EMB Agar እና MacConkey፦ ልዩነት፣ ምርጫ እና ትርጓሜ

አንድ ተማሪ ተመሳሳይ የውሃ ናሙናን በሁለት ፕሌቶች ላይ በስትሪክ ይዘራል። በአንደኛው ላይ አረንጓዴ ሜታሊክ አንጸባራቂ ያላቸው ጥቁር ኮሎኒዎች ይታያሉ። በሌላው ላይ ግልጽ ሮዝ ኮሎኒዎች ከደብዛዛ ሃሎ ጋር ይታያሉ። ሁለቱም ፕሌቶች ከተመሳሳይ ቱቦ ተዘርተው፣ ጎን ለጎን ኢንኩቤት ተደርገው፣ በተመሳሳይ ሰዓት ተነበቡ። ተማሪው የትኛው ፕሌት ትክክል እንደሆነ ይጠይቃል።

ሁለቱም ፕሌቶች ትክክል ናቸው። የተለያዩ ጥያቄዎችን ይመልሳሉ። ግራ መጋባቱ ሁለቱን ሚዲያዎች ለአንጀት ባክቴሪያዎች እርስ በርስ ሊተካኩ የሚችሉ የማጣሪያ ሚዲያዎች አድርጎ ከመቁጠር ይመጣል። ዓላማቸው አንድ ነው፤ ግራም-አሉታዊ የአንጀት ኦርጋኒዝሞችን መምረጥ እና ላክቶስን የሚያፈላሉትን ከማያፈላሉት መለየት። ሆኖም ይህን ዓላማ በተለያየ ኬሚስትሪ እና በተለያየ የእይታ አመክንዮ ያከናውናሉ። መሠረታዊዎቹን ሁለት ሐሳቦች አንዴ ካወቁ፣ የፕሌት ምርጫ እና የኮሎኒ ንባብ መደበኛ ሂደት ይሆናሉ።

አጭር መልስ

EMB agar ሁለት ቀለሞችን፣ eosin Y እና methylene blueን፣ ይጠቀማል፤ እነዚህም ሁለት ሥራዎችን ያከናውናሉ። የግራም-አዎንታዊ እድገትን ይገታሉ፣ እንዲሁም ብዙ አሲድ በሚያመነጩ ኦርጋኒዝሞች ዙሪያ በመዝቀጥ ጥቁር ኮሎኒዎችን ይፈጥራሉ፤ በተለምዶ Escherichia coli ላይ ሜታሊክ አረንጓዴ አንጸባራቂ መልክ ይታያል። MacConkey agar ሥራዎቹን ይለያያል፤ bile salts ከcrystal violet ጋር የግራም-አዎንታዊዎችን ይገታሉ፣ lactose ለፈርመንቴሽን ምግብ ይሰጣል፣ neutral red ደግሞ አሲድን እንደ ሮዝ ወይም ቀይ ኮሎኒ ያሳያል። ተግባሩ E. coliን በግልጽ የቅድመ-ግምት ማሳያ ማቅረብ ከሆነ፣ EMB ጠቃሚ ምርጫ ነው። ተግባሩ ላክቶስ ፈርመንተሮችን ከማያፈላሉት በቀላሉ ሮዝ ከቀለም አልባ ለመለየት ከሆነ፣ በተለይ በሰገራ ወይም በሽንት የሥራ ሂደቶች፣ MacConkey በአብዛኛው ለማንበብ ቀላል ነው። ከሁለቱም ፕሌቶች አንዱም ኦርጋኒዝምን በቀለም ብቻ አይለይም።

EMB፦ በአንድ ጊዜ የሚመርጡና የሚያሳዩ ቀለሞች

የEMB መርህ ምርጫን እና ማመልከቻን በተመሳሳይ ሞለኪውሎች ውስጥ ያጣምራል። የASM eosin methylene blue agar ፕሮቶኮል EMBን መራጭም ልዩነት አሳይም እንደሆነ ይገልጻል፤ የቀለሞቹ ጥምረት ብዙ የግራም-አዎንታዊ ኦርጋኒዝሞችን ሲገታ፣ የlactose ፈርመንቴሽን የቀለም መያዝንና መዝቀጥን ያበረታታል። መደበኛው የLevine ፎርሙሌሽን peptone፣ lactose፣ phosphate፣ eosin Y፣ methylene blue እና agar ይዟል፤ ይህም የFDA BAM ዘዴ ለLevine EMB agar ላይ ተዘርዝሯል። አሮጌ የEMB አሰራሮች አንዳንድ ጊዜ ከlactose ጋር sucrose ይጨምሩ ነበር፣ Levine EMB ግን lactose ይዟል እንጂ sucrose የለውም፤ ስለዚህ ላቦራቶሪዎ የሚያከማቸውን ፎርሙሌሽን ይመዝግቡ።

EMBን ማንበብ ማለት የቀለም ባህሪን ማንበብ ማለት ነው። ኃይለኛ የlactose ፈርመንቴሽን ብዙ የቀለም ዝቃጭ እንዲፈጠር በቂ አሲድ ያመነጫል፤ ይህም E. coliን ጥቁር ሰማያዊ-ጥቁር ማዕከል ያለው ኮሎኒ ያደርገዋል፣ እና በተለመደው ሁኔታ በተንጸባረቀ ብርሃን ሜታሊክ አረንጓዴ አንጸባራቂ መልክ ይታያል። እንደ Enterobacter እና Klebsiella ያሉ ደካማ ፈርመንተሮች በተለምዶ ያለዚያ አንጸባራቂ መልክ ሮዝ እስከ ሐምራዊ የሚደርሱ ሙኮይድ ኮሎኒዎች ሆነው ያድጋሉ። እንደ Salmonella፣ Shigella እና Proteus ያሉ የማያፈላሉ ኦርጋኒዝሞች ቀለሞቹን የሚያዝቅጥ የአሲድ ፍንዳታ ስለማያመነጩ በአብዛኛው ቀለም አልባ ወይም አሳላፊ ኮሎኒዎች ሆነው ያድጋሉ። የግራም-አዎንታዊዎች በአብዛኛው ይገታሉ፤ ሆኖም መገታት በደረጃ የሚለያይ ሲሆን እንደ ስትሬን እና ምርት ይለያያል። methylene blue በመጀመሪያ ለምን ካቲዮኒክ ቀለም እንደሚሆን ጨምሮ የቀለም ዝግጅት ሙሉ ኬሚስትሪ የቀለም ፎርሙሌሽኖችን በሚመለከት የተለየ ውይይት ይፈልጋል፣ አጠቃላይ የማይክሮስኮፒ አውድ ደግሞ በስቴይኒንግ ዘዴዎች አትላስ ውስጥ ይገኛል። ይህ ጽሑፍ በፕሌት ምርጫ እና ንባብ ላይ ብቻ ያተኩራል።

የተለመዱ የኮሎኒ ቀለሞችን የሚያሳዩ ጎን ለጎን የተቀመጡ ምሳሌያዊ EMB እና MacConkey ፕሌቶች። ሁለቱም ፕሌቶች ምሳሌያዊ ዳግም-ግንባታዎች ናቸው፣ የእውነተኛ ካልቸሮች ፎቶግራፎች አይደሉም።

ከላይ ያለው ምስል ምሳሌያዊ ነው። የሚጠበቀውን የእይታ አመክንዮ ያሳያል፤ በEMB ላይ ጥቁር አንጸባራቂ ኮሎኒዎች፣ ሮዝ ሙኮይድ ዓይነቶች እና ፈዛዛ ዓይነቶች፣ በMacConkey ላይ ደግሞ ሮዝ ከፈዛዛ ዓይነቶች ጋር። ንድፉን ለመማር ይጠቀሙበት፣ ከዚያም እያንዳንዱን ውሳኔ በፎቶ ከተመዘገቡ ኮንትሮሎች እና በሥራ ጠረጴዛዎ ላይ ለሚገኘው ትክክለኛ ሚዲያ ከምርት መመሪያው ጋር ያረጋግጡ።

MacConkey፦ የተለያዩ ሥራዎች፣ ቀላል የእይታ ሕግ

የMacConkey መርህ እያንዳንዱን ሥራ ለተለየ ንጥረ ነገር ይመድባል። የASM MacConkey agar ፕሮቶኮል ተመሳሳይ የመራጭ እና ልዩነት አሳይ መዋቅርን ያቀርባል፣ የFDA BAM ዘዴ ለMacConkey agar ደግሞ የሥራ ክፍሎቹን ይዘረዝራል፦ peptones፣ lactose፣ bile salts፣ salt፣ neutral red፣ crystal violet እና agar። Bile salts ከcrystal violet ጋር የግራም-አዎንታዊዎችን ይመርጡባቸዋል። Lactose የፈርመንቴሽን ሰብስትሬትን ይሰጣል። Neutral red እንደ pH ሪፖርተር ይሠራል፣ አሲድ በሚፈጠርበት ቦታ ሮዝ እስከ ቀይ ይለወጣል፤ አንዳንድ ጊዜም በኃይለኛ ፈርመንተሮች ዙሪያ የbile ዝቃጭ ይፈጠራል።

የንባብ ሕጉ ሆን ተብሎ ቀላል ተደርጓል፦ ሮዝ ማለት lactose ፈርመንተር ነው፣ ቀለም አልባ ወይም ፈዛዛ ማለት የማያፈላ ነው። E. coli ከሮዝ እስከ ቀይ ይታያል፣ ብዙ ጊዜም የbile ዝቃጭ ሃሎ ይኖረዋል። Klebsiella እና Enterobacter ሮዝ ሆነው ይታያሉ፣ እና በካፕሱላቸው ምክንያት ብዙ ጊዜ ሙኮይድ ናቸው። Salmonella፣ Shigella፣ Proteus እና ሌሎች ብዙ የግራም-አሉታዊ ሮዶች ቀለም አልባ ሆነው ይታያሉ። በማስተማሪያ ላቦራቶሪዎች ውስጥ የሚጠቅም ተጨማሪ ጥቅም አለ፦ bile salts በአብዛኛው የProteus swarmingን ይቀንሳሉ፣ ስለዚህ ከመራጭ ካልሆኑ ሚዲያዎች ይልቅ በMacConkey ላይ የተለዩ ኮሎኒዎችን ማግኘት ቀላል ነው። ሆኖም መገታቱ ፍጹም አይደለም፣ swarmingን መቆጣጠር ዋና ቅድሚያ በሆነበት ጊዜ ከsalt ነፃ አማራጮችም አሉ።

ቀለሞቹ በዚህ መንገድ የሚሠሩበት ሞለኪውላዊ ምክንያት ከኤሌክትሪክ ክፍያ እና መዋቅር ጋር ይያያዛል። Methylene blue ካቲዮኒክ phenothiazine ቀለም ሲሆን መዋቅሩ እና ባህሪያቱ ለአሲዳማ የባክቴሪያ ወለሎች ያለውን ተሳስቦ ያብራራሉ፤ ይህም በEMB ላይ በአሲድ ዞኖች ውስጥ ሲዝቅጥ የሚሠራው ተመሳሳይ ተሳስቦ ነው።

በአንድ እይታ ንጽጽር

ባህሪ	EMB agar	MacConkey agar
መራጭ ስርዓት	Eosin Y plus methylene blue	Bile salts plus crystal violet
ልዩነት አሳይ ሰብስትሬት	Lactose (Levine has no sucrose)	Lactose
አመልካች	Dye precipitation itself (dark colonies, green sheen)	Neutral red (pink to red acid colonies)
ጠንካራ E. coli ምልክት	Dark blue black colony, often metallic green sheen	Pink to red colony, often bile precipitate
Klebsiella እና Enterobacter	Pink to purple, mucoid, usually no sheen	Pink to red, often mucoid
Salmonella, Shigella, Proteus	Usually colorless or translucent	Usually colorless or pale
ግራም-አዎንታዊዎች	Usually suppressed	Usually suppressed on crystal violet formulas
ምርጥ የማስተማሪያ ጥቅም	Strong versus weak fermentation made visible	Simplest fermenter versus nonfermenter sort

ሰንጠረዡን እንደ የውሳኔ ሂደት ያንብቡ። ልምምዱ ተማሪዎች የፈርመንቴሽን ጥንካሬ ደረጃን ከአንድ ግልጽ የመጨረሻ ምልክት ጋር እንዲያዩ ካስፈለገ፣ EMB ያሳየዋል። ልምምዱ ከባዮኬሚካል ማረጋገጫ በፊት ፈርመንተርን ከማያፈላ ኦርጋኒዝም ፈጣን በሆነ ሁለትዮሽ መንገድ መለየት ካስፈለገ፣ MacConkey ያሳየዋል።

ለየትኛው ናሙና የትኛው ሚዲያ

የቅድመ-ግምት የfecal coliform ወይም E. coli መለያን ያነጣጠሩ የውሃ ልምምዶች ላይ፣ EMB አንጸባራቂ መልኩ በእይታ በቀላሉ ስለሚለይ ማራኪ ምርጫ ነው። MacConkeyም የአንጀት ግራም-አሉታዊ ኦርጋኒዝሞችን ይይዛል እና በታሪክ የውሃ ምርመራ አጠቃቀም ነበረው፣ ግን ከሁለቱም ፕሌቶች አንዱም የደንብ መሠረት ያለውን የውሃ ዘዴ አይተካም፤ እንደ ምርመራው ዓይነት እንደ modified mTEC ወይም MI ያሉ ሚዲያዎች ሊወሰኑ ይችላሉ። ላቦራቶሪዎ እንዲከተል የተጠየቀውን ዘዴ ያረጋግጡ።

በሰገራ ዓይነት ስራዎች ውስጥ ፈርመንተሮችን ከማያፈላሉት ለመለየት፣ ከሁለቱ MacConkey በአጠቃላይ የበለጠ ጠቃሚ ነው። ለSalmonella ወይም Shigella የተግባር የሰገራ ሥራ በመደበኛነት MacConkeyን ብቻ ከመጠቀም ይልቅ እንደ XLD ወይም Hektoen enteric ያሉ የበለጠ መራጭ የአንጀት ሚዲያዎችን ይጨምራል።

ክሊኒካዊ የሥራ ሂደትን ለሚመስል የሽንት ማስተማሪያ፣ MacConkeyን ከblood agar ጋር ያጣምሩ። MacConkey ቀደም ብሎ የግራም-አሉታዊ መለያን ይሰጣል፣ blood agar ደግሞ MacConkey የሚገታቸውን ኦርጋኒዝሞች ያዳብራል። ይህ ጥምረት በክሊኒካዊ የሽንት ካልቸር አዘገጃጀት መግለጫዎች ውስጥ መደበኛ ነው።

ለንጹህ የመርህ ማስተማሪያ፣ ሁለቱንም ያሂዱ። EMB የፈርመንቴሽን ጥንካሬ አስፈላጊ እንደሆነ እና አንድ ሞለኪውል ሁለት ሚናዎችን ሊወጣ እንደሚችል ያስተምራል። MacConkey ሞጁላር ዲዛይንን ያስተምራል፦ መራጭ፣ ሰብስትሬት እና ሪፖርተር ተለያይተው ይቀመጣሉ። የታወቀ E. coli፣ የታወቀ Klebsiella aerogenes እና የታወቀ Salmonellaን በሁለቱም ሚዲያዎች ላይ ጎን ለጎን የሚዘሩ ተማሪዎች ሁለቱን አመክንዮዎች እንደገና ብዙም አያደባልቁም።

በየወቅቱ የሚደጋገሙ የንባብ ስህተቶች

በጣም የተለመደው ስህተት በቀለም ብቻ መለየት ነው። በMacConkey ላይ ሮዝ የሆነው E. coli፣ Klebsiella፣ Enterobacter ወይም ሌላ ፈርመንተር ሊሆን ይችላል። ቀለም አልባ የሆነው Salmonella፣ Shigella፣ Proteus፣ Pseudomonas ወይም ሌላ የማያፈላ ኦርጋኒዝም ሊሆን ይችላል። ቀለም እንደ Gram stain፣ oxidase፣ biochemical panels ወይም instrument identification ያሉ የማረጋገጫ ሥራዎችን የሚመራ የማጣሪያ phenotype ነው እንጂ የspecies ስም አይደለም።

ሁለተኛው ስህተት ያልታየ አንጸባራቂ መልክን ከመጠን በላይ መተርጎም ነው። አንዳንድ እውነተኛ E. coli ኮሎኒዎች፣ በተለይ ተለይተው ያደጉት፣ በEMB ላይ ትንሽ ወይም ምንም ሜታሊክ አንጸባራቂ መልክ አያሳዩም። አንጸባራቂ መልክ አለመኖሩ E. coliን አያስወግድም፣ መኖሩም እሱ መሆኑን አያረጋግጥም። አንጸባራቂ መልኩን እንደ የቅድመ-ግምት ፍንጭ ይዩት።

ሦስተኛው ስህተት የተለያየ ዕድሜ ያላቸውን ፕሌቶች ማወዳደር ነው። ዘግይተው lactoseን የሚያፈሉ ኦርጋኒዝሞች ረጅም ጊዜ ከincubation በኋላ በMacConkey ላይ ሮዝ ሊሆኑ ይችላሉ፣ ይህም በፈርመንተር እና በማያፈላ ኦርጋኒዝም መካከል ያለውን ግልጽ ልዩነት ያደበዝዛል። በላቦራቶሪው በተወሰነው ሰዓት ያንብቡ እና የincubation ጊዜን ከውጤቱ ጋር ይመዝግቡ።

አራተኛው ስህተት የተቀላቀለ እድገትን እንደ አንድ ኦርጋኒዝም ማንበብ ነው። ከቀለም አልባ ኮሎኒ አጠገብ ያለ ሮዝ ኮሎኒ ሁለት phenotypesን ይመዘግባል እንጂ መካከለኛ ሁኔታን አያሳይም። በደንብ የተለዩ ኮሎኒዎችን ይምረጡ እና እያንዳንዱን morphotype ለየብቻ ይስሩበት። ሙኮይድ ገጽታም ተመሳሳይ ወጥመድ ይፈጥራል፦ Klebsiella እና Enterobacter ሁለቱም ሙኮይድ ሊመስሉ ይችላሉ፣ ስለዚህ capsule ብቻውን ስሙን ፈጽሞ አይወስንም። ቀደም ሲል Enterobacter aerogenes ተብሎ የሚሰጥ ኦርጋኒዝም አሁን Klebsiella aerogenes ተብሎ ይመደባል፤ ይህም አሮጌ ሰንጠረዦች እና አዲስ መለያዎች ለምን የሚቃረኑ እንደሚመስሉ ያብራራል።

ኮንትሮሎች እና የመጨረሻ ሕግ

በእያንዳንዱ ሴሽን በፎቶ የተመዘገቡ ወይም ትኩስ ኮንትሮሎችን ያሂዱ፦ E. coli ለጠንካራ የፈርመንተር ምላሽ፣ Klebsiella aerogenes ያለ ተለመደው አንጸባራቂ መልክ ሙኮይድ ፈርመንቴሽንን ለማሳየት፣ አንድ Salmonella strain ለቀለም አልባ የማያፈላ ምላሽ፣ እና Staphylococcus aureus በትክክለኛው ምርትዎ ላይ የግራም-አዎንታዊ መገታትን ለማረጋገጥ። መራጭነት ከbile፣ crystal violet እና የቀለም ይዘት ጋር ስለሚለዋወጥ፣ strain numbers እና acceptance criteriaን ከአምራቹ መመሪያ ጋር ያዛምዱ።

በሥራ ጠረጴዛ ላይ አንድ ዓረፍተ ነገር ያስታውሱ። EMB መምረጥም ማሳየትም የሚችሉ ቀለሞችን ይጠቀማል፤ ይህም ትርጓሜውን ትንሽ ውስብስብ ቢያደርገውም ግልጽ የE. coli ምልክት ይሰጣል። MacConkey መምረጥን ከማሳየት ይለያል፤ ይህም የፈርመንቴሽን ዝርዝርን ቢቀንስም ቀላል የሮዝ እና ፈዛዛ ልዩነት ይሰጣል። መርሁ ከጥያቄው ጋር የሚጣጣም ሚዲያ ይምረጡ፣ ቀለምን በተገቢ ምርመራዎች ያረጋግጡ፣ ከዚያም ሁለቱ ፕሌቶች መወዳደራቸውን ትተው ተባብረው መሥራት ይጀምራሉ።