EMB агары һәм MacConkey агары: мохитне сайлау һәм нәтиҗәләрне аңлату

Студент бер үк су үрнәген ике тәлинкәгә штрихлап чәчә. Берсендә яшел металл ялтыравы булган караңгы колонияләр барлыкка килә. Икенчесендә томанлы ореол белән ачык алсу колонияләр күренә. Ике тәлинкәгә дә бер үк пробиркадан чәчелгән, алар янәшә инкубацияләнгән һәм бер үк сәгатьтә укылган. Студент кайсы тәлинкә дөрес дип сорый.

Ике тәлинкә дә дөрес. Алар төрле сорауларга җавап бирә. Буталчыклык бу ике мохитне эчәк бактерияләрен тикшерү өчен үзара алыштырыла торган скрининг мохитләре дип кабул итүдән туа. Аларның уртак максаты бар: Грам-тискәре эчәк организмнарын сайлап үстерү һәм лактоза ферментаторларын ферментламаучылардан аеру. Әмма бу максат төрле химия һәм төрле визуаль логика ярдәмендә гамәлгә ашырыла. Ике төп принципны аңлагач, тәлинкә сайлау һәм колонияләрне уку гадәти эшкә әйләнә.

Кыска җавап

EMB агары ике буяуны, eosin Y һәм methylene blue, куллана; алар ике эшне берьюлы башкара: Грам-уңай үсешне тоткарлый һәм күп кислота җитештерүчеләр тирәсендә утырым хасил итеп, караңгы колонияләр барлыкка китерә, Escherichia coli өчен классик очракта металл-яшел ялтыравы белән. MacConkey агары вазифаларны аера: үт тозлары һәм crystal violet Грам-уңайларны тоткарлый, лактоза ферментация өчен субстрат бирә, ә neutral red кислотаны алсу яки кызыл колонияләр рәвешендә күрсәтә. Бурыч E. coli-ны ачык, фаразый рәвештә күрсәтү булса, EMB үз урынын таба. Бурыч лактоза ферментаторларын ферментламаучылардан, бигрәк тә нәҗес яки сидек эш процессларында, алсу һәм төссез төркемнәргә ачык бүлү булса, MacConkey гадәттә уку өчен гадирәк. Бер генә тәлинкә дә организмны төс буенча гына идентификацияләми.

EMB: бер үк вакытта сайлый һәм хәбәр итә торган буяулар

EMB концепциясе сайлау һәм күрсәтү функцияләрен бер үк молекулаларда берләштерә. ASM eosin methylene blue agar protocol EMB-ны селектив та, дифференциаль дә мохит буларак тасвирлый: буяулар пары күп Грам-уңай организмнарны тоткарлый, ә лактоза ферментациясе буяуларның үзләштерелүенә һәм утыруына китерә. Стандарт Levine формуласына peptone, lactose, phosphate, eosin Y, methylene blue һәм agar керә; бу FDA BAM method for Levine EMB agar документында күрсәтелгән. Игътибар итегез: иске EMB рецептларының кайберләрендә лактоза белән бергә sucrose да өстәлгән, ә Levine EMB составында lactose бар, ләкин sucrose юк. Шуңа лабораториягездә кайсы формула кулланылуын теркәп барыгыз.

EMB-ны уку буяуларның үз-үзен тотышын уку дигән сүз. Көчле лактоза ферментациясе күп күләмдә кислота барлыкка китереп, буяуларның интенсив утыруына китерә. Нәтиҗәдә E. coli кара-күк диярлек кара үзәкләр хасил итә һәм, классик очракта, чагылдырылган яктылыкта металл-яшел ялтыравы күрсәтә. Enterobacter һәм Klebsiella кебек көчсезрәк ферментаторлар гадәттә ялтыравы булмаган алсу-кызгылт, лайласыман колонияләр булып үсә. Salmonella, Shigella һәм Proteus кебек ферментламаучылар, гадәттә, төссез яки үтә күренмәле колонияләр булып үсә, чөнки алар буяуларны утыртырлык көчле кислота импульсы тудырмый. Грам-уңайлар гадәттә тоткарлана, әмма бу тоткарлау дәрәҗә мәсьәләсе булып тора һәм штаммга да, продуктка да бәйле. Буяуларны әзерләү химиясе, шул исәптән methylene blue ни өчен баштан ук катион буяу кебек эшләве, буяу формулалары турында аерым сөйләшүгә карый, ә гомуми микроскопия контексты буяу ысуллары атласында бирелгән. Бу мәкалә тәлинкә сайлау һәм уку белән генә чикләнә.

Өстәге рәсем иллюстратив. Ул көтелгән визуаль логиканы күрсәтә: EMB-да караңгы ялтыравыклы колонияләр, алсу лайласыман төрләр һәм төссезрәк төрләр; MacConkey-да исә алсу һәм төссезрәк төрләр. Аны үрнәкне өйрәнү өчен кулланыгыз, аннары һәр нәтиҗәне фотога төшерелгән контрольләр һәм өстәлегездәге төгәл мохитнең продукт күрсәтмәсе белән чагыштырып раслагыз.

MacConkey: аерым вазифалар, гадирәк визуаль кагыйдә

MacConkey концепциясендә һәр вазифа аерым ингредиентка бирелә. ASM MacConkey agar protocol шул ук селектив һәм дифференциаль принципны күрсәтә, ә FDA BAM method for MacConkey agar эш компонентларын санап чыга: peptones, lactose, bile salts, salt, neutral red, crystal violet һәм agar. Үт тозлары һәм crystal violet Грам-уңайларга каршы селекция ясый. Lactose ферментация субстратын бирә. Neutral red pH күрсәткече булып эшли: кислота барлыкка килгән урыннарда ул алсу-кызыл төскә керә, ә көчле ферментаторлар тирәсендә кайчак үт утырымы да барлыкка килә.

Уку кагыйдәсе махсус рәвештә гади: алсу төс лактоза ферментаторын, төссез яки тонык төс ферментламаучыны аңлата. E. coli алсу-кызыл төстә күренә, еш кына тирәсендә үт утырымы ореолы була. Klebsiella һәм Enterobacter алсу төстә һәм капсулалары аркасында еш кына лайласыман булып күренә. Salmonella, Shigella, Proteus һәм күп кенә башка Грам-тискәре таякчыклар төссез булып үсә. Укыту лабораторияләрендә өстәмә файдасы да бар: үт тозлары гадәттә Proteus-ның җәелеп үсүен киметә, шуңа MacConkey-да аерым колонияләрне селектив булмаган мохитләргә караганда җиңелрәк алу мөмкин. Әмма бу тоткарлау абсолют түгел, һәм җәелеп үсүне контрольдә тоту төп максат булганда тозсыз альтернативалар да бар.

Буяуларның нәкъ шулай эшләвенең молекуляр сәбәбе заряд һәм структурага барып тоташа. Methylene blue — катион phenothiazine буявы, һәм аның structure and properties үзлекләре кислота характерындагы бактерия өслекләренә тартылуын аңлата; EMB-дагы кислота зоналарында утыру вакытында шул ук тартылу эшли.

Кыскача чагыштыру

Таблицаны карар кабул итү тәртибе буларак укыгыз. Күнегүдә студентларга ферментация көченең градиентын бер ачык чик ноктасы белән күрсәтү кирәк булса, EMB моны күрсәтә. Күнегүдә биохимик раслау алдыннан тиз ике төркемгә бүлү кирәк булса, MacConkey моны күрсәтә.

Кайсы үрнәк өчен кайсы мохит

Фаразый нәҗес колиформнарын яки E. coli-ны тануга юнәлтелгән су күнегүләрендә EMB уңайлы, чөнки ялтыравы визуаль яктан ачык аерыла. MacConkey да эчәккә хас Грам-тискәре организмнар өчен яраклы һәм тарихи рәвештә су анализында кулланылган, әмма берсе дә норматив су анализы ысулын алыштырмый; тестка карап анда modified mTEC яки MI кебек мохитләр таләп ителергә мөмкин. Лабораториягез үтәргә тиешле ысулны тикшерегез.

Нәҗескә охшаган үрнәкләрдә ферментаторларны ферментламаучылардан аеру өчен бу икесеннән MacConkey гадәттә файдалырак. Salmonella яки Shigella белән практик эшләгәндә, MacConkey-га гына таянмыйча, гадәттә XLD яки Hektoen enteric кебек тагын да селективрак эчәк мохитләре өстәлә.

Клиник эш процессын охшаткан сидек үрнәге буенча укытуда MacConkey-ны blood agar белән бергә кулланыгыз. MacConkey башлангыч Грам-тискәре аеруны тәэмин итә, ә blood agar MacConkey тоткарлаган организмнарны үстерә. Бу парлау сидек культурасын әзерләүнең клиник тасвирламаларында стандарт булып тора.

Төп концепцияләрне өйрәтү өчен икесен дә кулланыгыз. EMB ферментация көченең әһәмиятле булуын һәм бер молекуланың ике вазифа үти алуын күрсәтә. MacConkey модульле төзелешне өйрәтә: селектор, субстрат һәм индикатор аерым тотыла. Билгеле E. coli, билгеле Klebsiella aerogenes һәм билгеле Salmonella-ны ике мохиттә дә янәшә чәчкән студентлар бу ике логиканы гадәттә бүтән бутамый.

Һәр семестр кабатлана торган уку хаталары

Иң еш очрый торган хата — организмны төс буенча гына идентификацияләү. MacConkey-дагы алсу колония E. coli, Klebsiella, Enterobacter яки башка ферментатор булырга мөмкин. Төссез колония Salmonella, Shigella, Proteus, Pseudomonas яки башка ферментламаучы булырга мөмкин. Төс — раслау эшләренең юнәлешен билгеләүче скрининг фенотибы гына; мондый эшләргә Gram stain, oxidase, биохимик панельләр яки инструменталь идентификация керә. Ул төр исеме түгел.

Икенче хата — ялтыравык булмауга артык зур әһәмият бирү. Кайбер чын E. coli колонияләре, бигрәк тә аерым үскәннәре, EMB-да металл ялтыравыкны бик аз күрсәтә яки бөтенләй күрсәтми. Ялтыравык булмау E. coli-ны кире какмый, ә ялтыравык булу аны расламый. Ялтыравыкны фаразый билге итеп кенә карагыз.

Өченче хата — төрле яшьтәге тәлинкәләрне чагыштыру. Соңарып лактоза ферментлаучы организмнар озак инкубациядән соң MacConkey-да алсу төскә керергә мөмкин, һәм бу ферментаторлар белән ферментламаучылар арасындагы ачык чикне тоныкландыра. Нәтиҗәне лаборатория билгеләгән сәгатьтә укыгыз һәм инкубация вакытын нәтиҗә белән бергә теркәгез.

Дүртенче хата — катнаш үсешне бер организм дип уку. Төссез колония янындагы алсу колония арадаш халәтне түгел, ике фенотипны күрсәтә. Яхшы аерылган колонияләрне сайлап алыгыз һәм һәр морфотип белән аерым эшләгез. Лайласыман текстура да шундый ук тозак тудыра: Klebsiella да, Enterobacter да лайласыман күренергә мөмкин, шуңа капсула гына исемне билгеләми. Элек Enterobacter aerogenes дип укытылган организм хәзер Klebsiella aerogenes буларак классификацияләнә; шуңа иске схемалар белән яңа ярлыклар каршылыклы кебек күренергә мөмкин.

Контрольләр һәм йомгаклау кагыйдәсе

Һәр сессиядә фотога төшерелгән яки яңа контрольләр кулланыгыз: көчле ферментатор реакциясе өчен E. coli, классик ялтыравыксыз лайласыман ферментация өчен Klebsiella aerogenes, төссез ферментламаучы реакциясе өчен бер Salmonella штаммы һәм нәкъ сез кулланган продуктта Грам-уңайларның тоткарлануын раслау өчен Staphylococcus aureus. Штамм номерларын һәм кабул итү критерийларын җитештерүче күрсәтмәсе белән туры китерегез, чөнки селективлык үт, crystal violet һәм буяу күләменә бәйле рәвештә үзгәрә.

Эш өстәле янында бер җөмләне истә тотыгыз. EMB берьюлы сайлый һәм хәбәр итә торган буяулар куллана; бу укуны бераз нечкәрәк итү бәрабәренә E. coli өчен ачык сигнал бирә. MacConkey сайлау белән хәбәр итүне аера; бу ферментация турында азрак деталь бәрабәренә алсу һәм тонык төрләр арасында гади аеру бирә. Концепциясе сезнең сорауга туры килгән мохитне сайлагыз, төсне тиешле тестлар белән раслагыз, һәм ике тәлинкә көндәш булудан туктап, бер-берсен тулыландыра башлый.