Gorm meitiléine i dtástálacha saotharlainne G6PD: cad atá á dhéanamh ag an ruaim i ndáiríre

Tá mac léinn ag breathnú ar dhá fheadán tar éis goradh. Tá an dath a rabhthas ag súil leis ar cheann acu. Níl sé ar an gceann eile. Baineann an mac léinn de thátal as go bhfuil easnamh dehidrigionáise glúcóis-6-fosfáite ar an dara hothar. D'fhéadfadh an tátal sin a bheith ceart, ach fágtar ar lár sa réasúnaíocht an coincheap a fhágann go n-oibríonn an tástáil. Ní thomhaiseann aon rud sa fheadán an einsím go díreach. Tomhaistear sa fheadán an méid a tháirgeann an einsím, agus úsáidtear gorm meitiléine mar idirghabhálaí.

Nuair a thuigtear an tomhas indíreach sin, ní bhíonn cuma threallach a thuilleadh ar an nós imeachta, ar na rialuithe ná ar an liosta fada de thorthaí bréagacha.

An freagra gairid

Is táscaire ocsaídiúcháin-dí-ocsaídiúcháin é gorm meitiléine i dtástáil G6PD. Gineann an einsím G6PD NADPH, agus déanann córais atá spleách ar NADPH gorm meitiléine, atá gorm, a dhí-ocsaídiú go dtí a fhoirm leuco gan dath (nó úsáideann siad é chun leictreoin a iompar). Bíonn dí-ocsaídiú éifeachtúil mar thoradh ar ghnáthghníomhaíocht einsíme. Bíonn dí-ocsaídiú mall nó neamhiomlán mar thoradh ar ghníomhaíocht easnamhach. Sin é an comhartha ar fad.

Úsáidtear an ruaim chéanna in dhá mhodh stairiúla, ach tá críochphointí éagsúla acu. Coinnigh ar leithligh iad agus imeoidh an chuid is mó den mhearbhall.

Dhá thástáil, ruaim amháin, críochphointí éagsúla

Is í an chéad cheann an tástáil dhíreach ar dhí-ocsaídiú ghoirm meitiléine, ar chuir Sass agus a chomhghleacaithe síos uirthi agus a ndearna Gibbs measúnú uirthi níos déanaí. Anseo, is í an ruaim féin an críochphointe: déantar gorm meitiléine ocsaídithe, atá gorm, a dhí-ocsaídiú i dtreo leicimeitiléine gorm gan dath, agus léiríonn ráta an athraithe sin an cumas NADPH a ghiniúint. Tá an bunpháipéar scagthástála innéacsaithe ar PubMed faoi Sass et al. (1966).

Is í an dara ceann tástáil Brewer ar dhí-ocsaídiú meiteamhaemaglóibine. Déanann nítrít sóidiam haemaglóibin a ocsaídiú go meiteamhaemaglóibin dhonn ar dtús. Ansin feidhmíonn gorm meitiléine mar idirghabhálaí aistrithe leictreon: tugann gorm meitiléine dí-ocsaídithe coibhéisí dí-ocsaídiúcháin don mheiteamhaemaglóibin, á tiontú ar ais go haemaglóibin dhearg. Mar sin, is é donn i gcomparáid le dearg an críochphointe infheicthe, seachas gorm i gcomparáid le gan dath. Foilsíodh an modh bunaidh i bhFeasachán na hEagraíochta Domhanda Sláinte (Brewer et al., 1960).

Ó thaobh na ceimice de, níl sé beacht measúnacht Brewer a thabhairt ar thástáil dhídhathaithe ruaime. Téann an ruaim trí thimthriall; athraíonn an haemaglóibin dath. Rianaíonn an léaráid thíos an dá chonair.

An t-imoibriú bunúsach

Catalaíonn G6PD an chéad chéim ocsaídiúcháin den chonair fosfáite peantóis:

Glucose-6-phosphate + NADP+ becomes 6-phosphogluconolactone + NADPH + H+

Braitheann deargchealla aibí go mór ar an gconair seo chun NADPH a fháil, mar a pléadh san athbhreithniú in Blood le Luzzatto agus a chomhghleacaithe (2020). Coinníonn NADPH glútaithión ina fhoirm dhí-ocsaídithe agus cosnaíonn sé an chill ar dhamáiste ocsaídiúcháin. Téann gorm meitiléine isteach sa chóras seo mar ghlacadóir leictreon. Má bhíonn dóthain G6PD ann, bíonn dóthain NADPH ann, rud a fhágann go mbíonn dí-ocsaídiú éifeachtúil ann. Briseann leibhéal íseal G6PD an slabhra ag an gcéad nasc.

Smaoinigh ar an ruaim mar thomhsaire breosla, ní mar an t-inneall. Léiríonn sí an soláthar NADPH. Féadfaidh aon rud eile a athraíonn an soláthar sin, nó an léamh, an tsnáthaid a bhogadh gan aon athrú sa ghéin.

Conas a dhéantar an nós imeachta de chineál Brewer

Tá éagsúlacht tagtha ar oidis imoibrí thar na blianta, mar sin níor cheart cur síos teagaisc a mheascadh le prótacal cliniciúil. Leanann gach saotharlann a nós imeachta caighdeánach oibriúcháin bailíochtaithe féin. Agus an rabhadh sin san áireamh, oibríonn an socrú clasaiceach feadán mar seo a leanas, i bhfoirm a ndearnadh cur síos uirthi le trí fheadán agus goradh 3 huaire an chloig sa chur i bhfeidhm foilsithe seo:

1. Feadán an othair: lánfhuil móide glúcós, nítrít sóidiam agus gorm meitiléine. Cruthaíonn an nítrít meiteamhaemaglóibin, cothaíonn an glúcós meitibileacht na ndeargcheall, agus soláthraíonn an ruaim an córas iompair atá spleách ar NADPH.
2. Rialú ocsaídithe: fuil móide nítrít agus glúcós, ach gan gorm meitiléine. Léiríonn sé críochphointe donn na meiteamhaemaglóibine, an patrún easnamhach.
3. Rialú haemaglóibine: fuil móide uisce. Léiríonn sé críochphointe dearg na haemaglóibine, an gnáthphatrún.
4. Gor na feadáin uile ag teocht gar do 37 C, ar feadh 3 huaire an chloig de ghnáth, agus iad á meascadh go réidh.
5. Caolaigh sliocht beag tomhaiste ó gach feadán in uisce driogtha chun na cealla a lís agus chun gur féidir na dathanna a chur i gcomparáid go soiléir.
6. Cuir feadán an othair i gcomparáid leis an dá rialú. Léiríonn athrú ar ais i dtreo dearg cumas suntasach dí-ocsaídiúcháin. Tugann fanacht i dtreo donn le fios go bhfuil easnamh mór ann.

Baineadh úsáid i bhfoirmliú stairiúil amháin as thart ar 1 mL fola le himoibrithe ag tiúchana gar do 180 mM nítrít sóidiam, 280 mM deastrós agus 0.4 mM gorm meitiléine. Glac leis na huimhreacha sin mar shampla ón litríocht, ní mar shonraíocht uilíoch.

An toradh a léamh

Is fearr a dhéanann scagthástáil cháilíochtúil idirdhealú timpeall ar 30 go 40 faoin gcéad den ghnáthghníomhaíocht, mar a phléitear san athbhreithniú seo in Malaria Journal ar bhearnaí i mbrath G6PD. Dá bhrí sin, ciallaíonn gnáththoradh scagthástála nár bhraith an mheasúnacht easnamh trom. Ní dheimhníonn sé go bhfuil an ghníomhaíocht go hiomlán gnáth.

Cén fáth a mbíonn scagthástáil míthreorach

Is é reiticiulóicíotóis tar éis haemalú an chúis chlasaiceach le toradh bréagach gnáth. Bíonn níos mó G6PD i ndeargchealla óga agus i reiticiulóicítí ná mar a bhíonn i gcealla sean. Le linn eipeasóid ghéar haemalaithe, d'fhéadfadh na cealla is sine agus is easnamhaí a bheith scriosta cheana féin, rud a fhágann daonra óg ceall a léiríonn gnáthghníomhaíocht nuair a dhéantar tástáil air. Cuireann an bhitheolaíocht chéanna measúnachtaí cainníochtúla amú, ní scagthástálacha ruaime amháin.

Ceileann fuilaistriú le déanaí easnamh toisc go gcuireann deargchealla an deontóra a n-einsím féin leis an eiseamal. Liostaíonn Mayo Clinic Laboratories fuilaistriú i measc na gcúiseanna le torthaí einsíme neamhiontaofa, in éineacht le reiticiulóicíotóis agus cur isteach ó leoicicítí.

Is iad baineannaigh heitrisigeacha an cás is deacra. Cruthaíonn díghníomhachtú randamach an X-chrómasóim meascán de dheargchealla gnáth agus easnamhacha, agus d'fhéadfadh an ghníomhaíocht fhoriomlán a bheith áit ar bith idir an-easnamhach agus gnáth de réir dealraimh. Ní bhraitheann scagthástálacha cáilíochtúla feinitíopaí idirmheánacha go minic. Pléitear an teorainn seo go mion i ndoiciméadacht WHO ar thástáil G6PD.

Cuireann aois an eiseamail, teocht stórála, suibiachtúlacht an chríochphointe amhairc, haematacrit agus cáilíocht na n-imoibrithe torann anailíseach leis na héifeachtaí bitheolaíocha seo.

Ní diagnóis í scagthástáil

Teastaíonn measúnacht chainníochtúil einsíme G6PD má thugann scagthástáil toradh easnamhach, idirmheánach nó toradh nach dtagann leis an léiriú cliniciúil. Measann WHO gurb í speictreafótaiméadracht chainníochtúil faoi rialú teochta an cur chuige tagartha. Sa mheasúnacht sin, cuirtear glúcós-6-fosfáit agus NADP+ le haemalásáit deargcheall, agus rianaítear an NADPH a fhoirmítear trí mhéadú san ionsúiteacht ag 340 nm. Tá ráta an athraithe i gcomhréir le gníomhaíocht na heinsíme, agus de ghnáth déantar é a normalú de réir haemaglóibine mar aonaid in aghaidh an ghraim. Tá achoimre ar chleachtas reatha na saotharlann cliniciúil san iontráil i gcatalóg tástálacha Mayo maidir le gníomhaíocht G6PD.

Úsáidtear raon tagartha bailíochtaithe na saotharlainne chun na torthaí a léirmhíniú. Is minic a chuirtear an raon sin i gcomparáid le gnáthghníomhaíocht sa daonra, agus is gnách easnamh a phlé gar don tairseach 30 faoin gcéad agus gníomhaíocht idirmheánach os a cionn. Leagtar an creat diagnóiseach sin amach i bpróifílí sprice WHO do tháirgí tástála G6PD (2022). Má fhágann haemalú nó fuilaistriú le déanaí go bhfuil feinitíopáil neamhiontaofa, déan an tástáil arís tar éis do dhaonra na ndeargcheall teacht ar ais i gcothromaíocht. Féadfaidh tástáil mhóilíneach faisnéis bhreise a sholáthar gan teacht in ionad thomhas na heinsíme.

Teorainn is fiú a choinneáil

Is imoibrí saotharlainne ex vivo é gorm meitiléine sna measúnachtaí seo. Baineann an fíric sin le plé eile seachas sábháilteacht ghoirm meitiléine a thabhairt d'othar, a chlúdaítear sa treoir maidir le fritásca ghoirm meitiléine. Tá nasc bithcheimiceach eatarthu, ós rud é go mbraitheann an druga freisin ar dhí-ocsaídiú atá spleách ar NADPH, ach ní hionann ruaim i bpromhadán agus dáileog i sruth na fola. Chun comhthéacs a fháil faoin gcaoi a bhfeidhmíonn an ruaim mar ábhar dathaithe i suíomh eile, féach prionsabail dathaithe le gorm meitiléine, agus maidir leis an teaghlach ceimice lena mbaineann sé, ruaimeanna ocsaídiúcháin-dí-ocsaídiúcháin sa tsaotharlann.

Fiafraíonn scagthástáil an bhfuil cuma shlán ar an gcumas dí-ocsaídiúcháin. Fiafraíonn tástáil dheimhniúcháin cé mhéad einsím atá ann i ndáiríre. Freastalaíonn an ruaim go maith ar an gcéad cheist, ar choinníoll nach n-iarrann aon duine uirthi an dara ceist a fhreagairt.