Metilen mavisi və qaraciyər yağlanması: eksperimental tədqiqatlar nə aşkar edib

Qaraciyər yağlanması bir neçə fərqli problemi ifadə edən ümumi addır. Bir insanda buna səbəb uzun müddət ərzində yüksək miqdarda alkoqol istifadəsidir. Digərində isə insulin müqaviməti ilə yanaşı həddindən artıq qida maddələrinin qəbulu və qaraciyərə daha çox yağın daşınmasıdır. Mikroskop altında hər iki halda sadəcə yağ toplanması görünə bilər, lakin buna gətirib çıxaran ilkin səbəblər fərqlidir. Hər hansı təcrübənin nəyi sübut edə biləcəyini məhz bu fərq müəyyənləşdirir.

Metilen mavisi və qaraciyər yağlanması barədə ədəbiyyat məhduddur və bu məsələ üzrə tamamilə preklinik tədqiqatlardan ibarətdir. Siçovul və siçanlar üzərində aparılmış üç tədqiqata daha çox istinad edilir və onların hamısı eyni nəticəyə gəlmir. Etanolla qidalandırma tədqiqatlarından birində redoks dəyişikliyi düzəldilib, lakin qaraciyərdəki yağ dəyişməyib. Yüksək yağlı pəhriz tədqiqatlarından birində siqnallaşma dəyişikliyi ilə yanaşı qaraciyərdəki yağ azalıb. Sağlam heyvanlar üzərində aparılmış bir tədqiqatda isə qaraciyər və böyrəkdə lipid peroksidləşməsi üzrə əks nəticələr əldə edilib. Birlikdə nəzərdən keçirildikdə bunlar üç sonlanma göstəricisinin niyə ayrı saxlanmalı olduğunu göstərir: redoks dəyişikliyi, siqnallaşmanın aktivləşməsi və toxumada yağ toplanması.

Asanlıqla qarışdırılan üç sonlanma göstəricisi

Redoks göstəricisi elektronların ötürülməsini təsvir edir. Qaraciyərdə NAD+-ın NADH-a nisbəti hüceyrə mühitinin nisbi olaraq oksidləşmiş, yoxsa reduksiya olunmuş vəziyyətdə olduğunu göstərir. Etanolun oksidləşməsi NAD+-ı NADH-a çevirir, buna görə xroniki alkoqol istifadəsi bu nisbəti aşağı salır. Elektron qəbul edən boya onu yenidən yüksəldə bilər. Bu, kimyəvi prosesdir, toplanmış yağın azalmasının sübutu deyil.

Siqnallaşma göstəricisi tənzimlənməni təsvir edir. SIRT1 mitoxondrial funksiyada və lipidlərin emalında iştirak edən zülalları dəyişdirən, NAD+-dan asılı tənzimləyici fermentdir. AMPK enerji azlığını hiss edən sensor kimi fəaliyyət göstərir; aktivləşdikdə yanacağın oksidləşməsinə üstünlük verir və lipid sintezini məhdudlaşdırır. Bir məqalədə metilen mavisinin qaraciyərdə SIRT1-i aktivləşdirdiyi bildirilirsə, bu, tənzimləyici dəyişikliyin qeydə alınmasıdır. Bu, hələ pasiyentdə əldə olunmuş nəticə deyil.

Histoloji və ya biokimyəvi göstərici qaraciyərin özünü təsvir edir. Geniş istifadə olunan nümunələrə toxumanın hər qramına düşən triqliserid miqdarı, neytral yağın Oil Red O ilə boyanması, hüceyrələrin balonlaşmasının və zədələnmənin hematoksilin və eozinlə qiymətləndirilməsi, eləcə də plazmada ALT aktivliyi daxildir. Həmin təcrübədə metilen mavisinin qaraciyər steatozunu yaxşılaşdırıb-yaxşılaşdırmadığına yalnız bu üçüncü qrup cavab verir.

Bu qrupları ayrı saxlamaq ən çox rast gəlinən yanlış şərhin qarşısını alır: əlverişli redoks və ya siqnallaşma nəticəsi qaraciyər yağlanmasının azalması demək deyil.

Etanol modeli: redoks düzəlib, yağ dəyişməyib

Ən aydın mənfi nəticə erkək Wistar siçovullarında etanolla xroniki qidalandırma tədqiqatından gəlir. Heyvanlara maye pəhrizin tərkibində etanol verilib və onun payı ümumi enerjinin 36 faizinə qədər artırılıb. Eyni miqdarda qida alan nəzarət heyvanlarına isə etanoldan gələn enerjinin əvəzinə qlükoza verilib. Bir etanol qrupu və bir nəzarət qrupu 5-ci gündən 30-cu günədək pəhrizin hər litrinə 130 mg, yəni gündə təxminən hər kg bədən çəkisinə 42 mg metilen mavisi də alıb.

Redoks vəziyyəti standart metabolit cütləri əsasında qiymətləndirilib: sitozol üçün laktatın piruvata, mitoxondrilər üçün isə 3-hidroksibutiratın asetoasetata nisbəti. Yüksək dozalı etanolla qidalandırmanın erkən mərhələsində etanol qruplarında böyük dəyişikliklər müşahidə olunub: sitozolda NAD+-ın NADH-a nisbəti təxminən 62 faiz, mitoxondrilərdə isə təxminən 71 faiz azalıb, həmçinin qliserol 3-fosfat artıb. Metilen mavisi bu dəyişiklikləri böyük ölçüdə geri çevirib və etanol qəbulunu, bədən çəkisinin artımını və ya serumdakı etanol səviyyəsini dəyişdirmədən qliserol 3-fosfatı nəzarət göstəricilərinə yaxın səviyyəyə qaytarıb.

Qaraciyərdəki yağ isə fərqli mənzərə göstərib. 12-ci gündə, əhəmiyyətli yağ toplanmasından əvvəl, qruplar arasında triqliserid fərqi olmayıb. 27-ci gündə etanol qruplarında metilen mavisinin verilib-verilməməsindən asılı olmayaraq triqliserid səviyyəsində böyük artımlar qeydə alınıb. 30-cu gündə etanolla qidalandırılan heyvanlarda ümumi lipid təxminən 89 faiz, triqliserid isə təxminən 196 faiz artıb və boya yenə də buna təsir etməyib. Sentrolobulyar yağ infiltrasiyası müalicə ilə də, müalicəsiz də eyni görünüb. Müəlliflər belə nəticəyə gəliblər ki, bu modeldə uzunmüddətli qidalandırmadan sonra yaranan qaraciyər yağlanmasının əsas səbəbi etanolun yaratdığı redoks dəyişikliyi deyil. Heyvan və hüceyrə tədqiqatlarının nəticələrinin insan üçün riskə necə tətbiq olunduğunu ayırd etməyi öyrənmək burada faydalıdır: mexanizm həqiqətən mövcud ola bilər, amma yenə də nəticəni müəyyənləşdirməyə bilər.

Hər hansı redoks düzəlişinin qaraciyərdəki yağı mütləq aradan qaldırmalı olduğunu iddia edənlərə məhz bu tədqiqatı göstərmək lazımdır. Bu təcrübə dizaynında belə olmayıb.

Metabolik model: siçanlarda siqnallaşma və yağın azalması

SIRT1 və AMPK üzərində qurulmuş hepatositlər və yüksək yağlı pəhriz alan siçanlar üzrə tədqiqat fərqli mənzərə göstərir. HepG2 hüceyrələrində, AML-12 hüceyrələrində və siçovulların ilkin hepatositlərində metilen mavisi NAD+-ın NADH-a nisbətini yüksəldib, SIRT1 zülalını artırıb, PGC-1alpha tənzimləyicisinin asetilləşməsini azaldıb, mitoxondrial DNT miqdarını və oksigen istehlakını artırıb, həmçinin AMPK-nı aktivləşdirərək sonrakı mərhələlərdə CPT-1 və PPARalpha artımlarına səbəb olub. SIRT1 ekspressiyası susdurulduqda AMPK aktivləşməsi aradan qalxıb; bu, həmin hüceyrə sistemində zəncirin SIRT1-lə bağlı olduğunu göstərir. Boya həmçinin LXR aqonisti T0901317-dən və palmitata məruz qalmadan qaynaqlanan lipogen siqnallara, o cümlədən SREBP-1c, FAS və ACC induksiyasına qarşı təsir göstərib.

Tədqiqatın heyvanlar üzərindəki hissəsində 8 həftə ərzində 60 faiz yağ tərkibli pəhrizlə qidalandırılan erkək C57BL/6 siçanlarından istifadə olunub. Son 4 həftədə metilen mavisi ağızdan, həftədə dörd dəfə, gündə hər kg bədən çəkisinə 3 və ya 10 mg verilib. Metilen mavisi verilən siçanlarda, yüksək yağlı pəhriz alan, lakin bu maddəni almayan siçanlarla müqayisədə, Oil Red O ilə boyanma daha az, qaraciyərdə triqliserid daha aşağı, histoloji müayinədə balonlaşma və yağ degenerasiyası daha az, plazmada ALT isə daha aşağı olub. Eyni məqalədəki farmakokinetik araşdırma ağızdan qəbul zamanı bioloji əlçatanlığın təxminən 31–35 faiz olduğunu müəyyən edib: bağırsaqdan sorulma demək olar ki, tam olub, lakin maddə əhəmiyyətli dərəcədə metabolizmə uğrayıb. Toxumadakı konsentrasiyanın plazmadakı konsentrasiyaya ən yüksək nisbəti qaraciyərdə qeydə alınıb; bu da paylanma baxımından qaraciyərə təsiri ən azı mümkün edir.

Bu, steatozun azalmasına dair real siqnaldır, lakin onun əhatə dairəsi dardır. Bu, hər qrupda 9–10 heyvanın olduğu, bir pəhrizin, iki dozanın və dörd həftəlik tətbiqin sınaqdan keçirildiyi qısamüddətli siçan təcrübəsidir. O, alkoqolla əlaqəli xəstəliyi deyil, metabolik steatozu və steatohepatit əlamətlərini yoxlayır; sirrozu, fibrozun geriləməsini və ya insanlarda hər hansı nəticəni sınaqdan keçirmir. Belə nəticələri şərh edərkən mitoxondrial və redoks göstəricilərinin rolu onları doza və ya protokol kimi deyil, bir fərziyyəni dəstəkləyən məlumat kimi təqdim etməkdir.

Sağlam toxumaya baxış: eyni doza, orqanlarda əks nəticələr

Üçüncü bir tədqiqat tez-tez qaraciyərlə bağlı iddialara daxil edilir, halbuki həmin iddialara aid deyil. Sağlam dişi Wistar siçovullarında aparılmış 30 günlük təcrübədə beş heyvana içməli suda 1 mM metilen mavisi verilib, digər beş heyvan isə nəzarət qrupu olub. Qaraciyər və böyrəkdə superoksid dismutaza, katalaza və reduksiya olunmuş qlutation dəyişməyib. Lipid peroksidləşməsi qaraciyərdə bir qədər artıb, böyrəkdə isə azalıb. Serumda ALT və kreatinin azalıb, qanda sidik cövhəri azotu isə dəyişməyib.

Düzgün şərh xəstəliyin müalicəsi deyil, sağlam heyvanlarda toxumaya xas təsirdir. Eyni təsirə məruz qalma bir göstəriciyə görə qaraciyərdə zəif prooksidant, həmin göstəriciyə görə böyrəkdə isə zəif qoruyucu təsir göstərib; standart antioksidant müdafiə göstəriciləri isə dəyişməyib. Hər qrupda beş heyvanın olması və xəstəlik modelinin olmaması ilə bu məqalə metilen mavisini ümumi qaraciyər antioksidantı adlandırmamaq barədə xəbərdarlıq edir. O, həmçinin qaraciyər fermentlərindəki dəyişikliklərin yaxşılaşma mənası daşıması üçün müəyyən edilmiş xəstəlik kontekstinin lazım olduğunu göstərir.

Qaraciyər üzrə üç təcrübənin müqayisəsi

Cədvəl əsas məqamı aydın göstərir. Oxşar mavi boya, fərqli biologiya. Etanol tədqiqatı redoks üzrə uğuru yağın azalmasındakı uğursuzluqdan ayırır. Pəhriz tədqiqatı bir modeldə siqnallaşma ilə yağ göstəricilərindəki yaxşılaşmanı birləşdirir. Sağlam heyvanlar üzrə tədqiqat isə redoks göstəricilərinin orqandan asılı olaraq əks istiqamətlərdə dəyişə biləcəyini göstərir.

Niyə bunlardan müalicə iddiası irəli gəlmir

Bu tədqiqatların heç birinə qaraciyər yağlanması olan insanlar cəlb edilməyib. Dozalar, tətbiq yolları və müddətlər məqalələr arasında fərqlənir və sadə miqyaslandırma ilə insan üçün istifadə sxeminə çevrilmir. Qrupların kiçik olması, xüsusilə etanol tədqiqatında hər redoks ölçmə vaxtı üçün üç heyvanın və sağlam heyvanlar tədqiqatında hər qrupda beş heyvanın olması, əhəmiyyətli qeyri-müəyyənlik yaradır. Cins, genetik xətt, pəhrizin tərkibi və tətbiqin zədələnməyə nəzərən vaxtı da fərqlidir. Üstəlik, iki xəstəlik modeli fərqli ilkin səbəbləri təmsil edir, buna görə pəhriz üzrə müsbət nəticə etanol üzrə mənfi nəticəni dəyişə bilməz və əksinə.

Qaraciyər xəstəliyi diaqnozu qoyulmuş hər kəs üçün daha vacib yanaşma müalicə axtarışından çox ehtiyatlılıqdır. Metilen mavisi ilə bağlı böyrək və qaraciyər üçün ehtiyat tədbirlərinin icmalı heyvan tədqiqatı əlverişli görünsə belə, orqan funksiyasının pozulmasının təhlükəsizlik məsələlərini niyə dəyişdirdiyini izah edir. Diaqnozu, son laboratoriya nəticələrini, konkret məhsul və tətbiq yolu barədə məlumatı, eləcə də dərmanların tam siyahısını həkimə təqdim edin və bu dərəcədə funksional pozuntusu olan bir insanda həmin məhsulun həmin məqsədlə istifadəsini hansı sübutların dəstəklədiyini soruşun.

Yekun olaraq: metilen mavisi bir etanol modelində toplanmış yağı azaltmadan qaraciyərin redoks vəziyyətini dəyişib, bir siçan metabolik modelində yağı azaltmaqla yanaşı SIRT1 və AMPK-nı aktivləşdirib və sağlam siçovullarda orqana xas redoks təsirləri göstərib. Bunlar qaraciyər yağlanması üçün təsdiqlənmiş müalicə deyil, tədqiqat üçün istiqamətlər toplusudur.