Eksplikasyon sou koloran ble metilèn alkalin Loeffler ak ble metilèn polikrom

Twa boutèy ka chita youn bò lòt sou yon ban kolorasyon, chak ak yon etikèt ki bay yon varyant ble metilèn. Youn di ble metilèn nan dlo 1%. Youn di ble metilèn alkalin Loeffler. Youn di ble metilèn polikrom. Yon travayè ki okipe pran sa ki pi pre a. Lè sa a, fwoti a pran yon koulè ki twò pal, oswa ki twò menm ble toupatou, oswa li pran ton vyolèt ki pa t prevwa, epi yo mete fot rezilta a sou echantiyon an.

Sa se yon pwoblèm fòmilasyon, se pa yon pwoblèm echantiyon. Twa solisyon yo gen koloran ki gen rapò youn ak lòt, men yo baze sou diferan prensip kolorasyon. Youn se yon koloran katyonik senp ak yon pH ki prèske net. Youn se menm koloran an, men yon alkali rann li pi fò nan aksyon li. Youn pa yon sèl koloran ankò ditou, men li se yon melanj yo okside volontèman. Si ou sèvi ak sa ki pa bon an, prensip kolorasyon an chanje pandan w ap travay.

Repons kout la

Ble metilèn senp nan dlo se baz konparezon an: anviwon 1% koloran nan dlo, yon koloran katyonik senp pou mòfoloji bakteri ak mikwoskopi jeneral. Ble metilèn alkalin Loeffler ajoute yon ti kantite alkali dilye, byen mezire, nan yon solisyon manman alkòl yo dilye nan dlo. Sa monte pH la epi fè koloran katyonik la fikse pi fò sou estrikti asid bakteri yo. Ble metilèn polikrom se ble metilèn yo fè matirite volontèman pa oksidasyon nan yon milye alkalin. Konsa, boutèy la gen yon melanj omològ demetile (azure A, azure B, azure C), tyonin ak vyolèt metilèn ansanm ak ble metilèn ki rete a, epi melanj sa a bay diferan estrikti diferan ton koulè.

Si ou sonje yon sèl fraz: alkalinizasyon chanje entansite kolorasyon an, tandiske polikromizasyon chanje koulè kolorasyon yo.

Ble metilèn òdinè nan dlo: pwen referans lan

Fòmilasyon ki pi senp la se ble metilèn ki fonn nan dlo, anjeneral a 1% w/v, san alkali epi san oksidasyon. Espès chimik ki bay koulè a se katyon metiltyoninyòm nan ak yon kont-iyon klori, yon ti koloran fenotyazin ki gen fòm plat, yo dekri nan fich ble metilèn PubChem nan kòm klori metiltyoninyòm. Antanke katyon, li mare ak zo rèl fosfat asid nikleyik yo ak gwoup asid ki sou mi selil bakteri yo, sa ki bay selil yo yon koulè ble sou yon fon klè.

Avantaj li se ke rezilta li previzib. Nwayo ak bakteri parèt ble. Kontras la modere. Òganis ki parèt pal ka pran koulè fèb, e se egzakteman limit sa a Loeffler te chèche korije. Pou fanmi pi laj koloran senp pou bakteri solisyon sa a fè pati a, gade yon apèsi sou kolorasyon senp bakteri. Li toujou enpòtan pou verifye idantite koloran an isit la: ble metil se yon molekil ki konplètman diferan, jan ble metil konpare ak ble metilèn esplike sa. Kidonk, yon rechèch nan katalòg ki baze sèlman sou non koulè a ka mennen ou nan move klas koloran an.

Ble metilèn alkalin Loeffler: menm koloran an, ak yon aksyon pi fò

Resèt klasik Loeffler la konbine yon solisyon manman ble metilèn nan alkòl ak alkali dilye nan dlo. Vèsyon ki nan liv yo mande 0.3 g koloran nan 30 mL etanòl 95% plis 100 mL idwoksid potasyòm 0.01% nan dlo (oswa, kòm ekivalan, 30 mL solisyon satire ble metilèn nan alkòl, 100 mL dlo distile ak 1 mL KOH 1%). Sa bay yon solisyon pou travay ki gen prèske 0.3% koloran ak yon pH ki byen alkalin. Vèsyon komèsyal yo suiv menm prensip la, epi katalòg koloran pou mikwobyoloji Thermo Fisher la mete ble metilèn alkalin Loeffler ansanm ak varyant polikrom ak varyant nan dlo yo kòm atik apa nan katalòg la, chak pou itilizasyon apa.

Alkali a se eleman ki fè diferans lan. Lè pH la monte, gwoup kaboksil ak fosfat ki sou echantiyon an pèdi pwoton, sa ki ogmante dansite sit ki gen chaj negatif yo. Pandan sa, solisyon manman nan etanòl la kenbe koloran an fin fonn nèt pou li rive sou sit sa yo sou fòm monomè. Rezilta a se yon kolorasyon bakteri ki pi rapid ak pi entans pase sa koloran net nan dlo bay, ak baton ak kòk ki gen koulè ble fonse yo abitye wè nan yon fwoti bakteryolojik woutin. Tan kolorasyon an anjeneral se youn a twa minit, epi yo rense ak dlo apre sa.

Aplikasyon klasik la se Corynebacterium diphtheriae ki grandi sou milye sewòm Loeffler: baton mens, souvan ak pwent ki gonfle tankou yon mas, ki gen granil metakromatik Babes-Ernst ki pran koulè fò epi ki gen polifosfat an rezèv. Asosyasyon ant milye a ak koloran an soti nan listwa; yo bay menm bakteryològ la kredi pou toude, epi avantaj pou dyagnostik la se kontras granil yo. Anplis travay sou difteri, koloran an sèvi kòm yon koloran bakteryolojik jeneral pou fwoti ki soti nan kilti, pou mòfoloji Neisseria nan fwoti klinik, epi nenpòt kote yon kolorasyon Gram pa nesesè men ble senp nan dlo a twò pal. Se yon koloran monokrom. Tout sa ki asid pran yon ton ble. Lè yon pwotokòl mande koulè pou fè diferans ant estrikti yo, alkali poukont li pa ka bay sa.

Yon prekosyon pratik: solisyon koloran alkalin yo degrade epi fòme presipite pandan yo estoke yo ak lè yo absòbe diyoksid kabòn. Laboratwa yo swa prepare ti volim, swa achte solisyon ki nan katalòg la epi respekte dire konsèvasyon li, olye yo kontinye sèvi ak yon ansyen boutèy ki kounye a depoze sediman sou chak lam.

Ble metilèn polikrom: yon sèl non, plizyè koloran

Ble metilèn polikrom kòmanse ak menm koloran an, men yo fè li sibi oksidasyon kontwole nan yon milye alkalin, yon pwosesis yo te konn rele matirasyon oswa polikromizasyon. Vyeyisman nan milye alkalin, chofaj ak kabonat, oswa oksidasyon ak ajan tankou dikwomat retire gwoup metil yo nan gwoup dimetilamino yo etap pa etap. Pwodui a se yon melanj: ble metilèn ki rete a plis azure B (yon metil pèdi), azure A ak azure C (plis demetilasyon), tyonin (konplètman demetile), ak pwodui segondè oksidasyon ki nan fanmi vyolèt metilèn. Chak konpozan gen pwòp ton koulè pa li ak pwòp afinite li pou tisi yo. Konsa, melanj la bay yon kolorasyon metakromatik: nwayo, granil, misin ak katilaj pran ton diferan ki soti nan ble rive nan wouj-vyolèt.

Chimi sa a se menm chimi ki dèyè koloran san ki pi popilè yo. Premye chèchè yo te jwenn ke ble metilèn yo te rann alkalin te bay nwayo parazit malarya yo ton vyolèt, men solisyon matirite yo nan dlo pa t estab epi yo te fòme presipite nan kèk jou. Revizyon sou kijan yo te envante koloran vyolèt pou san an retrase kijan Malachowski ak Romanowsky te sèvi ak efè sa a, chak endepandamman, nan 1891; kijan yo te entwodui metanòl pou estabilize presipite koloran an epi fikse fwoti yo san chalè; epi kijan Giemsa te estandadize melanj la pita avèk kantite azure B ak eyozin yo te mezire, ansanm ak gliseròl pou estabilize li. Koloran modèn ki nan kalite Giemsa yo soti dirèkteman nan ble metilèn polikrom plis eyozin, konbinezon ki pwodui efè Romanowsky a. Pou detay sou asosyasyon ak eyozin lan ak konpozan azure B a, gade koloran kalite Romanowsky ak entèraksyon ant azure B ak eyozin.

Paske se yon melanj, ble metilèn polikrom se sa ki mwens estandadize nan twa yo, pa nati li menm. Ekilib egzak ton koulè li yo depann de metòd oksidasyon an ak degre oksidasyon an. Se poutèt sa founisè istoloji yo vann li kòm yon pwodui apa ak pwòp tès pèfòmans li, olye yo vann li kòm yon solisyon Loeffler ki vin vye. Itilizasyon tipik yo gen ladan montre granil mastosit yo, misin ak katilaj pa metakromazi, detay plasmosit yo, epi Helicobacter pylori nan koup tisi avèk metòd polikrom kalite Goodpasture. Se bon chwa a lè kesyon an se fè diferans pa koulè, epi se move chwa a lè pwotokòl la mande yon silwèt bakteri byen klè nan yon sèl koulè.

Konparezon fòmilasyon ak itilizasyon

Li tablo a kòm yon gid pou pran desizyon. Si echantiyon an pran yon koulè twò pal, chanje apwòch pH la epi pran koloran Loeffler la. Si tout bagay pran koulè men pa gen anyen ki distenge tèt li, chanje apwòch koloran an epi pran polikrom nan. Si yon fwoti Loeffler montre granil yo byen bèl, men sipèvizè a mande poukisa nwayo ak sitoplas pataje menm ble a, repons lan se ke okenn koloran alkalin monokrom pa ka fè travay sa a. Kesyon sa a konsène fanmi polikrom nan ak derive li yo pou kolorasyon san.

Evite konfizyon abityèl yo

De erè eksplike pi fò nan konfizyon an. Premye a se konsidere koloran Loeffler la kòm yon bagay ou ka ranplase ak ble metilèn senp paske toude parèt ble nan boutèy la. Yo diferan nan pH ak entansite, epi lè ou mete yon koloran net kote yo mande koloran Loeffler la, ou pèdi egzakteman kontras granil pwotokòl la te fèt pou bay la. Dezyèm nan se konsidere nenpòt ansyen ble alkalin, oswa yon ble alkalin ki te vin vye san entansyon, kòm polikrom. Vyeyisman san kontwòl bay yon melanj ou pa konnen ak yon fòs ou pa konnen, tandiske vrè solisyon polikrom yo prepare ak metòd oksidasyon byen defini epi, nan liy koloran san yo, yo konbine yo ak yon kantite eyozin byen mezire. Listwa bay yon leson isit la: solisyon matirite nan dlo ki pa t estab nan ane 1890 yo te fè plas pou fòmilasyon estabilize nan metanòl, jisteman paske yo pa t ka repwodui melanj ki pa t kontwole yo. Se yon leson ki merite sonje anvan ou kolore yon lam pou dyagnostik ak yon boutèy ou pa sèten depi konbyen tan li la.

Rigor nan non yo konplete verifikasyon an. Konfime atik katalòg la (nan dlo, Loeffler oswa polikrom), kantite koloran an ak aplikasyon yo prevwa a sou etikèt la, olye ou dedui yo selon koulè a. Twa fòmilasyon yo pataje yon menm zansèt kwomofò. Yo pa gen menm objektif.