প্ৰবন্ধ
যেতিয়া মিথিলিন ব্লুৱে ইয়াক জোখাৰ পৰীক্ষাটোতেই ব্যাঘাত ঘটায়

এটা পৰীক্ষাগাৰে সাধাৰণ পালন-ঘনত্বৰ মিথিলিন ব্লুত জেব্ৰাফিছৰ ভ্ৰূণ পালন কৰে, তাৰ পাছত দুটা পদ্ধতিৰে বিপাক জোখে। প্ৰথম দিনা Seahorse বিশ্লেষকে অক্সিজেনৰ ব্যৱহাৰ বৃদ্ধি পোৱা বুলি দেখুৱায়। চতুৰ্থ আৰু পঞ্চম দিনা Alamar Blue প্লেটে শক্তি ব্যয় হ্ৰাস পোৱা বুলি দেখুৱায়। একে ৰঞ্জক, একে মাছৰ বংশধাৰা, কিন্তু বিপৰীত সিদ্ধান্ত। তাৰ পাছত আহে নিঃশব্দ নিয়ন্ত্ৰণটো: মিথিলিন ব্লু আৰু Alamar Blue বিকাৰক থকা, কিন্তু একেবাৰেই মাছ নথকা কূপবোৰেও কেৱল বিকাৰক থকা কূপতকৈ কম উজ্জ্বল সংকেত দিয়ে। ফলৰ এটা অংশ আছিল জৈৱিক। আনটো অংশ আছিল ৰঞ্জকে নিজৰ পৰীক্ষাৰ নিজেই নম্বৰ দিয়া। বিকাশমান জেব্ৰাফিছত মিথিলিন ব্লুৰ বিষয়ে 2025 চনত Communications Biology-ত প্ৰকাশিত এটা অধ্যয়নত নথিভুক্ত এই বিভাজনেই মিথিলিন ব্লুৰ পৰীক্ষাজনিত ব্যাঘাতৰ সাধাৰণ ৰূপ। সেইবাবেই ৰেডক্স-সক্ৰিয় ৰঞ্জকৰ বাবে এনে নিয়ন্ত্ৰণ লাগে, যিবোৰ সাধাৰণ পৰীক্ষাধীন যৌগৰ বাবে প্ৰয়োজন নহয়।
ৰেজাজুৰিন পৰীক্ষাই প্ৰকৃততে কি দেখুৱায়
Alamar Blue হৈছে ৰেজাজুৰিন দ্ৰৱণৰ এটা ব্ৰেণ্ড নাম। সেয়ে Alamar Blue-ত মিথিলিন ব্লুৰ ব্যাঘাত আৰু ৰেজাজুৰিন পৰীক্ষাত মিথিলিন ব্লুৰ ব্যাঘাতে একেটা সংঘাতকে বুজায়। জাৰিত ৰেজাজুৰিন নীলা আৰু ইয়াৰ প্ৰতিপ্ৰভা অতি দুৰ্বল। বিপাকীয়ভাৱে সক্ৰিয় কোষে ইয়াক বিজাৰিত কৰি ৰেজৰুফিনলৈ ৰূপান্তৰ কৰে, যিটো গোলাপী আৰু প্ৰায় 560 nm উত্তেজন আৰু 590 nm নিৰ্গমনত তীব্ৰ প্ৰতিপ্ৰভা দেখুৱায়। প্ৰস্তুতকাৰকৰ মাইক্ৰ’প্লেট প্ৰট’কল অনুসৰি ইয়াৰ ব্যৱহাৰযোগ্য পৰিসৰ উত্তেজনৰ বাবে প্ৰায় 530 ৰ পৰা 570 nm আৰু নিৰ্গমনৰ বাবে 580 ৰ পৰা 610 nm। বিজাৰণ আৰু আগুৱাই গ’লে ৰেজৰুফিন ডাইহাইড্ৰ’ৰেজৰুফিনলৈ ৰূপান্তৰিত হয়, যাৰ প্ৰতিপ্ৰভা দুৰ্বল। সেয়ে কূপত অত্যধিক কোষ ৰাখিলে বা অত্যধিক সময় দিলে কেলিব্ৰেচন বক্ৰৰ উচ্চ মানৰ মূৰটো তললৈ বেঁকা হয়।
ইলেক্ট্ৰনবোৰ মূলতঃ NADH আৰু NADPH-ৰ পৰা আহে, চাইট’ছল, মাইক্ৰ’ছম আৰু মাইট’কণ্ড্ৰিয়াত থকা কোষীয় ৰিডাক্টেজ আৰু ডায়াফ’ৰেজৰ জৰিয়তে। সেয়েহে এই পৰিমাপৰ ফলে সমন্বিত বিজাৰণ ক্ষমতা দেখুৱায়; ই জীৱিত কোষৰ গণনা নহয় আৰু মাইট’কণ্ড্ৰিয়াৰ পৰিমাপো নহয়। অধিক সংকেতৰ অৰ্থ অধিক কোষ, প্ৰতিটো কোষত অধিক বিজাৰণকাৰী প্ৰবাহ, অথবা দুয়োটাই হ’ব পাৰে। NADH-ৰ পথ সলনি কৰা যৌগে এটা কোষো নমৰাকৈ সংকেত সলনি কৰিব পাৰে। এই বাক্যটো মনত ৰাখক, কাৰণ NADH-ৰ পথ সলনি কৰাটোৱেই মিথিলিন ব্লুৰ স্বাভাৱিক কাম।
ব্যাঘাতৰ দুটা পথ, হ্ৰাস পোৱা এটা সংকেত
মিথিলিন ব্লুৱে দুটা স্বতন্ত্ৰ পথেৰে ৰেজাজুৰিনৰ পৰিমাপৰ ফল বিকৃত কৰে, আৰু যিকোনো এটা পথেই অকলে আপাত প্ৰতিপ্ৰভা কমাব পাৰে।
পথ 1 আলোকীয়। মিথিলিন ব্লুৱে ৰঙা অঞ্চলত তীব্ৰভাৱে পোহৰ শোষণ কৰে। ইয়াৰ মন’মাৰৰ বেণ্ড প্ৰায় 660 ৰ পৰা 665 nm-ত আৰু ডাইমাৰৰ কান্ধসদৃশ অংশ প্ৰায় 607 ৰ পৰা 610 nm-ত থাকে; এই অংশৰ শেষৰ ফালে বিস্তৃত হোৱা অংশটো প্ৰায় 590 nm-ত থকা ৰেজৰুফিনৰ নিৰ্গমনৰ দিশলৈকে যায়। পোহৰৰ পথত থকা ৰঞ্জকে উত্তেজক পোহৰৰ কিছু অংশ শোষণ কৰে আৰু নিৰ্গত প্ৰতিপ্ৰভাৰ কিছু অংশ পুনৰ শোষণ কৰে। এই আভ্যন্তৰীণ ফিল্টাৰ প্ৰভাৱে ৰেজৰুফিনৰ উৎপাদন অপৰিৱৰ্তিত থাকিলেও কূপৰ সংকেত ম্লান কৰে। ৰঞ্জকৰ অৱস্থাৰ সৈতে বৰ্ণালীও সলনি হয়: পানী আৰু চাইক্ল’ডেক্সট্ৰিন দ্ৰৱণত মিথিলিন ব্লুৰ বৰ্ণালীৰ কাৰক বিশ্লেষণে মন’মাৰ, ডাইমাৰ আৰু আশ্ৰয়দাতা-অতিথি কমপ্লেক্সক 500 ৰ পৰা 700 nm-ত পৃথক বিলুপ্তি সহগ থকা তিনিটা প্ৰজাতি হিচাপে চিহ্নিত কৰে। সেয়ে ঘনত্ব, সমষ্টিকৰণ আৰু বন্ধনৰ সৈতে আলোকীয় ত্ৰুটিৰ পৰিমাণ সলনি হয়। পৰীক্ষাত সাধাৰণ আলোকীয় ক্ষীণীকৰণক আণৱিক প্ৰতিপ্ৰভা-দমনৰ পৰা পৃথক কৰিবলৈ তলত বৰ্ণিত স্পাইক পুনৰুদ্ধাৰ পৰীক্ষা ব্যৱহাৰ কৰক, কাৰণ দুয়োটাৰ সংশোধন পদ্ধতি বেলেগ।
পথ 2 ৰেডক্স প্ৰতিযোগিতা। জাৰিত মিথিলিন ব্লুৱে NAD(P)H-ৰ পৰা ইলেক্ট্ৰন গ্ৰহণ কৰি বৰ্ণহীন লিউকো মিথিলিন ব্লু গঠন কৰে। আণৱিক অক্সিজেনে ইয়াক পুনৰ জাৰিত কৰি নীলা ৰূপলৈ ঘূৰাই আনে আৰু একে সময়তে হাইড্ৰ’জেন পেৰ’ক্সাইডকে ধৰি অক্সিজেনৰ বিজাৰিত উৎপাদ সৃষ্টি কৰে। এই চক্ৰৰ প্ৰতিটো পাকত এনে বিজাৰণকাৰী সমতুল্য খৰচ হয়, যিবোৰে অন্যথা ৰেজাজুৰিন বিজাৰিত কৰিলেহেঁতেন। ইয়াৰ লগতে অক্সিজেনো খৰচ হয় আৰু আনুষংগিকভাৱে পেৰ’ক্সাইড সৃষ্টি হয়। সেয়ে Alamar Blue-ৰ সংকেত হ্ৰাস পোৱাৰ অৰ্থ হ’ব পাৰে যে ইলেক্ট্ৰন ৰেজৰুফিনলৈ যোৱাৰ পৰিৱৰ্তে মিথিলিন ব্লুৰ চক্ৰৰ মাজেৰে গৈছে। কোষবোৰে যিয়েই নকৰক, প্লেটত ইয়াক হ্ৰাস পোৱা বিপাক হিচাপে পঢ়া হয়। একে ৰসায়নে অক্সিজেন জোখা যন্ত্ৰত বিপৰীতধৰ্মী ফান্দ এটাও ব্যাখ্যা কৰে: অক্সিজেনে বিজাৰিত ৰঞ্জকক পুনৰ জাৰিত কৰিলে কোনো জৈৱিক উপাদান নথকাকৈও ৰাসায়নিকভাৱে অক্সিজেন খৰচ হয়। সেয়ে শ্বসন পৰিমাপতো কেৱল ৰঞ্জকযুক্ত ব্লেংক নিয়ন্ত্ৰণ থাকিব লাগে, যিদৰে মাইট’কণ্ড্ৰিয়াৰ ক্ষেত্ৰত অক্সিজেন, ATP আৰু ঝিল্লী বিভৱৰ পৰিমাপৰ ফলৰ তুলনাই ব্যাখ্যা কৰে।
সংকেতৰ পৰিৱৰ্তন আৰু জৈৱিক পৰিৱৰ্তন দুয়োটাই সত্য হ’ব পাৰে
জেব্ৰাফিছৰ অধ্যয়নটো মূল্যৱান হোৱাৰ মূল কাৰণেই হৈছে যে ই সহজে এটাক সত্য আৰু আনটোক মিছা বুলি ধৰি লোৱা নাই। জৈৱিক পৰিৱৰ্তন প্ৰকৃত আছিল: দুয়োটা পালন-ঘনত্বতে 1-দিনীয়া ভ্ৰূণৰ ভিত্তিগত অক্সিজেন ব্যৱহাৰ বৃদ্ধি পাইছিল, কম ঘনত্বত ATP-সংযুক্ত শ্বসন বৃদ্ধি পাইছিল, JC-10 প্ৰ’বৰে জোখা ঝিল্লী বিভৱ দ্বিতীয় দিনা বৃদ্ধি পাইছিল, আৰু মাইট’কণ্ড্ৰিয়াৰ কমপ্লেক্সৰ ট্ৰান্সক্ৰিপ্ট প্ৰথম আৰু চতুৰ্থ দিনা হ্ৰাস পাইছিল। পৰীক্ষাজনিত বিকৃতিও প্ৰকৃত আছিল: Alamar Blue ধাপৰ আগতে তিনিবাৰ ধোৱাৰ পাছতো মাছৰ মূৰ, মুখ আৰু ঘ্ৰাণ-সম্পৰ্কীয় অঞ্চলত দৃশ্যমান নীলা ৰং থাকি গৈছিল। ৰঞ্জক আৰু বিকাৰক থকা কোষবিহীন কূপবোৰেও নিজে নিজেই সামান্য কিন্তু তাৎপৰ্যপূৰ্ণ পৰিমাণৰ প্ৰতিপ্ৰভা হেৰুৱাইছিল। চতুৰ্থ আৰু পঞ্চম দিনা জীৱদেহৰ Alamar Blue সংকেতৰ হ্ৰাস কোষবিহীন প্ৰভাৱতকৈ অধিক আছিল। সেয়ে লেখকসকলে ফলটো সামান্য বিকৃত লেন্সৰ মাজেৰে দেখা প্ৰকৃত বিপাকীয় পৰিৱৰ্তন বুলি ব্যাখ্যা কৰিছিল। এইটোৱেই সঠিক ধাৰণাগত আৰ্হি। ৰেডক্স চক্ৰ চলোৱা আৰু একে সময়তে নীলা ৰঞ্জক হিচাপে পোহৰ শোষণ কৰা পদাৰ্থই সাধাৰণতে অধ্যয়নাধীন পথ আৰু ৰিপ’ৰ্টাৰৰ ৰসায়ন দুয়োটাতে একে সময়তে প্ৰভাৱ পেলাব। নিয়ন্ত্ৰণৰ কাম হৈছে প্ৰতিটোৰ অৱদানৰ পৰিমাণ নিৰ্ণয় কৰা, কোনো এটাক কাল্পনিক বুলি ঘোষণা কৰা নহয়। চাইক্ল’ডেক্সট্ৰিনৰ সৈতে বন্ধনৰ গৱেষণাৰ পৰাও এটা সম্পৰ্কিত শিক্ষা পোৱা যায়: আশ্ৰয়দাতা অণুৱে ৰঞ্জকটোক আবদ্ধ কৰি ৰখাত ৰং লাগি থকা আৰু গ্লুক’জ গ্ৰহণৰ সক্ৰিয়কৰণ একেলগে কমি গৈছিল। ইয়াৰ পৰা বুজা গৈছিল যে বিপাকীয় প্ৰভাৱৰ বাবে বিয়পি থকা ৰেডক্স পটভূমিৰ সলনি ৰঞ্জকৰ প্ৰত্যক্ষ আন্তঃক্ৰিয়া প্ৰয়োজন আছিল। ৰঞ্জকৰ ভৌতিক পৰিমাপৰ ফলক কাৰ্যগত পৰিমাপৰ ফলৰ সৈতে সম্পৰ্কিত কৰাটোৱেই কাৰ্যপ্ৰণালীক পৰীক্ষাজনিত বিকৃতিৰ পৰা পৃথক কৰাৰ সঠিক উপায়। ৰঞ্জকভিত্তিক বিপাকীয় দাবী মূল্যায়নৰ নিৰ্দেশিকাই এই অভ্যাসটো আৰু আগুৱাই নিয়ে।
দুয়োটাক পৃথক কৰা নিয়ন্ত্ৰণসমূহ
ৰেজাজুৰিন প্লেটৰ পৰা পোৱা মিথিলিন ব্লুৰ যিকোনো ফল ব্যাখ্যা কৰাৰ আগতে এইবোৰ কৰক। ঘনত্ব, মাধ্যম, ইনকিউবেচনৰ সময় আৰু আলোকায়ন কোষীয় পৰীক্ষাৰ সৈতে হুবহু মিলিব লাগিব, কাৰণ ওপৰৰ প্ৰতিটো পথ এইবোৰৰ ওপৰত নিৰ্ভৰশীল।
| # | নিয়ন্ত্ৰণ | ই কি ধৰা পেলায় | উত্তীৰ্ণ হোৱাৰ চৰ্ত | চৰ্ত পূৰণ নকৰিলে |
|---|---|---|---|---|
| 1 | মাধ্যম আৰু ৰঞ্জক, বিকাৰক নাই, কোষ নাই | পৰীক্ষাৰ তৰংগদৈৰ্ঘ্যত ৰঞ্জকৰ পটভূমি সংকেত | কোষীয় সংকেতৰ তুলনাত পটভূমি সংকেত কম | প্ৰতিটো ঘনত্বৰ পৃথক ব্লেংক বিয়োগ কৰক, সকলোৰে বাবে এটা ব্লেংক কেতিয়াও ব্যৱহাৰ নকৰিব |
| 2 | মাধ্যম আৰু বিকাৰক, ৰঞ্জক নাই, কোষ নাই | বিকাৰকৰ স্বতঃস্ফূৰ্ত বিজাৰণ | ইনকিউবেচনৰ সময়ছোৱাত কম আৰু স্থিৰ ভিত্তি সংকেত | ইনকিউবেচনৰ সময় কমাওক, মাধ্যম সলনি কৰক, অথবা অধিক ন্যূনতম সংকেত স্তৰ মানি লওক |
| 3 | মাধ্যম, ৰঞ্জক আৰু বিকাৰক, কোষ নাই | ৰঞ্জক-বিকাৰকৰ প্ৰত্যক্ষ ৰাসায়নিক আন্তঃক্ৰিয়া | পৰিমাপৰ অনিশ্চয়তাৰ সীমাৰ ভিতৰত নিয়ন্ত্ৰণ 2-ৰ সৈতে একে | বিচ্যুতি উল্লেখ কৰক, ইয়াক কোষৰ বাবে হোৱা বুলি নক’ব |
| 4 | বাহক দ্ৰৱণ থকা কূপ আৰু ৰঞ্জক থকা কূপত ৰেজৰুফিনৰ স্পাইক যোগ | আলোকীয় ক্ষীণীকৰণ বা প্ৰতিপ্ৰভা-দমন | দুয়োটা মাধ্যমতে সমান পুনৰুদ্ধাৰ | ৰঞ্জকৰ প্ৰতিটো মাত্ৰাৰ বাবে ক্ষতিৰ পৰিমাণ নিৰ্ণয় কৰি সংশোধন কৰক, অথবা পৰিমাপৰ পদ্ধতি সলনি কৰক |
| 5 | ধোৱা আৰু নোধোৱা অৱস্থাত কোষবিহীন অৱশিষ্ট বহন | আপোনাৰ ধোৱাৰ ধাপৰ পাছত ৰৈ যোৱা ৰঞ্জক | ধোৱাৰ ফলত কোষবিহীন প্ৰভাৱ আঁতৰি যায় | কোষৰ ভিতৰত সোমোৱা ৰঞ্জক থাকি যায়, সেয়ে নিয়ন্ত্ৰণ 3 আৰু 4 এতিয়াও প্ৰযোজ্য |
নিয়ন্ত্ৰণ 3 আৰু 4 হৈছে সেই যোৰ, যিটো বেছিভাগ গৱেষণা-পত্ৰই বাদ দিয়ে আৰু বেছিভাগ মিথিলিন ব্লু-সম্পৰ্কীয় গৱেষণা-পত্ৰৰ প্ৰয়োজন হয়। নিয়ন্ত্ৰণ 3-এ ৰাসায়নিক প্ৰভাৱ ধৰা পেলায়, নিয়ন্ত্ৰণ 4-এ আলোকীয় প্ৰভাৱ ধৰা পেলায়। দুয়োটাই মিলি কোনো জৈৱিক দাবী কৰাৰ আগতে পৰীক্ষাজনিত বিকৃতিৰ সীমা নিৰ্ধাৰণ কৰে।
স্বতন্ত্ৰ পদ্ধতিৰ পৰিমাপ, প্ৰতিটোৰে নিজস্ব সীমাবদ্ধতা
কেৱল এটা দ্বিতীয় পৰীক্ষাই প্ৰথমটোৰ বৈধতা নিশ্চিত নকৰে। স্বতন্ত্ৰ পদ্ধতিৰ প্ৰতিটো পৰিমাপে এটা পথৰ প্ৰভাৱ এৰাই যায়, কিন্তু আন এটাৰ প্ৰভাৱৰ সন্মুখীন হৈ থাকে। সেয়ে এনে সমন্বয় বাছক যাৰ সীমাবদ্ধতাবোৰ একে ঠাইত নপৰে। ৰেডক্স-সক্ৰিয় যৌগৰ বাবে পৰীক্ষা-বাছনিৰ মেট্ৰিক্সে এই যোৰ বাছনিৰ যুক্তি ব্যাখ্যা কৰে, আৰু ঝিল্লী বিভৱৰ প্ৰ’ব-সম্পৰ্কীয় নিৰ্দেশিকাই প্ৰতিপ্ৰভাৰ সীমাবদ্ধতাবোৰ বিশদভাৱে আলোচনা কৰে।
Seahorse-ৰ অক্সিজেন ব্যৱহাৰৰ পৰিমাপে ৰেজৰুফিনলৈ যোৱা ইলেক্ট্ৰনৰ সলনি অক্সিজেনলৈ যোৱা ইলেক্ট্ৰন অনুসৰণ কৰে। ইয়াৰ ফলত ৰিপ’ৰ্টাৰৰ ৰসায়ন সম্পূৰ্ণৰূপে এৰাব পাৰি, কিন্তু ৰঞ্জকেও ৰাসায়নিকভাৱে অক্সিজেন খৰচ কৰে। সেয়ে সম্পূৰ্ণ মাধ্যমত মাইট’কণ্ড্ৰিয়াবিহীন ৰঞ্জক ব্লেংক বাধ্যতামূলক। ATP লুচিফাৰেজ পৰীক্ষাই ৰেজৰুফিনৰ প্ৰতিপ্ৰভাৰ সলনি জৈৱদীপ্তি ব্যৱহাৰ কৰে আৰু সেয়ে আলোকীয় ওপৰা-ওপৰি আৰু ৰিডাক্টেজ প্ৰতিযোগিতা দুয়োটাই এৰাই চলে। অৱশ্যে ই সংশ্লেষণৰ প্ৰবাহৰ সলনি ATP-ৰ মুঠ ভাণ্ডাৰৰ ভাৰসাম্য দেখুৱায়। TMRM বা JC-10-ৰ দৰে ঝিল্লী বিভৱৰ প্ৰ’বে আধানৰ প্ৰৱণতা বজাই আছে নে নাই সেয়া দেখুৱায়। কিন্তু ইহঁতৰ প্ৰতিপ্ৰভা একেটা দৃশ্যমান পৰিসৰত হয়, য’ত ৰঞ্জকে পোহৰ শোষণ কৰে। সেয়ে ৰৈ যোৱা নীলা ৰঙে এইবোৰৰ পৰিমাপো জটিল কৰে, আৰু ৰঞ্জকৰ প্ৰতিটো মাত্ৰাত কেৱল ৰঞ্জকযুক্ত ব্লেংক প্ৰয়োজন হয়। শ্বসন কমপ্লেক্সৰ উপএককৰ ট্ৰান্সক্ৰিপ্ট পৰিমাপে আলোকীয় প্ৰভাৱ সম্পূৰ্ণৰূপে এৰাই চলে আৰু ঘণ্টাজোৰা পৰিৱৰ্তন একত্ৰিতভাৱে দেখুৱায়। ই মিনিটৰ সময়-পৰিসৰত কৰা প্লেটৰ পৰিমাপৰ পৰিপূৰক।
সেয়ে মিথিলিন ব্লুৰ বিষয়ে এটা বিপাকীয় দাবীৰ ন্যূনতম বিশ্বাসযোগ্য প্ৰমাণসমষ্টি হ’ল: নিয়ন্ত্ৰণ 1 ৰ পৰা 4-সহ এটা ৰেজাজুৰিন ফল, লগতে ভিন্ন ভৌতিক নীতিৰ ওপৰত ভিত্তি কৰা ৰেজাজুৰিনবিহীন এটা সমাপ্তি-সূচক, আৰু পৰিৱৰ্তনে কোষৰ সংখ্যা, প্ৰতিটো কোষৰ বিজাৰণকাৰী প্ৰবাহ, নে দুয়োটাই প্ৰতিফলিত কৰে সেই বিষয়ে স্পষ্ট বক্তব্য। ইয়াতকৈ কম হ’লে পাঠকে কম সক্ৰিয় বিপাক আৰু কম উজ্জ্বল কূপৰ মাজত পাৰ্থক্য কৰিব নোৱাৰে।
ব্যাঘাত-নিয়ন্ত্ৰণৰ কৰ্মপত্ৰ
ৰঞ্জকৰ সৈতে ৰেডক্স ৰিপ’ৰ্টাৰ একেলগে ব্যৱহাৰ কৰা প্ৰতিটো পৰীক্ষাৰ বাবে এই কৰ্মপত্ৰ পৰীক্ষাগাৰৰ নোটবুকত নকল কৰক। এইটো এই প্ৰবন্ধৰ নিজস্ব ব্যৱহাৰযোগ্য উপকৰণ: ৰঞ্জকৰ প্ৰতিটো ঘনত্বৰ বাবে এটা শাৰী পূৰণ কৰক।
A. সংকেতৰ পথসমূহ। প্ৰতিটো ঘনত্বৰ বাবে লিপিবদ্ধ কৰক: মন’মাৰ বনাম ডাইমাৰৰ প্ৰত্যাশিত অৱস্থা (কম মাইক্ৰ’ম’লাৰ বনাম দহৰ ঘৰৰ মাইক্ৰ’ম’লাৰ আৰু তাতকৈ অধিক), কোষবিহীন কূপত অন্তিম সামগ্ৰীৰ 590 nm-ত শোষণমান, আৰু ৰেজৰুফিন স্পাইকৰ পুনৰুদ্ধাৰৰ শতাংশ। পুনৰুদ্ধাৰ প্ৰায় 90 শতাংশৰ তললৈ নামিলে, সেই মাত্ৰাৰ সকলো প্ৰতিপ্ৰভা মানক আলোকীয়ভাৱে হ্ৰাস পোৱা বুলি গণ্য কৰক, জৈৱিকভাৱে সঠিক বুলি নহয়।
B. ৰাসায়নিক পৰীক্ষা। প্ৰতিবাৰ পৰিমাপ লোৱাৰ সময়ত কোষবিহীন ৰঞ্জক-আৰু-বিকাৰকৰ প্ৰতিপ্ৰভাক কেৱল বিকাৰক থকা ভিত্তি সংকেতৰ শতাংশ হিচাপে লিপিবদ্ধ কৰক। সময়ৰ সৈতে বিচ্যুতি বৃদ্ধি পালে, পৰীক্ষা চলি থকাৰ সময়ত ৰঞ্জকে ৰিপ’ৰ্টাৰ ব্যৱস্থাৰ সৈতে বিক্ৰিয়া কৰি আছে, আৰু কেৱল শেষবাৰৰ পৰিমাপে বিভ্ৰান্ত কৰিব। সময় অনুসৰি পৰিমাপ লোৱা বা বেলেগ ৰিপ’ৰ্টাৰ ব্যৱহাৰ কৰাৰ কথা বিবেচনা কৰক।
C. জৈৱিক ফলৰ পাৰস্পৰিক যাচাই। এই পৰীক্ষাৰ বাবে বাছি লোৱা স্বতন্ত্ৰ পদ্ধতিৰ পৰিমাপ, তাৰ নিজস্ব ৰঞ্জক ব্লেংক, আৰু ৰেজাজুৰিনৰ ফল প্ৰকৃত হ’লে প্ৰত্যাশিত ফল উল্লেখ কৰক। প্ৰকৃত বিপাকীয় হ্ৰাসে এটা স্বতন্ত্ৰ সমাপ্তি-সূচকক সামঞ্জস্যপূৰ্ণ দিশত সলনি কৰিব লাগে। স্বতন্ত্ৰ সমাপ্তি-সূচকৰ ফল মিল নাখালে, এতিয়াই কোনোটো ফলকে বিশ্বাস নকৰিব আৰু দুয়োটাৰ গড় লোৱাৰ সলনি পৰীক্ষাৰ নক্সা নতুনকৈ সাজক।
D. সিদ্ধান্তৰ বাক্য। এই ৰূপত এটা বাক্য লিখক: উল্লেখিত মাত্ৰা আৰু পৰ্যায়ত ৰেজাজুৰিন সংকেত উল্লেখিত পৰিমাণে সলনি হৈছে, যাৰ উল্লেখিত পৰিমাণ কোষবিহীন পৰীক্ষাজনিত বিকৃতি, আৰু স্বতন্ত্ৰ সমাপ্তি-সূচক (একমত বা অমত)। কোনো তথ্য খালী থাকিলে পৰীক্ষাটো সম্পূৰ্ণ হোৱা নাই।
মিথিলিন ব্লু এতিয়াও এটা উপযোগী বিপাকীয় প্ৰ’ব, আৰু জেব্ৰাফিছৰ গৱেষণাই এনে মাত্ৰাত প্ৰকৃত মাইট’কণ্ড্ৰিয়াজনিত প্ৰভাৱ দেখুৱায়, যিমান বহু প্ৰতিষ্ঠানে প্ৰতিদিনে নলাত ঢালি দিয়ে। ৰঞ্জকটোৱে কেৱল এনে যন্ত্ৰৰে ইয়াক জোখাটো বিচাৰে, যাৰ পৰিমাপত ই নিজে প্ৰভাৱ পেলাব নোৱাৰে। ইয়াৰ বাবে কেৱল ৰঞ্জকযুক্ত কূপ, এটা স্পাইক পুনৰুদ্ধাৰ পৰীক্ষা আৰু ভিন্ন ভৌতিক নীতিৰ ওপৰত নিৰ্মিত এটা পৰিমাপৰ ব্যৱস্থা কৰক। তেতিয়া ব্যাঘাত আৰু ফান্দ হৈ নাথাকে; ই সংখ্যাৰে প্ৰকাশ কৰিব পৰা এটা পৰিমাণ হৈ পৰে।