Grein
At lesa útsjóndina á E. coli og øðrum koloniium á EMB-agar
Ein lesandi strikar eina ókenda mikroveru út á eosin-metylenblátt-agar, inkuberar hana um náttina og kemur aftur til eina skál við myrkum koloniium við grønum glansi. Í royndarbókini stendur „E. coli, staðfest.“ Hetta sigur meira, enn skálin kann prógva. Skálin vísir eina vakstrar- og gerjunarfenotypu undir ávísum umstøðum. At staðfesta slagið er ein onnur niðurstøða, sum krevur onnur prógv.
Henda vegleiðingin viðger úrslit á EMB-agar sum eina tulkingaruppgávu. Hon greiðir frá grundhugsanini, fer ígjøgnum eitt myndaligt skálatlas við eftirlitsroyndum og lýsir tey føri, har lærubókamyndin kann villleiða.
Hugsanin aftan fyri skálina
EMB-agar er bæði selektivt og differentierandi. Litevnini eosin Y og metylenblátt tálma nógvum grampositivum verum, so ætið fremur gramnegativan vøkstur. Somu litevni virka sum indikatorar: tá ið ein vera gerjar tøka sukrið og framleiðir nóg mikið av sýru á staðnum, tekur koloniið nógv litevni upp og verður myrkt violett til blásvart. Við kraftigari sýruframleiðslu kann yvirflatan á koloniinum fáa ein metalgrønan, litspælandi glans. ASM-mannagongdin fyri skálir við eosin-metylenblátt-agar lýsir hesa samansetingina av selektión og differentiering og hevur tilvísingarmyndir til undirvísing.
Ein smálutur hevur týdning, áðrenn nakað úrslit verður lisið: kanna, hvør samanseting verður brúkt. Eldra Holt Harris Teague-samansetingin inniheldur bæði laktosu og sukrosu, meðan Levine EMB bert inniheldur laktosu. Ein vera, sum gerjar sukrosu, men ikki laktosu, til dømis nógvir isolatar av Serratia marcescens, kann síggja ymisk út á teimum báðum útgávunum. Skjalfestingin frá framleiðaranum um EMB-æti nevnir týðiliga henda munin í samanseting. Skriva framleiðara og samanseting í royndarbókina saman við úrslitinum.
Tilgjørt EMB-agar, sum ikki er sáað, er vanliga reyðbrúnt til reyðviolett, viðhvørt við einum grønligum dámi ella fínum botnfalli. Hesin bakgrundsliturin er ikki vøkstur. Samanber hvørja avlesing við eina ósáaða skál ella tað skjalfesta útgangsstøðið, og les fyrstu skálina eftir umleið 18 til 24 tímar av aerobari inkubatión við 35 til 37 C, um undirvísingarmannagongdin ikki ásetur annað. Longri inkubatión kann broyta útsjóndina, sum gerjunin gevur.
Soleiðis hyggur tú at skálini
Brúka tvey sløg av ljósi. Kanna fyrst skálina í endurspeglaðum ella skáum ljósi og halla henni: metalglansurin hevur litspæl og kann koma fram ella hvørva eftir sjónarvinklinum. Kanna hana síðan við gjøgnumfallandi ljósi fyri at meta um litin á koloniunum og myrkar miðdeplar. Arbeið við væl skildum koloniium, tí tøttur vøkstur og grannakoloniir broyta sýruuppsavningina á staðnum og kunnu minka um ella styrkja litin. Myndasavnið hjá ASM vísir hetta beinleiðis: E. coli í blandaðari dyrking kann missa væntaða glansin, tí verurnar rundanum broyta sýruumhvørvið.
Tak eftirlitsroyndir við, tá ið venjingin loyvir tí. Eitt vanligt sett til undirvísing er E. coli ATCC 25922 til fenotypuna við blásvørtum liti og metalglansi, ein ikki-gerjandi vera sum Salmonella Typhimurium ATCC 14028 ella Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 til litleysu fenotypuna og ein grampositiv vera sum Enterococcus faecalis ella Staphylococcus aureus til eftirlit við tálming, sum nevnt í vanligum talvum fyri góðskueftirlit av EMB-æti. Um positivu eftirlitsroyndini vantar glans, skalt tú fyrst hava illgruna um inkubatión, tættan vøkstur ella samanseting, áðrenn tú hevur illgruna um ókendu veruna.
Myndaligt skálatlas
Skálirnar niðanfyri eru gjørdar myndlýsingar, ikki ljósmyndir av veruligum dyrkingum. Tær vísa mynstrið, tú skalt leita eftir, ikki nágreiniliga litblæið hjá einum einstøkum stovni. Samanber tær við tilvísingarmyndirnar hjá ASM og við veruligar skálir á undirvísingarstarvsstovuni.
Skál 1: Escherichia coli á EMB-agar, kraftig laktosugerjun
E. coli á EMB-agar er vanliga myrkt violett til blásvart, ofta við myrkum miðdepli og metalgrønum glansi frá kraftigari sýruframleiðslu. Glansurin er tað vælkenda eyðkennið, sum lesandi leita eftir, men met hann sum stuðlandi prógv heldur enn eina allýsing. Styrkin á glansinum broytist eftir stovni, inkubatiónstíð, kolonitættleika og sjónarvinkli. Manglandi glansur útilokar ikki E. coli, og eitt myrkt kolonii uttan glans kann benda á fleiri aðrar gerjandi verur. Vel eitt væl skilt kolonii til framhaldandi arbeiði heldur enn at lesa av í einum øki við tøttum vøkstri.
Skál 2: Klebsiella pneumoniae á EMB-agar, slímut gerjandi vera
Klebsiella pneumoniae á EMB-agar myndar vanliga stór, glitrandi, slímut koloniir við ljósareyðviolettum til brúnviolettum litblæi, ofta við myrkum miðdeplum, men vanliga uttan sterkan metalglans. Líknandi bygnaður sæst hjá skyldum gerjandi verum sum Enterobacter. Slímut áferð og kolonistødd eru partur av avlesingini: eitt ljósareytt kolonii, sum er lítið og flatt, hevur annan týdning enn eitt stórt, kúplað og slímut kolonii. Eins og við E. coli bendir skálin á eina gerjunarfenotypu, og at seta navn á slagið krevur lívevnafrøðiliga staðfesting, sum lýst niðanfyri.
Skál 3: Salmonella á EMB-agar og aðrar ikki-gerjandi verur, litleys koloniir
Salmonella á EMB-agar og skyldar verur, sum ikki gerja laktosu, harímillum Shigella og nógvir Pseudomonas-isolatar, vaksa vanliga sum litleys til gjøgnumskygn ella bleikt ravlitt koloniir. Ávísar samansetingar og umstøður geva ein veikan ljósareyðan dám, so eitt bleikt ljósareytt kolonii er ikki sjálvvirkandi ein gerjandi vera. EMB skilur ikki Salmonella frá Shigella ella øðrum ikki-gerjandi verum; tann munurin verður staðfestur við seinni royndum. Legg eisini til merkis, at laktosupositivir Salmonella-stovnar við metalglansandi koloniium, sum líkjast E. coli, eru skjalfestir. Hetta er enn ein orsøk til, at ein einstøk skál ikki kann avgera málið.
Skál 4: Serratia marcescens og fellan í samansetingini
Serratia marcescens fær sín egna part, tí lesandi ofta vænta reyð koloniir og tí mistulka skálina. Flestu klinisku isolatar gerja ikki laktosu, so á Levine EMB eru teir vanliga bleikir til veikt litaðir. Tí nógvir isolatar gerja sukrosu, kann ein samanseting við sukrosu geva eitt myrkari ella meira sýrutengt svar. Vænta heldur ikki tað klassiska reyða prodigiosin-litevnið við 35 til 37 C; litevnisframleiðslan er óálítandi við inkubatortemperatur. Tá ið mannagongdin nevnir Serratia marcescens á EMB-agar, skalt tú kanna, hvør samanseting liggur til grund fyri útsøgnini. Ein yvirlitsgrein um evnaskiftið hjá Serratia tekur samanum mynstrið við manglandi laktosugerjun og skiftandi sukrosugerjun, sum liggur aftan fyri hesa felluna.
Skál 5: eftirlitsroyndir og tálmaðar verur
Grampositivar verur sum Staphylococcus, Enterococcus, Streptococcus og Bacillus verða vanliga tálmaðar ella hava munandi niðursettan vøkstur á EMB-agar, hóast tálmingin ikki er fullkomin fyri allar stovnar. Eitt sett av eftirlitsroyndum ger avlesingina álítandi: E. coli-eftirlitsroyndin eigur at vísa góðan vøkstur við blásvørtum liti og glansi, eftirlitsroyndin við ikki-gerjandi veru eigur at vísa litleysan vøkstur, og tálmingareftirlitið eigur at vísa lítlan ella ongan vøkstur. Um tálmingareftirlitið veksur væl, hevur selektiónin ikki virkað, og allar aðrar avlesingar úr tí framleiðslulotinum eru ivasamar. Litingarhættir svara einum øðrum spurningi enn dyrkingaræti; um liting av objektgløsum á starvsstovuni, sí atlas um metylenblátt-liting.
Samanbering við greiðum avmarkingum
| Eygleiðing á EMB-agar | Sannlíkur týdningur | Hvat hon ikki staðfestir |
|---|---|---|
| Myrkt blásvart kolonii við grønum glansi í skáum ljósi | Kraftig gerjun, E. coli eitt av mest sannlíku sløgunum | Slagsamleika; aðrar kraftigt gerjandi verur kunnu hava glans |
| Stórt slímut ljósareyðviolett kolonii, eingin glansur | Gerjandi vera við kapsuleyðkennum, møguliga Klebsiella | Klebsiella pneumoniae serstakt; Enterobacter sær líknandi út |
| Litleyst ella gjøgnumskygt kolonii | Vera, sum ikki gerjar laktosu, til dømis Salmonella, Shigella, Pseudomonas | Hvør ikki-gerjandi vera tað er; at skilja Salmonella frá Shigella krevur aðrar royndir |
| Bleikt kolonii, har reytt var væntað | Møguliga Serratia á EMB við bert laktosu við 37 C | At Serratia ikki er til staðar; kanna samanseting og temperatur |
| Eingin vøkstur ella smá, tálmað koloniir | Møguliga tálming av grampositivum verum | Sterilitet ella samleika; summir stovnar sleppa undan tálming |
Tríggjar setningar taka samanum villleiðandi útsjóndirnar. Myrkt merkir ikki E. coli, tí Klebsiella, Enterobacter og aðrar gerjandi verur fáa myrkar miðdeplar uttan glans. Ljósareytt merkir ikki Klebsiella, tí verur við miðal ella seinari gerjun og summar verur, sum vanliga verða roknaðar sum ikki-gerjandi, kunnu vera ljósareyðar ella ljósaviolettar. Glansur merkir ikki endaliga staðfest E. coli, tí aðrar kraftigt gerjandi verur kunnu framleiða hann. Undirvísingarmannagongdin og myndirnar av blandaðari dyrking vísa hvørja av hesum feiltulkingum.
Avmarkingar fyri staðfesting
EMB-agar vísir eina fenotypu, ikki eitt slag. Ymiskar verur kunnu hava somu koloniútsjónd, og ein vera kann víkja frá lærubókamyndini eftir stovni, aldri, kolonitættleika, samanseting og inkubatión. Tí verður bygnaðurin á EMB-koloniium mettur sum fyribils ábending í bæði undirvísingar- og kliniskum arbeiðsgongdum.
Ein fakliga væl grundað arbeiðsgongd hjá lesandi er: lýs tað skilda koloniið (stødd, lit, miðdepil, glans í skáum ljósi og slímut eyðkenni), skráset samanseting, inkubatiónstíð og temperatur og eftirlitsroyndir; umdyrka síðan eitt væl skilt kolonii til reina dyrking, áðrenn nøkur staðfestingarroynd verður gjørd. Vanligar framhaldsroyndir eru Gram-liting og IMViC-reaktiónir til fyribils eyðmerking av E. coli og koliformum bakterium, TSI ella KIA og lívevnafrøðilig royndarsett lagað til einstakar tarmverur, við serologiskari eyðmerking, MALDI TOF ella aðrari váttaðari eyðmerking, tá ið uppgávan krevur tað. Fyri bakgrund um, hvussu EMB hoyrir saman við øðrum selektivum og differentierandi ætum til tarmverur, sí inngangslýsingar av dyrkingarætum til tarmverur og framhaldsroyndir við Gram-liting. Um skylda spurningin um, hvat ein blá liting á objektglasi kann og ikki kann prógva, heldur atlas um metylenblátt-liting eygleiðing og niðurstøðu sundur á sama hátt.
Skriva eygleiðingina áðrenn niðurstøðuna. „Myrk blásvørt koloniir við grønum glansi, sum broytist eftir sjónarvinklinum, á Levine EMB eftir 24 tímar, í samsvari við kraftiga laktosugerjun“ er fakliga væl grundað. „E. coli, staðfest“ krevur tað staðfestingarstigið, sum skálin einsamøll ikki kann veita.