Artikel
Metileenblou en Bartonella: laboratoriumbevindinge en beperkings van kliniese bewyse
'n Kultuurskottel en 'n pasiënt deel 'n woord, infeksie, maar nie 'n konsep nie. In die skottel is infeksie 'n telling van kolonies op agar. In die pasiënt is dit bakterieë binne selle en bloedvate, middels wat deur bloed en weefsel beweeg, en 'n immuunstelsel wat 'n deel van die werk doen. Verwar die twee, en 'n treffende laboratoriumsyfer begin soos 'n behandeling lyk. Hou hulle apart, en dieselfde syfer word wat dit is: 'n rede om die volgende eksperiment te doen.
Daardie onderskeid is die hele doel van hierdie oorsig van metileenblou en Bartonella. Twee laboratoriumstudies deur een navorsingsgroep het metileenblou teen Bartonella henselae in niegroeiende toestande getoets. Albei het sterk aktiwiteit in glas en plastiek gerapporteer. Nie een het dit by 'n mens getoets nie.
Waarom navorsers die stationêre fase toets
Die meeste antibiotikatoetse gebruik groeiende selle. Daardie model mis 'n moeiliker geval: selle wat opgehou het om te verdeel en middels verdra wat hul groeiende eweknieë doodmaak.
Bartonella kan in die liggaam voortbestaan, onder meer binne eritrosiete en endoteelselle. Die groep het dus gevra watter goedgekeurde middels B. henselae kan doodmaak nadat dit die stationêre fase betree het. 'n Lae MIC teen groeiende selle het nie die doodmaak van selle in die stationêre fase voorspel nie. Rifampisien het 'n baie lae MIC gehad, maar stationêre selle swak doodgemaak, terwyl verbindings met hoër MIC-waardes hulle goed doodgemaak het. Lesers wat 'n algemene metode vir hierdie soort artikel soek, sal dit in die gids vir die lees van metileenblounavorsing vind.
Eerste sifting: Li en kollegas, 2019
Die 2019-sifting van die stationêre fase in Antibiotics het 'n enkele stam, B. henselae JK53, gebruik, wat in Schneider-medium met 10 persent fetale beeserum by 37 C met 5 persent CO2 gekweek is. Eendagkulture het hoofsaaklik uit verspreide, verdelende selle bestaan. Vyfdagkulture, met ongeveer 10 tot die 8ste mag kolonievormende eenhede per mL, is as stationêre fase beskou en het sigbare aggregate bevat.
Die toets het SYBR Green I met propidiumjodied gebruik en is teen mengsels van lewende selle en selle wat met isopropanol doodgemaak is, gekalibreer. Omdat metileenblou sterk gekleurd is, is positiewe siftingsresultate deur mikroskopie en daarna deur kolonietellings op bloedagar, die strenger eindpunt, bevestig.
Van 1,581 goedgekeurde middels teen 50 micromolar het metileenblou 16 persent lewensvatbaarheid volgens die plaatleser en 25 persent volgens mikroskopie oorgelaat. Daptomisien het 21 persent aangeteken, verskeie asole 22 tot 27 persent, gentamisien 32 persent, eritromisien 66 persent en siprofloksasien 74 persent. Pirviniumpamoaat het sterker op die leser gelyk, maar kon weens sy eie fluoressensie nie deur mikroskopie beoordeel word nie.
Teen groeiende B. henselae was die metileenblou-MIC 0.08 tot 0.16 micrograms per mL. Teen vyfdag- stationêre selle by 5 micrograms per mL het die kolonietelling ná een dag se blootstelling tot geen waarneembare kolonies gedaal nie, wat ooreengestem het met daptomisien en pirviniumpamoaat by hul getoetste konsentrasies. 'n Afsonderlike tyd-afhanklike doodmaaktoets het 10 micrograms per mL gebruik. Dit is laboratoriumblootstellingsvlakke, nie dosisse nie, en die artikel beskryf hulle so. 'n Aangehaalde menslike piekplasmawaarde van ongeveer 3.9 micrograms per mL verskyn slegs as agtergrondkonteks in die artikel. Die oorsig van metileenblou se farmakokinetiek verduidelik waarom 'n plasmawaarde nie as 'n weefselwaarde gelees kan word nie.
Twee beperkings word uitdruklik in die artikel genoem. Daar was geen biofilmmodel en geen toetsing van metileenbloukombinasies nie. Die vyfdag-aggregate was groepe selle in 'n stationêre vloeibare kultuur, nie 'n gevalideerde biofilmeksperiment nie. Die outeurs het gevra vir diereondersoeke, kombinasieondersoeke, biofilmondersoeke en toetsing met ander Bartonella-spesies.
Kombinasies en selle afkomstig uit biofilms: Zheng en kollegas, 2020
Die 2020-opvolgstudie in BMC Microbiology het dieselfde stam en medium behou, maar na sesdag- stationêre kulture oorgeskakel en twee dinge bygevoeg wat die eerste artikel nie gehad het nie: kombinasies van twee middels en 'n model met selle afkomstig uit biofilms.
Met enkelmiddels teen 'n eenvormige 5 micrograms per mL vir 24 uur het metileenblou 3.2 maal 10 tot die 4de mag kolonievormende eenhede per mL oorgelaat, teenoor 'n kontrole van ongeveer 2.8 maal 10 tot die 10de mag. Siprofloksasien, gentamisien en nitrofurantoïen het op dieselfde tydstip minder kolonies oorgelaat. Dit verskil van die 2019-resultaat, waar dieselfde nominale vlak ná een dag geen waarneembare kolonies opgelewer het nie. Die kultuurouderdom, digtheid en hantering het verskil, dus was die doodmaak-effek herhaalbaar in rigting, maar nie identies in omvang nie. Hierdie verskuiwing tussen toetslopies is een rede waarom standaardkontroles vir veiligheid en interaksies laboratoriumpotensie as afsonderlik van kliniese effek beskou.
Die kombinasiesifting is die deel wat die meeste aangehaal word. Elke komponent is op 5 micrograms per mL vasgestel. Sowel azitromisien plus metileenblou as rifampisien plus metileenblou het teen 24 uur geen waarneembare kolonies in die stationêre fase opgelewer nie, net soos albei siprofloksasienpare, en slegs dié vier uit 25 getoetste pare. Geen formele sinergie-ontleding is uitgevoer nie; die korrekte term is dus 'n aktiewe kombinasie onder hierdie toestande, nie bewese sinergie nie.
Die biofilmeksperiment het selle getoets wat uit 'n jong, ontwrigte biofilm herwin is, nie penetrasie in 'n ongeskonde, volwasse biofilm nie. Kulture is vyf dae lank gekweek, vir nog vyf dae in putjieplate verdun, deur kristalvioletkleuring bevestig en toe voor blootstelling aan die middels afgeskraap. By 5 micrograms per mL het metileenblou alleen die telling teen dag 6 tot 2.3 maal 10 tot die 2de mag laat daal, onder die beste enkelmiddels, maar nie tot nul nie. Albei metileenbloukombinasies het teen dag 6 nul bereik, net soos albei siprofloksasienkombinasies.
Die outeurs het dieselfde beperkings uitgelig wat 'n noukeurige leser sou raaksien: 'n jong, afgeskraapte biofilm eerder as 'n ou, ongeskonde biofilm; een gerieflike konsentrasie vir alle middels in plaas van elke middel by sy eie realistiese piek; slegs geselekteerde pare rondom azitromisien of rifampisien; een stam; geen diere nie; geen pasiënte nie. Latere ondersoeke met drie middels is voorgestel, nie gerapporteer nie.
Vergelyking van studie-ontwerpe
| Ontwerpaspek | Li 2019 | Zheng 2020 | Wat as kliniese bewyse tel |
|---|---|---|---|
| Organisme | Slegs B. henselae JK53 | Slegs B. henselae JK53 | Pasiënte met bevestigde bartonellose, omskrewe eindpunte |
| MIC van metileenblou vir groeiende selle | 0.08 tot 0.16 micrograms per mL | Dieselfde, 0.08 tot 0.16 | Nie van toepassing nie |
| Stationêre model | 5-dagkultuur, enkelmiddels | 6-dagkultuur, enkelmiddels plus 25 pare | Weefsel- en intrasellulêre aktiwiteit, farmakokinetiek |
| Biofilmmodel | Geen; aggregate is nie biofilm nie | Afgeskraapte selle uit 'n 5-dagbiofilm | Ongeskonde biofilm of data oor voortbestaan in vivo |
| Belangrikste metileenblouresultaat | 5 micrograms per mL, geen kolonies op dag 1 nie | Dieselfde vlak, 3.2 maal 10 tot die 4de mag teen 24 uur; pare met azitromisien of rifampisien op nul | Responskoers, terugvalkoers, ongewenste gebeurtenisse |
| Formele sinergietoets | Nie gedoen nie | Nie gedoen nie | Dosisbepaling en gekontroleerde vergelyking |
Die tabel gee die kern van hierdie artikel in kompakte vorm weer. Alles links van die laaste kolom is kultuurwerk. Niks in enige van die twee artikels hoort in die laaste kolom nie.
Bartonella is nie Borrelia nie
Albei artikels noem Borrelia burgdorferi, die spirogeet wat Lyme-siekte veroorsaak, omdat die kleurstoftoets uit vroeëre werk aan Borrelia in die stationêre fase in dieselfde laboratorium gekom het, waar metileenblou en daptomisien ook positiewe siftingsresultate opgelewer het. Daardie geskiedenis is nuttige konteks en 'n algemene bron van foute.
Geen eksperiment in enige van die Bartonella-artikels toets Borrelia en Bartonella langs mekaar nie. Organismes verskil, media verskil, konsentrasies verskil, en die veronderstelde membraaneffek van metileenblou in Bartonella is as bespiegeling beskryf wat meer ondersoek verg. Resultate behoort nie van een spesie na 'n ander oorgedra te word nie, en nie een van die artikels ondersteun breë aansprake oor parasiete nie. Die vergelyking van Borrelia- en Bartonella-persisteerders hou die twee navorsingsliterature om hierdie rede apart.
Waarom kulture nie in 'n protokol omskep kan word nie
Belangstelling in soektogte na 'n metileenblou-bartonella-protokol is verstaanbaar. Hierdie artikels is die rede waarom daardie frase as 'n waarskuwingsteken eerder as 'n inkopielys beskou behoort te word.
Eerstens is 5 micrograms per mL in 'n putjie nie 'n voorskrif nie. Dit hou geen rekening met absorpsie, verspreiding, proteïenbinding, intrasellulêre penetrasie of verdraagsaamheid nie. Die outeurs het dit as 'n benaderde gemiddelde van antibiotikapieke gekies en gesê dat toekomstige werk elke middel op sy eie realistiese vlak behoort te gebruik.
Tweedens beteken nul kolonies geen kolonies onder daardie uitplateringstoestande nie, nie steriele weefsel nie. Persisteerders, intrasellulêre bakterieë en beperkings van monsterneming val almal buite die agarplaat.
Derdens kan kombinasies wat 'n putjie steriliseer, in 'n liggaam misluk of skade veroorsaak. Azitromisien plus metileenblou en rifampisien plus metileenblou is laboratoriumpare by laboratoriumblootstellingsvlakke. Sonder farmakokinetiese data uit diere en gekontroleerde menslike data is daar geen dosis, geen duur en geen voordeel-risiko-verhouding nie. Enigiemand wat opsies oorweeg, behoort hulle met 'n klinikus te bespreek en na te gaan wanneer metileenblougebruik mediese toesig vereis voordat enige gevolgtrekking uit skotteldata gemaak word.
Die beperkte gevolgtrekking wat hierdie artikels wel ondersteun, is dit: metileenblou het herhaalbare aktiwiteit teen niegroeiende B. henselae JK53 in vitro, ook in laboratoriumkombinasies van twee middels, met die sterkste kombinasieresultate en resultate vir selle uit biofilms uit die 2020-studie. Al die ander aspekte, insluitend of daardie aktiwiteit vir bartonellose by mense saak maak, bly ongetoets.