EMB agar kumpara sa MacConkey agar: pagpili at pagpapakahulugan sa media

Nag-streak ang isang estudyante ng parehong sample ng tubig sa dalawang plate. Sa isa, lumitaw ang maiitim na colony na may berdeng metallic shine. Sa isa naman, lumitaw ang matingkad na pink na colony na may malabong halo. Parehong inoculated mula sa iisang tube ang dalawang plate, magkatabing in-incubate, at binasa sa parehong oras. Itinanong ng estudyante kung aling plate ang tama.

Parehong tama ang dalawang plate. Magkaibang tanong ang sinasagot ng mga ito. Nagmumula ang kalituhan sa pagtrato sa dalawang media na para bang mapagpapalit na screening media para sa mga bacteria sa bituka. Pareho ang pangkalahatang layunin ng mga ito: piliin ang Gram-negative enteric organisms at paghiwalayin ang lactose fermenters sa nonfermenters, ngunit magkaiba ang chemistry at visual logic na ginagamit nila para gawin iyon. Kapag malinaw na ang dalawang pangunahing konsepto, nagiging routine na ang pagpili ng plate at pagbasa ng colony.

Ang maikling sagot

Gumagamit ang EMB agar ng dalawang dye, eosin Y at methylene blue, na may dalawang tungkulin: pinipigilan ng mga ito ang paglaki ng Gram-positive organisms at namumuo ang mga ito sa paligid ng malalakas na acid producer upang makabuo ng maiitim na colony, na karaniwang may metallic green sheen sa Escherichia coli. Sa MacConkey agar, magkahiwalay ang mga tungkulin: bile salts kasama ang crystal violet ang pumipigil sa Gram positives, lactose ang substrate para sa fermentation, at neutral red ang nagpapakita ng acid bilang pink o pulang colony. Kung ang gawain ay isang malinaw na presumptive demonstration ng E. coli, may malinaw na gamit ang EMB. Kung ang gawain ay simpleng paghiwalay ng pink at colorless na lactose fermenters mula sa nonfermenters, lalo na sa stool o urine workflows, karaniwang mas madaling basahin ang MacConkey. Walang alinman sa dalawang plate ang makapagtutukoy ng organism batay lamang sa kulay.

EMB: mga dye na sabay na pumipili at nagpapakita ng resulta

Pinagsasama ng konsepto ng EMB ang selection at indication sa parehong mga molecule. Inilalarawan ng ASM eosin methylene blue agar protocol ang EMB bilang parehong selective at differential, kung saan pinipigilan ng pares ng dye ang maraming Gram-positive organisms habang ang lactose fermentation ang nagtutulak sa dye uptake at precipitation. Ang karaniwang Levine formulation ay naglalaman ng peptone, lactose, phosphate, eosin Y, methylene blue, at agar, gaya ng nakalista sa FDA BAM method para sa Levine EMB agar. Tandaan na kung minsan ay may sucrose kasama ng lactose ang mas lumang mga recipe ng EMB, samantalang lactose lamang at walang sucrose ang Levine EMB, kaya itala kung aling formulation ang ginagamit ng inyong laboratoryo.

Ang pagbasa sa EMB ay nangangahulugang pagbasa sa kilos ng dye. Ang masiglang lactose fermentation ay lumilikha ng sapat na acid upang magdulot ng matinding dye precipitation, kaya nagkakaroon ang E. coli ng dark blue black centers at, sa klasikong kaso, berdeng metallic sheen sa reflected light. Ang mas mahihinang fermenter gaya ng Enterobacter at Klebsiella ay karaniwang tumutubo bilang pink hanggang purple na mucoid colonies na walang ganoong sheen. Ang nonfermenters gaya ng Salmonella, Shigella, at Proteus ay karaniwang tumutubo bilang colorless o translucent colonies dahil hindi sila gumagawa ng biglaang pagtaas ng acid na nagpapamuo sa mga dye. Karaniwang napipigilan ang Gram positives, bagaman nag-iiba ang antas ng suppression ayon sa strain at produkto. Ang kumpletong chemistry ng paghahanda ng dye, kabilang ang dahilan kung bakit kumikilos ang methylene blue bilang cationic stain, ay mas angkop sa hiwalay na talakayan tungkol sa dye formulations, at ang pangkalahatang konteksto ng microscopy ay nasa atlas ng mga staining method. Nakatuon ang artikulong ito sa pagpili at pagbasa ng plate.

Illustrative ang figure sa itaas. Ipinapakita nito ang visual logic na dapat asahan: dark sheen colonies, pink mucoid types, at pale types sa EMB, kumpara sa pink at pale types sa MacConkey. Gamitin ito upang matutunan ang pattern, pagkatapos ay kumpirmahin ang bawat pagbasa gamit ang photographed controls at ang product insert para sa eksaktong medium na nasa inyong bench.

MacConkey: magkakahiwalay na tungkulin, mas simpleng visual rule

Sa konsepto ng MacConkey, may hiwalay na ingredient para sa bawat tungkulin. Inilalahad ng ASM MacConkey agar protocol ang parehong selective at differential na balangkas, at inililista ng FDA BAM method para sa MacConkey agar ang mga pangunahing bahagi: peptones, lactose, bile salts, salt, neutral red, crystal violet, at agar. Ang bile salts kasama ang crystal violet ang pumipili laban sa Gram positives. Lactose ang nagsisilbing fermentation substrate. Neutral red ang nagsisilbing pH reporter at nagiging pink hanggang pula kung saan nabubuo ang acid, kung minsan ay may precipitated bile sa paligid ng malalakas na fermenter.

Sadyang simple ang tuntunin sa pagbasa: ang pink ay nangangahulugang lactose fermenter, at ang colorless o pale ay nangangahulugang nonfermenter. Ang E. coli ay lumilitaw na pink hanggang pula, madalas na may halo ng bile precipitate. Ang Klebsiella at Enterobacter ay lumilitaw na pink at kadalasang mucoid dahil sa kanilang capsules. Ang Salmonella, Shigella, Proteus, at marami pang ibang Gram-negative rods ay lumilitaw na colorless. May karagdagang benepisyo ito sa mga teaching lab: karaniwang binabawasan ng bile salts ang Proteus swarming, kaya mas madaling makakuha ng isolated colonies sa MacConkey kaysa sa nonselective media, bagaman hindi ganap ang suppression at may mga salt free alternative kung pangunahing layunin ang pagkontrol sa swarming.

Ang molecular na dahilan kung bakit ganito kumilos ang mga dye ay nakaugat sa charge at structure. Ang methylene blue ay isang cationic phenothiazine dye na ang structure at properties ay nagpapaliwanag sa affinity nito para sa acidic bacterial surfaces, na siya ring affinity na gumagana kapag namumuo ito sa mga acid zone sa EMB.

Paghahambing sa isang tingin

Basahin ang table bilang isang decision procedure. Kapag kailangang makita ng mga estudyante ang gradient ng lakas ng fermentation na may isang kapansin-pansing endpoint, malinaw itong ipinapakita ng EMB. Kapag kailangan ng mabilis na binary sort bago ang biochemical confirmation, malinaw itong ipinapakita ng MacConkey.

Aling medium para sa aling sample

Para sa mga exercise sa tubig na nakatuon sa presumptive fecal coliform o pagkilala sa E. coli, kaakit-akit ang EMB dahil madaling makilala ang sheen. Ang MacConkey ay angkop din sa enteric Gram negatives at may kasaysayan ng paggamit sa water testing, ngunit walang alinman sa dalawang plate ang kapalit ng isang regulatory water method, na maaaring magtakda ng media gaya ng modified mTEC o MI depende sa test. Suriin ang method na kinakailangang sundin ng inyong laboratoryo.

Para sa stool style separations ng fermenters mula sa nonfermenters, karaniwang mas kapaki-pakinabang ang MacConkey sa dalawa. Sa praktikal na stool work para sa Salmonella o Shigella, karaniwang nagdaragdag ng mas selective na enteric media gaya ng XLD o Hektoen enteric sa halip na umasa lamang sa MacConkey.

Para sa urine style teaching na ginagaya ang clinical workflow, ipares ang MacConkey sa blood agar. Nagbibigay ang MacConkey ng paunang Gram-negative sort habang nakaka-recover ang blood agar ng organisms na pinipigilan ng MacConkey. Standard ang pairing na ito sa mga clinical description ng urine culture setup.

Para sa purong concept teaching, gamitin ang pareho. Itinuturo ng EMB na mahalaga ang lakas ng fermentation at na maaaring gumanap ng dalawang tungkulin ang isang molecule. Itinuturo ng MacConkey ang modular design: magkahiwalay ang selector, substrate, at reporter. Ang mga estudyanteng nag-i-streak ng kilalang E. coli, kilalang Klebsiella aerogenes, at kilalang Salmonella nang magkatabi sa parehong media ay bihira nang malito muli sa dalawang magkaibang logic.

Mga paulit-ulit na pagkakamali sa pagbasa bawat term

Ang pinakakaraniwang pagkakamali ay ang pagtukoy ng organism batay lamang sa kulay. Ang pink sa MacConkey ay maaaring E. coli, Klebsiella, Enterobacter, o ibang fermenter. Ang colorless ay maaaring Salmonella, Shigella, Proteus, Pseudomonas, o ibang nonfermenter. Ang kulay ay isang screening phenotype na gumagabay sa confirmatory work gaya ng Gram stain, oxidase, biochemical panels, o instrument identification, hindi pangalan ng species.

Ang ikalawang pagkakamali ay ang sobrang pagbibigay-kahulugan sa kawalan ng sheen. Ang ilang tunay na E. coli colonies, lalo na ang isolated colonies, ay kaunti o walang metallic sheen sa EMB. Hindi ibinubukod ng kawalan ng sheen ang E. coli, at hindi rin ito napatutunayan ng presensya ng sheen. Ituring ang sheen bilang presumptive clue.

Ang ikatlong pagkakamali ay ang paghahambing ng mga plate na magkaiba ang edad. Maaaring maging pink sa MacConkey ang delayed lactose fermenters matapos ang matagal na incubation, kaya nagiging hindi gaanong malinaw ang paghihiwalay ng fermenter at nonfermenter. Basahin sa oras na itinakda ng laboratoryo at itala ang incubation time kasama ng resulta.

Ang ikaapat na pagkakamali ay ang pagbasa sa mixed growth bilang isang organism. Ang pink na colony sa tabi ng colorless na colony ay kumakatawan sa dalawang phenotype, hindi sa isang intermediate. Pumili ng well isolated colonies at iproseso nang hiwalay ang bawat morphotype. Nagdudulot din ng katulad na bitag ang mucoid texture: parehong maaaring magmukhang mucoid ang Klebsiella at Enterobacter, kaya hindi sapat ang capsule lamang upang matukoy ang pangalan. Ang organism na dating itinuturo bilang Enterobacter aerogenes ay inuuri na ngayon bilang Klebsiella aerogenes, kaya tila magkasalungat ang mas lumang mga chart at mas bagong mga label.

Controls at pangwakas na tuntunin

Gumamit ng photographed o fresh controls sa bawat session: E. coli para sa strong fermenter reaction, Klebsiella aerogenes para sa mucoid fermentation na walang classic sheen, isang Salmonella strain para sa colorless nonfermenter reaction, at Staphylococcus aureus upang kumpirmahin ang Gram-positive suppression sa eksaktong produktong ginagamit ninyo. Itugma ang strain numbers at acceptance criteria sa manufacturer insert, dahil nagbabago ang selectivity ayon sa bile, crystal violet, at dye content.

Tandaan ang isang pangungusap sa bench. Gumagamit ang EMB ng mga dye na parehong pumipili at nagpapakita ng resulta, kaya nagbibigay ito ng kapansin-pansing E. coli signal kapalit ng mas nuanced na pagbasa. Pinaghihiwalay ng MacConkey ang pagpili at pagpapakita ng resulta, kaya nagbibigay ito ng malinaw na pink kumpara sa pale na paghihiwalay kapalit ng mas kaunting detalye tungkol sa fermentation. Piliin ang medium na ang konsepto ay tumutugma sa tanong, kumpirmahin ang kulay gamit ang wastong mga test, at sa halip na magmukhang magkatunggali, nagiging magkaugnay na kasangkapan ang dalawang plate.