Fífi búlúù methylene ṣe àbàwọ́n rọrùn ní àfiwé sí àbàwọ́n Gram: ohun tí ọ̀nà kọ̀ọ̀kan lè fi hàn

Akẹ́kọ̀ọ́ kan mú àpẹẹrẹ tín-ín-rín tí a tẹ́ sórí dígí láti inú àṣà ìdàgbàsókè bakitéríà tí a samisi E. coli, ó bo àpẹẹrẹ náà pẹ̀lú búlúù methylene fún ìṣẹ́jú kan, ó fi omi ṣan án, ó sì wò ó nípasẹ̀ lẹ́ńsì tí a ń lò pẹ̀lú òróró. Àwọn sẹ́ẹ̀lì búlúù tó rí bí ọ̀pá kún agbègbè ìwò náà. Ìròyìn yàrá ìdánwò náà sọ pé: "A dá àwọn bakitéríà Gram-òdì tó rí bí ọ̀pá mọ̀ gẹ́gẹ́ bí E. coli." Ohun tí a rí tọ́. Ṣùgbọ́n dígí àpẹẹrẹ yẹn kò fúnni ní ẹ̀rí tó yẹ fún ìparí náà.

Àṣìṣe náà wà nínú òye, kì í ṣe nínú ọ̀nà ìṣiṣẹ́. Akẹ́kọ̀ọ́ náà ka àbàwọ́n rọrùn sí ìdánwò ìyàtọ̀. Àbàwọ́n rọrùn àti àbàwọ́n Gram ń dáhùn àwọn ìbéèrè ọ̀tọ̀ọ̀tọ̀ nítorí pé wọ́n dá lórí àwọn ìlànà fífi àwọ̀ sí tó yàtọ̀. Ọ̀kan ń béèrè pé: ìrísí wo ló wà níbẹ̀. Èkejì ń béèrè pé: báwo ni ògiri sẹ́ẹ̀lì ṣe ń hùwà nígbà tí a bá fi sí ìdánwò. Bí o bá da àwọn méjèèjì pọ̀, dígí àpẹẹrẹ tí a fi àwọ̀ sí lọ́nà tó tọ́ lè yọrí sí ìròyìn tí kò ní ẹ̀rí tó yẹ.

Àfiwé yìí ń pa àwọn ọ̀nà méjèèjì mọ́ lọ́tọ̀, ó ń fi ohun tí àbájáde kọ̀ọ̀kan fún ọ ní ẹ̀tọ́ láti sọ hàn, ó sì ń dáhùn àwọn ìbéèrè méjì tí àwọn akẹ́kọ̀ọ́ máa ń béèrè jù lọ: ṣé a lè lo búlúù methylene nínú àbàwọ́n Gram, àti kí ni àbàwọ́n E. coli pẹ̀lú búlúù methylene ń fi hàn ní tòótọ́.

Ìdáhùn ní ṣókí

Àbàwọ́n rọrùn pẹ̀lú búlúù methylene ń fún gbogbo sẹ́ẹ̀lì tí àwọ̀ lè wọ̀ ní àwọ̀ búlúù kan náà, nítorí náà ó ń fi ìrísí hàn (ọ̀pá, bọ́ọ̀lù, àyíká) àti ètò ìṣètò (ọ̀kọ̀ọ̀kan, méjì-méjì, ẹ̀wọ̀n), ṣùgbọ́n kò sọ ohunkóhun nípa ẹ̀ka Gram. Àbàwọ́n Gram ń fi iodine, ìgbésẹ̀ yíyọ àwọ̀, àti àwọ̀ àfikún kún un, nítorí náà ó ń ya àwọn bakitéríà sí Gram-rere (àlùkò) àti Gram-òdì (pínkì tàbí pupa) gẹ́gẹ́ bí àwọn ìbòrí sẹ́ẹ̀lì wọn ṣe ń di àwọ̀ mú. Àwọn ọ̀pá búlúù lẹ́yìn fífi búlúù methylene sí túmọ̀ sí pé "àwọn sẹ́ẹ̀lì tó rí bí ọ̀pá wà níbẹ̀." Àwọn ọ̀pá pínkì lẹ́yìn gbogbo ìgbésẹ̀ Gram túmọ̀ sí pé "àwọn ọ̀pá Gram-òdì wà níbẹ̀." Gbólóhùn kejì ní ẹ̀rí tó lágbára sí i nítorí pé ọ̀nà ìṣiṣẹ́ náà ṣe ìdánwò àfikún.

Fún àkójọpọ̀ tó gbòòrò sí i ti àwọn ọ̀nà fífi àwọ̀ kan ṣoṣo sí bakitéríà tí àpilẹ̀kọ yìí jẹ́ apá rẹ̀, wo àtílásì àbàwọ́n fún ìwò máíkírósíkóòpù.

Àbàwọ́n rọrùn: àwọ̀ kan, ìbéèrè kan

Búlúù methylene jẹ́ ohun èlò àwọ̀ alábásì (tó ní kátíọ́nù). Íọ́nù rẹ̀ tó ní àwọ̀ ní ẹrù iná rere, ó sì ń so mọ́ àwọn ẹ̀yà sẹ́ẹ̀lì tó ní ẹrù iná òdì, títí kan àwọn ásíìdì núkílíìkì àti àwọn ẹgbẹ́ olómi-ásíìdì lórí ojú sẹ́ẹ̀lì, nítorí náà àwọn sẹ́ẹ̀lì máa ń hàn ní búlúù lórí abẹ́lẹ̀ tí àwọ̀ rẹ̀ fẹ́ẹ́rẹ́. OpenStax ṣàlàyé ìlànà fífi àwọ̀ sí sẹ́ẹ̀lì fúnra rẹ̀ yìí nínú orí rẹ̀ nípa àbàwọ́n. Kátíọ́nù ohun èlò àwọ̀ náà fúnra rẹ̀ ni íọ́nù phenothiazine kékeré tó tẹ́ pẹrẹsẹ tí a ṣàlàyé ní kíkún nínú ìtọ́kasí kẹ́míṣírì búlúù methylene; íọ́nù chloride tó jẹ́ alábàákẹ́gbẹ́ òdì rẹ̀ kì í ṣe ohun tó ń fúnni ní àwọ̀.

Ìlànà ìkọ́ni tó wọ́pọ̀ rọrùn ní ìmọ̀ọ́mọ̀: tẹ́ àpẹẹrẹ tín-ín-rín sórí dígí, jẹ́ kó gbẹ ní afẹ́fẹ́, fi ooru mú un dúró, bo ó pẹ̀lú búlúù methylene tí a tú sínú omi ní ìwọ̀n bí 1% fún nǹkan bí ìṣẹ́jú kan, fi omi ṣan án rọra, fi ohun amúomi gbẹ́ ẹ, kí o sì wò ó pẹ̀lú ọ̀nà ìwò tí a fi òróró sí láàárín àpẹẹrẹ àti lẹ́ńsì. Ìlànà ìkọ́ni LibreTexts kan fúnni ní ọ̀nà 1% fún ìṣẹ́jú kan yìí gan-an, ó sì sọ pé àwọn yàrá ìdánwò kan máa ń mú àkókò náà gùn sí i. Kò sí ohun amúàwọ̀dúró, kò sí ohun yíyọ àwọ̀, kò sí àwọ̀ kejì. Àìsí àwọn nǹkan wọ̀nyí ni kókó ọ̀nà náà. Pẹ̀lú àwọ̀ kan ṣoṣo àti láìsí yíyọ àwọ̀ ní ọ̀nà tó yan àwọn sẹ́ẹ̀lì kan, gbogbo sẹ́ẹ̀lì tí ó di àwọ̀ mú máa ń ní àwọ̀ kan náà ní ìparí.

Fún E. coli, ohun tí a retí láti rí nínú agbègbè ìwò ni àwọn ọ̀pá búlúù (bacilli), lọ́kọ̀ọ̀kan tàbí méjì-méjì tàbí nínú àwọn àkójọpọ̀ kékeré. Búlúù náà wá láti inú ohun èlò àwọ̀. Ìrísí ọ̀pá náà wá láti inú ẹ̀dá náà. Ṣùgbọ́n àpapọ̀ yìí kò dá ẹ̀dá náà mọ̀, nítorí ọ̀pọ̀ ẹ̀yà ni ìrísí ọ̀pá, ọ̀pọ̀ àwọn ọ̀pá sì ń di búlúù nínú àbàwọ́n rọrùn. ATCC sọ ààlà ìrísí-nìkan yìí ní kedere nínú ìtọ́sọ́nà rẹ̀ fún ṣíṣe àṣà ìdàgbàsókè àwọn ẹ̀dá kéékèèké. Ìròyìn tó tọ́ sọ pé: "a rí bacilli búlúù." Ohunkóhun tó kọjá ìrísí àti ètò ìṣètò nílò ẹ̀rí sí i.

Àbàwọ́n Gram: ohun èlò kẹ́míkà mẹ́rin, ìdánwò ìhùwàsí kan

Àbàwọ́n Gram jẹ́ àbàwọ́n tó ń fi ìyàtọ̀ hàn. Ó ń mú gbogbo sẹ́ẹ̀lì kọjá ọ̀wọ́ ìgbésẹ̀ kan náà, ó sì ń ṣàyẹ̀wò àwọn sẹ́ẹ̀lì tó di àwọ̀ àkọ́kọ́ mú àti àwọn tó pàdánù rẹ̀. Àwọn ìlànà àbàwọ́n Gram ti American Society for Microbiology ṣètò ọ̀wọ́ ìgbésẹ̀ mẹ́rin tó jẹ́ ìlànà àkọ́kọ́: crystal violet (àwọ̀ àkọ́kọ́), iodine Gram (ohun amúàwọ̀dúró), ọtí tàbí àdàlù acetone àti ọtí (ohun yíyọ àwọ̀), lẹ́yìn náà safranin (àwọ̀ àfikún).

Àwòṣe ìkọ́ni tó wọ́pọ̀ ṣàlàyé ìyàtọ̀ náà nípasẹ̀ ìṣètò ìbòrí sẹ́ẹ̀lì. Àwọn sẹ́ẹ̀lì Gram-rere ní ògiri peptidoglycan tó nípọn, tí omi inú rẹ̀ ń dín kù, tó sì ń di àpapọ̀ crystal violet àti iodine mú nígbà fífi ọtí ṣan án. Àwọn sẹ́ẹ̀lì Gram-òdì ní fẹ́lẹ́fẹ́lẹ́ peptidoglycan tín-ín-rín àti àwọ̀ ìta tí ọ̀rá pọ̀ nínú rẹ̀, èyí tí ohun yíyọ àwọ̀ ń ba ìṣètò rẹ̀ jẹ́; nítorí náà àpapọ̀ náà ń jáde nígbà fífọ̀, àwọn sẹ́ẹ̀lì náà sì ń gba safranin lẹ́yìn náà. Àtúnyẹ̀wò àbàwọ́n Gram ti NCBI Bookshelf fúnni ní àlàyé ògiri sẹ́ẹ̀lì yìí. Àwọn amọ̀ja fi kún un pé gbogbo ìlànà fíísíìkì àti kẹ́míṣírì tó wà nínú rẹ̀ díjú ju nínípọn ògiri nìkan lọ, ṣùgbọ́n fún ìtumọ̀ àbájáde ní yàrá ìdánwò, òfin ìhùwàsí náà ṣì dúró: àlùkò túmọ̀ sí pé àwọ̀ dúró, pínkì túmọ̀ sí pé àwọ̀ àkọ́kọ́ jáde, lẹ́yìn náà a fi àwọ̀ àfikún sí i.

Àwọn àwòrán àlàyé. Àwọn àwòrán tí a yà lọ́nà àrà fún àfiwé ọ̀nà, kì í ṣe fọ́tò tí kámẹ́rà ya láti inú máíkírósíkóòpù. A mú àwọn àwọ̀ náà rọrùn láti kọ́ni ní ìlànà náà: àwọ̀ kan nínú àbàwọ́n rọrùn, àwọ̀ méjì lẹ́yìn yíyọ àwọ̀ nínú ọ̀nà Gram.

Ṣé a lè lo búlúù methylene nínú àbàwọ́n Gram

Ìbéèrè yìí ní ìtumọ̀ méjì, wọ́n sì nílò ìdáhùn ọ̀tọ̀ọ̀tọ̀.

Ìtumọ̀ àkọ́kọ́: ṣé fífi búlúù methylene bo àpẹẹrẹ lẹ́ẹ̀kan lè rọ́pò gbogbo ọ̀wọ́ ìgbésẹ̀ Gram. Rárá. Láìsí iodine, ohun yíyọ àwọ̀, àti àwọ̀ àfikún, kò sí ìgbésẹ̀ tó ń fi ìyàtọ̀ hàn, nítorí náà a kò dán ẹ̀ka Gram kankan wò. Agbègbè búlúù lẹ́yìn lílo búlúù methylene nìkan jẹ́ àbájáde àbàwọ́n rọrùn, kódà bí ìgò rẹ̀ bá wà lẹ́gbẹ̀ẹ́ àwọn ohun èlò kẹ́míkà Gram. Má ṣe kọ ọ́ sílẹ̀ gẹ́gẹ́ bí àbájáde Gram.

Ìtumọ̀ kejì: ṣé búlúù methylene lè rọ́pò safranin gẹ́gẹ́ bí àwọ̀ àfikún ní ìgbésẹ̀ 4. Nípa iṣẹ́ rẹ̀, ó lè fún àwọn sẹ́ẹ̀lì tí a yọ àwọ̀ wọn ní àwọ̀, eré ìdánilẹ́kọ̀ọ́ inú ìwé ẹ̀kọ́ sì sọ pé a máa rí àwọn sẹ́ẹ̀lì Gram-rere àlùkò àti àwọn sẹ́ẹ̀lì Gram-òdì búlúù lẹ́yìn ìrọ́pò bẹ́ẹ̀. Ìrònú náà tọ́ nítorí pé àwọn sẹ́ẹ̀lì Gram-òdì tí a yọ àwọ̀ wọn lọ́nà tó tọ́ fẹ́rẹ̀ẹ́ má ní àwọ̀, wọ́n á sì gba ohun èlò àwọ̀ mìíràn tó ní kátíọ́nù. Ṣùgbọ́n kì í ṣe ìlànà tó jẹ́ àṣà. Àwọn ìlànà ASM sọ pé kí a lo safranin, pẹ̀lú àwọn àṣàyàn mìíràn tí a mọ̀ sí, bí basic fuchsin nínú àwọn ẹ̀yà ìlànà kan, kì í ṣe búlúù methylene. Ìṣòro kan tún wà níbi iṣẹ́: yíya búlúù sọ́tọ̀ kúrò ní àlùkò ṣòro ju yíya pínkì sọ́tọ̀ kúrò ní àlùkò lọ, pàápàá fún àwọn olùbẹ̀rẹ̀ àti nígbà tí àwọn fìtílà máíkírósíkóòpù ti rẹ̀. Fún iṣẹ́ ẹ̀kọ́ àti àbájáde èyíkéyìí tó ṣe pàtàkì, lo àwọ̀ àfikún tí ìlànà rẹ dárúkọ, èyí tó sábà máa ń jẹ́ safranin, kí o sì ka àwọ̀ àfikún búlúù methylene sí ẹ̀yà ìfihàn dípò ìlànà àṣà tó dọ́gba pẹ̀lú rẹ̀.

Ìbéèrè tó jọmọ́ èyí nípa bí búlúù methylene ṣe rí ní àfiwé pẹ̀lú àwọn àṣàyàn àwọ̀ kan ṣoṣo mìíràn ni a jíròrò nínú àfiwé àwọn àbàwọ́n rọrùn fún bakitéríà.

Ohun tí àbàwọ́n E. coli pẹ̀lú búlúù methylene fi hàn, àti ohun tí kò fi hàn

E. coli jẹ́ bakitéríà Gram-òdì tó rí bí ọ̀pá, ṣùgbọ́n gbólóhùn yẹn ṣàpapọ̀ àwọn òtítọ́ láti ọ̀pọ̀ ọ̀nà: ìrísí láti inú ìwò máíkírósíkóòpù, ìhùwàsí Gram láti inú àbàwọ́n Gram, àti ìdánimọ̀ láti inú àṣà ìdàgbàsókè pẹ̀lú ìdánwò kẹ́míṣírì ẹ̀dá tàbí ìdánwò molékúlà. Àpẹẹrẹ tí a fi búlúù methylene sí ń pèsè apá àkọ́kọ́ nìkan. Ó fi hàn pé àwọn sẹ́ẹ̀lì tó rí bí ọ̀pá wà nínú àpẹẹrẹ tí a fi àwọ̀ sí, àti bí wọ́n ṣe tò. Kò fi ìhùwàsí Gram múlẹ̀, nítorí a kò ṣe ìdánwò yíyọ àwọ̀. Kò dá ẹ̀yà ẹ̀dá náà mọ̀, nítorí àwọn ọ̀pá láti ọ̀pọ̀ ẹ̀yà jọ ara wọn ní ìwọ̀n agbára ìyàtọ̀ ìwò yìí.

Ibí yìí ni àwọn ìròyìn ti máa ń ṣàṣìṣe lọ́nà tí a lè retí. Òǹkọ̀wé ń kó ìmọ̀ tó ti ní tẹ́lẹ̀ ("a retí pé àṣà ìdàgbàsókè yìí jẹ́ E. coli, àti pé E. coli jẹ́ Gram-òdì") sínú gbólóhùn ohun tí a rí, tó fi jẹ́ pé dígí àpẹẹrẹ dà bí ẹni pé ó fìdí ohun tí a kàn rò tẹ́lẹ̀ múlẹ̀. Ìròyìn tó ṣe kedere sí i máa ń ya àwọn ipele náà sọ́tọ̀: "Àbàwọ́n rọrùn pẹ̀lú búlúù methylene: a rí bacilli búlúù; ìrísí nìkan, a kò dán ẹ̀ka Gram kankan wò." Lẹ́yìn náà, bí a bá ti ṣe àbàwọ́n Gram lọ́nà tó tọ́ pẹ̀lú àwọn àpẹẹrẹ ìṣàkóso: "Àbàwọ́n Gram: àwọn ọ̀pá pínkì, tó bá Gram-òdì mu." Ìdánimọ̀ ẹ̀yà máa ń dé lẹ́yìn náà, láti inú ọ̀wọ́ iṣẹ́ ìdánimọ̀, kì í ṣe láti àwọ̀ nìkan.

Ìtọ́sọ́nà ìtumọ̀ àbájáde fún lílò níbi iṣẹ́

Lo òfin ìpinnu yìí níbi iṣẹ́ yàrá ìdánwò. Bí gbogbo sẹ́ẹ̀lì bá ní àwọ̀ kan, tí ìlànà náà sì lo ohun èlò àwọ̀ kan láìsí ohun yíyọ àwọ̀, àbàwọ́n rọrùn ni o ṣe. Ròyìn ìrísí, ìṣírò ìwọ̀n, àti ètò ìṣètò. Dáwọ́ dúró níbẹ̀. Bí ìlànà náà bá lo crystal violet, iodine, ohun yíyọ àwọ̀, àti àwọ̀ àfikún pẹ̀lú àwọn àpẹẹrẹ ìṣàkóso rere àti òdì tí a mọ̀, àbàwọ́n Gram ni o ṣe. Ròyìn àwọ̀ pẹ̀lú ìrísí: àwọn cocci àlùkò nínú ẹ̀wọ̀n, àwọn ọ̀pá pínkì, àti bẹ́ẹ̀ bẹ́ẹ̀ lọ.

Àṣìṣe mẹ́ta ló ń fa ọ̀pọ̀ jù lọ nínú ìdàrúdàpọ̀. Àkọ́kọ́, fífi ìtumọ̀ tó ju ẹ̀rí lọ sí àwọn ọ̀pá búlúù bí ẹni pé wọ́n fìdí E. coli múlẹ̀. Èkejì, kíkọ dígí àpẹẹrẹ búlúù methylene sílẹ̀ lábẹ́ àkọlé "àbàwọ́n Gram" nínú ìwé àkọsílẹ̀, èyí tí àwọn tó bá kà á lẹ́yìn yóò túmọ̀ lọ́nà tí kò tọ́. Ẹ̀kẹta, yíyí àwọn àwọ̀ àfikún padà láìronú jinlẹ̀, lẹ́yìn náà ṣíṣe àfiwé àwọ̀ láàárín àwọn yàrá ìdánwò bí ẹni pé àwọn àkójọpọ̀ àwọ̀ wọn dọ́gba. Àtúnṣe kan náà ló wà fún àṣìṣe kọ̀ọ̀kan: dárúkọ ọ̀nà tí o ṣe ní tòótọ́, kí o sì sọ ohun tí ọ̀nà náà dán wò nìkan.

Àbàwọ́n rọrùn ní ipò tirẹ̀ gan-an nítorí pé ohun tí ó sọ pé òun fi hàn kéré. Ó yára, kò nílò ìpéye tó le koko, ó sì tó nígbà tí ìbéèrè bá dá lórí ìrísí: ṣé ohunkóhun wà níbẹ̀, ìrísí wo ló sì ní. Nígbà tí ìbéèrè bá dá lórí ìpín sí ẹ̀ka, ṣe ìdánwò ìyàtọ̀. Dígí àpẹẹrẹ búlúù ń sọ bí àwọn sẹ́ẹ̀lì ṣe rí fún ọ. Dígí àpẹẹrẹ àlùkò tàbí pínkì ń sọ bí àwọn ògiri wọn ṣe ń hùwà fún ọ. Kò sí èyíkéyìí nínú àwọn dígí àpẹẹrẹ méjèèjì tó lè sọ ẹ̀yà ẹ̀dá náà fún ọ ní òun nìkan.