ሜቲሊን ብሉ እና ባርቶኔላ፦ የላቦራቶሪ ግኝቶች እና የክሊኒካዊ ማስረጃ ገደቦች

የማዳበሪያ ሳህን እና ታካሚ «ኢንፌክሽን» የሚለውን ቃል ይጋራሉ፤ ነገር ግን የሚወክለውን ጽንሰ ሐሳብ አይጋሩም። በሳህኑ ውስጥ፣ ኢንፌክሽን በአጋር ላይ ያሉ የባክቴሪያ ቅኝ ግዛቶች ብዛት ነው። በታካሚው ውስጥ ግን፣ በሕዋሳት እና በደም ሥሮች ውስጥ ያሉ ባክቴሪያዎች፣ በደምና በሕብረ ሕዋሳት ውስጥ የሚዘዋወሩ መድኃኒቶች እና ከሥራው የተወሰነውን የሚያከናውን የበሽታ መከላከያ ሥርዓት ናቸው። ሁለቱን ከደባለቁ፣ አስደናቂ የላቦራቶሪ ቁጥር ሕክምና መስሎ መታየት ይጀምራል። ለይተው ካዩአቸው ግን፣ ያው ቁጥር ትክክለኛውን ትርጉም ይይዛል፦ የሚቀጥለውን ሙከራ ለማድረግ የሚያነሳሳ ምክንያት።

ይህ በሜቲሊን ብሉ እና በባርቶኔላ ላይ የተዘጋጀ ግምገማ ዋና ተግባር ይህንን ልዩነት ማስጠበቅ ነው። ከአንድ የምርምር ቡድን የወጡ ሁለት የላቦራቶሪ ጥናቶች ሜቲሊን ብሉን እያደገ ባልሆነ Bartonella henselae ላይ ፈትነዋል። ሁለቱም በመስታወት እና በፕላስቲክ ዕቃዎች ውስጥ ከፍተኛ እንቅስቃሴ እንዳሳየ ዘግበዋል። አንዳቸውም በሰው ላይ አልፈተኑትም።

ተመራማሪዎች የእድገት መቆሚያ ደረጃን ለምን ይፈትናሉ?

አብዛኛው የአንቲባዮቲክ ምርመራ እያደጉ ያሉ ሕዋሳትን ይጠቀማል። ይህ ሞዴል የበለጠ አስቸጋሪ የሆነውን ሁኔታ አይወክልም፦ መከፋፈል ያቆሙ እና እያደጉ ያሉ አቻ ሕዋሳቶቻቸውን የሚገድሉ መድኃኒቶችን የሚቋቋሙ ሕዋሳት።

ባርቶኔላ በሰውነት ውስጥ፣ ቀይ የደም ሕዋሳትን እና የደም ሥሮችን ውስጠኛ ግድግዳ የሚሸፍኑ ሕዋሳትን ጨምሮ፣ ሊቆይ ይችላል። ስለዚህ ቡድኑ B. henselae ወደ እድገት መቆሚያ ደረጃ ከገባ በኋላ የትኞቹ የጸደቁ መድኃኒቶች ሊገድሉት እንደሚችሉ ጠየቀ። እያደጉ ባሉ ሕዋሳት ላይ ያለ ዝቅተኛ MIC፣ በእድገት መቆሚያ ደረጃ ያሉትን ሕዋሳት የመግደል ችሎታ አልተነበየም። ሪፋምፒን በጣም ዝቅተኛ MIC ቢኖረውም፣ እድገታቸው የቆመ ሕዋሳትን በደካማ ሁኔታ ገድሏል፤ ከፍ ያሉ የMIC እሴቶች ያሏቸው ውህዶች ግን በጥሩ ሁኔታ ገድለዋቸዋል። እንዲህ ያለ ጥናታዊ ጽሑፍ ለማንበብ አጠቃላይ ዘዴ የሚፈልጉ አንባቢዎች፣ ስለ ሜቲሊን ብሉ ምርምር አነባበብ በሚገልጸው መመሪያ ውስጥ ያገኙታል።

የመጀመሪያው ማጣሪያ፦ ሊ እና ባልደረቦቹ፣ 2019

በ2019 በAntibiotics የታተመው የእድገት መቆሚያ ደረጃ ማጣሪያ ጥናት አንድ ዝርያ ብቻ፣ B. henselae JK53፣ ተጠቅሟል። ይህም 10 percent የከብት ጽንስ ሴረም በያዘ የSchneider ማዳበሪያ ውስጥ፣ በ37 C እና በ5 percent CO2 ተዳብሏል። የአንድ ቀን ማዳበሪያዎች በአብዛኛው የተበታተኑ፣ እየተከፋፈሉ ያሉ ሕዋሳት ነበሩ። በአንድ mL ወደ 10 በ8ኛ ኃይል የሚጠጉ ቅኝ ግዛት መመሥረት የሚችሉ አሃዶች ያሏቸው የአምስት ቀን ማዳበሪያዎች፣ በእድገት መቆሚያ ደረጃ እንደሆኑ ተወስደው ነበር፤ በዓይን የሚታዩ ስብስቦችም ነበሯቸው።

ምርመራው SYBR Green Iን ከፕሮፒዲየም አዮዳይድ ጋር ተጠቅሟል፤ መለኪያውም በሕይወት ያሉ እና በአይሶፕሮፓኖል የተገደሉ ሕዋሳት ድብልቆችን በመጠቀም ተስተካክሏል። ሜቲሊን ብሉ ጠንካራ ቀለም ስላለው፣ አዎንታዊ ውጤቶቹ በማይክሮስኮፕ ከተረጋገጡ በኋላ፣ የበለጠ ጥብቅ መለኪያ በሆነው በደም አጋር ላይ ባሉ ቅኝ ግዛቶች ቆጠራ ተረጋግጠዋል።

በ50 micromolar ከተፈተኑ 1,581 የጸደቁ መድኃኒቶች መካከል፣ ሜቲሊን ብሉ በፕሌት አንባቢው መለኪያ 16 percent፣ በማይክሮስኮፕ ደግሞ 25 percent ሕያው ሕዋሳትን አስቀርቷል። ዳፕቶማይሲን 21 percent፣ የተለያዩ አዞሎች ከ22 እስከ 27 percent፣ ጀንታማይሲን 32 percent፣ ኤሪትሮማይሲን 66 percent፣ ሲፕሮፍሎክሳሲን 74 percent አስቀርተዋል። ፒርቪኒየም ፓሞኤት በአንባቢው መሣሪያ የበለጠ ጠንካራ ውጤት ያሳየ ቢመስልም፣ የራሱ ፍሎረሰንስ ስላለው በማይክሮስኮፕ ሊመዘን አልቻለም።

እያደገ ባለ B. henselae ላይ የሜቲሊን ብሉ MIC ከ0.08 እስከ 0.16 micrograms per mL ነበር። በአምስት ቀን ማዳበሪያ ውስጥ እድገታቸው በቆመ ሕዋሳት ላይ በ5 micrograms per mL ሲፈተን፣ ከአንድ ቀን ተጋላጭነት በኋላ የቅኝ ግዛቶች ብዛት ሊገኙ እስከማይችሉበት ደረጃ ወርዷል። ይህም ዳፕቶማይሲን እና ፒርቪኒየም ፓሞኤት በተፈተኑበት ክምችት ካሳዩት ውጤት ጋር ተመሳሳይ ነበር። የመግደል ሂደቱን በጊዜ ሂደት የሚከታተል ሌላ የተለየ ሙከራ 10 micrograms per mL ተጠቅሟል። እነዚህ የላቦራቶሪ ተጋላጭነት ደረጃዎች እንጂ ለሰው የሚሰጡ መጠኖች አይደሉም፤ ጥናቱም እንደዚሁ ይገልጻቸዋል። በጥናቱ የተጠቀሰው ወደ 3.9 micrograms per mL የሚጠጋ በሰው ፕላዝማ ውስጥ የተመዘገበ ከፍተኛ እሴት፣ እንደ ዳራ መረጃ ብቻ ቀርቧል። የሜቲሊን ብሉ ፋርማኮኪኔቲክስ አጠቃላይ መግለጫ፣ የፕላዝማ ቁጥር ለምን እንደ ሕብረ ሕዋስ ቁጥር ሊተረጎም እንደማይችል ያብራራል።

በጥናቱ ሁለት ገደቦች በግልጽ ተጠቅሰዋል። የባዮፊልም ሞዴልም ሆነ ሜቲሊን ብሉ ከሌሎች መድኃኒቶች ጋር የሚጣመርበት ሙከራ አልነበረም። የአምስት ቀን ስብስቦቹ፣ እድገታቸው በቆመ ፈሳሽ ማዳበሪያ ውስጥ ያሉ የሕዋሳት ክምችቶች እንጂ የተረጋገጠ የባዮፊልም ሙከራ አልነበሩም። ጸሐፊዎቹ በእንስሳት፣ በመድኃኒት ጥምረቶች፣ በባዮፊልም እና በሌሎች የባርቶኔላ ዝርያዎች ላይ ሥራ እንዲሠራ ጠይቀዋል።

ጥምረቶች እና ከባዮፊልም የተወሰዱ ሕዋሳት፦ ዠንግ እና ባልደረቦቹ፣ 2020

በ2020 በBMC Microbiology የታተመው ተከታይ ጥናት ያንኑ ዝርያ እና ማዳበሪያ ይዞ ቀጥሏል፤ ነገር ግን ወደ ስድስት ቀን የእድገት መቆሚያ ደረጃ ማዳበሪያዎች ተሸጋግሮ፣ በመጀመሪያው ጥናት ያልነበሩ ሁለት ነገሮችን ጨምሯል፦ የሁለት መድኃኒቶች ጥምረቶችን እና ከባዮፊልም የተወሰዱ ሕዋሳትን የሚጠቀም ሞዴል።

ነጠላ መድኃኒቶችን በእኩል 5 micrograms per mL ለ24 ሰዓታት ሲፈትኑ፣ ሜቲሊን ብሉ በአንድ mL 3.2 በ10 በ4ኛ ኃይል ቅኝ ግዛት መመሥረት የሚችሉ አሃዶችን አስቀርቷል፤ በንጽጽር ቡድኑ ግን ወደ 2.8 በ10 በ10ኛ ኃይል ነበሩ። ሲፕሮፍሎክሳሲን፣ ጀንታማይሲን እና ናይትሮፉራንቶይን በዚያው ጊዜ ያስቀሩት ቅኝ ግዛቶች ያነሱ ነበሩ። ይህ ከ2019 ውጤት ይለያል፤ በዚያ ጥናት፣ በቁጥር ተመሳሳይ የሆነው ደረጃ ከአንድ ቀን በኋላ ሊገኙ የሚችሉ ቅኝ ግዛቶችን አላስቀረም። የማዳበሪያው ዕድሜ፣ ጥግግት እና አያያዝ ይለያዩ ነበር፤ ስለዚህ የመግደል ውጤቱ አቅጣጫ ሊደገም ቢችልም፣ መጠኑ አንድ አልነበረም። ይህ ከአንድ ሙከራ ወደ ሌላ የሚታይ ለውጥ፣ መደበኛ የደህንነት እና የመድኃኒት መስተጋብር ማጣሪያዎች የላቦራቶሪ ኃይለኛነትን ከክሊኒካዊ ውጤት ለይተው የሚመለከቱበት አንዱ ምክንያት ነው።

የጥምረት ማጣሪያው በብዛት የሚጠቀሰው ክፍል ነው። እያንዳንዱ ክፍል በ5 micrograms per mL ተወስኖ ነበር። አዚትሮማይሲን ከሜቲሊን ብሉ ጋር እና ሪፋምፒን ከሜቲሊን ብሉ ጋር፣ ሁለቱም ከ24 ሰዓታት በኋላ በእድገት መቆሚያ ደረጃ ያሉ ሊገኙ የሚችሉ ቅኝ ግዛቶችን አላስቀሩም። ሁለቱ ሲፕሮፍሎክሳሲን የያዙ ጥምረቶችም ተመሳሳይ ውጤት አሳይተዋል፤ ከተፈተኑት 25 ጥምረቶች ውስጥ ይህን ውጤት ያሳዩት እነዚህ አራቱ ብቻ ነበሩ። መደበኛ የሲነርጂ ትንተና ስላልተደረገ፣ ትክክለኛው አገላለጽ «በእነዚህ ሁኔታዎች እንቅስቃሴ ያሳየ ጥምረት» እንጂ «የተረጋገጠ ሲነርጂ» አይደለም።

የባዮፊልም ሙከራው የፈተነው ከወጣት፣ ከተበጣጠሰ ባዮፊልም የተወሰዱ ሕዋሳትን እንጂ፣ ያልተበጣጠሰ የበሰለ ባዮፊልም ውስጥ የመግባት ችሎታን አልነበረም። ማዳበሪያዎቹ ለአምስት ቀናት ከተዳበሩ በኋላ፣ ተበርዘው ጉድጓዶች ባሏቸው ፕሌቶች ውስጥ ለተጨማሪ አምስት ቀናት ተቀምጠዋል። ከዚያም በክሪስታል ቫዮሌት ቀለም ተረጋግጠው፣ ለመድኃኒት ከመጋለጣቸው በፊት በመፋቅ ተነስተዋል። በ5 micrograms per mL፣ ሜቲሊን ብሉ ብቻውን እስከ 6ኛው ቀን ቁጥሩን ወደ 2.3 በ10 በ2ኛ ኃይል አውርዶታል። ይህም ከምርጥ ነጠላ መድኃኒቶች መካከል እንዲሆን አድርጎታል፤ ነገር ግን ዜሮ አልነበረም። ሁለቱም ሜቲሊን ብሉ የያዙ ጥምረቶች በ6ኛው ቀን ዜሮ ደርሰዋል፤ ሁለቱ ሲፕሮፍሎክሳሲን የያዙ ጥምረቶችም እንዲሁ።

ጸሐፊዎቹ ጥንቃቄ የሚያደርግ አንባቢ የሚለያቸውን ተመሳሳይ ገደቦች አመልክተዋል፦ አሮጌና ያልተበጣጠሰ ባዮፊልም ሳይሆን ወጣትና በመፋቅ የተነሳ ባዮፊልም፤ እያንዳንዱ መድኃኒት በራሱ ተጨባጭ ከፍተኛ ክምችት ከመፈተን ይልቅ ለሁሉም መድኃኒቶች አንድ ምቹ ክምችት መጠቀም፤ በአዚትሮማይሲን ወይም በሪፋምፒን ዙሪያ የተመረጡ ጥምረቶች ብቻ፤ አንድ ዝርያ፤ እንስሳት አለመኖራቸው፤ ታካሚዎች አለመኖራቸው። በኋላ የሶስት መድኃኒቶች ጥናት እንዲደረግ ሐሳብ ቀርቧል እንጂ፣ ውጤቱ አልተዘገበም።

የጥናት ንድፍ ንጽጽር

ሰንጠረዡ የዚህን ጽሑፍ ዋና ነጥብ በአጭሩ ያሳያል። ከመጨረሻው ዓምድ በስተግራ ያለው ሁሉ የማዳበሪያ ሥራ ነው። በሁለቱም ጥናቶች ውስጥ የመጨረሻውን ዓምድ የሚሞላ ምንም ነገር የለም።

ባርቶኔላ ቦሬሊያ አይደለም

ሁለቱም ጥናቶች የላይም በሽታ መንስኤ የሆነውን ጠመዝማዛ ባክቴሪያ Borrelia burgdorferiን ይጠቅሳሉ። ምክንያቱም የቀለም ምርመራው በዚያው ላቦራቶሪ ቀደም ሲል በቦሬሊያ የእድገት መቆሚያ ደረጃ ላይ ከተሠራ ጥናት የመጣ ነው፤ በዚያም ሜቲሊን ብሉ እና ዳፕቶማይሲን አዎንታዊ ውጤት አሳይተው ነበር። ይህ ታሪክ ጠቃሚ ዳራ ነው፤ በተመሳሳይ ጊዜም የተለመደ የስህተት ምንጭ ነው።

በሁለቱም የባርቶኔላ ጥናቶች ውስጥ ቦሬሊያን ከባርቶኔላ ጋር ጎን ለጎን የሚፈትን ሙከራ የለም። ተሕዋስያኑ ይለያያሉ፣ ማዳበሪያዎቹ ይለያያሉ፣ ክምችቶቹ ይለያያሉ። ሜቲሊን ብሉ በባርቶኔላ ሽፋን ላይ ያሳድራል ተብሎ የታሰበው ተጽእኖም፣ ተጨማሪ ጥናት የሚፈልግ ግምት እንደሆነ ተገልጿል። ውጤቶች ከአንድ ዝርያ ወደ ሌላ መተላለፍ የለባቸውም፤ አንዳቸውም ጥናቶች ስለ ጥገኛ ተሕዋስያን ሰፊ አባባሎችን አይደግፉም። የቦሬሊያ እና የባርቶኔላ መድኃኒትን ተቋቁመው የሚቀሩ ሕዋሳት ንጽጽር፣ በዚህ ምክንያት ሁለቱን የምርምር ስብስቦች ለይቶ ይይዛል።

የማዳበሪያ ውጤቶች ለምን ወደ የሕክምና ፕሮቶኮል አይቀየሩም?

ለባርቶኔላ የሜቲሊን ብሉ ፕሮቶኮል የመፈለግ ፍላጎት የሚገባ ነው። እነዚህ ጥናቶች ይህ ሐረግ እንደ መግዣ ዝርዝር ሳይሆን እንደ ማስጠንቀቂያ ምልክት መወሰድ ያለበትን ምክንያት ያሳያሉ።

በመጀመሪያ፣ በፕሌት ጉድጓድ ውስጥ ያለ 5 micrograms per mL የመድኃኒት ትእዛዝ አይደለም። ስለ መምጠጥ፣ ስርጭት፣ ከፕሮቲን ጋር መያያዝ፣ ወደ ሕዋስ ውስጥ መግባት ወይም ሰውነት ሊቋቋመው ስለመቻሉ የሚያሳይ መረጃ አያካትትም። ጸሐፊዎቹ የአንቲባዮቲኮች ከፍተኛ ክምችቶች ግምታዊ አማካይ እንዲሆን መርጠውታል፤ ወደፊት የሚሠራው ሥራም እያንዳንዱን መድኃኒት በራሱ ተጨባጭ ደረጃ መጠቀም እንዳለበት ገልጸዋል።

ሁለተኛ፣ ዜሮ ቅኝ ግዛቶች ማለት በእነዚያ የማዳበሪያ ሳህን ሁኔታዎች ቅኝ ግዛቶች አልታዩም ማለት እንጂ፣ ሕብረ ሕዋሱ ከተሕዋስያን ነጻ ሆኗል ማለት አይደለም። መድኃኒትን ተቋቁመው የሚቀሩ ሕዋሳት፣ በሕዋሳት ውስጥ ያሉ ባክቴሪያዎች እና የናሙና አወሳሰድ ገደቦች፣ ሁሉም ከአጋር ሳህኑ የመለካት ወሰን ውጭ ናቸው።

ሶስተኛ፣ በፕሌት ጉድጓድ ውስጥ ተሕዋስያንን ሙሉ በሙሉ የሚያስወግዱ ጥምረቶች፣ በሰውነት ውስጥ ሊሳኩ አለመቻላቸው ወይም ጉዳት ማድረሳቸው ይቻላል። አዚትሮማይሲን ከሜቲሊን ብሉ ጋር እና ሪፋምፒን ከሜቲሊን ብሉ ጋር፣ በላቦራቶሪ ተጋላጭነት ደረጃዎች የተፈተኑ የላቦራቶሪ ጥምረቶች ናቸው። የእንስሳት ፋርማኮኪኔቲክስ እና ቁጥጥር ካላቸው የሰው ጥናቶች የሚገኝ መረጃ ከሌለ፣ የመድኃኒት መጠን፣ የመጠቀሚያ ጊዜ ወይም የጥቅም ከአደጋ ጥምርታ አልተወሰነም። አማራጮችን የሚመዝን ማንኛውም ሰው፣ ከሳህን መረጃ ማንኛውንም ድምዳሜ ከማውጣቱ በፊት፣ ከሕክምና ባለሙያ ጋር መወያየት እና የሜቲሊን ብሉ አጠቃቀም መቼ የሕክምና ክትትል እንደሚፈልግ መገምገም አለበት።

እነዚህ ጥናቶች የሚደግፉት ውስን ድምዳሜ ይህ ነው፦ ሜቲሊን ብሉ፣ ከሕያው አካል ውጭ በላቦራቶሪ ሁኔታ፣ እያደገ ባልሆነ B. henselae JK53 ላይ ሊደገም የሚችል እንቅስቃሴ አለው፤ ይህም በሁለት መድኃኒቶች የላቦራቶሪ ጥምረቶች ውስጥ የታየውን ያካትታል። ከጥምረቶች እና ከባዮፊልም በተወሰዱ ሕዋሳት ላይ የታዩት በጣም ጠንካራ ውጤቶች ከ2020 ጥናት የመጡ ናቸው። ይህ እንቅስቃሴ በሰው ባርቶኔሎሲስ ላይ ትርጉም እንዳለው ጨምሮ፣ ከዚህ ውጭ ያለው ሁሉ ገና አልተፈተነም።