Staenio celloedd y boch â glas methylen: beth i'w arsylwi

Mae myfyrwraig yn gosod diferyn o daliant celloedd y boch ar sleid, yn edrych drwy'r microsgop, ac yn gweld bron dim. Mae ambell ffurf welw, fel ysbryd, yn drifftio ar draws maes llachar. Mae hi'n addasu'r ffocws, yna'n ychwanegu mwy o olau, ac yna'n dod i'r casgliad bod y sleid yn wag. Nid yw'r sleid yn wag. Mae'r celloedd yno. Maent bron yn dryloyw, a thryloywder yw'r union broblem y mae'r staen hwn yn bodoli i'w datrys.

Mae'n werth tynnu sylw at y gwahaniaeth hwnnw rhwng disgwyliad a delwedd cyn dechrau'r protocol. Mae dechreuwyr yn disgwyl i ficrosgop ddatgelu manylion yn yr un modd ag y mae chwyddo â chamera yn datgelu arwydd pell. Mae microsgop maes llachar yn gwneud rhywbeth mwy penodol: mae'n dangos gwahaniaethau mewn amsugno golau. Nid yw cell o'r boch sydd heb ei staenio yn amsugno bron dim golau, felly nid yw'n creu bron dim gwahaniaeth. Mae glas methylen yn ychwanegu'r gwahaniaeth hwnnw. Mae'n rhwymo y tu mewn i'r gell, yn anwastad, ac yn troi strwythur yn gyferbyniad. Unwaith y bydd myfyrwyr yn deall y cysyniad hwnnw, mae pob cam dilynol yn gwneud synnwyr fel canlyniad yn hytrach na rysáit.

Mae gwybodaeth gefndir am sut mae staeniau syml yn ychwanegu cyferbyniad yn labordy'r ysgol yn helpu yma, ac mae adolygiad o osod microsgop maes llachar cyn staenio yn atal hanner y sleidiau aflwyddiannus. Ceir y cemeg y tu ôl i'r lliw mewn cyflwyniad i las methylen mewn microsgopeg, sy'n egluro pam mae'r llifyn penodol hwn yn ymddangos dro ar ôl tro ar y fainc.

Protocol yr ystafell ddosbarth

Y fersiwn paratoad gwlyb isod yw'r dewis arferol symlach ar gyfer dosbarthiadau cyffredinol. Nid oes angen fflam na cham sefydlogi arni. Mae'r amrywiad taeniad sefydlog a ddefnyddir mewn rhai llawlyfrau coleg yn ychwanegu sychu yn yr aer ynghyd â sefydlogi byr â gwres, fel yng ngweithgaredd taeniad y boch North Central Texas College a gyhoeddwyd drwy Biology LibreTexts, ond arfer microbioleg yw sefydlogi â gwres, nid gofyniad ar gyfer gweld celloedd epithelaidd.

Beth sydd ei angen: sleidiau a gorchuddwydrau glân, swabiau di-haint untro (y dewis gorau) neu bigau dannedd gwastad newydd, potel ddiferu o doddiant dyfrllyd glas methylen 0.5 i 1 y cant, dŵr distyll neu ddŵr wedi'i ddadïoneiddio, papur blotio, menig, a microsgop cyfansawdd â chwyddiad cyfan o 100x a 400x.

1. Rinsiwch y geg â dŵr plaen. Mae hyn yn cael gwared ar ronynnau bwyd a fyddai'n staenio'n ddwys yn ddiweddarach ac yn tynnu sylw oddi wrth y celloedd.
2. Mae pob myfyriwr yn cymryd sampl o'i foch ei hun yn unig. Rhwbiwch du mewn y boch yn ysgafn â swab di-haint newydd. Gwasgwch, peidiwch â chrafu. Stopiwch ymhell cyn unrhyw anghysur neu waedu.
3. Rholiwch y swab ar draws canol sleid lân i greu haen denau. Haen denau yw'r ffactor pwysicaf un wrth ragweld a fydd modd dehongli sleid. Bydd dyddodyn gwyn trwchus yn staenio'n fàs glas na ellir ei ddehongli.
4. Ychwanegwch un diferyn o las methylen dros y taeniad. Gadewch ef am 1 i 3 munud. Mae un munud yn ddigon mewn llawer o brotocolau coleg; mae llawlyfr labordy gwyddoniaeth Dosbarth IX NCERT yn defnyddio tua 3 munud ar gyfer paratoad dros dro. Nid yw hirach yn well, a gorstaenio yw'r camgymeriad amseru mwyaf cyffredin.
5. Rinsiwch yn ysgafn â dŵr distyll neu sugno'r staen dros ben i ffwrdd â phapur blotio, gan ddilyn y protocol lleol. Dylai'r cefndir droi'n las golau, nid yn las tywyll dwfn.
6. Gostyngwch orchuddwydr ar ogwydd fel bod un ymyl yn cyffwrdd yn gyntaf, yna gadewch iddo ddisgyn yn araf. Mae hyn yn atal swigod aer rhag cael eu dal oddi tano.
7. Dechreuwch ar chwyddiad isel i ddod o hyd i'r celloedd, cadarnhewch y ffocws a'u bod wedi'u canoli, yna symudwch i 100x ac yn olaf i 400x. Ar 400x defnyddiwch yr addasiad ffocws mân yn unig.

Mae crynodiad y staen yn haeddu un frawddeg fanwl. Mae protocolau ysgol yn tueddu i ddefnyddio toddiant dyfrllyd glas methylen tua 1 y cant. Mae hydoddiant stoc cryfach neu amser amlygu hir yn tywyllu'r cefndir yn gyflymach nag y mae'n tywyllu'r cnewyllyn, gan wrthdroi'r cyferbyniad y mae'r ymarfer yn dibynnu arno.

Trin deunydd o'r boch yn ddiogel

Mae samplau o'r boch yn cynnwys poer a micro-organebau arferol y geg, felly dylid trin pob taeniad ffres fel deunydd a allai fod yn heintus er bod y rhoddwyr yn gyd-ddisgyblion iach. Mae canllawiau bioddiogelwch yr American Society for Microbiology ar gyfer labordai addysgu yn nodi'r egwyddorion cyffredinol: asesu risg cyn y sesiwn, gwisgo menig, amddiffyn y llygaid lle gall tasgu ddigwydd, golchi dwylo wedyn, diheintio meinciau, a chael gwared ar eitemau untro halogedig drwy'r llwybr gwastraff biolegol cymeradwy.

Mae pedair rheol ystafell ddosbarth yn ymdrin â'r rhan fwyaf o'r risg. Un rhoddwr i bob swab ac i bob sleid, heb rannu byth. Cymryd sampl ohonoch eich hun yn unig, byth o rywun arall. Mae swabiau a phigau dannedd untro yn mynd yn syth i'r cynhwysydd gwastraff dynodedig, byth yn ôl ar y fainc. Mae glas methylen ei hun yn staenio croen a dillad ac yn llidio'r llygaid, felly mae angen menig a'r arferion hylendid arferol ar gyfer llifynnau. Peidiwch ag ymestyn yr ymarfer hwn i feithrin unrhyw beth o'r taeniad, a pheidiwch â sefydlogi deunydd dynol ffres â gwres mewn ffordd fyrfyfyr y tu allan i weithdrefn ddiogelwch yr ysgol.

Beth i'w arsylwi, a pham mae'n edrych felly

Ar 100x, chwiliwch am gelloedd llydan, gwastad, glas golau, ag amlinelliadau hirgrwn neu bolygonaidd afreolaidd. Maent yn gorwedd yn unigol neu mewn haenau rhydd sy'n gorgyffwrdd. Fel arfer mae gan bob cell un smotyn glas tywyllach. Y cnewyllyn yw'r smotyn hwnnw. Sylwch ar y trefniant hefyd: teils tenau yw celloedd epithelaidd cennog, nid sfferau, a dyna pam mae eu hymylon yn edrych fel gwydredd craciog yn hytrach na balŵns crwn.

Ar 400x, gellir gwahaniaethu tair nodwedd yn glir. Mae ffin y gell yn ymddangos fel llinell denau dywyllach sy'n amgáu'r gell. Mae'r cytoplasm yn llenwi'r tu mewn â glas golau cyson. Mae'r cnewyllyn yn dywyllach ac yn fwy cryno, yn aml yn hirgrwn, ac fel arfer ger y canol ond nid bob amser. Gofynnwch i'r myfyrwyr gofnodi'r tair nodwedd ynghyd â'r siâp a'r chwyddiad, oherwydd dyna'n union y mae'r daflen waith yn gofyn amdano.

Mae un pwynt ynghylch cywirdeb yn bwysig yma, ac mae llawer o daflenni gwaith yn ei gael yn anghywir. Mae'r ffin weladwy yn cyfateb i ranbarth y bilen plasma, ond mae'r bilen ei hun, dwyhaen lipid tua 7 i 10 nanometr o drwch, ymhell islaw'r hyn y gall microsgop ysgol ei wahaniaethu. Yr hyn y mae myfyrwyr yn ei weld yw ymyl optegol y gell ynghyd â staen sydd wedi cronni yno. Mae'r un rhybudd yn berthnasol i organynnau. Nid yw mitocondria, y reticwlwm endoplasmig, cyrff Golgi, na ribosomau yn ymddangos yn y paratoad hwn. Gall microsgop golau confensiynol wahaniaethu manylion i lawr i tua 0.2 micrometr mewn amodau da, fel yr eglura gwybodaeth gefndir bioleg celloedd NCBI am offer microsgopeg, ac mae'r rhan fwyaf o uwchstrwythur islaw'r terfyn hwnnw neu'n agos ato. Mae chwyddiad gwag uwch yn gwneud y ddelwedd yn fwy heb ychwanegu manylion.

Pam mae'r cnewyllyn yn staenio dywyllaf? Llifyn cationig yw glas methylen, â gwefr bositif mewn hydoddiant, ac mae'n cysylltu â deunydd â gwefr negatif yn y gell, yn enwedig asidau niwclëig. Mae cromatin yn crynhoi DNA yn y cnewyllyn, felly'r cnewyllyn sy'n casglu'r mwyaf o lifyn. Mae cytoplasm yn cynnwys RNA a moleciwlau eraill â gwefr, felly mae'n staenio hefyd, ond yn fwy gwasgaredig ac yn ysgafnach. Y cymhwyster allweddol: nid yw glas methylen yn staen sy'n benodol i DNA. Mae gwaith ar ddosbarthiad glas methylen wrth ddelweddu cnewyll yn disgrifio'r cation yn cysylltu â rhanbarthau cyfoethog mewn asidau niwclëig, a chanfu gwaith meintiol hŷn ar rwymo glas methylen mewn paratoadau celloedd fod y rhan fwyaf o'r llifyn rhwymedig yn gysylltiedig ag asidau niwclëig. Felly patrwm cyferbyniad yw cnewyllyn tywyll ynghyd â chytoplasm golau, nid prawf moleciwlaidd.

Camgymeriadau y bydd myfyrwyr yn eu gwneud, a sut i'w dehongli

Mae bron pob sleid aflwyddiannus yn perthyn i un o bum patrwm. Dysgwch fyfyrwyr i nodi beth sydd o'i le ar y sleid yn hytrach na'i hailadrodd yn ddall.

Mae gorstaenio'n gwneud y celloedd a'r cefndir yn unffurf dywyll fel bod y cnewyllyn yn diflannu yn y maes. Cywirwch hyn drwy ddefnyddio amser staenio byrrach neu rinsio'n fwy trylwyr. Mae tanstaenio'n gadael ffurfiau gwelw sy'n diflannu wrth gynyddu'r golau; ychwanegwch amser mewn camau o dri deg eiliad. Mae taeniadau trwchus yn creu masau dwys sy'n gorgyffwrdd lle na ellir olrhain unrhyw amlinelliad; cywiriad mecanyddol sydd ei angen, taenwch yn deneuach y tro nesaf, gan na all unrhyw rinsio achub pentwr o gelloedd. Mae swigod aer yn ymddangos fel cylchoedd perffaith ag ymylon tywyll miniog ac yn tynnu sylw dechreuwyr sy'n eu camgymryd am strwythurau; ail-osodwch y gorchuddwydr yn araf ar ogwydd. Fel arfer, bacteria arferol y geg yw dotiau tywyll bach sydd wedi'u gwasgaru ar y celloedd neu o'u cwmpas, fel y noda protocolau ysgol megis gweithdrefn celloedd y boch Ingrid Science. Maent yn cadarnhau bod organebau'n byw yn y geg, rhywbeth a all aros yng nghof myfyrwyr, ond ni ellir pennu eu rhywogaeth yn yr ymarfer hwn ac ni ddylid eu lluniadu fel rhannau o gelloedd. Mae gweddillion bwyd ac edafedd mwcws yn staenio'n afreolaidd ac yn ddwys; diben y rinsio ymlaen llaw yw eu lleihau.

Beth na all yr ymarfer hwn ei wneud

Arsylwad addysgol yw hwn, nid prawf diagnostig. Ni all unrhyw beth am olwg celloedd mewn staen ystafell ddosbarth ddiagnosio haint, canser, nac unrhyw glefyd, ac ni ddylid darllen yr erthygl fel petai'n awgrymu fel arall. Mae'r paratoad yn dangos siâp, ffin, cytoplasm, a chnewyllyn ar ddau chwyddiad. Nid yw'n dangos uwchstrwythur pilenni, manylion organynnau, na hunaniaeth foleciwlaidd. Mae nodi'r cyfyngiad yn eglur yn diogelu'r wyddoniaeth a'r myfyrwyr: canlyniad da yw lluniad wedi'i labelu'n gywir gyda'r chwyddiad a'r staen wedi'u cofnodi, nid casgliad am iechyd.

Taflen waith i fyfyrwyr a micrograffau wedi'u labelu

Y ddau adnodd prosiect ar gyfer y dudalen hon yw'r micrograff wedi'i labelu uchod a'r daflen waith isod. Argraffwch un daflen waith i bob myfyriwr neu dangoswch hi â thaflunydd a gofynnwch i'r myfyrwyr gopïo'r blychau i'w llyfrau nodiadau.

Sut i'w defnyddio mewn sesiwn 45 munud: deg munud ar gyfer briffio diogelwch a chymryd samplau, deg munud ar gyfer staenio a pharatoi'r sleidiau, pymtheg munud ar gyfer arsylwi a braslunio ar y ddau chwyddiad, deg munud ar gyfer y rhestr wirio a chymharu â'r micrograff wedi'i labelu. Mae eitemau'r rhestr wirio yn fwriadol weithdrefnol. Taeniad tenau, amser staenio cywir, cnewyllyn yn dywyllach na'r cytoplasm, chwyddiad wedi'i gofnodi. Mae myfyriwr sy'n gallu ticio'r pedwar wedi deall y cysyniad y mae'r wers yn bodoli i'w ddysgu: mae microsgopau'n dangos gwahaniaethau, ac mae staeniau'n creu'r gwahaniaethau sy'n werth eu dangos.