Метилен зәңгәре һәм Bartonella: лаборатория нәтиҗәләре һәм клиник дәлилләрнең чикләре

Культура савыты белән пациентны «инфекция» дигән сүз берләштерә, ләкин бу сүз аларда бер үк төшенчәне аңлатмый. Савытта инфекция — агардагы колонияләр саны. Пациентта исә ул — күзәнәкләр һәм кан тамырлары эчендәге бактерияләр, кан һәм тукымалар аша хәрәкәт итүче дарулар һәм эшнең бер өлешен башкаручы иммун системасы. Бу икесен бутасаң, лабораториядә алынган тәэсирле сан дәвалау ысулы кебек күренә башлый. Аларны аерып карасаң, шул ук сан үзенең чын мәгънәсен ала: ул — чираттагы тәҗрибәне үткәрү өчен сәбәп.

Метилен зәңгәре һәм Bartonella турындагы бу күзәтүнең төп бурычы — нәкъ шушы аерманы саклау. Бер тикшеренү төркеме үткәргән ике лаборатория тикшеренүендә метилен зәңгәре үсүдән туктаган Bartonella henselae бактерияләренә каршы сыналган. Икесендә дә пыяла һәм пластик савытларда көчле активлык теркәлгән. Берсендә дә кешеләрдә сынау үткәрелмәгән.

Тикшеренүчеләр ни өчен стационар фазаны сыный

Антибиотикларны сынауларның күбесендә үсүче күзәнәкләр кулланыла. Бу модель катлаулырак очракны читтә калдыра: бүленүдән туктаган һәм үсүче тугандаш күзәнәкләрен үтерә торган даруларга түзә алган күзәнәкләрне.

Bartonella организмда, шул исәптән эритроцитлар һәм эндотелий күзәнәкләре эчендә, сакланып кала ала. Шуңа күрә төркем кулланырга рөхсәт ителгән кайсы даруларның стационар фазага күчкән B. henselae бактерияләрен үтерә алуын тикшергән. Үсүче күзәнәкләргә каршы түбән минималь ингибицияләү концентрациясе (MIC) стационар фазадагы күзәнәкләрнең үтереләчәген алдан күрсәтмәгән. Рифампинның MIC күрсәткече бик түбән булган, ләкин ул стационар фазадагы күзәнәкләрне начар үтергән; ә MIC күрсәткечләре югарырак булган кушылмалар аларны яхшы үтергән. Мондый мәкаләләрне укуның гомуми ысулын эзләүче укучылар аны метилен зәңгәре турындагы тикшеренүләрне уку белешмәсендә таба ала.

Беренче скрининг: Li һәм хезмәттәшләре, 2019

Antibiotics журналындагы 2019 елгы стационар фаза скринингында бер генә штамм — B. henselae JK53 кулланылган. Ул 10 percent феталь сыер сүленнән торган өстәмә белән Schneider туклыклы тирәлегендә, 37 C температурада һәм 5 percent CO2 шартларында үстерелгән. Бер көнлек культуралар, нигездә, аерым таралган бүленүче күзәнәкләрдән торган. mL саен якынча 10 ның 8 нче дәрәҗәсе кадәр колония барлыкка китерүче берәмлек булган биш көнлек культуралар стационар фазада дип саналган; аларда күзгә күренеп торган агрегатлар булган.

Анализда пропидий йодиды белән бергә SYBR Green I кулланылган; ул тере һәм изопропанол белән үтерелгән күзәнәкләр катнашмалары буенча калибрланган. Метилен зәңгәре көчле төсле булганга, активлык күрсәткән нәтиҗәләр башта микроскопия белән, аннары канлы агардагы колонияләрне санау белән расланган. Соңгысы катгыйрак нәтиҗә күрсәткече булган.

Кулланырга рөхсәт ителгән 1,581 даруны 50 micromolar концентрациядә сынаганда, метилен зәңгәреннән соң тереклек сәләте планшет уку җайланмасы буенча 16 percent, микроскопия буенча 25 percent калган. Даптомицин өчен бу күрсәткеч 21 percent, берничә азол өчен 22 дән 27 percent ка кадәр, гентамицин өчен 32 percent, эритромицин өчен 66 percent, ципрофлоксацин өчен 74 percent булган. Пирвиний памоаты уку җайланмасында көчлерәк күренгән, ләкин үз флуоресценциясе аркасында аны микроскопия белән бәяләп булмаган.

Үсүче B. henselae бактерияләренә каршы метилен зәңгәренең MIC күрсәткече 0.08 дән 0.16 micrograms per mL га кадәр булган. Биш көнлек стационар фазадагы күзәнәкләргә 5 micrograms per mL концентрациядә тәэсир иткәндә, бер көннән соң ачыклап була торган колонияләр калмаган. Бу нәтиҗә даптомицин һәм пирвиний памоатының сыналган концентрацияләрдәге нәтиҗәләренә туры килгән. Вакытка бәйле үтерүне бәяләүче аерым тәҗрибәдә 10 micrograms per mL кулланылган. Болар — дозалар түгел, лабораториядәге тәэсир концентрацияләре; мәкаләдә дә алар шулай күрсәтелгән. Кеше плазмасындагы иң югары концентрациянең якынча 3.9 micrograms per mL булуы турындагы китерелгән мәгълүмат мәкаләдә бары тик гомуми контекст өчен генә бирелгән. Метилен зәңгәренең фармакокинетикасына күзәтү плазмадагы санны ни өчен тукымадагы сан итеп кабул итеп булмавын аңлата.

Мәкаләдә ике чикләү ачык күрсәтелгән. Биопленка моделе дә, метилен зәңгәрен комбинацияләрдә сынау да булмаган. Биш көнлек агрегатлар — стационар фазадагы сыек культурада тупланган күзәнәкләр; алар биопленка буенча расланган тәҗрибә моделе түгел. Авторлар хайваннарда, комбинацияләр белән, биопленкаларда һәм Bartonella ның башка төрләрендә тикшеренүләр үткәрергә чакырган.

Комбинацияләр һәм биопленкадан алынган күзәнәкләр: Zheng һәм хезмәттәшләре, 2020

BMC Microbiology журналындагы 2020 елгы дәвам тикшеренүендә шул ук штамм һәм туклыклы тирәлек сакланган, ләкин алты көнлек стационар культураларга күчкәннәр һәм беренче мәкаләдә булмаган ике нәрсәне өстәгәннәр: ике препаратлы комбинацияләрне һәм биопленкадан алынган күзәнәкләр моделен.

Аерым препаратларны барысын да бер үк 5 micrograms per mL концентрациядә 24 сәгать сынаганда, метилен зәңгәреннән соң mL саен 3.2 тапкыр 10 ның 4 нче дәрәҗәсе кадәр колония барлыкка китерүче берәмлек калган; контрольдә бу күрсәткеч якынча 2.8 тапкыр 10 ның 10 нчы дәрәҗәсенә тигез булган. Шул ук вакыт ноктасында ципрофлоксацин, гентамицин һәм нитрофурантоиннан соң колонияләр азрак калган. Бу 2019 елгы нәтиҗәдән аерыла: анда шул ук номиналь концентрациядә бер көннән соң ачыклап була торган колонияләр калмаган. Культураның яше, тыгызлыгы һәм аның белән эшләү ысуллары аерылган, шуңа күрә үтерү тәэсире юнәлеше ягыннан кабатланган, ләкин күләме ягыннан бертөрле булмаган. Тәҗрибәләр арасындагы бу үзгәреш — стандарт иминлек һәм үзара тәэсир тикшерүләрендә лабораториядәге активлыкны клиник тәэсирдән аерып карауның бер сәбәбе.

Комбинацияләр скринингы — иң еш телгә алына торган өлеш. Һәр компонентның концентрациясе 5 micrograms per mL итеп билгеләнгән. Азитромицин белән метилен зәңгәре дә, рифампин белән метилен зәңгәре дә 24 сәгатьтән соң стационар фазада ачыклап була торган колонияләр калдырмаган. Ципрофлоксацинлы ике пар да шундый нәтиҗә биргән; сыналган 25 пар арасында бары тик шушы дүртесе генә. Формаль синергия анализы үткәрелмәгән, шуңа күрә дөрес атама — расланган синергия түгел, ә әлеге шартларда актив комбинация.

Биопленка тәҗрибәсендә бөтен килеш сакланган өлгергән биопленкага үтеп керү түгел, ә яшь, җимерелгән биопленкадан алынган күзәнәкләр сыналган. Культураларны биш көн үстергәннәр, сыеклатып, күзәнәкчекле планшетларга күчергәннәр һәм тагын биш көн үстергәннәр. Биопленканы кристаллвиолет белән буяп раслаганнар, аннары препаратлар белән тәэсир итәр алдыннан кырып алганнар. 5 micrograms per mL концентрациядә метилен зәңгәре ялгызы 6 нчы көнгә санны 2.3 тапкыр 10 ның 2 нче дәрәҗәсенә кадәр киметкән. Бу аерым препаратлар арасында иң яхшы нәтиҗәләрнең берсе булган, ләкин нуль түгел. Метилен зәңгәренең ике комбинациясе дә, ципрофлоксацинның ике комбинациясе кебек үк, 6 нчы көнгә нульгә җиткән.

Авторлар игътибарлы укучы да күрерлек шул ук чикләүләрне билгеләгән: иске һәм бөтен килеш сакланган биопленка урынына яшь, кырып алынган биопленка; һәр даруның үз реалистик иң югары концентрациясе урынына барлык дарулар өчен бер уңайлы концентрация; азитромицин яки рифампин нигезендәге сайланган парлар гына; бер штамм; хайваннар да, пациентлар да юк. Соңрак өч препаратлы тикшеренүләр тәкъдим ителгән, ләкин аларның нәтиҗәләре хәбәр ителмәгән.

Тикшеренүләрнең төзелешен чагыштыру

Таблица бу мәкаләнең төп фикерен кыскача күрсәтә. Соңгы баганадан сулда булганның барысы да — культуралар белән эш. Ике мәкаләнең берсендә дә соңгы баганага туры килерлек мәгълүмат юк.

Bartonella — Borrelia түгел

Ике мәкаләдә дә Лайм авыруын китереп чыгаручы спирохета Borrelia burgdorferi телгә алына. Чөнки буягычлар кулланылган анализ шул ук лабораториядә моңа кадәр үткәрелгән Borrelia ның стационар фазасын тикшерү эшләреннән алынган; анда метилен зәңгәре белән даптомицин да актив дип табылган. Бу тарих файдалы контекст бирә, ләкин еш очрый торган ялгышлар чыганагы да булып тора.

Bartonella турындагы ике мәкаләнең берсендәге бер генә тәҗрибә дә Borrelia белән Bartonella ны янәшә сынамый. Организмнар да, туклыклы тирәлекләр дә, концентрацияләр дә аерыла. Метилен зәңгәренең Bartonella мембранасына тәэсире турындагы фараз исә өстәмә тикшерү таләп иткән уйланма буларак күрсәтелгән. Нәтиҗәләрне бер төрдән икенчесенә күчерергә ярамый; ике мәкаләнең берсе дә паразитлар турында киң гомуми раслауларны нигезләми. Borrelia һәм Bartonella ның персистер күзәнәкләрен чагыштыру нәкъ шуңа күрә бу ике юнәлештәге әдәбиятны аерып карый.

Ни өчен культура нәтиҗәләре протоколга әверелми

Bartonella өчен метилен зәңгәре протоколын эзләүгә кызыксыну аңлашыла. Бу мәкаләләр әлеге сүзтезмәне сатып алу исемлеге түгел, ә кисәтү билгесе итеп кабул итәргә кирәклеген күрсәтә.

Беренчедән, планшет күзәнәкчегендәге 5 micrograms per mL — табиб билгеләгән дәвалау түгел. Бу концентрациягә сеңү, таралу, аксымнар белән бәйләнү, күзәнәк эченә үтеп керү яки организмның аны күтәрә алуы турындагы мәгълүмат беркетелмәгән. Авторлар аны антибиотикларның иң югары концентрацияләренең якынча уртача кыйммәте итеп сайлаган һәм киләчәктә һәр даруны үзенең реалистик концентрациясендә кулланырга кирәклеген әйткән.

Икенчедән, колонияләр санының нуль булуы — шушы чәчү шартларында колонияләр юк дигән сүз; ул тукыманың стериль булуын аңлатмый. Персистер күзәнәкләр, күзәнәк эчендәге бактерияләр һәм үрнәк алу чикләүләре агар пластинкасыннан читтә кала.

Өченчедән, планшет күзәнәкчегендә тере бактерияләрне калдырмаган комбинацияләр организмда эшләмәскә яки зыян китерергә мөмкин. Азитромицин белән метилен зәңгәре һәм рифампин белән метилен зәңгәре — лабораториядәге тәэсир дәрәҗәләрендә сыналган лаборатория парлары. Хайваннардагы фармакокинетика һәм кешеләрдә үткәрелгән контрольле тикшеренүләр мәгълүматыннан башка доза да, дәвамлылык та, файда белән куркыныч нисбәте дә билгеле түгел. Вариантларны бәяләүче һәркем аларны табиб белән сөйләшергә һәм культура савытындагы мәгълүматтан нинди дә булса нәтиҗә чыгарганчы, метилен зәңгәрен куллануның кайчан медицина күзәтүе таләп итүен карап чыгарга тиеш.

Бу мәкаләләр нигезли алган тар нәтиҗә шундый: метилен зәңгәренең үсүдән туктаган B. henselae JK53 гә каршы in vitro активлыгы кабатлана, шул исәптән ике препаратлы лаборатория комбинацияләрендә дә. Комбинацияләр һәм биопленкадан алынган күзәнәкләр буенча иң көчле нәтиҗәләр 2020 елгы тикшеренүдә алынган. Калганның барысы да, шул исәптән бу активлыкның кешеләрдәге бартонеллез өчен әһәмияте бармы-юкмы дигән сорау да, сыналмаган булып кала.