Tástálacha giosta le gorm meitiléine: cealla beo a chomhaireamh seachas riospráid a uainiú

Tá dhá fheadán ar an mbinse. Tá an dá cheann gorm. I gceann amháin, ciallaíonn cealla gorma faoin micreascóp go bhfuil an giosta marbh. Sa cheann eile, ciallaíonn feadán a athraíonn ó ghorm go héadathach go bhfuil an giosta beo agus ag riospráid. An ruaim chéanna, léamha contrártha. Má mheasctar an dá thástáil le chéile, cuirtear gach conclúid bunoscionn.

Is faoin idirdhealú sin atá an t-alt ar fad. Is ruaim ocsaídiúcháin-dí-ocsaídiúcháin é gorm meitiléine: bíonn sé gorm agus é ocsaídithe, agus ina leocóghorm meitiléine éadathach agus é dí-ocsaídithe. Baineann comhaireamh inmharthanachta leas as an gceimic sin i léargas gairid micreascópach. Baineann turgnamh riospráide leas aisti in imoibriú uainithe sa mheascán iomlán. Teastaíonn a phrótacal féin, a rialuithe féin agus a amhras criticiúil féin ó gach ceann acu.

An comhaireamh inmharthanachta: ruaimniú gairid, léamh pras

Is é prótacal na grúdlainne an leagan is caighdeánaithe. Ullmhaigh gorm meitiléine 0.01% w/v i gciotráit sóidiam 2%, measc é 1:1 leis an bhfionraí giosta, agus scrúdaigh an meascán tar éis eatramh gairid socraithe. Athraíonn na heatraimh fhoilsithe ó 1 go 2 nóiméad i lámhleabhar an Brewing Science Institute go thart ar 5 nóiméad i bprótacail taighde, agus éilíonn modh micribhitheolaíochta fíona OIV scrúdú laistigh de 10 nóiméad. Bíonn tiúchan na ruaime sa mheascán comhairimh gar do 0.005% sa deireadh. Líon seomra feabhsaithe Neubauer, agus ag formhéadú thart ar 400x aicmigh cealla dúghorma mar chealla neamh-inmharthana agus cealla gan ruaimniú mar chealla inmharthana. Áirítear cealla éadroma gorma mar chealla beo i modh OIV, rud a thugann leid cheana féin faoin bhfadhb suibiachtúlachta a phléitear thíos.

Ríomhtar tiúchan na gceall ó gheoiméadracht an tseomra. Nuair a chomhairtear an chearnóg lárnach iomlán 1 mm, is ionann cealla in aghaidh mL agus N iolraithe faoin bhfachtóir caolaithe iolraithe faoi 10^4, áit arb é N an comhaireamh sa limistéar sin, mar a leagtar amach i modhanna giosta ASBC. Tá inmharthanacht níos simplí: cealla gan ruaimniú roinnte ar líon iomlán na gceall, iolraithe faoi 100. Comhair thart ar 400 ceall chun inmharthanacht a mheas, de réir staidéar comparáide grúdlainne FEMS agus chleachtas OIV. Úsáid riail teorann amháin go comhsheasmhach, mar shampla cealla ar línte íochtaracha agus clé na greille a áireamh agus iad siúd ar na línte uachtaracha agus deasa a fhágáil amach.

Teastaíonn riail do na bachlóga sula dtosaíonn an comhaireamh. De réir gnás coitianta, áirítear bachlóg mar chill ar leith nuair a shroicheann sí thart ar leath mhéid na máthairchille, agus áirítear í leis an máthairchill má tá sí níos lú ná sin. Cibé riail a roghnaítear, cuir i bhfeidhm í ar gach cearnóg agus scríobh ar an mbileog oibre í ionas go leanfaidh an chéad duine eile í.

Bileog chomhairimh (priontáil í seo)

Is ábhar bunaidh don alt seo í an bhileog oibre seo. Cóipeáil isteach i leabhar nótaí í nó priontáil ceann amháin do gach sampla.

Inmharthanacht (%) = 100 x gan ruaimniú / (gan ruaimniú + dúghorm). Líon iomlán ceall in aghaidh mL = N x fachtóir caolaithe x 10^4, agus N ón limistéar sainithe den seomra. Taifead an t-eatramh ruaimnithe in aice leis an toradh, mar ní féidir luach inmharthanachta a atáirgeadh gan a uainiú.

Cén fáth a n-athraíonn luachanna inmharthanachta

Is é an t-uainiú an chéad trasnaíocht, agus oibríonn sé sa dá threo. Dí-ocsaídíonn cealla atá gníomhach ó thaobh meitibileachta de an ruaim, mar sin d'fhéadfadh léamh luath cealla beo a ghabháil sula mbíonn an dí-ocsaídiú críochnaithe acu agus iad a aicmiú go mícheart mar chealla marbha. Ach tá nochtadh fada tocsaineach ann féin agus cruthaíonn sé cealla gorma a bhfuil damáiste dáiríre déanta dóibh, rud a thugann ruaimniú bréagach báis. Dá bhrí sin, sonraíonn prótacal teagaisc saotharlainne gur cheart an scóráil a dhéanamh laistigh de 5 nóiméad, mar atá doiciméadaithe i bprótacal teagaisc giosta Wisconsin. Is é an cur síos stuama ná go mbraitheann scóráil le gorm meitiléine ar am, mar sin socraigh eatramh gairid amháin agus coinnigh mar an gcéanna é do gach sampla i sraith.

Bíonn an dara claonadh i samplaí a bhfuil inmharthanacht íseal acu. Tugann an modh caighdeánaithe rabhadh gur féidir le gorm meitiléine rómheastachán a dhéanamh ar fhíorinmharthanacht faoi bhun thart ar 80%, toisc nach gá go gcoinníonn cealla a dhí-ocsaídíonn an ruaim fós a gcumas atáirgthe. Déanann litríocht na grúdaireachta cur síos ar an neamhiontaofacht chéanna nuair a bhíonn inmharthanacht laghdaithe go mór. Caith le gorm meitiléine mar mheastachán tapa garbh, agus deimhnigh cinntí tábhachtacha a bhaineann le hinmharthanacht íseal, amhail cultúr a chur isteach arís i mbaisc, le comhairimh ar phlátaí nó le ruaim chomhlántach.

Tagann éifeachtaí na maitríse sa tríú háit. Déantar modh OIV gar do pH 4.6 agus tugann sé rabhadh go gcuireann samplaí íseal-pH a bhfuil maolánú láidir iontu cosc ar iompar ceart na ruaime. Molann sé freisin gan an tástáil a úsáid os cionn 100 g/L siúcra, nuair a bhíonn cuma éadrom ghorm mhíthreorach ar na cealla. I gcomparáid thurgnamhach ar pH an ruaimnithe, fuarthas athrú suntasach ar íogaireacht thar an raon a tástáladh, rud atá ag teacht le staidéar ar mhodh gorm meitiléine atá spleách ar pH. Is gaiste ar leith é smionagar: déanann cáithníní ruaimnithe i meascáin bhrasctha shalacha aithris ar chealla marbha agus méadaíonn siad an éagsúlacht idir oibreoirí.

Tá an éagsúlacht sin cainníochtaithe, ní bunaithe ar scéalta amháin. I dtriail grúdlainne sé mhí a tuairiscíodh i gcomparáid giosta FEMS, bhí meán diall caighdeánach 6.1% ag tomhais dhúblacha gorm meitiléine i gcomparáid le 0.2% do shreabhchíteiméadracht le hocsonól, agus bhí difríocht suas le 13 phointe céatadáin idir beirt oibreoirí ar an sampla céanna. Fuair comparáid chainníochtúil ar mhodhanna inmharthanachta in 2023 go raibh micreascópacht fhluaraiseachta agus sreabhchíteiméadracht i bhfad níos beaichte, agus léirigh sí go mbraitheann feidhmíocht ar an speiceas agus ar an maitrís. Is é an cur síos clasaiceach ar an modh le Painting agus Kirsop (PMID 24430080) an pointe tagartha fós, agus cuireann athbhreithniú níos leithne ar thástálacha inmharthanachta agus beogachta giosta (PMID 25154541) gorm meitiléine i measc tástálacha comhlántacha seachas tástálacha cinntitheacha. Ní feabhas uathoibríoch é gorm trypan anseo: léiríonn sé caillteanas sláine an scannáin, ach léiríonn gorm meitiléine iontógáil agus gníomhaíocht dí-ocsaídiúcháin araon, mar sin is féidir cealla faoi strus a aicmiú ar bhealaí éagsúla leis an dá ruaim.

An turgnamh riospráide: uainigh imeacht an datha ghoirm

Ní úsáidtear micreascóp ar chor ar bith sa dara tástáil. Cuirtear giosta, glúcós agus gorm meitiléine caolaithe i bhfeadán dúnta, agus tomhaiseann an clog an fad a thógann sé ar an dath gorm imeacht. De réir mar a mheitibilíonn na cealla, gineann siad coibhéisí dí-ocsaídiúcháin a athraíonn an ruaim ghorm go dtí a foirm éadathach, agus ocsaídíonn ocsaigin thuaslagtha ar ais í. Nuair a íslíonn na cealla leibhéal na hocsaigine, bíonn an dí-ocsaídiú glan i réim agus cailltear dath an fheadáin. Léiríonn an críochphointe, dá bhrí sin, an chothromaíocht idir riospráid, tiúchan na ruaime agus infhaighteacht ocsaigine. Ba cheart é a thuairisciú mar am dí-ocsaídiúcháin nó dídhathaithe gorm meitiléine, ní mar ráta díreach tomhaltais ocsaigine móilíní.

Úsáid ruaim i bhfad níos caolaithe ná mar a úsáidtear in obair inmharthanachta ionas go mbeidh an t-am tomhaiste i raon áisiúil. Caighdeánaíonn lámhleabhar AQA don obair phraiticiúil riachtanach ag A level é seo go maith: 1 g glúcóis in aghaidh 100 mL uisce téite go thart ar 30 C, 5 g giosta triomaithe curtha leis díreach roimh úsáid, agus tuaslagán oibre ruaime gar do 0.001% ullmhaithe trí 0.1 mL de thuaslagán stoic 1% a chaolú go 100 mL. Measc 2 mL den fhionraí giosta agus glúcóis le 2 mL den tuaslagán oibre ruaime, lig dó teocht na tástála a bhaint amach, croith uair amháin é ar feadh 10 soicind, cuir tús leis an amadóir, agus ná croith arís é. Tugann croitheadh ocsaigin isteach arís agus cuireann sé an dath gorm ar ais sa fheadán, arb é an déantán nós imeachta is mó é. Tugann AQA faoi deara gur cheart don ullmhóid a dath a chailleadh de ghnáth laistigh de thart ar 5 nóiméad ag 35 C, le meánluachanna trialach 275 s ag 20 C, 128 s ag 35 C, agus 145 s ag 45 C. Is samplaí iad sin ó leagan amach amháin, ní tagarmharcanna uilíocha. Tacaíonn staidéir shonracha dí-ocsaídiúcháin leis an nasc cainníochtúil idir an ráta dí-ocsaídiúcháin agus giosta atá gníomhach ó thaobh meitibileachta de faoi choinníollacha rialaithe, lena n-áirítear obair atá innéacsaithe mar PMID 25773544 agus an staidéar meicníochta in Yeast (2014).

Léiriú thar am (ábhar bunaidh)

Is léiriú bunaidh é an tábla thíos a rinneadh don alt seo agus úsáid á baint as an leagan amach de chineál AQA a bhfuil cur síos air thuas: 2 mL de mheascán giosta agus glúcóis móide 2 mL de thuaslagán oibre ruaime gar do 0.001%, croitheadh amháin ar feadh 10 soicind, agus ansin goradh gan cur isteach air. Is léamha samplacha iad na hiontrálacha san fhormáid ba cheart do ghrúpa mac léinn a thaifeadadh, agus sainmhínítear an t-innéacs ráta mar 1 roinnte ar an am dídhathaithe i soicindí. Déan an turgnamh leis na feadáin chéanna agus cuir luachanna tomhaiste in áit na n-iontrálacha seo.

Breac an t-innéacs ráta i gcoinne na teochta do fheadáin A, B agus C. Ardaíonn an cuar agus ansin éiríonn sé cothrom nó titeann sé, arb é an patrún a mbeifí ag súil leis ó ghníomhaíocht einsímí é, ní líne dhíreach. Ní pointí sonraí ar an gcuar sin iad feadáin D, E agus F. Is iad na rialuithe iad a fhágann gur féidir an cuar a léirmhíniú.

Rialuithe a thugann brí do gach tástáil

Teastaíonn trí shampla tionlacain ó gach rith riospráide. Ba cheart do ghiosta bruite nó maraithe móide glúcós móide ruaim fanacht gorm, rud a chruthaíonn go mbraitheann dí-ocsaídiú tapa ar mheitibileacht bheo. Is rialú foshraithe é giosta beo móide ruaim gan ghlúcós breise, ach bí ag súil le dídhathú mall mar sin féin ós rud é go n-úsáideann giosta a chúlchistí inmheánacha. Is é glúcós móide ruaim gan ghiosta an sampla bán ceimiceach, atá riachtanach mar is féidir le glúcós alcaileach gorm meitiléine a dhí-ocsaídiú gan aon chealla a bheith i láthair.

Teastaíonn cineál eile rialaithe ón gcomhaireamh inmharthanachta: comhsheasmhacht nós imeachta. An tuaslagán stoic ruaime céanna, an cóimheas meascáin céanna, an t-eatramh ruaimnithe céanna, an limistéar céanna den seomra, na rialacha céanna do bhachlóga agus teorainneacha, agus comhaireamh dall nuair is féidir. Nuair a bhíonn difríocht deich bpointe idir beirt oibreoirí, is gnách go nochtann an bhileog oibre an chúis: uainiú difriúil, tairseach dhifriúil don dath gorm, nó rialacha difriúla do bhachlóga. Tá na teicnící chun cealla ruaimnithe a ullmhú agus a fheiceáil gaolmhar le modhanna simplí ruaimnithe baictéar, agus tá forbhreathnú níos leithne ar an méid a mharcálann an ruaim i samplaí éagsúla san atlas ruaimnithe micreascópachta. Maidir leis an bhfisic atá taobh thiar de léamh cainníochtúil ar aon déine ghoirm, míníonn an tagairt ionsúcháin a bhfuil na coinníollacha sonraithe inti cén fáth nach mór do gach comhéifeacht a bheith ag gabháil lena coinníollacha tuaslagóra, pH agus tiúchana.

Roghnaigh an tástáil de réir na ceiste. Is ceist chomhairimh í cé mhéad ceall atá beo anois, agus freagraítear í ag an micreascóp le bileog oibre. Is ceist chinéiteach í cé chomh gníomhach agus atá an cultúr seo ag riospráid, agus freagraítear í le stopuaireadóir agus feadáin rialaithe. Freastalaíonn gorm meitiléine ar an dá cheann, ach ní sa fheadán céanna ag an am céanna riamh.