ak yon kontrekoloran. Konsa, li separe bakteri an Gram-pozitif (vyolèt) ak Gram-negatif (woz oswa wouj) selon fason anvlòp yo kenbe koloran an. Baton ble apre ble metilèn vle di "selil ki gen fòm baton prezan." Baton woz apre yon sekans Gram konplè vle di "bakteri Gram-negatif ki gen fòm baton prezan." Dezyèm deklarasyon an pi solid paske pwosedi a te fè yon tès anplis.

Pou fanmi pi laj metòd pou bakteri ki sèvi ak yon sèl koloran, kote atik sa a fè pati a, gade atlas kolorasyon pou mikwoskopi a.

Kolorasyon senp: yon sèl koloran, yon sèl kesyon

Ble metilèn se yon koloran bazik (katyonik). Iyon ki bay koulè li a gen yon chaj pozitif epi li kole ak estrikti ki gen chaj negatif nan selil la, tankou asid nikleyik ak gwoup asid sou sifas la. Se poutèt sa selil yo parèt ble sou yon fon pal. OpenStax dekri prensip kolorasyon pozitif sa a nan chapit li sou kolorasyon. Katyon koloran an li menm se ti iyon fenotyazin plat yo dekri an detay nan referans sou chimi ble metilèn nan; kontre-iyon klori a pa bay koulè a.

Yon pwotokòl estanda pou ansèyman senp espre: fè yon fwoti mens, kite l seche nan lè, fikse l ak chalè, kouvri l ak yon solisyon akeuz ble metilèn anviwon 1% pandan apeprè yon minit, rense l dousman ak dlo, seche l lè ou tanponnen l, epi egzamine l ak imèsyon nan lwil. Yon pwotokòl ansèyman LibreTexts bay egzakteman fòm 1% pandan yon minit sa a, pandan li fè remake kèk laboratwa pwolonje tan an. Pa gen mòdan, pa gen dekoloran, pa gen dezyèm koloran. Se absans sa a ki kle a. Avèk yon sèl koloran epi san retire l yon fason selektif, tout selil ki pran koloran an fini ak menm koulè a.

Avèk E. coli, chan vizyon yo atann nan se baton ble (basil), poukont yo, an pè oswa an ti gwoup. Ble a soti nan koloran an. Fòm baton an soti nan òganis lan. Men konbinezon an pa idantifye òganis lan, paske anpil espès gen fòm baton epi anpil baton vin ble nan yon kolorasyon senp. ATCC eksplike klèman limit sa a, ki konsène mòfoloji sèlman, nan gid li sou kilti nan mikwobyoloji. Yon rapò kòrèk di: "basil ble obsève." Nenpòt deklarasyon ki depase fòm ak aranjman mande plis prèv.

Kolorasyon Gram: kat reyaktif, yon sèl tès konpòtman

Kolorasyon Gram se yon kolorasyon diferansyèl. Li fè tout selil yo pase nan menm sekans lan epi li montre ki selil ki kenbe premye koloran an ak ki selil ki pèdi l. Pwotokòl kolorasyon Gram Sosyete Ameriken pou Mikwobyoloji a defini lòd estanda ki gen kat etap la: vyolèt kristal (koloran prensipal), yòd Gram (mòdan), alkòl oswa melanj asetòn ak alkòl (dekoloran), apre sa safranin (kontrekoloran).

Modèl estanda pou ansèyman an esplike separasyon sa a atravè estrikti anvlòp la. Selil Gram-pozitif yo gen yon miray peptidoglikan epè ki dezidrate epi ki kenbe konplèks vyolèt kristal ak yòd la pandan lavaj ak alkòl la. Selil Gram-negatif yo gen yon kouch peptidoglikan mens ansanm ak yon manbràn ekstèn ki rich an lipid, dekoloran an deranje. Konsa, konplèks la soti pandan lavaj la epi selil yo pran safranin apre sa. Revizyon sou kolorasyon Gram nan NCBI Bookshelf bay eksplikasyon sa a sou miray selil la. Espesyalis yo ajoute tout mekanis fizik ak chimik yo pi konplike pase epesè miray la sèlman. Men pou entèpretasyon nan laboratwa, règ konpòtman an toujou valab: vyolèt vle di koloran an rete; woz vle di li soti epi selil la pran kontrekoloran an.

Panèl ilistrasyon. Desen stilize pou konpare metòd yo, pa foto mikwoskopik ki fèt ak kamera. Koulè yo senplifye pou anseye lojik la: yon sèl koulè nan yon kolorasyon senp, de koulè apre dekolorasyon Gram.

Èske yo ka itilize ble metilèn nan kolorasyon Gram

Kesyon sa a ka gen de sans, epi yo bezwen repons diferan.

Premye sans lan: èske yon sèl aplikasyon ble metilèn ki kouvri fwoti a ka ranplase tout sekans Gram lan. Non. San yòd, dekoloran, ak kontrekoloran, pa gen etap diferansyèl, kidonk yo pa teste okenn kategori Gram. Yon chan ble apre ble metilèn sèlman se yon rezilta kolorasyon senp, menm si boutèy la chita bò reyaktif Gram yo. Pa anrejistre l kòm yon rezilta Gram.

Dezyèm sans lan: èske ble metilèn ka ranplase safranin kòm kontrekoloran nan etap 4. Sou plan fonksyonèl, li ka kolore selil ki dekolore yo, epi yon egzèsis nan yon liv prevwa selil Gram-pozitif vyolèt ak selil Gram-negatif ble apre yon ranplasman konsa. Lojik la solid paske selil Gram-negatif ki byen dekolore yo prèske san koulè epi yo pral pran yon lòt koloran katyonik. Men sa pa pwotokòl estanda a. Pwotokòl ASM yo presize safranin, ak lòt chwa yo rekonèt, tankou fikzin bazik nan kèk varyant, men pa ble metilèn. Gen yon dezavantaj pratik tou: ble ak vyolèt pi difisil pou distenge pase woz ak vyolèt, sitou pou moun k ap kòmanse epi sitou anba lanp mikwoskòp ki vin fèb. Pou travay nan kou ak nenpòt rezilta ki enpòtan, itilize kontrekoloran pwotokòl ou a nonmen an, anjeneral safranin, epi konsidere yon kontrekolorasyon ak ble metilèn kòm yon varyant pou demonstrasyon, pa kòm yon ekivalan estanda.

Kesyon ki gen rapò a, sou fason ble metilèn konpare ak lòt opsyon ki sèvi ak yon sèl koloran, trete nan yon konparezon kolorasyon senp pou bakteri.

Sa kolorasyon E. coli ak ble metilèn pwouve, ak sa li pa pwouve

E. coli se yon bakteri Gram-negatif ki gen fòm baton, men fraz sa a konbine enfòmasyon ki soti nan plizyè metòd: mòfoloji soti nan mikwoskopi, reyaksyon Gram soti nan yon kolorasyon Gram, idantite soti nan kilti ansanm ak tès byochimik oswa molekilè. Yon fwoti ak ble metilèn bay premye pati a sèlman. Li etabli gen selil ki gen fòm baton nan echantiyon kolore a epi li montre fason yo ranje. Li pa etabli reyaksyon Gram lan, paske yo pa t fè okenn tès dekolorasyon. Li pa idantifye espès la, paske baton anpil espès sanble youn ak lòt nan nivo rezolisyon sa a.

Se la rapò yo konn fè erè yon fason nou ka prevwa. Moun k ap ekri a mete konesans li deja genyen ("kilti sa a sipoze se E. coli, epi E. coli Gram-negatif") nan liy obsèvasyon an. Konsa, lam nan parèt konfime sa yo te sipoze an reyalite. Yon rapò ki pi klè separe nivo yo: "Kolorasyon senp ak ble metilèn: basil ble obsève; mòfoloji sèlman, pa gen kategori Gram ki teste." Apre sa, si yo te fè yon kolorasyon Gram kòrèkteman ak kontwòl: "Kolorasyon Gram: baton woz, ki ann akò ak Gram-negatif." Idantite espès la vini pita, nan pwosesis idantifikasyon an, pa nan koulè a sèlman.

Yon gid pratik pou entèpretasyon

Sèvi ak règ desizyon sa a nan laboratwa. Si tout selil yo gen yon sèl koulè epi pwotokòl la te itilize yon sèl koloran san dekoloran, ou te fè yon kolorasyon senp. Rapòte fòm, estimasyon gwosè, ak aranjman. Kanpe la. Si pwotokòl la te itilize vyolèt kristal, yòd, dekoloran, ak kontrekoloran ansanm ak kontwòl pozitif ak negatif ki konnen, ou te fè yon kolorasyon Gram. Rapòte koulè ansanm ak mòfoloji: kòk vyolèt an chèn, baton woz, elatriye.

Twa erè lakòz pifò konfizyon an. Premye a se bay baton ble plis sans pase sa yo genyen, tankou se yon konfimasyon E. coli. Dezyèm nan se anrejistre yon lam ak ble metilèn anba tit "Kolorasyon Gram" nan yon kaye, sa ki pral fè moun ki li l pita mal entèprete l. Twazyèm nan se chanje kontrekoloran san prekosyon epi konpare koulè ant laboratwa tankou yo te itilize menm seri koulè a. Chak erè gen menm koreksyon an: nonmen metòd yo te fè toutbon an, epi afime sèlman sa metòd sa a teste.

Kolorasyon senp gen plas li jisteman paske li afime ti kras. Li rapid, li tolere ti varyasyon nan teknik, epi li sifi lè kesyon an konsène mòfoloji: èske gen yon bagay la, epi ki fòm li genyen. Lè kesyon an konsène klasifikasyon, fè tès diferansyèl la. Lam ble a di ou ki aparans selil yo genyen. Lam vyolèt oswa woz la di ou ki jan miray yo konpòte yo. Okenn nan de lam yo, poukont li, pa di ou ki espès la.