নিউ মিথিলিন ব্লু আৰু ৰেটিকুলোচাইট ৰঞ্জন: এটা পৃথক ৰঞ্জক আৰু জীৱিত কোষৰ পদ্ধতি

এজন শিক্ষাৰ্থীয়ে ৰেটিকুলোচাইট গণনাৰ প্ৰস্তুতি কৰে, মিথিলিন ব্লু অৰ্ডাৰ কৰে, তেজৰ সৈতে মিহলায় আৰু প্ৰায় একোৱেই দেখা নাপায়। এজন সহপাঠীয়ে নিউ মিথিলিন ব্লু বুলি লেবেল লগোৱা বটল ব্যৱহাৰ কৰি কিছুমান লোহিত ৰক্তকণিকাৰ ভিতৰত স্পষ্ট নীলা সূতা-সদৃশ গঠন দেখা পায়। প্ৰথম শিক্ষাৰ্থীয়ে ধৰি লয় যে দ্বিতীয় বটলটোৰ ৰঞ্জক অধিক সতেজ বা অধিক ঘন। ইয়াৰ এটাও নহয়। সেই বটলটোত এটা পৃথক অণু আছে।

এই ক্ষেত্ৰৰ বেছিভাগ বিভ্ৰান্তিৰ আঁৰত আছে এই ধাৰণাগত ভুল। নামটোৱে এনে ভাব দিয়ে যেন নিউ মিথিলিন ব্লু মিথিলিন ব্লুৰ এটা উন্নত বেচ। ৰসায়নে কিন্তু অন্য কথা কয়। নিউ মিথিলিন ব্লু N এটা পৃথক ফেনোথিয়াজিন ৰঞ্জক; ইয়াৰ নিজা Colour Index নম্বৰ, নিজা প্ৰতিস্থাপন বিন্যাস আৰু ৰক্তবিজ্ঞানত নিজা মানকীকৃত ভূমিকা আছে। এই পাৰ্থক্য স্পষ্ট হ'লেই পদ্ধতিটোৰ বাকী কথাবোৰ—ৰঞ্জনৰ সময়ত কোষবোৰ কিয় জীৱিত থাকিব লাগে, কিহক ৰেটিকুলোচাইট হিচাপে গণনা কৰা হয়, হাইঞ্জ বডিৰ স্থান ক'ত আৰু ব্ৰিলিয়েণ্ট ক্ৰেছিল ব্লু কেতিয়া প্ৰাসংগিক হয়—সহজ হৈ পৰে।

চমু উত্তৰ

ৰক্তবিজ্ঞানৰ বিকাৰক নিউ মিথিলিন ব্লু N-ক সাধাৰণতে নিউ মিথিলিন ব্লুৰ PubChem নথিত Basic Blue 24 হিচাপে চিনাক্ত কৰা হয়: C.I. 52030, CAS 1934-16-3, সূত্ৰ C18H22ClN3S। সাধাৰণ মিথিলিন ব্লু হৈছে ইয়াৰ PubChem নথিত উল্লেখ থকা মিথিলথায়োনিনিয়াম ক্লৰাইড, Basic Blue 9: C.I. 52015, CAS 61-73-4, সূত্ৰ C16H18ClN3S। গাঁথনিগতভাৱে নিউ মিথিলিন ব্লুত বলয়ৰ সৈতে সংলগ্ন দুটা মিথাইল গোট আৰু ইথাইলএমিনো পাৰ্শ্বশৃংখল থাকে; আনহাতে মিথিলিন ব্লুত ডাইমিথাইলএমিনো গোট থাকে। এই পাৰ্থক্যই ৰঞ্জনৰ আচৰণ সলনি কৰে। ৰক্তবিজ্ঞানৰ পাঠ্যপুথিত সাধাৰণ মিথিলিন ব্লুক ৰেটিকুলোচাইটৰ বাবে তুলনামূলকভাৱে দুৰ্বল ৰঞ্জক আৰু নিউ মিথিলিন ব্লুক অধিক গাঢ় আৰু সমসত্ত্ব ৰঞ্জন দিয়া ৰঞ্জক বুলি বৰ্ণনা কৰা হয়। এই তুলনা নিউ মিথিলিন ব্লুৰ বিষয়ে ScienceDirect-ৰ আলোচনাত সংক্ষেপে দিয়া আছে।

হয়, নিউ মিথিলিন ব্লু এটা সুপ্ৰাভাইটেল ৰঞ্জক। সুপ্ৰাভাইটেল ৰঞ্জনৰ অৰ্থ হৈছে শৰীৰৰ পৰা উলিয়াই অনাৰ পাছত আৰু ফিক্সেশ্যনৰ আগতে জীৱিত কোষ ৰঞ্জিত কৰা, যিদৰে সুপ্ৰাভাইটেল ৰঞ্জনৰ নীতিসমূহৰ NCBI পৰ্যালোচনাত সংজ্ঞায়িত কৰা হৈছে। নিউ মিথিলিন ব্লু আৰু ব্ৰিলিয়েণ্ট ক্ৰেছিল ব্লু দুয়োটাই এই শ্ৰেণীৰ অন্তৰ্গত, আৰু CLSI-ৰ ৰেটিকুলোচাইট মানদণ্ডত নিউ মিথিলিন ব্লুক স্পষ্টভাৱে সুপ্ৰাভাইটেল ৰঞ্জক হিচাপে অন্তৰ্ভুক্ত কৰা হৈছে। শিক্ষাৰ্থীয়ে কেতিয়াবা ইয়াক ফিক্স কৰা ফিল্মৰ ৰোমানোভস্কি ৰঞ্জনৰ সৈতে একে বুলি ভাবে। ইয়াত সেই ধাৰণাটো খাটে নে। আগতে ফিক্স কৰিলে পদ্ধতিটোৱে কাম নকৰে।

কাছাকাছি নামৰ ৰঞ্জকবোৰৰ বিষয়ে জানিব বিচৰা পাঠকৰ বাবে মিথাইল ব্লু আৰু মিথিলিন ব্লুৰ তুলনা-ত এটা ঋণায়নিক ট্ৰাইএৰাইলমিথেন ৰঞ্জক আৰু ধনায়নিক ফেনোথিয়াজিন পৰিয়ালৰ মাজৰ পৃথক আৰু অধিক ব্যাপক বিভ্ৰান্তি আলোচনা কৰা হৈছে। পৰীক্ষাগাৰৰ ৰঞ্জন-পদ্ধতিৰ সামগ্ৰিক পৰিচয়-ত ফিক্স কৰা ফিল্মৰ পদ্ধতিসমূহৰ মাজত সুপ্ৰাভাইটেল পদ্ধতিৰ স্থান দেখুওৱা হৈছে, আৰু ৰক্তকণিকাৰ আকৃতি-গঠনৰ নিৰ্দেশিকাত বিস্তৃত বিভেদমূলক মূল্যায়নত ৰেটিকুলোচাইটৰ মূল্যায়ন ক'ত খাপ খায় সেয়া দেখুওৱা হৈছে।

কেটেলগ সম্পৰ্কীয় এটা সতৰ্কতা: নিউ মিথিলিন ব্লুৰ এটা পৃথক জিংক ক্লৰাইড দ্বৈত-লৱণ ৰূপ CAS 6586-05-6-ৰ অধীনত আছে। সেয়েহে পদ্ধতিৰ অংশত কেৱল সাধাৰণ নামটো নহয়, লৱণৰ ৰূপ আৰু যোগানকাৰীৰ নামো উল্লেখ কৰিব লাগে।

সুপ্ৰাভাইটেল ৰঞ্জনে আচলতে কি কৰে

ৰেটিকুলোচাইট হৈছে এটা অপৰিণত লোহিত ৰক্তকণিকা, যিয়ে কেন্দ্ৰক হেৰুৱাইছে কিন্তু অৱশিষ্ট ৰাইব'ছ'মীয় RNA ধৰি ৰাখিছে। ৰঞ্জন নকৰা ভিজা প্ৰস্তুতিত সেই RNA দেখা নাযায়। সুপ্ৰাভাইটেল ৰঞ্জক জীৱিত কোষৰ ভিতৰত সোমাই সেই RNA-ক নীলা দানা আৰু সূতা-সদৃশ গঠনৰ ৰূপত অধঃক্ষেপিত বা সমষ্টিবদ্ধ কৰে। তেল-নিমজ্জন পদ্ধতিৰে দেখা এই গঠনেই ৰেটিকুলোফিলামেণ্টীয় পদাৰ্থ। সেয়েহে এই জালিকাখন ৰঞ্জনৰ ফলত সৃষ্টি হোৱা গঠন, ৰং পাবলৈ অপেক্ষা কৰি থকা পূৰ্বগঠিত কাঠামো নহয়। সেইবাবেই প্ৰটোকলৰ চলকসমূহ—ৰঞ্জকৰ ঘনত্ব, বাফাৰ, তেজ আৰু ৰঞ্জকৰ অনুপাত, তাপমাত্ৰা, সময়—ৰঞ্জকৰ নামটোৰ সমানেই গুৰুত্বপূৰ্ণ।

ইয়াৰ ব্যৱহাৰিক ফল হৈছে কামৰ এটা কঠোৰ ক্ৰম: প্ৰথমে তেজ গোট নমৰিবলৈ প্ৰতিগোটকাৰী মিহলোৱা তেজৰ সৈতে ৰঞ্জক মিহলাব, ইনকিউবেট কৰিব, তাৰ পাছত ফিল্ম প্ৰস্তুত কৰি ফিক্স নকৰাকৈ আৰু প্ৰতিবিপৰীত ৰঞ্জন নকৰাকৈ পৰীক্ষা কৰিব। ৰঞ্জনৰ আগতে ফিক্সেশ্যন কৰিলে, অথবা ম্লান সূতা-সদৃশ গঠন ঢাকি পেলোৱা প্ৰতিবিপৰীত ৰঞ্জক ব্যৱহাৰ কৰিলে, গণনাৰ বাবে প্ৰয়োজনীয় তথ্য নষ্ট হয়।

নিউ মিথিলিন ব্লুৰে ৰেটিকুলোচাইটৰ এটা ব্যৱহাৰযোগ্য প্ৰটোকল

সকলোতে ব্যৱহাৰ হোৱা একেটা সংমিশ্ৰণ নাই, সেয়েহে ব্যৱহাৰ কৰা সংমিশ্ৰণটো উল্লেখ কৰক। নথিভুক্ত তিনিটা ভিন্ন পদ্ধতিয়ে এই বৈচিত্ৰ্য দেখুৱায়।

ধ্ৰুপদী Brecher-ধৰণৰ পদ্ধতিত পটাছিয়াম অক্সালেটৰ সৈতে প্ৰায় 0.5 percent নিউ মিথিলিন ব্লু ব্যৱহাৰ কৰা হয়। ভালদৰে মিহলোৱা EDTA তেজৰ সৈতে ইয়াক সমান আয়তনত মিহলাই কোঠাৰ উষ্ণতাত প্ৰায় 10 ৰ পৰা 15 মিনিট ইনকিউবেট কৰা হয়। লাহে লাহে পুনৰ মিহলোৱাৰ পাছত পাতল কীলক-আকৃতিৰ ফিল্ম প্ৰস্তুত কৰি বতাহত শুকুৱাই ফিক্স নকৰাকৈ 100x তেল-নিমজ্জন অবজেক্টিভেৰে পৰীক্ষা কৰা হয়। ৰেটিকুলোচাইট গণনাৰ NCBI পদ্ধতিত এই কাৰ্যক্ৰম আৰু ইয়াৰ সৈতে ব্যৱহাৰ কৰা গণনাৰ কাঠামো বৰ্ণনা কৰা হৈছে।

Dacie আৰু Lewis-ৰ ভিন্ন পদ্ধতিত চাইট্ৰেট ছেলাইনত 1.0 percent নিউ মিথিলিন ব্লু ব্যৱহাৰ কৰা হয়। ইয়াৰ সৈতে 2 ৰ পৰা 4 গুণ আয়তনৰ তেজ মিহলাই ফিল্ম প্ৰস্তুত কৰাৰ আগতে 37 C-ত 15 ৰ পৰা 20 মিনিট ৰখা হয়। CLSI H44 পদ্ধতিৰ এক শেহতীয়া সমন্বয়মূলক প্ৰয়োগত pH 7.4-ৰ ফছফেট-বাফাৰযুক্ত ছেলাইনত অধিক পাতল 0.1 percent দ্ৰৱণ ব্যৱহাৰ কৰা হৈছিল; 20 C-ত 10 মিনিট ইনকিউবেট কৰা হৈছিল আৰু ফিক্সেশ্যন কৰা হোৱা নাছিল। এই কথা 2026-ৰ NMB সমন্বয়মূলক অধ্যয়নত জনোৱা হৈছে।

সকলো ভিন্ন পদ্ধতিতে গণনাৰ নিয়ম একে। কোনো কোষত অন্তত দুটা পৃথক নীলা ৰঞ্জিত দানা বা সূতা-সদৃশ খণ্ড থাকিলে তাক ৰেটিকুলোচাইট হিচাপে গণনা কৰক; ইয়াৰ ফলত অকলশৰীয়া ৰঞ্জকৰ জমা বাদ পৰে। নিয়মীয়া কামত অন্তত 1,000 লোহিত ৰক্তকণিকা গণনা কৰি ৰেটিকুলোচাইটৰ পৰিমাণ শতাংশ হিচাপে জনাওক। শতাংশ কম হ'লে পৰিসংখ্যাগতভাৱে অধিক কোষ গণনা কৰিব লাগে। CLSI H44 পদ্ধতিৰ এটা পৰ্যালোচনাত উল্লেখ কৰা হৈছে যে ৰেটিকুলোচাইট প্ৰায় 1 percent হ'লে গণনাৰ তাৰতম্য 5 percent-লৈ আনিবলৈ প্ৰায় 4,400 কোষ গণনা কৰা প্ৰয়োজন; এই তথ্য De Gruyter-ৰ CLSI H44 পৰ্যালোচনাত আছে। Miller অকুলাৰ ডিস্কে বৃহৎ সংখ্যাৰ গণনা ব্যৱহাৰিক কৰি তোলে। ৰঞ্জক ছেকি লওক বা সতেজকৈ প্ৰস্তুত কৰক, কাৰণ অধঃক্ষেপে দানাযুক্ত অন্তৰ্ভুক্তিৰ দৰে ৰূপ লয়।

একে প্ৰস্তুতিত হাইঞ্জ বডি

একে সুপ্ৰাভাইটেল ফিল্মত হাইঞ্জ বডিও দেখা যাব পাৰে। এইবোৰ অৱশিষ্ট RNA নহয়, বৰং জাৰিত আৰু স্বাভাৱিক গঠন হেৰুওৱা হিম'গ্লবিনৰ সমষ্টি। নিউ মিথিলিন ব্লুৰ প্ৰস্তুতিত এইবোৰ গোলাকাৰ গঠন হিচাপে দেখা যায়, প্ৰায়ে এটাকৈ আৰু কোষপৰ্দাৰ ওচৰত থাকে, আৰু ৰেটিকুলোফিলামেণ্টীয় পদাৰ্থতকৈ পাতল নীলা ৰং লয়। ফিক্সেশ্যন আৰু প্ৰতিবিপৰীত ৰঞ্জনৰ মাজেৰে এইবোৰ ভালদৰে অক্ষুণ্ণ নাথাকে, সেয়েহে ফিক্স নকৰা ফিল্ম পৰীক্ষা কৰক। এটা শেহতীয়া প্ৰটোকলত 20 microliters EDTA তেজৰ সৈতে 20 microliters 1 percent নিউ মিথিলিন ব্লু ব্যৱহাৰ কৰি 15 মিনিট ইনকিউবেট কৰাৰ পাছত 250 লোহিত ৰক্তকণিকাৰ মাজত হাইঞ্জ বডি থকা কোষৰ পৰিমাণ গণনা কৰা হৈছিল। এই কথা সেই পদ্ধতি প্ৰকাশ কৰা PMC অধ্যয়নত দিয়া আছে।

দুটা পাৰ্থক্য জানিলে ভুল ব্যাখ্যা এৰাব পাৰি। প্ৰথমতে, মিথাইল ভায়োলেট আৰু ক্ৰিষ্টেল ভায়োলেটে নিউ মিথিলিন ব্লুতকৈ হাইঞ্জ বডিক অধিক তীব্ৰভাৱে ৰঞ্জিত কৰে, যিদৰে ScienceDirect-ৰ হাইঞ্জ বডি বিষয়ক আলোচনাত উল্লেখ কৰা হৈছে। ৰেটিকুলোচাইট আৰু হাইঞ্জ বডি একেলগে মূল্যায়ন কৰাৰ সময়ত নিউ মিথিলিন ব্লু সুবিধাজনক পছন্দ, কিন্তু কেৱল হাইঞ্জ বডিৰ বাবে ই আটাইতকৈ শক্তিশালী ৰঞ্জক নহয়। দ্বিতীয়তে, আলফা থেলাছেমিয়া ট্ৰেইটত HbH অন্তৰ্ভুক্তিয়ে সুপ্ৰাভাইটেল ৰঞ্জনৰ পাছত কোষজুৰি বহুতো সূক্ষ্ম বিন্দু সৃষ্টি কৰে; আনহাতে ধ্ৰুপদী হাইঞ্জ বডি সংখ্যাত কম, আকাৰত ডাঙৰ আৰু প্ৰায়ে কোষপৰ্দাৰ সৈতে সংযুক্ত থাকে। ৰঞ্জকৰ জমা হৈছে তৃতীয় সদৃশ বস্তু: ই কোষবোৰৰ ফ'কাছৰ সমতলৰ বাহিৰত থাকে আৰু পৰ্যবেক্ষণ ক্ষেত্ৰভেদে বেলেগ হয়।

ব্ৰিলিয়েণ্ট ক্ৰেছিল ব্লু আৰু নিউ মিথিলিন ব্লুৰ তুলনা

দুয়োটা ৰঞ্জকেই ৰেটিকুলোচাইটৰ বাবে সুপ্ৰাভাইটেল ৰঞ্জক, কিন্তু মানকীকৰণত এটাক অগ্ৰাধিকাৰ দিয়া হয়। ৰক্তবিজ্ঞানৰ মানকীকৰণৰ আন্তঃৰাষ্ট্ৰীয় পৰিষদৰ সৈতে যুটীয়াভাৱে বিকশিত আৰু CLSI H44 মানদণ্ডৰ পৃষ্ঠাত তালিকাভুক্ত CLSI H44-A2 ৰেটিকুলোচাইট পদ্ধতিয়ে EDTA তেজৰ নিউ মিথিলিন ব্লু ৰঞ্জনক হাতেৰে কৰা তুলনামূলক পদ্ধতি হিচাপে নিৰ্ধাৰণ কৰিছে। ধ্ৰুপদী ৰক্তবিজ্ঞানৰ শিক্ষাতো দৃশ্যমান ৰূপৰ বিষয়ে একেই মত পোৱা যায়: নিউ মিথিলিন ব্লুৱে অধিক গাঢ় আৰু সমসত্ত্ব সূতা-সদৃশ ৰঞ্জন দিয়ে, আনহাতে ব্ৰিলিয়েণ্ট ক্ৰেছিল ব্লুৰ ফল বেচ আৰু নমুনাভেদে অধিক সলনি হয়।

এই মৰ্যাদাৰ সৈতে এটা সীমাবদ্ধতাও উল্লেখ কৰা প্ৰয়োজন। ICSH-ৰ বিশ্লেষক মূল্যায়ন নিৰ্দেশিকাই হাতেৰে কৰা নিউ মিথিলিন ব্লু অণুবীক্ষণক প্ৰসংগ-মানভিত্তিক তুলনাৰ পদ্ধতি হিচাপে গ্ৰহণ কৰে, কিন্তু ইয়াক পৰ্যবেক্ষকৰ বিচাৰনিৰ্ভৰ আৰু তুলনামূলকভাৱে কম নিখুঁত বুলি কয়; য'ত উপলব্ধ, তাত ফ্ল' চাইটোমেট্ৰিক প্ৰসংগ-মান পদ্ধতিক অগ্ৰাধিকাৰ দিয়া হয়। 2022-ত 100 নমুনাৰ এটা তুলনাত ব্যৱহৃত বিশ্লেষকৰ তুলনাত নিউ মিথিলিন ব্লুতকৈ ব্ৰিলিয়েণ্ট ক্ৰেছিল ব্লুৰ ফলত কম পদ্ধতিগত বিচ্যুতি পোৱা গৈছিল। এই তথ্য ৰঞ্জন-পদ্ধতিৰ PMC তুলনামূলক অধ্যয়নত প্ৰকাশ কৰা হৈছে। শিক্ষাৰ্থীৰ বাবে যুক্তিসংগত সাৰাংশটো হ'ল: নিউ মিথিলিন ব্লুক মানকীকৃত হাতেৰে কৰা তুলনামূলক মান হিচাপে ব্যৱহাৰ কৰক, যিকোনো স্থানীয় ব্ৰিলিয়েণ্ট ক্ৰেছিল ব্লু পদ্ধতি ইয়াৰ সৈতে বা স্বয়ংক্ৰিয় পদ্ধতিৰ সৈতে তুলনা কৰি যাচাই কৰক, আৰু দুয়োটা ক্ষেত্ৰতে হাতেৰে কৰা অণুবীক্ষণৰ ফলত অধিক বিক্ষিপ্ততা আশা কৰক। পুৰণি মানকীকৰণৰ সাহিত্যতো বাণিজ্যিক ৰঞ্জকৰ লটভেদে তাৰতম্য থকাৰ বাবে বিশুদ্ধ Azure B-ক ৰাসায়নিকভাৱে অধিক বিশুদ্ধ বিকল্প হিচাপে সমৰ্থন কৰা হৈছিল; এই কথা Azure B-ৰ বিষয়ে Marshall-ৰ অধ্যয়নত আছে। ইয়াৰ পৰাই বুজা যায় কিয় পদ্ধতিৰ আলোচনাত বিকাৰকৰ মান এতিয়াও প্ৰাসংগিক হৈ আছে।

সাধাৰণ ভুলবোৰ এৰোৱা

বেছিভাগ বিফল প্ৰস্তুতিৰ কাৰণ চাৰিটা ভুল। নিউ মিথিলিন ব্লু N-ৰ সলনি সাধাৰণ মিথিলিন ব্লু অৰ্ডাৰ কৰিলে ৰঞ্জন দুৰ্বল হয় ৰাসায়নিক কাৰণত, কাৰিকৰী কৌশলৰ বাবে নহয়। পৰ্যবেক্ষণৰ আগতে ফিক্স কৰা বা প্ৰতিবিপৰীত ৰঞ্জন কৰিলে সুপ্ৰাভাইটেল সংকেত আঁতৰি যায়। ৰঞ্জকৰ অধঃক্ষেপক দানা বুলি গণনা কৰিলে ফল বেছি হয়; দুটা দানাৰ নিয়ম আৰু ছেকা ৰঞ্জক ব্যৱহাৰে এই ভুল ৰোধ কৰে। ৰেটিকুলোচাইটৰ শতাংশ কম থাকোঁতে অতি কম কোষ গণনা কৰিলে দেখাত নিখুঁত এটা সংখ্যা পোৱা যায়, কিন্তু তাৰ আস্থাৰ সীমা বহল থাকে। প্ৰতিটো ভুলৰ একেটা লক্ষণ দেখা যায়: বিকাৰকৰ ধাপতে নিৰ্ধাৰিত হোৱা ফলৰ বাবে অণুবীক্ষণ পৰ্যবেক্ষকে অণুবীক্ষণ যন্ত্ৰটোক দোষ দিয়ে।