EMB agar va MacConkey agar: muhitni tanlash va talqin qilish

Talaba bir xil suv namunasini ikkita plastinkaga shtrix usulida ekadi. Birida yashil metallik jilo beruvchi to‘q koloniyalar paydo bo‘ladi. Ikkinchisida esa xira haloli yorqin pushti koloniyalar ko‘rinadi. Har ikkala plastinka bir xil probirkadan inokulyatsiya qilingan, yonma-yon inkubatsiya qilingan va bir xil vaqtda o‘qilgan. Talaba qaysi plastinka to‘g‘ri ekanini so‘raydi.

Har ikkala plastinka ham to‘g‘ri. Ular turli savollarga javob beradi. Chalkashlik ikki muhitni ichak bakteriyalarini aniqlash uchun o‘zaro almashtiriladigan skrining vositalari deb qarashdan kelib chiqadi. Ularning maqsadi umumiy: Gram manfiy enterik organizmlarni seleksiya qilish va laktoza fermentatorlarini fermentatsiya qilmaydiganlardan ajratish. Ammo ular bu maqsadni turli kimyo va turli vizual mantiq orqali amalga oshiradi. Ikki asosiy konsepsiyani tushunganingizdan so‘ng, plastinka tanlash va koloniyalarni o‘qish odatiy jarayonga aylanadi.

Qisqa javob

EMB agar ikki xil bo‘yoqdan, eosin Y va methylene blue dan foydalanadi; ular ikki vazifani bir vaqtning o‘zida bajaradi: Gram musbat o‘sishni bostiradi va ko‘p kislota hosil qiluvchilar atrofida cho‘kib, to‘q koloniyalarni hosil qiladi, Escherichia coli uchun esa klassik tarzda metallik yashil jilo kuzatiladi. MacConkey agar vazifalarni ajratadi: o‘t tuzlari va crystal violet Gram musbatlarni bostiradi, laktoza fermentatsiya uchun substrat beradi, neutral red esa kislotani pushti yoki qizil koloniyalar sifatida ko‘rsatadi. Agar vazifa E. coli ni yaqqol presumptiv tarzda namoyish etish bo‘lsa, EMB o‘z o‘rniga ega. Agar vazifa laktoza fermentatorlarini fermentatsiya qilmaydiganlardan pushti va rangsiz ko‘rinish bo‘yicha aniq ajratish bo‘lsa, ayniqsa najas yoki siydik ish jarayonlarida, MacConkey odatda o‘qish uchun soddaroq. Hech bir plastinka organizmni faqat rangiga qarab aniqlamaydi.

EMB: bir vaqtning o‘zida seleksiya qiluvchi va signal beruvchi bo‘yoqlar

EMB konsepsiyasida seleksiya va indikatsiya bir xil molekulalarga yuklangan. ASM eosin methylene blue agar protokoli EMB ni ham selektiv, ham differensial muhit sifatida ta’riflaydi: bo‘yoqlar juftligi ko‘plab Gram musbat organizmlarni ingibirlaydi, laktoza fermentatsiyasi esa bo‘yoqlarning yutilishi va cho‘kishini kuchaytiradi. Standart Levine formulasi pepton, laktoza, fosfat, eosin Y, methylene blue va agardan iborat bo‘lib, bu tarkib Levine EMB agar uchun FDA BAM usuli da keltirilgan. Eski EMB retseptlarining ayrimlarida laktoza bilan birga saxaroza ham qo‘shilgan, Levine EMB esa saxarozasiz laktoza saqlaydi, shuning uchun laboratoriyangizda qaysi formuladan foydalanilishini qayd eting.

EMB ni o‘qish bo‘yoqlarning xatti-harakatini o‘qish demakdir. Kuchli laktoza fermentatsiyasi yetarli miqdorda kislota hosil qilib, bo‘yoqlarning ko‘p miqdorda cho‘kishiga olib keladi; natijada E. coli to‘q ko‘k-qora markazlarga ega bo‘ladi va klassik holatda qaytgan yorug‘likda yashil metallik jilo ko‘rsatadi. Enterobacter va Klebsiella kabi kuchsizroq fermentatorlar odatda bunday jilosiz, pushtidan binafshagacha bo‘lgan mukoid koloniyalar shaklida o‘sadi. Salmonella, Shigella va Proteus kabi fermentatsiya qilmaydiganlar odatda rangsiz yoki shaffof koloniyalar hosil qiladi, chunki ular bo‘yoqlarni cho‘ktiradigan keskin kislota hosil bo‘lishini yuzaga keltirmaydi. Gram musbatlar odatda bostiriladi, biroq bostirish darajasi shtamm va mahsulotga qarab farq qiladi. Bo‘yoq tayyorlashning to‘liq kimyosi, jumladan methylene blue nega avvalo kationik bo‘yoq sifatida tutishi, bo‘yoq formulalariga bag‘ishlangan alohida muhokama mavzusidir; umumiy mikroskopiya konteksti esa bo‘yash usullari atlasida keltirilgan. Ushbu maqola plastinka tanlash va natijani o‘qishga qaratilgan.

Yuqoridagi rasm illustrativdir. U kutiladigan vizual mantiqni ko‘rsatadi: EMB da to‘q jiloli koloniyalar, pushti mukoid turlar va och rangli turlar; MacConkey da esa pushti va och rangli turlar. Undan naqshni o‘rganish uchun foydalaning, so‘ngra har bir xulosani fotografik nazorat namunalari va ish stolingizdagi aynan o‘sha muhit uchun mahsulot yo‘riqnomasi bilan tasdiqlang.

MacConkey: vazifalar ajratilgan, vizual qoida soddaroq

MacConkey konsepsiyasi har bir vazifani alohida tarkibiy qismga yuklaydi. ASM MacConkey agar protokoli ham xuddi shu selektiv va differensial yondashuvni beradi, MacConkey agar uchun FDA BAM usuli esa asosiy tarkibiy qismlarni sanab o‘tadi: peptonlar, laktoza, o‘t tuzlari, tuz, neutral red, crystal violet va agar. O‘t tuzlari va crystal violet Gram musbatlarga qarshi seleksiya qiladi. Laktoza fermentatsiya substratini ta’minlaydi. Neutral red pH indikatori vazifasini bajarib, kislota hosil bo‘lgan joylarni pushtidan qizilgacha rangga o‘zgartiradi; kuchli fermentatorlar atrofida ba’zan o‘t cho‘kmasi ham hosil bo‘ladi.

O‘qish qoidasi ataylab sodda: pushti rang laktoza fermentatorini, rangsiz yoki och rang esa fermentatsiya qilmaydiganni anglatadi. E. coli pushtidan qizilgacha ko‘rinadi, ko‘pincha o‘t cho‘kmasi halosi bilan. Klebsiella va Enterobacter pushti bo‘lib, kapsulalari sabab ko‘pincha mukoid ko‘rinadi. Salmonella, Shigella, Proteus va ko‘plab boshqa Gram manfiy tayoqchalar rangsiz ko‘rinadi. O‘quv laboratoriyalarida yana bir foyda bor: o‘t tuzlari odatda Proteus ning yoyilib o‘sishini kamaytiradi, shuning uchun MacConkey da selektiv bo‘lmagan muhitlarga qaraganda alohida koloniyalarni olish osonroq; biroq bostirish mutlaq emas va agar yoyilib o‘sishni nazorat qilish ustuvor bo‘lsa, tuzsiz muqobil variantlar ham mavjud.

Bo‘yoqlarning bunday xatti-harakatining molekulyar sababi zaryad va tuzilishga borib taqaladi. Methylene blue kationik fenotiazin bo‘yoq bo‘lib, uning tuzilishi va xossalari kislotali bakterial yuzalarga moyilligini tushuntiradi; aynan shu moyillik EMB dagi kislotali zonalarda cho‘kish paytida ham namoyon bo‘ladi.

Bir qarashda taqqoslash

Jadvalni qaror qabul qilish tartibi sifatida o‘qing. Agar mashg‘ulotda talabalar fermentatsiya kuchining gradientini bitta yaqqol yakuniy belgi bilan ko‘rishi kerak bo‘lsa, EMB buni ko‘rsatadi. Agar mashg‘ulotda biokimyoviy tasdiqlashdan oldin tezkor ikkilik ajratish kerak bo‘lsa, MacConkey buni ta’minlaydi.

Qaysi namuna uchun qaysi muhit

Presumptiv fekal koliform yoki E. coli ni aniqlashga qaratilgan suv mashg‘ulotlarida EMB jilosining vizual jihatdan o‘ziga xosligi sabab jozibador. MacConkey ham enterik Gram manfiylar uchun mos va tarixan suv tahlillarida ishlatilgan, ammo hech bir plastinka normativ suv tahlili usulining o‘rnini bosmaydi; testga qarab bunday usullar modified mTEC yoki MI kabi muhitlarni talab qilishi mumkin. Laboratoriyangiz amal qilishi shart bo‘lgan usulni tekshiring.

Fermentatorlarni fermentatsiya qilmaydiganlardan ajratishga qaratilgan najas uslubidagi ishlar uchun MacConkey odatda bu ikkisidan foydaliroq. Salmonella yoki Shigella bilan bog‘liq amaliy najas tekshiruvlarida odatda faqat MacConkey ga tayanilmaydi, balki XLD yoki Hektoen enteric kabi yanada selektiv enterik muhitlar ham qo‘shiladi.

Klinik ish jarayonini taqlid qiluvchi siydik uslubidagi o‘quv mashg‘ulotlari uchun MacConkey ni blood agar bilan juftlang. MacConkey Gram manfiylarni dastlabki ajratishni ta’minlaydi, blood agar esa MacConkey bostiradigan organizmlarni o‘stiradi. Bu juftlik siydik kulturasini tashkil etishning klinik tavsiflarida standart hisoblanadi.

Sof konseptual o‘qitish uchun ikkalasini ham ishlating. EMB fermentatsiya kuchi muhimligini va bitta molekula ikki vazifani bajarishi mumkinligini o‘rgatadi. MacConkey modulli dizaynni o‘rgatadi: selektor, substrat va indikator alohida saqlanadi. Ma’lum E. coli, ma’lum Klebsiella aerogenes va ma’lum Salmonella ni ikkala muhitga yonma-yon ekkan talabalar odatda bu ikki mantiqni boshqa adashtirmaydi.

Har semestr takrorlanadigan o‘qish xatolari

Eng ko‘p uchraydigan xato — faqat rangga qarab identifikatsiya qilish. MacConkey dagi pushti rang E. coli, Klebsiella, Enterobacter yoki boshqa fermentator bo‘lishi mumkin. Rangsiz koloniya Salmonella, Shigella, Proteus, Pseudomonas yoki boshqa fermentatsiya qilmaydigan organizm bo‘lishi mumkin. Rang — Gram bo‘yash, oksidaza, biokimyoviy panellar yoki instrumental identifikatsiya kabi tasdiqlovchi ishlarni yo‘naltiruvchi skrining fenotipidir, tur nomi emas.

Ikkinchi xato — jilo yo‘qligiga ortiqcha ahamiyat berish. Ayrim haqiqiy E. coli koloniyalari, ayniqsa alohida o‘sganlari, EMB da juda kam yoki umuman metallik jilo bermasligi mumkin. Jilo yo‘qligi E. coli ni istisno qilmaydi, jilo borligi esa uni isbotlamaydi. Jiloni presumptiv belgi sifatida qabul qiling.

Uchinchi xato — turli yoshdagi plastinkalarni taqqoslash. Kechikib laktoza fermentatsiya qiluvchi organizmlar uzoq inkubatsiyadan keyin MacConkey da pushti rangga kirishi mumkin, bu esa fermentator va fermentatsiya qilmaydiganlar o‘rtasidagi aniq farqni xiralashtiradi. Laboratoriya belgilagan vaqtda o‘qing va natija bilan birga inkubatsiya vaqtini qayd eting.

To‘rtinchi xato — aralash o‘sishni bitta organizm deb talqin qilish. Rangsiz koloniya yonidagi pushti koloniya oraliq holatni emas, ikkita fenotipni bildiradi. Yaxshi ajralgan koloniyalarni tanlang va har bir morfotipni alohida ishlang. Mukoid tekstura ham shunga o‘xshash tuzoq yaratadi: Klebsiella ham, Enterobacter ham mukoid ko‘rinishi mumkin, shuning uchun faqat kapsulaga qarab nomni aniqlab bo‘lmaydi. Ilgari Enterobacter aerogenes sifatida o‘rgatilgan organizm hozir Klebsiella aerogenes deb tasniflanadi, shu sabab eski jadvallar va yangi yorliqlar bir-biriga ziddek ko‘rinishi mumkin.

Nazoratlar va yakuniy qoida

Har bir sessiyada fotografik yoki yangi tayyorlangan nazoratlarni qo‘llang: kuchli fermentator reaksiyasi uchun E. coli, klassik jilosiz mukoid fermentatsiya uchun Klebsiella aerogenes, rangsiz fermentatsiya qilmaydigan reaksiya uchun Salmonella shtammi va aynan siz ishlatayotgan mahsulotda Gram musbat bostirilishini tasdiqlash uchun Staphylococcus aureus. Shtamm raqamlari va qabul mezonlarini ishlab chiqaruvchi yo‘riqnomasi bilan moslashtiring, chunki selektivlik o‘t, crystal violet va bo‘yoq miqdoriga qarab o‘zgaradi.

Ish stolida bitta jumlani yodda tuting. EMB bir vaqtning o‘zida ham seleksiya qiladigan, ham signal beradigan bo‘yoqlardan foydalanadi, bu E. coli uchun yaqqol signal beradi, ammo natijani o‘qish nozikroq bo‘ladi. MacConkey seleksiyani signal berishdan ajratadi, bu pushti va och rang o‘rtasida sodda ajratishni beradi, ammo fermentatsiya haqida kamroq tafsilot beradi. Savolga konsepsiyasi mos keladigan muhitni tanlang, rangni tegishli testlar bilan tasdiqlang, shunda ikki plastinka raqobat qilishni to‘xtatib, bir-birini to‘ldira boshlaydi.