EMB-agar teenoor MacConkey-agar: seleksie en interpretasie van media

'n Student stryk dieselfde watermonster op twee plate uit. Op die een verskyn donker kolonies met 'n groen metaalglans. Op die ander verskyn helderpienk kolonies met 'n wasige halo. Albei plate is uit dieselfde buis geënt, langs mekaar geïnkubeer en op dieselfde uur gelees. Die student vra watter plaat reg is.

Albei plate is reg. Hulle beantwoord verskillende vrae. Verwarring ontstaan wanneer die twee media as uitruilbare siftingsmedia vir dermbakterieë behandel word. Hulle deel 'n doel, naamlik om Gram-negatiewe enteriese organismes te selekteer en laktosefermenteerders van nie-fermenteerders te onderskei, maar hulle bereik dié doel met verskillende chemie en verskillende visuele logika. Sodra jy die twee onderliggende konsepte verstaan, word plaatseleksie en kolonie-interpretasie roetine.

Die kort antwoord

EMB-agar gebruik twee kleurstowwe, eosien Y en metileenblou, wat twee funksies tegelyk verrig: hulle onderdruk Gram-positiewe groei en presipiteer rondom sterk suurprodusente om donker kolonies te vorm, klassiek met 'n metaalgroen glans vir Escherichia coli. MacConkey-agar skei die funksies: galsoute plus kristalviolet onderdruk Gram-positiewe organismes, laktose dien as substraat vir fermentasie, en neutraalrooi dui suurvorming aan as pienk of rooi kolonies. As die taak 'n opvallende presumptiewe demonstrasie van E. coli is, het EMB 'n duidelike plek. As die taak 'n eenvoudige onderskeid tussen pienk en kleurlose laktosefermenteerders en nie-fermenteerders is, veral in stoelgang- of urienwerkvloeie, is MacConkey gewoonlik makliker om te lees. Geen van die plate identifiseer 'n organisme op grond van kleur alleen nie.

EMB: kleurstowwe wat tegelyk selekteer en aandui

Die EMB-konsep kombineer seleksie en aanduiding in dieselfde molekules. Die ASM-protokol vir eosien-metileenblou-agar beskryf EMB as sowel selektief as differensieel, met die kleurstofpaar wat baie Gram-positiewe organismes inhibeer terwyl laktosefermentasie kleurstofopname en presipitasie aandryf. 'n Standaard Levine-formulering bevat peptoon, laktose, fosfaat, eosien Y, metileenblou en agar, soos aangedui in die FDA BAM-metode vir Levine EMB-agar. Let daarop dat ouer EMB-resepte soms sukrose saam met laktose bygevoeg het, terwyl Levine EMB laktose sonder sukrose bevat; teken dus aan watter formulering jou laboratorium aanhou.

Om EMB te lees, beteken om kleurstofgedrag te lees. Kragtige laktosefermentasie produseer genoeg suur om sterk kleurstofpresipitasie te veroorsaak, wat E. coli sy donker blou-swart middelpunte gee en, in die klassieke geval, 'n groen metaalglans in weerkaatste lig. Swakker fermenteerders soos Enterobacter en Klebsiella groei tipies as pienk tot pers slymerige kolonies sonder daardie glans. Nie-fermenteerders soos Salmonella, Shigella en Proteus groei oor die algemeen as kleurlose of deurskynende kolonies omdat hulle nie die suurpiek produseer wat die kleurstowwe laat presipiteer nie. Gram-positiewe organismes word gewoonlik onderdruk, hoewel die mate van onderdrukking wissel volgens stam en produk. Volledige chemie van kleurstofbereiding, insluitend waarom metileenblou in die eerste plek as 'n kationiese kleurstof optree, hoort by 'n afsonderlike bespreking van kleurstofformulerings, en die algemene mikroskopiekonteks verskyn in 'n atlas van kleuringsmetodes. Hierdie artikel fokus op plaatseleksie en interpretasie.

Die figuur hierbo is illustratief. Dit toon die visuele logika wat jy kan verwag: donker kolonies met glans plus pienk slymerige tipes plus bleek tipes op EMB, teenoor pienk teenoor bleek tipes op MacConkey. Gebruik dit om die patroon te leer en bevestig daarna elke interpretasie teen gefotografeerde kontroles en die produkbylae vir die presiese medium op jou werkbank.

MacConkey: afsonderlike funksies, eenvoudiger visuele reël

Die MacConkey-konsep ken elke funksie aan 'n afsonderlike bestanddeel toe. Die ASM-protokol vir MacConkey-agar gebruik dieselfde selektiewe en differensiële raamwerk, en die FDA BAM-metode vir MacConkey-agar lys die funksionele komponente: peptone, laktose, galsoute, sout, neutraalrooi, kristalviolet en agar. Galsoute plus kristalviolet selekteer teen Gram-positiewe organismes. Laktose verskaf die fermentasiesubstraat. Neutraalrooi dien as die pH-aanwyser en verander na pienk tot rooi waar suur vorm, soms met gepresipiteerde gal rondom sterk fermenteerders.

Die leesreël is doelbewus eenvoudig: pienk beteken laktosefermenteerder; kleurloos of bleek beteken nie-fermenteerder. E. coli vertoon pienk tot rooi, dikwels met 'n halo van galpresipitaat. Klebsiella en Enterobacter vertoon pienk en is dikwels slymerig weens hul kapsules. Salmonella, Shigella, Proteus en baie ander Gram-negatiewe stawe vertoon kleurloos. 'n Bykomende voordeel is belangrik in onderriglaboratoriums: galsoute verminder gewoonlik Proteus-swerwing, sodat geïsoleerde kolonies makliker op MacConkey as op nie-selektiewe media verkry kan word, hoewel onderdrukking nie absoluut is nie en soutvrye alternatiewe bestaan waar beheer van swerwing die prioriteit is.

Die molekulêre rede waarom die kleurstowwe so optree, hou verband met lading en struktuur. Metileenblou is 'n kationiese fenotiasienkleurstof waarvan die struktuur en eienskappe sy affiniteit vir suur bakteriële oppervlakke verklaar, dieselfde affiniteit wat ter sprake is wanneer dit in suursones op EMB presipiteer.

Vergelyking in 'n oogopslag

Lees die tabel as 'n besluitprosedure. Wanneer die oefening vereis dat studente 'n gradiënt van fermentasiesterkte met een dramatiese eindpunt moet sien, toon EMB dit. Wanneer die oefening 'n vinnige binêre onderskeid voor biochemiese bevestiging vereis, toon MacConkey dit.

Watter medium vir watter monster

Vir wateroefeninge wat op presumptiewe herkenning van fekale koliforme of E. coli gemik is, is EMB aantreklik omdat die glans visueel kenmerkend is. MacConkey hanteer ook enteriese Gram-negatiewe organismes en is histories vir watertoetsing gebruik, maar geen van die plate vervang 'n regulatoriese watermetode nie, wat na gelang van die toets media soos gemodifiseerde mTEC of MI kan spesifiseer. Kontroleer die metode wat jou laboratorium verplig is om te volg.

Vir stoelgangtipe skeidings van fermenteerders en nie-fermenteerders is MacConkey oor die algemeen die nuttiger van die twee. Praktiese stoelgangwerk vir Salmonella of Shigella gebruik normaalweg ook meer selektiewe enteriese media soos XLD of Hektoen-enteriese agar eerder as om op MacConkey alleen staat te maak.

Vir urientipe onderrig wat 'n kliniese werkvloei naboots, kombineer MacConkey met bloedagar. MacConkey verskaf die vroeë onderskeid van Gram-negatiewe organismes, terwyl bloedagar organismes herwin wat deur MacConkey onderdruk word. Hierdie kombinasie is standaard in kliniese beskrywings van die opstelling van urienkulture.

Vir suiwer konsep-onderrig, gebruik albei. EMB leer dat fermentasiesterkte saak maak en dat een molekule twee rolle kan vervul. MacConkey leer modulêre ontwerp: selekteerder, substraat en aanwyser word afsonderlik gehou. Studente wat 'n bekende E. coli, 'n bekende Klebsiella aerogenes en 'n bekende Salmonella langs mekaar op albei media uitstryk, verwar die twee logikas daarna selde weer.

Slaggate by interpretasie wat elke termyn herhaal

Die algemeenste fout is identifikasie volgens kleur alleen. Pienk op MacConkey kan E. coli, Klebsiella, Enterobacter of 'n ander fermenteerder wees. Kleurloos kan Salmonella, Shigella, Proteus, Pseudomonas of 'n ander nie-fermenteerder wees. Kleur is 'n siftingsfenotipe wat bevestigende werk soos Gram-kleuring, oksidase, biochemiese panele of instrumentidentifikasie rig; dit is nie 'n spesienaam nie.

Die tweede fout is om te veel betekenis aan 'n ontbrekende glans te heg. Sommige egte E. coli-kolonies, veral geïsoleerde kolonies, produseer min of geen metaalglans op EMB nie. Die afwesigheid van glans sluit E. coli nie uit nie, en die teenwoordigheid daarvan bewys dit nie. Behandel die glans as 'n presumptiewe leidraad.

Die derde fout is om plate van verskillende ouderdomme te vergelyk. Vertraagde laktosefermenteerders kan ná langdurige inkubasie pienk op MacConkey word, wat die duidelike skeiding tussen fermenteerders en nie-fermenteerders vervaag. Lees op die uur wat deur die laboratorium gespesifiseer is en teken die inkubasietyd saam met die resultaat aan.

Die vierde fout is om gemengde groei as een organisme te interpreteer. 'n Pienk kolonie langs 'n kleurlose kolonie verteenwoordig twee fenotipes, nie 'n tussenvorm nie. Kies goed geïsoleerde kolonies en werk elke morfotipe afsonderlik. Slymerige tekstuur skep 'n soortgelyke slaggat: sowel Klebsiella as Enterobacter kan slymerig lyk, dus bepaal 'n kapsule alleen nooit die naam nie. Die organisme wat vroeër as Enterobacter aerogenes onderrig is, word nou as Klebsiella aerogenes geklassifiseer, wat verklaar waarom ouer tabelle en nuwer etikette skynbaar verskil.

Kontroles en 'n slotreël

Gebruik elke sessie gefotografeerde of vars kontroles: E. coli vir die sterk fermenteerderreaksie, Klebsiella aerogenes vir slymerige fermentasie sonder die klassieke glans, 'n Salmonella-stam vir die kleurlose nie-fermenteerderreaksie, en Staphylococcus aureus om onderdrukking van Gram-positiewe organismes op jou presiese produk te bevestig. Pas stamnommers en aanvaardingskriteria by die vervaardiger se produkbylae, omdat selektiwiteit met die gal-, kristalviolet- en kleurstofinhoud verander.

Onthou een sin by die werkbank. EMB gebruik kleurstowwe wat sowel selekteer as aandui, wat 'n dramatiese E. coli-sein lewer ten koste van 'n subtieler interpretasie. MacConkey skei seleksie van aanduiding, wat 'n eenvoudige onderskeid tussen pienk en bleek lewer ten koste van minder besonderhede oor fermentasie. Kies die medium waarvan die konsep by die vraag pas, bevestig kleur met toepaslike toetse, en die twee plate hou op om mee te ding en begin saamwerk.