মিথিলিন ব্লু আৰু নাইট্ৰিক অক্সাইড: NOS, cGMP, আৰু ৰক্তনলীৰ সংকেত প্ৰেৰণ

প্ৰশ্নটো সহজ যেন লাগে: মিথিলিন ব্লুৱে নাইট্ৰিক অক্সাইড দমন কৰেনে? পৰীক্ষাগাৰত ইয়াৰ উত্তৰ চাৰিটা পৃথক প্ৰশ্নত ভাগ হয়, আৰু প্ৰতিটোৰ বাবে পৰীক্ষামূলক যাচাই বেলেগ। এইবোৰ একাকাৰ কৰাটোৱেই মিথিলিন ব্লু আৰু নাইট্ৰিক অক্সাইডৰ বিষয়ে লিখা কথাবোৰ আত্মবিশ্বাসী অথচ অস্পষ্ট যেন লগাৰ মুখ্য কাৰণ।

নাইট্ৰিক অক্সাইডৰ সংকেতক চাৰিটা সংযোগ থকা এটা শৃংখল বুলি ভাবক। নাইট্ৰিক অক্সাইড ছিন্থেজ তৈয়াৰ কৰিবলৈ এটা জিনৰ ট্ৰান্সক্ৰিপচন হয়। এনজাইমটোৱে আৰ্জিনিনক নাইট্ৰিক অক্সাইডলৈ ৰূপান্তৰ কৰে। গেছটোৱে আন কিবা এটাৰ সৈতে বিক্ৰিয়া কৰাৰ আগতে ব্যাপন হৈ নিজৰ লক্ষ্যস্থানলৈ যায়। দ্ৰৱণীয় গুৱানাইলেট ছাইক্লেজে ইয়াক চিনাক্ত কৰে আৰু চক্ৰীয় GMP তৈয়াৰ কৰে। প্ৰতিটো সংযোগতে মিথিলিন ব্লুৰ প্ৰভাৱৰ বিষয়ে প্ৰকাশিত তথ্য আছে, কিন্তু প্ৰমাণবোৰ বেলেগ বেলেগ পৰীক্ষামূলক প্ৰস্তুতি, ঘনত্ব আৰু আইছ’ফৰ্মৰ পৰা আহিছে। এটা সংযোগৰ ফলাফলে আন এটা সংযোগত কাৰ্য ঘটাৰ প্ৰমাণ নিদিয়ে।

প্ৰচলিত শৃংখলটো সহজ ভাষাত

ৰক্তনলীৰ প্ৰাচীৰত সাধাৰণ ক্ৰমটো এনেধৰণৰ। এটা উদ্দীপকে এণ্ডোথেলিয়াল কোষৰ ওপৰত ক্ৰিয়া কৰে। eNOS বা NOS3 নামেৰে জনাজাত এণ্ডোথেলিয়াল নাইট্ৰিক অক্সাইড ছিন্থেজে অলপ সময়ৰ বাবে সামান্য নাইট্ৰিক অক্সাইড উৎপন্ন কৰে। গেছটো ব্যাপন হৈ কাষৰ মসৃণ পেশীকোষত প্ৰৱেশ কৰে, দ্ৰৱণীয় গুৱানাইলেট ছাইক্লেজৰ বিজাৰিত লোহাযুক্ত হীমৰ সৈতে বান্ধ খায়, আৰু GTPৰ পৰা চক্ৰীয় GMPলৈ ৰূপান্তৰ ত্বৰান্বিত কৰে। চক্ৰীয় GMPয়ে প্ৰ’টিন কাইনেজ G সক্ৰিয় কৰে, কেলচিয়ামৰ নিয়ন্ত্ৰণ সলনি হয়, আৰু পেশী শিথিল হয়।

আন এটা শৃংখল পৃথককৈ মনত ৰখা উচিত। সংক্ৰমণৰ সময়ত বা চাইট’কাইনৰ সংস্পৰ্শত কোষবোৰে এটা বেলেগ এনজাইমৰ ট্ৰান্সক্ৰিপচন কৰে—প্ৰৰোচনাযোগ্য নাইট্ৰিক অক্সাইড ছিন্থেজ বা iNOS, যাক NOS2 বুলিও কোৱা হয়। ই eNOSতকৈ অধিক পৰিমাণৰ আৰু অধিক দীৰ্ঘস্থায়ী নাইট্ৰিক অক্সাইড প্ৰবাহ উৎপন্ন কৰে। তৃতীয় এটা আইছ’ফৰ্ম, নিউৰ’নেল NOS বা nNOS, আকৌ আন এক প্ৰসংগৰ সৈতে জড়িত। কোনো গৱেষণা-পত্ৰত আইছ’ফৰ্ম নিৰ্দিষ্ট নকৰাকৈ নাইট্ৰিক অক্সাইড ছিন্থেজ বুলি ক’লে, ৰৈ কোনটো জোখা হৈছিল সেয়া পৰীক্ষা কৰক। মিথিলিন ব্লুৱে কেনেকৈ ইলেক্ট্ৰন স্থানান্তৰ কৰে তাৰ সামগ্ৰিক বিৱৰণত সাধাৰণভাৱে ৰেডক্স লক্ষ্যবোৰৰ ক্ষেত্ৰতো একেই কথা কোৱা হৈছে: এই স্থানান্তৰ-ব্যৱস্থাই অকলে একো নকৰে, আৰু প্ৰতিটো মূৰত থকা অংশীদাৰেই ফলাফল নিৰ্ধাৰণ কৰে।

জোখা চক্ৰীয় GMPও বিভিন্ন প্ৰক্ৰিয়াৰ সমন্বিত ফলসূচক, প্ৰত্যক্ষ এনজাইম পৰীক্ষা নহয়। ইয়াৰ মাত্ৰাই ছাইক্লেজৰ দ্বাৰা সংশ্লেষণৰ পৰা ফছফ’ডাইএষ্টাৰেজৰ দ্বাৰা হোৱা ভাঙন বিয়োগ কৰাৰ ফল প্ৰতিফলিত কৰে; ৰক্তনলীৰ মসৃণ পেশীত বিশেষকৈ PDE5 এই ভাঙনৰ সৈতে জড়িত। সেয়েহে চক্ৰীয় GMP কমাৰ অৰ্থ হৈছে চিনাক্তকাৰীলৈ কম সংকেত গৈছে। কেৱল ইয়াৰ পৰা কোনটো সংযোগ বিফল হ’ল সেয়া জানিব নোৱাৰি।

সংযোগ 1: কম iNOS এনজাইম তৈয়াৰ হয়

বেক্টেৰিয়াৰ লাইপ’পলিছেকাৰাইড, ইণ্টাৰফেৰন গামা বা দুয়োটাৰে উদ্দীপিত নিগনিৰ মেক্ৰ’ফেজত মিথিলিন ব্লুৱে iNOS প্ৰ’টিনৰ প্ৰত্যাশিত বৃদ্ধি ৰোধ কৰিছিল আৰু মেক্ৰ’ফেজৰ ট্ৰান্সক্ৰিপচন পৰীক্ষাসমূহত iNOS মেছেঞ্জাৰ RNA যথেষ্ট দমন কৰিছিল। ইয়াত গুৰুত্বপূৰ্ণ কথাটো হৈছে কি সলনি হোৱা নাছিল। দমনকাৰী I কাপ্পা B আলফাৰ ভাঙন, NF কাপ্পা B আৰু STAT1ৰ ফছফৰাইলেচন, আৰু সেই কাৰকবোৰৰ কোষকেন্দ্ৰলৈ গতি বহুলাংশে অক্ষুণ্ণ আছিল। যিটো কমিছিল সেয়া আছিল DNAৰ সৈতে সিহঁতৰ বন্ধন; ক্ৰ’মেটিন ইমিউন’প্ৰেচিপিটেচনে iNOS প্ৰমোটাৰত সিহঁতৰ উপস্থিতি কমা দেখুৱাই এই কথা নিশ্চিত কৰিছিল।

এয়া এনজাইমৰ পৰিমাণ নিৰ্ধাৰণৰ আগৰ স্তৰত ঘটা জিন-নিয়ন্ত্ৰণমূলক প্ৰভাৱ, ইতিমধ্যে থকা এনজাইমৰ তাৎক্ষণিক অৱৰোধ নহয়। ই প্ৰদাহজনিত সংকেত প্ৰেৰণৰ অংশ, য’ত প্ৰ’টিন তৈয়াৰ হোৱাৰ আগতে ট্ৰান্সক্ৰিপচন কাৰকবোৰ এটা প্ৰমোটাৰৰ সৈতে বান্ধ খাব লাগে। বিশ্ৰাম অৱস্থাত থকা ৰক্তনলীৰ স্বাভাৱিকভাৱে প্ৰকাশিত eNOSৰ বিষয়ে ই প্ৰত্যক্ষভাৱে একো নকয়, আৰু ইয়াক সেই সীমাৰ ভিতৰতে বৰ্ণনা কৰা উচিত।

সংযোগ 2: ইতিমধ্যে থকা NOS এনজাইমে লাহে লাহে কাম কৰে

এন্দুৰৰ ওপৰত কৰা এটা অধ্যয়নে বেলেগ এটা স্তৰ পৰীক্ষা কৰিছিল। চেতন অৱস্থাত থকা মতা এন্দুৰক শিৰাৰ ভিতৰত লাইপ’পলিছেকাৰাইড দিয়া হৈছিল, তাৰ তিনি ঘণ্টাৰ পাছত শিৰাৰ ভিতৰত হয় ছেলাইন অথবা 3 mg per kg পৰিমাণত মিথিলিন ব্লু দিয়া হৈছিল। তাৰ পাছত হাইপ’থেলামাছৰ NOS সক্ৰিয়তা অধ্যয়নত চিহ্নিত আৰ্জিনিন ছিট্ৰুলিনলৈ ৰূপান্তৰ হোৱাৰ ভিত্তিত হাইপ’থেলামাছৰ মধ্যীয় ভিত্তিভাগত নাইট্ৰিক অক্সাইড ছিন্থেজৰ সক্ৰিয়তা জোখা হৈছিল। কেৱল চাপ আৰু ছেলাইনে কিছু কেলচিয়াম-স্বাধীন সক্ৰিয়তা প্ৰৰোচিত কৰিছিল, আৰু লাইপ’পলিছেকাৰাইডে ইয়াক নিয়ন্ত্ৰণ গোটৰ মাত্ৰাৰ প্ৰায় দহ গুণলৈ বৃদ্ধি কৰিছিল। মিথিলিন ব্লুৱে প্ৰৰোচিত দুয়োটা উপাদান আঁতৰাইছিল। সেই কলাত, সেই পৰিমাণ আৰু সময়বিন্দুত কেলচিয়াম-নিৰ্ভৰ স্বাভাৱিক সক্ৰিয়তা সলনি হোৱা নাছিল।

ফলাফলটো যিদৰে লিখা হৈছে ঠিক সেইদৰেই বুজক: সেই পৰিস্থিতিত জোখা iNOS-ধৰণৰ সক্ৰিয়তা দমন হৈছিল। ই জিনৰ প্ৰকাশৰ জোখ নহয়, আৰু eNOS বা nNOSৰ তুলনাত iNOSৰ প্ৰতি স্থায়ী নিৰ্বাচনশীলতাৰ প্ৰমাণো নহয়। বিশুদ্ধীকৃত এনজাইমৰ কামে এই সাৱধানতাৰ প্ৰয়োজন আৰু স্পষ্ট কৰে। বিশুদ্ধীকৃত নাইট্ৰিক অক্সাইড ছিন্থেজৰ প্ৰত্যক্ষ পৰীক্ষাত মিথিলিন ব্লুৱে 30 micromolarত ছিট্ৰুলিনৰ গঠন সম্পূৰ্ণৰূপে বন্ধ কৰিছিল। ছুপাৰঅক্সাইড ডিছমিউটেজ নথকাকৈ অৰ্ধেক দমনৰ ঘনত্ব প্ৰায় 5.3 micromolar আৰু ইয়াৰ উপস্থিতিত 9.2 micromolar আছিল, যিদৰে বিশুদ্ধীকৃত NOS আৰু গুৱানাইলেট ছাইক্লেজৰ তুলনাত প্ৰকাশ কৰা হৈছে। বিশুদ্ধীকৃত nNOSৰ আন এটা অধ্যয়নে এনজাইমৰ সৈতে বান্ধ খাই থকা হীমৰ জাৰণ জড়িত থকাৰ ইংগিত দিছিল। ব্যৱহাৰিক শিক্ষাটো হৈছে, পৃথকীকৃত ব্যৱস্থাত NOSৰ প্ৰত্যক্ষ দমন বাস্তৱ, কিন্তু হাইপ’থেলামাছৰ ফলাফলটোক টানি মিথিলিন ব্লুৱে সকলো ঠাইতে সকলো স্বাভাৱিকভাৱে প্ৰকাশিত NOSক অক্ষত ৰাখে বুলি সাধাৰণ দাবী কৰিব নোৱাৰি।

সংযোগ 3: নাইট্ৰিক অক্সাইড লক্ষ্যস্থান পোৱাৰ আগতেই নষ্ট হয়

এনজাইমৰ অৱৰোধৰ বাহিৰেও আন কিবা কাৰণে চক্ৰীয় GMP কমিব পাৰে বুলি আটাইতকৈ স্পষ্ট প্ৰদৰ্শনটো আহিছে কালচাৰত বৃদ্ধি কৰা শহাপহুৰ ফুসফুসীয় ধমনীৰ মসৃণ পেশীকোষৰ পৰা। পৰীক্ষাৰ বিন্যাসত নাইট্ৰিক অক্সাইড দাতা পোনপটীয়াকৈ যোগ কৰি অন্তৰ্জাত NOS সম্পূৰ্ণৰূপে এৰাই চলা হৈছিল। তাৰ পাছত ৰক্তনলীৰ মসৃণ পেশীৰ ছুপাৰঅক্সাইড অধ্যয়নত মিথিলিন ব্লুৱে তথাপিও চক্ৰীয় GMPৰ সঁহাৰি দমন কৰে নে নাই সেয়া পৰীক্ষা কৰা হৈছিল।

1ৰ পৰা 100 micromolarলৈ তিনিটা দাতা পৰীক্ষা কৰা হৈছিল: S নাইট্ৰ’ছ’ L চিষ্টেইন, ছ’ডিয়াম নাইট্ৰ’প্ৰুছাইড, আৰু MPANO নামৰ এটা স্থিৰ, এমিন গোট আঁতৰোৱা সমধৰ্মী যৌগ। সকলোবোৰে চক্ৰীয় GMP প্ৰায় 1.5 গুণৰ পৰা 12 গুণলৈ বৃদ্ধি কৰিছিল। 10 micromolar মিথিলিন ব্লুৱে প্ৰথম দুটাৰ সঁহাৰি 51ৰ পৰা 100 শতাংশলৈ দমন কৰিছিল আৰু MPANOৰ সঁহাৰি অপৰিৱৰ্তিত ৰাখিছিল। যদি মিথিলিন ব্লুৱে কেৱল ছাইক্লেজৰ অনুঘটক স্থান অৱৰোধ কৰি থাকিলহেঁতেন, তেন্তে দাতাভেদে এই নিৰ্বাচনশীলতা ব্যাখ্যা কৰা কঠিন হ’লহেঁতেন, কাৰণ তিনিওটাই একেটা পৰৱৰ্তী এনজাইমৰ ওপৰত ক্ৰিয়া কৰে।

তাৰ পাছত তিনিটা নিয়ন্ত্ৰণ পৰীক্ষাই প্ৰক্ৰিয়াটো ছুপাৰঅক্সাইডৰ সৈতে জড়িত বুলি নিশ্চিত কৰিছিল। প্ৰথমতে, জেন্থিন আৰু জেন্থিন অক্সিডেজ ব্যৱহাৰ কৰি কোষৰ বাহিৰত ছুপাৰঅক্সাইড উৎপন্ন কৰাত একেই আৰ্হি দেখা গৈছিল: CYSNO আৰু নাইট্ৰ’প্ৰুছাইডৰ সঁহাৰি বন্ধ হৈছিল, MPANOৰ সঁহাৰি অক্ষুণ্ণ আছিল। দ্বিতীয়তে, মিথিলিন ব্লুৱে পৰিমাণ আৰু সময়ৰ ওপৰত নিৰ্ভৰ কৰি মসৃণ পেশীকোষৰ পৰা ছুপাৰঅক্সাইড উৎপন্ন কৰাইছিল, যিটো চাইট’ক্ৰ’ম cৰ বিজাৰণৰ দ্বাৰা জোখা হৈছিল। তৃতীয়তে, ছুপাৰঅক্সাইড ডিছমিউটেজে দমন সম্পূৰ্ণৰূপে ৰোধ কৰিছিল, কিন্তু কেটালেজে কৰা নাছিল। ইয়াৰ পৰা সেই পৰীক্ষামূলক প্ৰস্তুতিত তাৎক্ষণিক কাৰক হিচাপে হাইড্ৰ’জেন পেৰক্সাইডৰ সলনি ছুপাৰঅক্সাইডৰ দিশলৈ ইংগিত পোৱা যায়।

পৰীক্ষাটোৰ সহ-কালচাৰ সংস্কৰণটো উল্লেখ কৰা উচিত, কাৰণ ই প্ৰভাৱটো ক’ত ঘটে সেয়া দেখুৱায়। কভাৰস্লিপত থকা এণ্ডোথেলিয়াল কোষবোৰ অলপ সময়ৰ বাবে মসৃণ পেশীকোষৰ সৈতে একেলগে কালচাৰ কৰা হৈছিল। ফলত মৌলিক অৱস্থাত নিৰ্গত এণ্ডোথেলিয়াল কাৰকে মসৃণ পেশীৰ চক্ৰীয় GMP তিনিৰ পৰা আঠ গুণলৈ বৃদ্ধি কৰিছিল। যিকোনো এটা কোষীয় অংশত আগতীয়াকৈ মিথিলিন ব্লু প্ৰয়োগ কৰাত সেই সংকেত কমিছিল, আৰু ছুপাৰঅক্সাইড ডিছমিউটেজে এণ্ডোথেলিয়াল অংশত আগতীয়াকৈ প্ৰয়োগ কৰাৰ প্ৰভাৱ আংশিকভাৱে উলটাই দিছিল। অৰ্থাৎ, মিথিলিন ব্লুৱে মসৃণ পেশীৰ সংকেত-চিনাক্তকাৰী কোষৰ ভিতৰত ক্ৰিয়া কৰাটো একেবাৰেই প্ৰয়োজনীয় নহয়। ই যাত্ৰাপথত বাৰ্তাবাহক আঁতৰাই সংকেত কমাব পাৰে। মিথিলিন ব্লুৰ গৱেষণা পঢ়াৰ নিৰ্দেশিকাই ইয়াক এটা সাধাৰণ নিয়ম হিচাপে গণ্য কৰে: আণৱিক লক্ষ্যৰ নাম কোৱাৰ আগতে হস্তক্ষেপ কোনটো কোষীয় অংশত হৈছিল সেয়া কওক।

ইয়াক NOSৰ দমন বুলি কোৱাটো ভুল হ’ব। দাতাবোৰে কাম কৰিবলৈ কোনো ছিন্থেজ পৰ্যায়ৰ প্ৰয়োজন হোৱা নাছিল, তথাপিও সংকেত কমিছিল।

সংযোগ 4: চিনাক্তকাৰীয়েই কম সঁহাৰি দিয়ে

দ্ৰৱণীয় গুৱানাইলেট ছাইক্লেজৰ ওপৰত প্ৰত্যক্ষ প্ৰভাৱ আছে, কিন্তু ঘনত্ব গুৰুত্বপূৰ্ণ। ওপৰত উল্লেখ কৰা বিশুদ্ধীকৃত এনজাইমৰ তুলনাত নাইট্ৰিক অক্সাইডে উদ্দীপিত কৰা ছাইক্লেজৰ অৰ্ধেক দমনৰ বাবে প্ৰায় 60 micromolar মিথিলিন ব্লুৰ প্ৰয়োজন হৈছিল, আনহাতে NOSৰ অৰ্ধেক দমন প্ৰায় 5ৰ পৰা 9 micromolarত হৈছিল। আনকি 1 millimolarতো অৱৰোধ সম্পূৰ্ণ হোৱা নাছিল, কেৱল আংশিক আছিল। এয়া প্ৰায় ছয়ৰ পৰা এঘাৰ গুণৰ পাৰ্থক্য। সেয়েহে কম micromolar ঘনত্বৰ কোষীয় পৰীক্ষাত চক্ৰীয় GMP কমিলে কেৱল সেই মানটোৰ ভিত্তিত ইয়াক ছাইক্লেজৰ নিৰ্বাচিত দমন বুলি ক’ব নোৱাৰি।

পৰৱৰ্তী এটা ৰেডক্স অধ্যয়নে আন এটা সাৱধানতা যোগ কৰিছিল: মিথিলিন ব্লুৱে নাইট্ৰিক অক্সাইডৰ দ্বাৰা সক্ৰিয় ছাইক্লেজক এনে এটা প্ৰক্ৰিয়াৰে নিষ্ক্ৰিয় কৰিছিল যিটো বায়ুৰ দ্বাৰা হীমৰ লোহাৰ সাধাৰণ জাৰণৰ পৰা পৃথক। গতিকে চিনাক্তকাৰীটো ক্ষতিগ্ৰস্ত হ’ব পাৰে, কিন্তু ৰাসায়নিক প্ৰক্ৰিয়াটো এতিয়াও নিশ্চিত হোৱা নাই। ঘনত্বৰ এই পাৰ্থক্যৰ অৰ্থ হৈছে, কম micromolar সংস্পৰ্শত প্ৰথমে ছুপাৰঅক্সাইড আৰু NOSৰ প্ৰভাৱ বাদ দিব পৰা যায় নে নাই সেয়া পৰীক্ষা কৰা উচিত। ফছফ’ডাইএষ্টাৰেজৰ নিয়ন্ত্ৰণ পৰীক্ষাও ইয়াতেই প্ৰাসংগিক। ভাঙন জোখা বা বন্ধ কৰা নহ’লে, চক্ৰীয় GMPৰ কম সঞ্চয় কম সংশ্লেষণ, দ্ৰুত ভাঙন বা দুয়োটাৰে সৈতে সামঞ্জস্যপূৰ্ণ।

ইয়াক কিয় ৰক্তচাপৰ এটা মাত্ৰ দাবীত সীমাবদ্ধ কৰিব নোৱাৰি

প্ৰতিটো সংযোগ বেলেগ বেলেগ ব্যৱস্থাত প্ৰতিষ্ঠা কৰা হৈছিল। মেক্ৰ’ফেজৰ ট্ৰান্সক্ৰিপচন হাইপ’থেলামাছৰ এনজাইম সক্ৰিয়তা নহয়। লাইপ’পলিছেকাৰাইডৰ পাছত হাইপ’থেলামাছৰ সক্ৰিয়তা বিশ্ৰাম অৱস্থাৰ এণ্ডোথেলিয়াল টান নহয়। সহ-কালচাৰত মৌলিক অৱস্থাত নিৰ্গত এণ্ডোথেলিয়াল কাৰক এগ’নিষ্টে উদ্দীপিত কৰা ৰক্তনলীৰ প্ৰসাৰণ নহয়। 10 micromolar মিথিলিন ব্লুৰ সংস্পৰ্শত থকা কালচাৰৰ ফুসফুসীয় ধমনীৰ কোষ মানুহৰ ৰক্তসঞ্চালন নহয়। এইবোৰ একাকাৰ কৰি মিথিলিন ব্লুৱে নাইট্ৰিক অক্সাইড বন্ধ কৰি ৰক্তচাপ বৃদ্ধি কৰে বুলি ক’লে, নিয়ন্ত্ৰণ পৰীক্ষাবোৰে যিবোৰ পাৰ্থক্য বজাই ৰাখিবলৈ তৈয়াৰ কৰা হৈছিল, সেইবোৰেই বাদ পৰে।

তিনিটা যাচাইয়ে ব্যাখ্যাটো যথাযথ ৰাখে। প্ৰথমতে, আইছ’ফৰ্মৰ নাম কওক: বিশ্ৰাম অৱস্থাৰ ৰক্তনলীৰ টানৰ বাবে eNOS, প্ৰৰোচিত প্ৰদাহজনিত প্ৰবাহৰ বাবে iNOS, আৰু স্নায়ুকোষীয় তথা কিছুমান বিশুদ্ধীকৃত এনজাইমৰ প্ৰসংগত nNOS। দ্বিতীয়তে, নাইট্ৰিক অক্সাইডৰ সংকেত কেনেকৈ যোগান ধৰা হৈছে সেয়া কওক: অন্তৰ্জাত সংশ্লেষণ, মৌলিক এণ্ডোথেলিয়াল নিৰ্গমন, নে CYSNO, নাইট্ৰ’প্ৰুছাইড বা MPANOৰ দৰে কোনো নিৰ্দিষ্ট দাতা। কাৰণ স্থিৰ দাতাটোৱে মিথিলিন ব্লুৰ প্ৰভাৱ প্ৰতিৰোধ কৰিছিল, কিন্তু অস্থিৰ দাতাবোৰে কৰা নাছিল। তৃতীয়তে, ঘনত্ব আৰু সঁহাৰি পুনৰুদ্ধাৰৰ কথা কওক: ছুপাৰঅক্সাইড ডিছমিউটেজে সঁহাৰি পুনৰুদ্ধাৰ কৰাটোৱে ছুপাৰঅক্সাইডৰ ভূমিকা সূচায়, কেটালেজৰ বিফলতাই সেই প্ৰস্তুতিত হাইড্ৰ’জেন পেৰক্সাইডৰ ভূমিকাৰ বিপক্ষে যায়, জেন্থিন অক্সিডেজে একেই প্ৰভাৱ দেখুওৱাটোৱে সেই প্ৰক্ৰিয়া যথেষ্ট বুলি দেখুৱায়, আৰু বিশুদ্ধীকৃত এনজাইমৰ পৰীক্ষাই প্ৰত্যক্ষ অনুঘটনীয় প্ৰভাৱক যাত্ৰাপথৰ ক্ষয়ৰ পৰা পৃথক কৰে।

সংক্ষিপ্ত সাৰাংশটো হ’ল এই। মিথিলিন ব্লুক ছাইক্লেজৰ নিৰ্বাচিত অৱৰোধকতকৈ নাইট্ৰিক অক্সাইডৰ পৰা চক্ৰীয় GMPলৈ সংকেত প্ৰেৰণৰ একাধিক স্থানত বিঘ্ন ঘটোৱা পদাৰ্থ হিচাপে গণ্য কৰাই অধিক যথাযথ। প্ৰস্তুতি আৰু ঘনত্বৰ ওপৰত নিৰ্ভৰ কৰি ই iNOSৰ ট্ৰান্সক্ৰিপচন কাৰকৰ বন্ধন কমাব পাৰে, NOS এনজাইম পোনপটীয়াকৈ দমন কৰিব পাৰে, ছুপাৰঅক্সাইড উৎপন্ন কৰি নাইট্ৰিক অক্সাইডৰ উপলব্ধতা কমাব পাৰে, আৰু নাইট্ৰিক অক্সাইডে সক্ৰিয় কৰা ছাইক্লেজৰ কাৰ্য ব্যাহত কৰিব পাৰে। ৰক্তনলীৰ অধ্যয়নত চক্ৰীয় GMP সংকেত প্ৰেৰণৰ ভূমিকা আৰু কোষীয় পৰীক্ষাত ব্যৱহৃত নাইট্ৰিক অক্সাইড দাতাসমূহৰ তুলনা—প্ৰতিটোৱে এই শাখাবোৰৰ এটাকৈ অধিক বিশদভাৱে আলোচনা কৰে। আনহাতে ৰেডক্স প্ৰভাৱক এনজাইমৰ প্ৰভাৱৰ পৰা পৃথক কৰিবলৈ ব্যৱহৃত পদ্ধতিসমূহে ব্যাখ্যা কৰে যে এই গৱেষণা-সাহিত্যত ছুপাৰঅক্সাইড ডিছমিউটেজ, কেটালেজ আৰু এটা স্থিৰ দাতাৰ নিয়ন্ত্ৰণ পৰীক্ষা একেলগে ইমান সঘনাই কিয় দেখা যায়।

মিথিলিন ব্লুৰ পাছত চক্ৰীয় GMPৰ কম মানে শৃংখলটো ভাঙিছে বুলি চিনাক্ত কৰে। কেৱল নিয়ন্ত্ৰণ পৰীক্ষাবোৰেহে কোনটো সংযোগ ভাঙিল সেয়া ক’ব পাৰে।