Methylene blue tuntun àti fífún reticulocyte ní àwọ̀: àwọ̀ ọ̀tọ̀ àti ọ̀nà sẹẹli alààyè

Akẹ́kọ̀ọ́ kan ń múra láti ka reticulocyte, ó paṣẹ fún methylene blue, ó dà á pọ̀ mọ́ ẹ̀jẹ̀, kò sì fẹ́rẹ̀ẹ́ rí ohunkóhun. Akẹ́kọ̀ọ́ ẹlẹgbẹ́ rẹ̀ lo ìgò kan tí a kọ methylene blue tuntun sí, ó sì rí àwọn òwú búlúù tí ó hàn kedere nínú díẹ̀ lára àwọn sẹẹli ẹ̀jẹ̀ pupa. Akẹ́kọ̀ọ́ àkọ́kọ́ rò pé àwọ̀ inú ìgò kejì ṣẹ̀ṣẹ̀ wá ni tàbí pé ó pọ̀ sí i nínú ojútùú náà. Kì í ṣe èyíkéyìí nínú méjèèjì. Mólékúlù ọ̀tọ̀ ni ó wà nínú rẹ̀.

Èyí ni àṣìṣe òye tó fa ọ̀pọ̀lọpọ̀ ìdàrúdàpọ̀ nípa ọ̀rọ̀ yìí. Orúkọ náà dà bí ẹni pé methylene blue tuntun jẹ́ methylene blue tí a ṣe dáadáa sí i. Ṣùgbọ́n kẹ́míkà rẹ̀ sọ ohun mìíràn. Methylene blue tuntun N jẹ́ àwọ̀ phenothiazine ọ̀tọ̀ tó ní nọ́ńbà Colour Index tirẹ̀, ètò ìrọ́pò àwọn ẹgbẹ́ kẹ́míkà tirẹ̀, àti ipa tirẹ̀ tí a ti ṣètò sí ìwọ̀n kan nínú ìmọ̀ ẹ̀jẹ̀. Tí ìyàtọ̀ yẹn bá ṣe kedere, àwọn apá tó kù nínú ọ̀nà náà (ìdí tí àwọn sẹẹli fi gbọ́dọ̀ wà láàyè nígbà tí a ń fún wọn ní àwọ̀, ohun tí a kà sí reticulocyte, ibi tí àwọn ara Heinz wà nínú rẹ̀, àti ìgbà tí brilliant cresyl blue bá wọlé) yóò rọrùn láti lóye.

Ìdáhùn kúkúrú

Methylene blue tuntun N, àtúnṣe ìdánwò ìmọ̀ ẹ̀jẹ̀ náà, ni a sábà máa ń dá mọ̀ gẹ́gẹ́ bí Basic Blue 24 nínú àkọsílẹ̀ PubChem fún methylene blue tuntun, C.I. 52030, CAS 1934-16-3, àgbékalẹ̀ kẹ́míkà C18H22ClN3S. Methylene blue lásán jẹ́ methylthioninium chloride, Basic Blue 9, nínú àkọsílẹ̀ PubChem rẹ̀, C.I. 52015, CAS 61-73-4, àgbékalẹ̀ kẹ́míkà C16H18ClN3S. Nípa ìṣètò rẹ̀, methylene blue tuntun ní ẹgbẹ́ methyl méjì lórí òrùka àti àwọn ẹ̀wọ̀n ethylamino ní ẹ̀gbẹ́, níbi tí methylene blue ti ní àwọn ẹgbẹ́ dimethylamino. Ìyàtọ̀ yẹn yí bí àwọ̀ náà ṣe ń ṣiṣẹ́ padà. Àwọn ìwé ìmọ̀ ẹ̀jẹ̀ ṣàpèjúwe methylene blue lásán gẹ́gẹ́ bí àwọ̀ tí kò dára tó fún reticulocyte, àti methylene blue tuntun gẹ́gẹ́ bí èyí tó ń fúnni ní àwọ̀ jíjinlẹ̀ tí ó sì dọ́gba sí i; a ṣe àkótán ìfiwéra náà nínú ọ̀rọ̀ ScienceDirect nípa methylene blue tuntun.

Bẹ́ẹ̀ ni, methylene blue tuntun jẹ́ àwọ̀ supravital. Fífún ní àwọ̀ supravital túmọ̀ sí fífún àwọn sẹẹli alààyè ní àwọ̀ lẹ́yìn tí a bá yọ wọ́n kúrò nínú ara àti kí a tó fi wọ́n dúró, gẹ́gẹ́ bí a ṣe ṣàlàyé nínú àtúnyẹ̀wò NCBI nípa àwọn ìlànà fífún ní àwọ̀ supravital. Methylene blue tuntun àti brilliant cresyl blue méjèèjì wà nínú ẹ̀ka yìí, ìlànà ìwọ̀n CLSI fún reticulocyte sì darúkọ methylene blue tuntun ní pàtó gẹ́gẹ́ bí àwọ̀ supravital. Nígbà míì, àwọn akẹ́kọ̀ọ́ máa ń kà á sí ẹ̀ka kan náà pẹ̀lú fífún àwọn ìtànkálẹ̀ sẹẹli tí a ti fi dúró ní àwọ̀ Romanowsky. Èrò yẹn kò ṣiṣẹ́ níbí. Tí a bá kọ́kọ́ fi àwọn sẹẹli dúró, ọ̀nà náà kò ní ṣiṣẹ́ mọ́.

Fún àwọn òǹkàwé tí wọ́n ń tọpinpin àwọn orúkọ àwọ̀ tí ó jọra, methyl blue ní ìfiwéra pẹ̀lú methylene blue ṣàlàyé ìdàrúdàpọ̀ mìíràn tó tóbi sí i láàárín àwọ̀ triarylmethane anionic àti ẹbí phenothiazine cationic. Àkótán fífún ní àwọ̀ nínú yàrá ìdánwò gbé iṣẹ́ supravital sí àárín àwọn ọ̀nà ìtànkálẹ̀ sẹẹli tí a ti fi dúró, ìtọ́sọ́nà ìrísí àwọn sẹẹli ẹ̀jẹ̀ sì fi ibi tí àyẹ̀wò reticulocyte wà nínú àyẹ̀wò ìpín àwọn sẹẹli ẹ̀jẹ̀ tó gbòòrò sí i hàn.

Ìkìlọ̀ kan nípa kátálọ́ọ̀gù: irú methylene blue tuntun ọ̀tọ̀ kan wà gẹ́gẹ́ bí iyọ̀ oníméjì zinc chloride lábẹ́ CAS 6586-05-6. Nítorí náà, apá àwọn ọ̀nà yẹ kí ó darúkọ irú iyọ̀ àti olùpèsè, kì í ṣe orúkọ tí gbogbo ènìyàn mọ̀ nìkan.

Ohun tí fífún ní àwọ̀ supravital ń ṣe gan-an

Reticulocyte jẹ́ sẹẹli ẹ̀jẹ̀ pupa ọ̀dọ́ tí ó ti pàdánù kókó rẹ̀ ṣùgbọ́n tí RNA ribosome tó ṣẹ́kù ṣì wà nínú rẹ̀. Nínú ìmúrasílẹ̀ tútù tí a kò fún ní àwọ̀, RNA yẹn kò ṣeé rí. Àwọ̀ supravital wọ inú sẹẹli alààyè, ó sì mú kí RNA yẹn jáde kúrò nínú ojútùú tàbí kóra jọ sí àwọn patikulu àti òwú búlúù, ohun èlò reticulofilamentous tí a ń rí nígbà lílo epo ìmìbọ̀. Nítorí náà, nẹ́tíwọ́ọ̀kì náà jẹ́ àbájáde fífún ní àwọ̀, kì í ṣe egungun tí ó ti wà níbẹ̀ tó ń dúró de àwọ̀. Ìdí nìyẹn tí àwọn ohun tí ó lè yí padà nínú ìlànà (ìfojúsùn àwọ̀, buffer, ìpín ẹ̀jẹ̀ sí àwọ̀, ìwọ̀n otútù, àkókò) fi ṣe pàtàkì bí orúkọ àwọ̀ náà.

Ohun tí èyí túmọ̀ sí níbi iṣẹ́ ni pé a gbọ́dọ̀ tẹ̀lé ètò ìṣe ní pàtó: kọ́kọ́ da ẹ̀jẹ̀ tí a ti dènà dídì rẹ̀ pọ̀ mọ́ àwọ̀, jẹ́ kí ó dúró fún àkókò tí a yàn, lẹ́yìn náà ṣe àwọn ìtànkálẹ̀ lórí gíláàsì, kí o sì ṣàyẹ̀wò wọn láìfi wọ́n dúró àti láìlo àwọ̀ àfikún. Fífi àwọn sẹẹli dúró kí a tó fún wọn ní àwọ̀, tàbí lílo àwọ̀ àfikún tí ó bo àwọn òwú tí kò hàn gbangba mọ́lẹ̀, ń ba ìsọfúnni tí kíkà náà sinmi lé lórí jẹ́.

Ìlànà reticulocyte tí ó ṣiṣẹ́ pẹ̀lú methylene blue tuntun

Kò sí àkópọ̀ kan ṣoṣo tí gbogbo ènìyàn ń lò, nítorí náà sọ èyí tí a lò. Àwọn àyípadà mẹ́ta tí a ti ṣe àkọsílẹ̀ wọn fi bí ìyàtọ̀ ṣe rí hàn.

Ọ̀nà Brecher ìbílẹ̀ máa ń lo methylene blue tuntun tó jẹ́ nǹkan bí 0.5 percent pẹ̀lú potassium oxalate, tí a dà pọ̀ ní ìwọ̀n didun tó dọ́gba pẹ̀lú ẹ̀jẹ̀ EDTA tí a ti dà pọ̀ dáadáa, tí a sì jẹ́ kí ó dúró fún nǹkan bí 10 sí 15 minutes ní ìwọ̀n otútù yàrá. Lẹ́yìn tí a bá tún dà á pọ̀ rọra, a ṣe àwọn ìtànkálẹ̀ tín-ín-rín tí ó ní ìrísí bíbẹ̀, a jẹ́ kí wọ́n gbẹ ní afẹ́fẹ́, a sì ṣàyẹ̀wò wọn láìfi wọ́n dúró lábẹ́ lẹ́ńsì ojú-ohun epo 100x. Ìlànà NCBI fún kíkà reticulocyte ṣàpèjúwe ètò iṣẹ́ yìí àti férémù kíkà tí a ń lò pẹ̀lú rẹ̀.

Àyípadà Dacie àti Lewis máa ń lo methylene blue tuntun 1.0 percent nínú ojútùú iyọ̀ citrate, tí a dà pọ̀ mọ́ ẹ̀jẹ̀ tó jẹ́ ìlọ́po 2 sí 4 ìwọ̀n didun rẹ̀, tí a sì mú dúró ní 37 C fún 15 sí 20 minutes kí a tó ṣe ìtànkálẹ̀. Ìmúṣẹ tuntun kan láti mú ìlànà CLSI H44 bá ìwọ̀n kan náà mu lo ojútùú 0.1 percent tí ó fẹ́rẹ̀ẹ́ sí i nínú ojútùú iyọ̀ tí a fi phosphate ṣe buffer sí pH 7.4, pẹ̀lú jíjẹ́ kí ó dúró ní 20 C fún 10 minutes àti láìfi àwọn sẹẹli dúró, gẹ́gẹ́ bí a ṣe ròyìn nínú ìwádìí 2026 nípa mímú NMB bá ìwọ̀n kan náà mu.

Àwọn òfin kíkà jẹ́ ọ̀kan náà fún gbogbo àyípadà wọ̀nyí. Ka sẹẹli kan sí reticulocyte tí ó bá ní ó kéré tán àwọn patikulu méjì ọ̀tọ̀ tí àwọ̀ búlúù wọ̀ tàbí àwọn apá òwú méjì, èyí tí ó yọ àwọ̀ kan ṣoṣo tó rọ̀ sílẹ̀ kúrò. Ka ó kéré tán 1,000 sẹẹli ẹ̀jẹ̀ pupa nínú iṣẹ́ déédéé, kí o sì ròyìn reticulocyte gẹ́gẹ́ bí ìdá ọgọ́rùn-ún. Nígbà tí ìdá ọgọ́rùn-ún náà bá kéré, ìṣirò béèrè fún àwọn sẹẹli púpọ̀ sí i. Àtúnyẹ̀wò ọ̀nà CLSI H44 kan sọ pé níbi tí reticulocyte bá sún mọ́ 1 percent, a nílò nǹkan bí 4,400 sẹẹli láti mú ìyàtọ̀ kíkà dé 5 percent, nínú àtúnyẹ̀wò CLSI H44 ní De Gruyter. Dísíkì Miller inú lẹ́ńsì ojú jẹ́ kí kíkà púpọ̀ ṣeé ṣe ní ìrọ̀rùn. Ṣàlẹ̀ àwọ̀ náà tàbí pèsè tuntun, nítorí àwọ̀ tí ó rọ̀ sílẹ̀ máa ń jọ àwọn patikulu inú sẹẹli.

Àwọn ara Heinz nínú ìmúrasílẹ̀ kan náà

Ìtànkálẹ̀ supravital kan náà tún lè fi àwọn ara Heinz hàn, tí wọ́n jẹ́ àkójọpọ̀ hemoglobin tí oxidation ti ṣẹlẹ̀ sí, tí ìṣètò rẹ̀ sì ti bàjẹ́, kì í ṣe RNA tó ṣẹ́kù. Nínú àwọn ìmúrasílẹ̀ methylene blue tuntun, wọ́n máa ń hàn bí àwọn ara yíká, ní ọ̀pọ̀ ìgbà ẹyọ kan ṣoṣo lẹ́gbẹ̀ẹ́ awọ sẹẹli, tí àwọ̀ búlúù wọn fẹ́rẹ̀ẹ́ ju ti ohun èlò reticulofilamentous lọ. Wọn kò farada fífi sẹẹli dúró àti fífún ní àwọ̀ àfikún dáadáa, nítorí náà ṣàyẹ̀wò ìtànkálẹ̀ tí a kò fi dúró. Ìlànà tuntun kan tí ó lo 20 microliters ẹ̀jẹ̀ EDTA pẹ̀lú 20 microliters methylene blue tuntun 1 percent, tí a sì jẹ́ kí ó dúró fún 15 minutes, wọn iye àwọn sẹẹli tí àwọn ara Heinz wà nínú wọn láàárín 250 erythrocytes, nínú ìwádìí PMC tí ó ròyìn ìlànà yẹn.

Ìyàtọ̀ méjì ń dènà kíkà àbájáde ní aṣìṣe. Àkọ́kọ́, methyl violet àti crystal violet ń fún àwọn ara Heinz ní àwọ̀ tó lágbára ju methylene blue tuntun lọ, gẹ́gẹ́ bí a ṣe sọ nínú ọ̀rọ̀ ScienceDirect nípa ara Heinz. Methylene blue tuntun ni àṣàyàn tó rọrùn nígbà tí a bá ń ṣàyẹ̀wò reticulocyte àti àwọn ara Heinz pọ̀, kì í ṣe àwọ̀ tó lágbára jù lọ tí a yàn fún àwọn ara Heinz nìkan. Èkejì, àwọn àkójọpọ̀ HbH nínú ìwà àbùdá alpha thalassemia máa ń mú ọ̀pọ̀lọpọ̀ àmì kéékèèké jákèjádò sẹẹli lẹ́yìn fífún ní àwọ̀ supravital, nígbà tí àwọn ara Heinz ìbílẹ̀ kéré níye, tóbi sí i, tí wọ́n sì sábà máa ń so mọ́ awọ sẹẹli. Àwọ̀ tó rọ̀ sílẹ̀ ni ohun kẹta tó lè jọ wọ́n: ó wà níta ipele ìfojúsùn àwọn sẹẹli, ó sì yàtọ̀ láàárín àwọn agbègbè ìwò.

Brilliant cresyl blue ní ìfiwéra pẹ̀lú methylene blue tuntun

Àwọn àwọ̀ méjèèjì jẹ́ àwọ̀ supravital fún reticulocyte, ṣùgbọ́n ìṣètò sí ìwọ̀n kan fẹ́ ọ̀kan nínú wọn. Ọ̀nà reticulocyte CLSI H44-A2, tí a ṣe ní ìfọwọ́sowọ́pọ̀ pẹ̀lú International Council for Standardization in Haematology, tí a sì ṣe àkọsílẹ̀ rẹ̀ lórí ojú ìwé ìlànà ìwọ̀n CLSI H44, yan fífún ẹ̀jẹ̀ EDTA ní àwọ̀ pẹ̀lú methylene blue tuntun gẹ́gẹ́ bí ọ̀nà ìfiwéra iṣẹ́ ọwọ́. Ẹ̀kọ́ ìmọ̀ ẹ̀jẹ̀ ìbílẹ̀ fara mọ́ èyí nípa ìrísí: methylene blue tuntun ń fún àwọn òwú ní àwọ̀ jíjinlẹ̀ tí ó sì dọ́gba sí i, nígbà tí brilliant cresyl blue máa ń yàtọ̀ sí i láàárín àwọn ẹ̀yà tí a ṣe àti àwọn àpẹẹrẹ.

Ipò yẹn nílò àlàyé ààlà rẹ̀. Ìtọ́sọ́nà ICSH fún ṣíṣe àyẹ̀wò ẹ̀rọ atúpalẹ̀ gba àyẹ̀wò methylene blue tuntun pẹ̀lú maikirosikopu lọ́nà iṣẹ́ ọwọ́ gẹ́gẹ́ bí ọ̀nà ìfiwéra àtọ́kasí, ṣùgbọ́n ó sọ pé ó sinmi lórí ìdájọ́ ẹni tí ń ṣe é, pé kò sì péye tó, tí a fẹ́ràn àwọn ìlànà àtọ́kasí flow cytometry níbi tí wọ́n bá wà. Ìfiwéra 2022 kan ti 100 àpẹẹrẹ rí ìyapa tó kéré sí i kúrò nínú àbájáde ẹ̀rọ atúpalẹ̀ rẹ̀ pẹ̀lú brilliant cresyl blue ju pẹ̀lú methylene blue tuntun lọ, gẹ́gẹ́ bí a ṣe ròyìn nínú ìfiwéra PMC ti àwọn ọ̀nà fífún ní àwọ̀. Àkótán tí ó ní ìpìlẹ̀ fún àwọn akẹ́kọ̀ọ́ ni èyí: lo methylene blue tuntun gẹ́gẹ́ bí àwọ̀ ìfiwéra iṣẹ́ ọwọ́ tí a ti ṣètò sí ìwọ̀n kan, fi ọ̀nà brilliant cresyl blue èyíkéyìí tí a ń lò ní agbègbè rẹ wé e tàbí wé ètò aládàáṣiṣẹ́ láti fìdí rẹ̀ múlẹ̀, kí o sì retí ìtànkálẹ̀ àbájáde tó gbòòrò sí i láti inú àyẹ̀wò maikirosikopu iṣẹ́ ọwọ́ ní ọ̀nà méjèèjì. Àwọn ìwé àtijọ́ nípa ìṣètò sí ìwọ̀n kan tún ṣeduro Azure B tí a ti sọ di mímọ́ gẹ́gẹ́ bí àṣàyàn mìíràn tí ó mọ́ sí i nípa kẹ́míkà, nítorí àwọn ẹ̀yà àwọ̀ tí a ń tà yàtọ̀, nínú ìwádìí Marshall nípa Azure B, èyí tó ṣàlàyé ìdí tí ìpele mímọ́ àtúnṣe ìdánwò fi ṣì máa ń fara hàn nínú àwọn ìjíròrò ọ̀nà.

Yíyẹra fún àwọn àṣìṣe tí ó wọ́pọ̀

Àṣìṣe mẹ́rin ló fa ọ̀pọ̀lọpọ̀ àwọn ìmúrasílẹ̀ tí kò ṣàṣeyọrí. Pípaṣẹ fún methylene blue lásán dípò methylene blue tuntun N máa ń mú àwọ̀ tí kò lágbára jáde nítorí kẹ́míkà rẹ̀, kì í ṣe nítorí ọgbọ́n ìṣe. Fífi àwọn sẹẹli dúró tàbí fífún wọn ní àwọ̀ àfikún kí a tó ka àbájáde yọ àmì supravital kúrò. Kíkà àwọ̀ tó rọ̀ sílẹ̀ sí àwọn patikulu máa ń mú àbájáde ga ju bó ṣe yẹ lọ, ohun tí òfin patikulu méjì àti àwọ̀ tí a ti ṣàlẹ̀ ń dènà. Kíkà àwọn sẹẹli tí kò tó nígbà tí ìdá ọgọ́rùn-ún reticulocyte bá kéré ń mú nọ́ńbà kan tí ó dà bí ẹni pé ó péye jáde, ṣùgbọ́n tí ààlà ìgbẹ́kẹ̀lé rẹ̀ gbòòrò. Àṣìṣe kọ̀ọ̀kan ní àmì kan náà: ẹni tí ń lo maikirosikopu ń dá maikirosikopu lẹ́bi fún ohun tí ìgbésẹ̀ àtúnṣe ìdánwò ti pinnu.