Metilen ko‘ki va Bartonella: laboratoriya natijalari va klinik dalillarning chegaralari

Kultura idishi va bemor uchun bir xil so‘z — infeksiya — ishlatiladi, ammo bu so‘z ular uchun bir xil tushunchani anglatmaydi. Idishda infeksiya agardagi koloniyalar sonidir. Bemorda esa bu hujayralar va tomirlar ichidagi bakteriyalar, qon va to‘qimalar bo‘ylab harakatlanayotgan dorilar hamda ishning bir qismini bajarayotgan immun tizimidir. Bu ikkisini chalkashtirsangiz, laboratoriyadagi ta’sirchan raqam davolash usulidek ko‘rina boshlaydi. Ularni bir-biridan ajratsangiz, o‘sha raqam asl mohiyatini saqlaydi: keyingi tajribani o‘tkazish uchun sabab.

Metilen ko‘ki va Bartonella haqidagi ushbu sharhning asosiy vazifasi aynan shu farqni saqlashdir. Bitta tadqiqot guruhining ikki laboratoriya tadqiqotida metilen ko‘ki o‘smayotgan holatdagi Bartonella henselae ga qarshi sinovdan o‘tkazilgan. Ikkalasida ham shisha va plastik idishlarda kuchli faollik qayd etilgan. Hech birida odamlarda sinov o‘tkazilmagan.

Nega tadqiqotchilar statsionar fazani sinaydi

Antibiotik sinovlarining aksariyatida o‘sayotgan hujayralar ishlatiladi. Bunday model murakkabroq holatni qamrab olmaydi: bo‘linishdan to‘xtagan va o‘sayotgan boshqa hujayralarni o‘ldiradigan dorilarga bardosh beradigan hujayralar.

Bartonella organizmda, jumladan eritrotsitlar va endotelial hujayralar ichida saqlanib qolishi mumkin. Shu sababli guruh B. henselae statsionar fazaga o‘tganidan keyin qaysi tasdiqlangan dorilar uni o‘ldira olishini tekshirgan. O‘sayotgan hujayralarga qarshi past MIC statsionar fazadagi hujayralarning o‘ldirilishini oldindan ko‘rsatmagan. Rifampinning MIC qiymati juda past bo‘lsa-da, u statsionar hujayralarni sust o‘ldirgan, MIC qiymatlari yuqoriroq bo‘lgan birikmalar esa ularni yaxshi o‘ldirgan. Bunday maqolalarni o‘qish uchun umumiy yondashuv izlayotgan o‘quvchilar uni metilen ko‘ki haqidagi tadqiqotlarni o‘qish qo‘llanmasidan topishi mumkin.

Birinchi skrining: Li va hamkasblari, 2019

Antibiotics jurnalida chop etilgan 2019 yilgi statsionar faza skriningida bitta shtamm — B. henselae JK53 — ishlatilgan. U 10 foiz homila qoramol zardobi qo‘shilgan Schneider oziqa muhitida, 37 C haroratda va 5 foiz CO2 sharoitida o‘stirilgan. Bir kunlik kulturalar asosan tarqoq holdagi bo‘linayotgan hujayralardan iborat bo‘lgan. Har mL da taxminan 10 ning 8-darajasi miqdorida koloniya hosil qiluvchi birlik bo‘lgan besh kunlik kulturalar statsionar faza deb qabul qilingan va ularda ko‘zga ko‘rinadigan agregatlar bo‘lgan.

Sinovda propidiy yodid bilan birga SYBR Green I ishlatilgan; usul tirik va izopropanol bilan o‘ldirilgan hujayralar aralashmalariga nisbatan kalibrlangan. Metilen ko‘ki kuchli rangga ega bo‘lgani uchun faol deb topilgan moddalar avval mikroskopiya orqali, so‘ng qonli agardagi koloniyalarni sanash orqali tasdiqlangan. Ikkinchisi qat’iyroq yakuniy ko‘rsatkich bo‘lgan.

50 mikromolyar konsentratsiyada tekshirilgan 1,581 ta tasdiqlangan dori orasida metilen ko‘ki qo‘llangandan keyin planshet o‘quvchi asbob bo‘yicha yashovchanlik 16 foiz, mikroskopiya bo‘yicha esa 25 foiz bo‘lgan. Daptomitsin uchun bu ko‘rsatkich 21 foiz, bir nechta azol uchun 22 dan 27 foizgacha, gentamitsin uchun 32 foiz, eritromitsin uchun 66 foiz, siprofloksatsin uchun 74 foiz bo‘lgan. Pirviniy pamoat asbob natijalarida kuchliroq ko‘ringan, ammo o‘ziga xos fluoressensiyasi sababli uni mikroskopiya orqali baholab bo‘lmagan.

O‘sayotgan B. henselae ga qarshi metilen ko‘kining MIC qiymati har mL da 0.08 dan 0.16 mikrogrammgacha bo‘lgan. Besh kunlik statsionar hujayralarga har mL da 5 mikrogramm konsentratsiyada ta’sir qilinganda, bir kundan keyin koloniyalar aniqlanmaydigan darajaga tushgan. Bu daptomitsin va pirviniy pamoatning sinovda qo‘llangan konsentratsiyalaridagi natijalarga mos kelgan. Vaqtga bog‘liq o‘ldirishni baholagan alohida sinovda har mL da 10 mikrogramm ishlatilgan. Bular doza emas, laboratoriyadagi ta’sir konsentratsiyalari bo‘lib, maqolada ham shunday ko‘rsatilgan. Odam qon plazmasidagi eng yuqori konsentratsiya taxminan har mL da 3.9 mikrogramm ekani haqidagi keltirilgan qiymat maqolada faqat qo‘shimcha kontekst sifatida berilgan. Metilen ko‘ki farmakokinetikasi haqidagi sharh plazmadagi qiymatni nega to‘qimadagi qiymat deb talqin qilib bo‘lmasligini tushuntiradi.

Maqolada ikki cheklov aniq ko‘rsatilgan. Bioplyonka modeli bo‘lmagan va metilen ko‘ki kombinatsiyalari sinovdan o‘tkazilmagan. Besh kunlik agregatlar statsionar suyuq kulturadagi hujayra to‘plamlari bo‘lgan, tasdiqlangan bioplyonka tajribasi emas. Mualliflar hayvonlarda, kombinatsiyalar bilan, bioplyonkalarda va Bartonella ning boshqa turlarida tadqiqotlar o‘tkazish zarurligini ta’kidlagan.

Kombinatsiyalar va bioplyonkadan olingan hujayralar: Zheng va hamkasblari, 2020

BMC Microbiology jurnalidagi 2020 yilgi davomiy tadqiqotda o‘sha shtamm va oziqa muhiti saqlangan, ammo olti kunlik statsionar kulturalarga o‘tilgan hamda birinchi maqolada bo‘lmagan ikki jihat qo‘shilgan: ikki preparatli kombinatsiyalar va bioplyonkadan olingan hujayralar modeli.

Alohida dorilar bir xil — har mL da 5 mikrogramm — konsentratsiyada 24 soat qo‘llanganda, metilen ko‘kidan keyin har mL da 3.2 × 10 ning 4-darajasi miqdorida koloniya hosil qiluvchi birlik qolgan; nazoratdagi ko‘rsatkich esa taxminan 2.8 × 10 ning 10-darajasi bo‘lgan. Shu vaqtda siprofloksatsin, gentamitsin va nitrofurantoin qo‘llanganda kamroq koloniya qolgan. Bu 2019 yilgi natijadan farq qiladi: o‘sha tadqiqotda xuddi shu nominal konsentratsiyada bir kundan keyin aniqlanadigan koloniyalar qolmagan. Kulturaning yoshi, zichligi va unga ishlov berish usullari farq qilgan. Shu bois o‘ldiruvchi ta’sirning yo‘nalishi takrorlangan, ammo ko‘lami bir xil bo‘lmagan. Sinovlar orasidagi bu tafovut laboratoriyadagi kuchli ta’sirni klinik ta’sirdan alohida ko‘rib chiqish standart xavfsizlik va o‘zaro ta’sir tekshiruvlarida muhim bo‘lishining sabablaridan biridir.

Kombinatsiyalar skriningi eng ko‘p iqtibos keltiriladigan qismdir. Har bir komponent har mL da 5 mikrogramm konsentratsiyada belgilangan. Azitromitsin va metilen ko‘ki hamda rifampin va metilen ko‘ki kombinatsiyalarining ikkalasida ham 24 soatda statsionar fazadagi koloniyalar aniqlanmagan. Siprofloksatsin qatnashgan ikkala juftlikda ham shunday natija kuzatilgan; sinovdan o‘tkazilgan 25 juftlik orasida faqat shu to‘rttasi bunday natija bergan. Rasmiy sinergiya tahlili o‘tkazilmagan. Shu sababli to‘g‘ri atama — tasdiqlangan sinergiya emas, balki shu sharoitlarda faol bo‘lgan kombinatsiya.

Bioplyonka tajribasida preparatning buzilmagan, yetilgan bioplyonka ichiga kirishi emas, balki buzilgan yosh bioplyonkadan ajratib olingan hujayralar tekshirilgan. Kulturalar besh kun o‘stirilgan, suyultirib chuqurchali planshetlarga joylashtirilgan va yana besh kun o‘stirilgan. Bioplyonka kristall binafsha bilan bo‘yash orqali tasdiqlangan, so‘ng preparat ta’siridan oldin qirib olingan. Har mL da 5 mikrogramm konsentratsiyadagi metilen ko‘ki yakka holda qo‘llanganda, 6-kunga kelib ko‘rsatkich 2.3 × 10 ning 2-darajasigacha tushgan. Bu yakka preparatlar orasidagi eng yaxshi natijalardan biri bo‘lgan, ammo nolga teng bo‘lmagan. Metilen ko‘ki qatnashgan ikkala kombinatsiya ham 6-kunga kelib nolga yetgan; siprofloksatsin qatnashgan ikkala kombinatsiyada ham shunday bo‘lgan.

Mualliflar sinchkov o‘quvchi ham payqaydigan cheklovlarni qayd etgan: eski, buzilmagan bioplyonka o‘rniga yosh, qirib olingan bioplyonka; har bir dorining amalda erishiladigan o‘z eng yuqori konsentratsiyasi o‘rniga barcha dorilar uchun bitta qulay konsentratsiya; faqat azitromitsin yoki rifampin asosidagi tanlangan juftliklar; bitta shtamm; hayvonlar va bemorlarda sinovlar yo‘qligi. Keyinchalik uch preparatli tadqiqot o‘tkazish taklif qilingan, ammo uning natijalari keltirilmagan.

Tadqiqot dizaynlarini taqqoslash

Jadval ushbu maqolaning asosiy fikrini ixcham shaklda ifodalaydi. Oxirgi ustundan chapdagi barcha ma’lumotlar kultura bilan olib borilgan ishlarga tegishli. Ikkala maqoladagi hech bir natija oxirgi ustunga kirmaydi.

Bartonella — Borrelia emas

Ikkala maqolada ham Laym kasalligini keltirib chiqaruvchi spiroxeta — Borrelia burgdorferi — tilga olingan. Sababi, bo‘yoq asosidagi sinov usuli shu laboratoriyada ilgari Borrelia ning statsionar fazasi bilan olib borilgan ishlardan olingan; ularda metilen ko‘ki va daptomitsin ham faol moddalar sifatida aniqlangan. Bu tarix foydali kontekst beradi, ammo ko‘pincha xatoga ham sabab bo‘ladi.

Bartonella haqidagi ikkala maqoladagi hech bir tajribada Borrelia va Bartonella yonma-yon sinovdan o‘tkazilmagan. Organizmlar, oziqa muhitlari va konsentratsiyalar farq qiladi. Metilen ko‘kining Bartonella membranasiga taxmin qilingan ta’siri esa qo‘shimcha tadqiqotni talab qiladigan faraz sifatida bayon etilgan. Natijalarni bir turdan boshqasiga ko‘chirish mumkin emas va ikkala maqola ham parazitlar haqidagi keng qamrovli da’volarni asoslamaydi. Borrelia va Bartonella persister hujayralarini taqqoslashda aynan shu sababli ikki yo‘nalishdagi ilmiy adabiyotlar alohida ko‘rib chiqiladi.

Nega kultura natijalari protokolga aylanmaydi

Metilen ko‘ki bilan bartonellyoz uchun protokolni izlashga qiziqish tushunarli. Ushbu maqolalar bu iborani xarid ro‘yxati emas, balki ogohlantiruvchi belgi sifatida qabul qilish kerakligining sababini ko‘rsatadi.

Birinchidan, planshet chuqurchasidagi har mL da 5 mikrogramm konsentratsiya retsept emas. Bu qiymatda so‘rilish, taqsimlanish, oqsillar bilan bog‘lanish, hujayra ichiga kirish yoki organizmning preparatni ko‘tara olishi hisobga olinmagan. Mualliflar uni antibiotiklarning eng yuqori konsentratsiyalaridan olingan taxminiy o‘rtacha qiymat sifatida tanlagan va kelgusi ishlarda har bir dorining amalda erishiladigan o‘z konsentratsiyasidan foydalanish kerakligini aytgan.

Ikkinchidan, nol koloniya to‘qima steril ekanini emas, balki aynan shu ekish sharoitlarida koloniyalar yo‘qligini anglatadi. Persister hujayralar, hujayra ichidagi bakteriyalar va namuna olishdagi cheklovlarning barchasi agar plastinkasi qamrovidan tashqarida qoladi.

Uchinchidan, chuqurchani steril holga keltiradigan kombinatsiyalar organizmda samara bermasligi yoki zarar yetkazishi mumkin. Azitromitsin va metilen ko‘ki hamda rifampin va metilen ko‘ki laboratoriyadagi ta’sir konsentratsiyalarida tekshirilgan laboratoriya juftliklaridir. Hayvonlardagi farmakokinetika va odamlardagi nazoratli tadqiqot ma’lumotlarisiz doza, davomiylik va foyda-xavf nisbati aniqlanmagan. Variantlarni ko‘rib chiqayotgan har bir kishi ularni shifokor bilan muhokama qilishi va idishdagi ma’lumotlardan biror xulosa chiqarishdan oldin metilen ko‘kini qo‘llash qachon tibbiy nazoratni talab qilishini ko‘rib chiqishi kerak.

Ushbu maqolalar asoslaydigan tor doiradagi xulosa shuki: metilen ko‘ki in vitro sharoitida o‘smayotgan B. henselae JK53 ga qarshi, jumladan ikki preparatli laboratoriya kombinatsiyalarida, takroran kuzatiladigan faollikka ega. Kombinatsiyalar va bioplyonkadan olingan hujayralar bo‘yicha eng kuchli natijalar 2020 yilgi tadqiqotda qayd etilgan. Qolgan barcha masalalar, jumladan bu faollik odamlardagi bartonellyoz uchun ahamiyatlimi yoki yo‘qmi, hali tekshirilmagan.