EMB агар супраць MacConkey агару: выбар і інтэрпрэтацыя асяроддзяў

Студэнт наносіць штрыхавым пасевам адзін і той жа ўзор вады на дзве чашкі. На адной з'яўляюцца цёмныя калоніі з зялёным металічным бляскам. На другой — ярка-ружовыя калоніі з мутнаватым арэолам. Абедзве чашкі засеялі з адной і той жа прабіркі, інкубавалі побач і ацэньвалі ў адзін і той жа час. Студэнт пытаецца, якая чашка паказвае правільны вынік.

Правільныя абедзве. Яны адказваюць на розныя пытанні. Блытаніна ўзнікае, калі гэтыя два асяроддзі лічаць узаемазаменнымі сродкамі скрынінгу кішэчных бактэрый. Іх аб'ядноўвае мэта: селектыўна падтрымліваць рост грамадмоўных кішэчных арганізмаў і адрозніваць ферментатары лактозы ад неферментатараў, але гэтая мэта рэалізуецца праз розную хімію і розную візуальную логіку. Калі зразумець два базавыя прынцыпы, выбар чашкі і счытванне калоній становяцца руціннымі.

Кароткі адказ

EMB агар выкарыстоўвае два фарбавальнікі, эазін Y і метыленавы сіні, якія выконваюць адразу дзве функцыі: прыгнятаюць рост грамастаноўчых арганізмаў і выпадаюць у асадак вакол моцных прадуцэнтаў кіслаты, утвараючы цёмныя калоніі, класічна — з металічным зялёным бляскам у Escherichia coli. MacConkey агар раздзяляе гэтыя функцыі: жоўцевыя солі разам з крышталічным фіялетавым прыгнятаюць грамастаноўчыя арганізмы, лактоза служыць субстратам для ферментацыі, а нейтральны чырвоны паказвае ўтварэнне кіслаты ў выглядзе ружовых або чырвоных калоній. Калі задача — наглядна прадэманстраваць меркаваную E. coli, EMB мае відавочную перавагу. Калі патрэбна простае раздзяленне ферментатараў лактозы на ружовыя калоніі і неферментатараў на бясколерныя, асабліва ў працоўных працэсах з калам або мачой, MacConkey звычайна лягчэй счытваць. Ні адна з гэтых чашак не ідэнтыфікуе арганізм толькі па колеры.

EMB: фарбавальнікі адначасова селектуюць і сігналізуюць

Канцэпцыя EMB аб'ядноўвае селекцыю і індыкацыю ў адных і тых жа малекулах. Пратакол ASM для агару з эазінам і метыленавым сінім апісвае EMB як адначасова селектыўнае і дыферэнцыяльнае асяроддзе: пара фарбавальнікаў прыгнятае многія грамастаноўчыя арганізмы, а ферментацыя лактозы выклікае паглынанне і выпадзенне фарбавальнікаў у асадак. Стандартная формула Levine змяшчае пептон, лактозу, фасфат, эазін Y, метыленавы сіні і агар, як пазначана ў метадзе FDA BAM для Levine EMB агару. Улічвайце, што ў старых рэцэптурах EMB разам з лактозай часам дадавалі цукрозу, тады як Levine EMB змяшчае лактозу без цукрозы, таму фіксуйце, якую менавіта рэцэптуру выкарыстоўвае ваша лабараторыя.

Счытванне EMB азначае назіранне за паводзінамі фарбавальнікаў. Інтэнсіўная ферментацыя лактозы ўтварае дастаткова кіслаты, каб выклікаць моцнае выпадзенне фарбавальнікаў у асадак, у выніку чаго ў E. coli з'яўляюцца цёмныя сіне-чорныя цэнтры і, у класічным выпадку, зялёны металічны бляск у адбітым святле. Больш слабыя ферментатары, такія як Enterobacter і Klebsiella, звычайна растуць у выглядзе ружовых або фіялетавых слізістых калоній без такога бляску. Неферментатары, такія як Salmonella, Shigella і Proteus, звычайна растуць у выглядзе бясколерных або напаўпразрыстых калоній, паколькі не ствараюць рэзкага павелічэння кіслотнасці, неабходнага для выпадзення фарбавальнікаў у асадак. Грамастаноўчыя арганізмы звычайна прыгнятаюцца, хоць ступень прыгнятання адрозніваецца ў залежнасці ад штама і канкрэтнага прадукту. Поўная хімія прыгатавання фарбавальнікаў, уключаючы прычыну катыённага характару метыленавага сіняга, належыць да асобнага абмеркавання фарбавальных рэцэптур, а агульны мікраскапічны кантэкст прадстаўлены ў атласе метадаў афарбоўвання. Гэты артыкул прысвечаны выбару асяроддзя і счытванню вынікаў на чашках.

Малюнак вышэй мае ілюстрацыйны характар. Ён паказвае чаканую візуальную логіку: на EMB — цёмныя калоніі з бляскам, ружовыя слізістыя тыпы і бледныя тыпы; на MacConkey — ружовыя і бледныя тыпы. Выкарыстоўвайце яго для засваення схемы, а затым пацвярджайце кожнае заключэнне па фотаздымках кантроляў і інструкцыі да канкрэтнага асяроддзя, якое знаходзіцца на вашым рабочым стале.

MacConkey: функцыі раздзялены, візуальнае правіла прасцейшае

Канцэпцыя MacConkey прызначае кожную функцыю асобнаму інгрэдыенту. Пратакол ASM для MacConkey агару выкарыстоўвае тую ж схему селектыўнага і дыферэнцыяльнага асяроддзя, а метад FDA BAM для MacConkey агару пералічвае асноўныя кампаненты: пептоны, лактозу, жоўцевыя солі, соль, нейтральны чырвоны, крышталічны фіялетавы і агар. Жоўцевыя солі разам з крышталічным фіялетавым селектыўна прыгнятаюць грамастаноўчыя арганізмы. Лактоза забяспечвае субстрат для ферментацыі. Нейтральны чырвоны служыць індыкатарам pH і становіцца ружовым або чырвоным там, дзе ўтвараецца кіслата; вакол моцных ферментатараў часам таксама выпадае ў асадак жоўць.

Правіла счытвання наўмысна простае: ружовы колер азначае ферментатар лактозы, бясколерны або бледны — неферментатар. E. coli выглядае ружовай або чырвонай, часта з арэолам асаджанай жоўці. Klebsiella і Enterobacter выглядаюць ружовымі і часта слізістымі з-за капсул. Salmonella, Shigella, Proteus і многія іншыя грамадмоўныя палачкі выглядаюць бясколернымі. У навучальных лабараторыях ёсць і дадатковая перавага: жоўцевыя солі звычайна памяншаюць роенне Proteus, таму ізаляваныя калоніі на MacConkey атрымаць лягчэй, чым на неселектыўных асяроддзях, хоць прыгнятанне не з'яўляецца абсалютным і існуюць бессалявыя альтэрнатывы для выпадкаў, калі галоўнай задачай з'яўляецца кантроль роення.

Малекулярная прычына такіх паводзін фарбавальнікаў звязана з зарадам і структурай. Метыленавы сіні — катыённы фенатыязінавы фарбавальнік, чые структура і ўласцівасці тлумачаць яго сроднасць да кіслых паверхняў бактэрый; тая ж сроднасць праяўляецца, калі ён выпадае ў асадак у кіслых зонах на EMB.

Кароткае параўнанне

Успрымайце табліцу як працэдуру прыняцця рашэння. Калі ў практыкаванні студэнты павінны ўбачыць градацыю інтэнсіўнасці ферментацыі з адным выразным канчатковым варыянтам, гэта добра паказвае EMB. Калі патрабуецца хуткае бінарнае раздзяленне перад біяхімічным пацвярджэннем, гэта лепш паказвае MacConkey.

Якое асяроддзе для якога ўзору

Для практыкаванняў з вадой, накіраваных на меркаванае распазнаванне фекальных каліформных бактэрый або E. coli, EMB прывабны тым, што яго бляск лёгка пазнаць візуальна. MacConkey таксама падыходзіць для кішэчных грамадмоўных арганізмаў і гістарычна выкарыстоўваўся ў даследаваннях вады, але ні адна з гэтых чашак не замяняе рэгламентаваны метад аналізу вады, які ў залежнасці ад тэсту можа патрабаваць такія асяроддзі, як modified mTEC або MI. Праверце метад, якога павінна прытрымлівацца ваша лабараторыя.

Для падзелу ферментатараў і неферментатараў ва ўзорах тыпу кала MacConkey звычайна больш карысны з гэтых двух асяроддзяў. У практычнай працы з калам пры пошуку Salmonella або Shigella звычайна дадаюць больш селектыўныя кішэчныя асяроддзі, такія як XLD або Hektoen enteric, а не выкарыстоўваюць толькі MacConkey.

Для навучальнай працы з узорамі тыпу мачы, якая імітуе клінічны працоўны працэс, спалучайце MacConkey з крывяным агарам. MacConkey забяспечвае ранняе раздзяленне грамадмоўных арганізмаў, а крывяны агар дазваляе вырасці арганізмам, якія MacConkey прыгнятае. Такое спалучэнне стандартна апісваецца ў клінічных схемах пастаноўкі пасеву мачы.

Для чыстага вывучэння канцэпцыі выкарыстоўвайце абодва асяроддзі. EMB паказвае, што інтэнсіўнасць ферментацыі мае значэнне і што адна малекула можа выконваць дзве ролі. MacConkey дэманструе модульную канструкцыю: селектар, субстрат і індыкатар функцыянуюць асобна. Студэнты, якія засяваюць вядомую E. coli, вядомую Klebsiella aerogenes і вядомую Salmonella побач на абодвух асяроддзях, пасля гэтага рэдка блытаюць дзве схемы.

Памылкі счытвання, якія паўтараюцца кожны семестр

Самая частая памылка — ідэнтыфікацыя толькі па колеры. Ружовая калонія на MacConkey можа быць E. coli, Klebsiella, Enterobacter або іншым ферментатарам. Бясколерная можа быць Salmonella, Shigella, Proteus, Pseudomonas або іншым неферментатарам. Колер — гэта скрынінгавы фенатып, які вызначае далейшую пацвярджальную працу, такую як афарбоўванне па Граму, тэст на аксідазу, біяхімічныя панэлі або інструментальная ідэнтыфікацыя, а не назва віду.

Другая памылка — празмернае значэнне адсутнасці бляску. Некаторыя сапраўдныя калоніі E. coli, асабліва ізаляваныя, утвараюць на EMB слабы металічны бляск або не ўтвараюць яго зусім. Адсутнасць бляску не выключае E. coli, а яго наяўнасць не пацвярджае яе. Успрымайце бляск як папярэднюю прыкмету.

Трэцяя памылка — параўнанне чашак рознага ўзросту. Ферментатары лактозы з запаволенай рэакцыяй могуць стаць ружовымі на MacConkey пасля працяглай інкубацыі, што размывае выразнае раздзяленне паміж ферментатарамі і неферментатарамі. Счытвайце вынік у час, вызначаны лабараторыяй, і запісвайце працягласць інкубацыі разам з вынікам.

Чацвёртая памылка — інтэрпрэтацыя змешанага росту як аднаго арганізма. Ружовая калонія побач з бясколернай адлюстроўвае два фенатыпы, а не прамежкавы варыянт. Выбірайце добра ізаляваныя калоніі і апрацоўвайце кожны марфатып асобна. Слізістая тэкстура стварае падобную пастку: і Klebsiella, і Enterobacter могуць выглядаць слізістымі, таму адна толькі капсула ніколі не вызначае назву. Арганізм, які раней выкладалі як Enterobacter aerogenes, цяпер класіфікуецца як Klebsiella aerogenes, чым і тлумачыцца розніца паміж старымі схемамі і новымі назвамі.

Кантролі і заключнае правіла

На кожнай сесіі выкарыстоўвайце фотаздымкі кантроляў або свежыя кантрольныя культуры: E. coli для рэакцыі моцнага ферментатара, Klebsiella aerogenes для слізістай ферментацыі без класічнага бляску, штам Salmonella для бясколернай рэакцыі неферментатара і Staphylococcus aureus для пацвярджэння прыгнятання грамастаноўчых арганізмаў на вашым канкрэтным прадукце. Супастаўляйце нумары штамаў і крытэрыі прымальнасці з інструкцыяй вытворцы, паколькі селектыўнасць змяняецца ў залежнасці ад утрымання жоўці, крышталічнага фіялетавага і фарбавальнікаў.

Памятайце на рабочым месцы адно правіла. У EMB фарбавальнікі адначасова селектуюць і сігналізуюць, што дае выразны сігнал E. coli, але патрабуе больш тонкай інтэрпрэтацыі. MacConkey раздзяляе селекцыю і індыкацыю, што дае простае раздзяленне на ружовыя і бледныя калоніі, але паказвае менш дэталяў пра інтэнсіўнасць ферментацыі. Выбірайце асяроддзе, канцэпцыя якога адпавядае пастаўленаму пытанню, пацвярджайце каляровыя прыкметы належнымі тэстамі — і гэтыя дзве чашкі перастаюць канкурыраваць і пачынаюць дапаўняць адна адну.