Alt
Léamh E. coli agus cuma coilíneachtaí eile ar agar EMB
Stríocann mac léinn sampla anaithnid ar agar eoisin agus gorm meitiléine, goraíonn sé thar oíche é, agus filleann sé ar phláta de choilíneachtaí dorcha a bhfuil lonrú glas orthu. Is é atá scríofa sa leabhar nótaí ná "E. coli, dearbhaithe." Maíonn an iontráil sin níos mó ná mar is féidir leis an bpláta a thacú. Léiríonn an pláta feinitíopa fáis agus coipthe faoi dhálaí sonracha. Is maíomh ar leith í céannacht an speicis agus teastaíonn fianaise ar leith uaithi.
Sa treoir seo, caitear le torthaí agar EMB mar thasc léirmhínithe. Mínítear an bunphrionsabal, tugtar léargas céim ar chéim ar atlas léiritheach plátaí le samplaí rialaithe, agus luaitear na cásanna ina mbíonn an íomhá théacsleabhair míthreorach.
An prionsabal atá taobh thiar den phláta
Tá agar EMB roghnaitheach agus difreálach araon. Cuireann na ruaimeanna eoisin Y agus gorm meitiléine fás a lán orgánach Gram-deimhneach faoi chois, agus mar sin fabhraíonn an meán d'fhás Gram-diúltach. Feidhmíonn na ruaimeanna céanna mar tháscairí: nuair a choipeann orgánach an siúcra atá ar fáil agus nuair a tháirgeann sé dóthain aigéid go háitiúil, ionsúnn an choilíneacht cuid mhór ruaime agus éiríonn sí corcra dorcha go dúghorm. Le táirgeadh bríomhar aigéid, d'fhéadfadh imreacht mhiotalach ghlas a bheith le feiceáil ar dhromchla na coilíneachta. Déanann prótacal ASM do phlátaí agar eoisin agus gorm meitiléine cur síos ar an meascán seo de roghnú agus difreáil agus cuireann sé grianghraif thagartha ar fáil don teagasc.
Tá mionsonra amháin tábhachtach sula léitear toradh ar bith: seiceáil cén fhoirmliú atá in úsáid. Tá lachtós agus siúcrós san fhoirmliú níos sine Holt Harris Teague, ach níl ach lachtós in EMB Levine. Féadfaidh cuma dhifriúil a bheith ar orgánach a choipeann siúcrós ach nach gcoipeann lachtós, amhail go leor aonráití Serratia marcescens, ar an dá leagan. Luaitear an difríocht seo idir na foirmlithe go sainráite i ndoiciméadacht an mhonaróra maidir le meáin EMB. Taifead an monaróir agus an foirmliú sa leabhar nótaí in éineacht leis an toradh.
De ghnáth, bíonn agar EMB ullmhaithe nach bhfuil ionaclaithe deargdhonn go corcra rua, agus uaireanta bíonn dealramh glas nó deascán mín ann. Ní fás é an dath cúlra sin. Cuir gach léamh i gcomparáid le pláta neamhionaclaithe nó leis an mbonnlíne dhoiciméadaithe, agus léigh an príomhphláta tar éis thart ar 18 go 24 uair an chloig de ghoradh aeróbach ag 35 go 37 C, mura sonraítear a mhalairt sa phrótacal teagaisc. Is féidir le goradh fada cuma an choipthe a athrú.
Conas breathnú ar an bpláta
Úsáid dhá chineál solais. Ar dtús, scrúdaigh an pláta faoi sholas frithchaite nó fiar agus claon é: tá imreacht sa loinnir mhiotalach agus is féidir léi teacht chun solais nó imeacht de réir uillinn an amhairc. Ansin scrúdaigh é le solas tarchurtha chun dath na gcoilíneachtaí agus a lárionaid dhorcha a mheas. Oibrigh le coilíneachtaí atá scartha go maith óna chéile, mar athraíonn plódú agus coilíneachtaí comharsanacha carnadh áitiúil aigéid agus féadann siad an dath a mhaolú nó a threisiú. Léiríonn tacar íomhánna ASM é seo go díreach: d'fhéadfadh E. coli i gcultúr measctha an loinnir a mbeifí ag súil léi a chailleadh toisc go n-athraíonn na horgánaigh máguaird an timpeallacht aigéadach.
Cuir samplaí rialaithe san áireamh nuair a cheadaíonn an cleachtadh é. Is tacar coitianta teagaisc é E. coli ATCC 25922 don fheinitíopa dúghorm agus loinnir mhiotalach, neamhchoiptheoir amhail Salmonella Typhimurium ATCC 14028 nó Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 don fheinitíopa gan dath, agus orgánach Gram-deimhneach amhail Enterococcus faecalis nó Staphylococcus aureus mar shampla rialaithe coiscthe, mar atá liostaithe i dtáblaí caighdeánacha rialaithe cáilíochta do mheáin EMB. Mura bhfuil loinnir ar an sampla rialaithe deimhneach, bí in amhras faoin ngoradh, faoin bplódú nó faoin bhfoirmliú sula mbíonn amhras ort faoin sampla anaithnid.
Atlas léiritheach plátaí
Is léaráidí ginte iad na plátaí thíos, ní grianghraif de fhíorchultúir. Léiríonn siad an patrún atá le lorg, ní scáth cruinn aon tréithchineáil ar leith. Cuir i gcomparáid iad le grianghraif thagartha ASM agus le fíorphlátaí ón tsaotharlann teagaisc.
Pláta 1: Escherichia coli ar agar EMB, coiptheoir bríomhar lachtóis
De ghnáth, bíonn E. coli ar agar EMB corcra dorcha go dúghorm, agus is minic a bhíonn lárionad dorcha agus loinnir mhiotalach ghlas ann de bharr táirgeadh bríomhar aigéid. Is í an loinnir an ghné cháiliúil a lorgaíonn mic léinn, ach caith léi mar fhianaise thacúil seachas mar shainmhíniú. Athraíonn déine na loinnire de réir an tréithchineáil, am an ghoradh, dlús na gcoilíneachtaí agus uillinn an amhairc. Ní chuireann easpa loinnire E. coli as an áireamh, agus d'fhéadfadh coilíneacht dhorcha gan loinnir roinnt coiptheoirí eile a chur in iúl. Roghnaigh coilíneacht atá scartha go maith ó na cinn eile d'aon obair leantach, seachas léamh a dhéanamh ó limistéar plódaithe.
Pláta 2: Klebsiella pneumoniae ar agar EMB, coiptheoir múcasach
De ghnáth, cruthaíonn Klebsiella pneumoniae ar agar EMB coilíneachtaí móra, lonracha, múcasacha i scáthanna bándeargchorcra go donnchorcra, agus is minic a bhíonn lárionaid dhorcha iontu ach de ghnáth ní bhíonn loinnir láidir mhiotalach orthu. Bíonn moirfeolaíocht chomhchosúil ar choiptheoirí gaolmhara amhail Enterobacter. Tá an uigeacht mhúcasach agus méid na coilíneachta mar chuid den léamh: ní bhíonn an tábhacht chéanna le coilíneacht bheag chothrom bhándearg agus a bhíonn le ceann mór cruinneachánach múcasach. Mar atá i gcás E. coli, tugann an pláta feinitíopa coipthe le fios, agus teastaíonn an dearbhú bithcheimiceach a ndéantar cur síos air thíos chun speiceas a ainmniú.
Pláta 3: Salmonella ar agar EMB agus neamhchoiptheoirí eile, coilíneachtaí gan dath
De ghnáth, fásann Salmonella ar agar EMB agus orgánaigh ghaolmhara nach gcoipeann lachtós, lena n-áirítear Shigella agus go leor aonráití Pseudomonas, mar choilíneachtaí gan dath, tréshoilseacha nó ómra éadrom. Tugann roinnt foirmlithe agus dálaí dealramh fann bándearg dóibh, mar sin ní coiptheoir go huathoibríoch í coilíneacht éadrom bhándearg. Ní dhéanann EMB idirdhealú idir Salmonella agus Shigella ná idir iad agus neamhchoiptheoirí eile; déantar an t-idirdhealú sin le tástálacha níos déanaí. Tabhair faoi deara freisin go bhfuil tréithchineálacha Salmonella atá deimhneach do lachtós agus a bhfuil coilíneachtaí miotalacha cosúil le E. coli acu doiciméadaithe, rud atá ina chúis eile nach féidir le pláta amháin an cheist a réiteach.
Pláta 4: Serratia marcescens agus gaiste an fhoirmlithe
Tá rannóg dá cuid féin tuillte ag Serratia marcescens toisc go mbíonn mic léinn ag súil le coilíneachtaí dearga go minic agus ansin go léann siad an pláta go mícheart. Ní choipeann formhór na n-aonráití cliniciúla lachtós, mar sin ar EMB Levine is gnách go mbíonn siad éadrom nó ar bheagán datha. Toisc go gcoipeann go leor aonráití siúcrós, d'fhéadfadh foirmliú ina bhfuil siúcrós imoibriú níos dorcha nó imoibriú níos mó a bhaineann le haigéad a thabhairt. Ná bí ag súil leis an lí dhearg chlasaiceach prodigiosin ag 35 go 37 C ach oiread; níl táirgeadh na lí iontaofa ag teocht an ghoradáin. Nuair a luaitear Serratia marcescens ar agar EMB sa phrótacal, seiceáil cén foirmliú a nglactar leis sa ráiteas. Tugann athbhreithniú ar mheitibileacht Serratia achoimre ar an bpatrún diúltach do lachtós agus athraitheach do shiúcrós atá taobh thiar den ghaiste seo.
Pláta 5: samplaí rialaithe agus orgánaigh choiscthe
Go ginearálta, cuirtear cosc ar orgánaigh Gram-deimhneacha amhail Staphylococcus, Enterococcus, Streptococcus agus Bacillus ar agar EMB, nó cuirtear a bhfás faoi chois go suntasach, cé nach mbíonn an cosc iomlán i gcás gach tréithchineáil. Cinntíonn painéal samplaí rialaithe léamh macánta: ba cheart go léireodh an sampla rialaithe E. coli fás maith le dath dúghorm agus loinnir, ba cheart go léireodh an sampla rialaithe neamhchoiptheach fás gan dath, agus ba cheart go léireodh an sampla rialaithe coiscthe beagán fáis nó gan aon fhás. Má fhásann an sampla rialaithe coiscthe go maith, theip ar an gcéim roghnaitheach agus tá gach léamh eile ón mbaisc sin amhrasach. Freagraíonn modhanna dathaithe ceist dhifriúil ó mheáin chultúir; maidir le dathú sleamhnán sa tsaotharlann, féach an t-atlas dathaithe le gorm meitiléine.
Comparáid laistigh de theorainneacha
| Breathnóireacht ar agar EMB | An bhrí is dóichí | An rud nach ndearbhaíonn sí |
|---|---|---|
| Coilíneacht dhúghorm le loinnir ghlas i solas fiar | Coipeadh bríomhar, E. coli ar cheann de na féidearthachtaí is dóichí | Céannacht an speicis; is féidir le coiptheoirí bríomhara eile loinnir a léiriú |
| Coilíneacht mhór bhándeargchorcra mhúcasach, gan loinnir | Coiptheoir le tréithe capsúlacha, Klebsiella ina fhéidearthacht | Klebsiella pneumoniae go sonrach; tá cuma chomhchosúil ar Enterobacter |
| Coilíneacht gan dath nó tréshoilseach | Orgánach nach gcoipeann lachtós, mar shampla Salmonella, Shigella, Pseudomonas | Cén neamhchoiptheoir atá ann; teastaíonn tástálacha eile chun Salmonella a idirdhealú ó Shigella |
| Coilíneacht éadrom nuair a bhíothas ag súil le dearg | B'fhéidir Serratia ar EMB nach bhfuil ann ach lachtós ag 37 C | Easpa Serratia; seiceáil an foirmliú agus an teocht |
| Gan fhás nó coilíneachtaí beaga bídeacha faoi chois | B'fhéidir cosc ar orgánaigh Gram-deimhneacha | Steirilíocht nó céannacht; éalaíonn roinnt tréithchineálacha ón gcosc |
Tugann trí abairt achoimre ar na cumaí míthreoracha. Ní hionann dorcha agus E. coli, mar forbraíonn Klebsiella, Enterobacter agus coiptheoirí eile lárionaid dhorcha gan loinnir. Ní hionann bándearg agus Klebsiella, mar bíonn cuma bhándearg nó labhandair ar choiptheoirí measartha nó malla agus ar roinnt orgánach a áirítear mar neamhchoiptheoirí. Ní hionann loinnir agus E. coli cinnte, mar is féidir le coiptheoirí bríomhara eile í a tháirgeadh. Léiríonn an prótacal teagaisc agus a léaráidí de chultúir mheasctha gach ceann de na hearráidí seo.
Teorainneacha an dearbhaithe
Tuairiscíonn agar EMB feinitíopa, ní speiceas. Is féidir le horgánaigh dhifriúla cuma choilíneachta amháin a roinnt, agus is féidir le horgánach amháin imeacht óna íomhá théacsleabhair de réir tréithchineáil, aoise, plódaithe, foirmlithe agus goradh. Sin an fáth a gcaitear le moirfeolaíocht EMB mar léiriú toimhdeach i sreafaí oibre teagaisc agus cliniciúla.
Is é seo sreabhadh oibre inchosanta do mhac léinn: déan cur síos ar an gcoilíneacht scartha (méid, dath, lárionad, loinnir faoi sholas fiar, tréithe múcasacha), taifead an foirmliú, am agus teocht an ghoradh, agus na samplaí rialaithe; ansin déan fochultúr de choilíneacht atá scartha go maith ó na cinn eile chun cultúr íon a fháil roimh aon tástáil dearbhaithe. I measc na ngnáthchéimeanna leantacha tá dathú Gram agus imoibrithe IMViC chun E. coli agus drólanna a shainaithint go toimhdeach, TSI nó KIA agus painéil bhithcheimiceacha a bhaineann go sonrach leis an orgánach i gcás orgánaigh eintreacha, agus sainaitheantas séireolaíoch, MALDI TOF, nó sainaitheantas bailíochtaithe eile nuair a éilíonn an tasc é. Chun cúlra a fháil ar áit EMB i measc na meán eintreach roghnaitheach agus difreálach, féach réamhráite ar mheáin chultúir eintreacha agus obair leantach ar dhathú Gram. Maidir leis an gceist ghaolmhar faoi cad is féidir agus nach féidir le dathú gorm sleamhnáin a chruthú, coinníonn an t-atlas dathaithe le gorm meitiléine an bhreathnóireacht agus an chonclúid ar leithligh sa mheon céanna.
Scríobh an bhreathnóireacht roimh an gconclúid. Tá "Coilíneachtaí dúghorma le loinnir ghlas a bhraitheann ar uillinn an amhairc ar EMB Levine ag 24 uair an chloig, ag teacht le coipeadh bríomhar lachtóis" inchosanta. Teastaíonn ó "E. coli, dearbhaithe" an chéim dearbhaithe nach féidir leis an bpláta amháin a sholáthar.