Makala
Metilen gögi we Bartonella: laboratoriýa netijeleri we kliniki subutnamalaryň çäkleri
Kultura gaby bilen näsag üçin bir söz — ýokanç — ulanylýar, ýöne onuň aňladýan düşünjesi birmeňzeş däl. Gapda ýokanç agaryň üstündäki koloniýalaryň sanydyr. Näsagda bolsa ol öýjükleriň we damarlaryň içindäki bakteriýalary, ganyň we dokumalaryň içinden geçýän dermanlary hem-de işiň bir bölegini ýerine ýetirýän immun ulgamyny öz içine alýar. Bulary biri-birine garyşdyrsaňyz, täsirli laboratoriýa görkezijisi bejergi ýaly görünip başlaýar. Olary aýry saklasaňyz, şol görkeziji öz hakyky manysynda galýar: indiki tejribäni geçirmek üçin esas.
Metilen gögi we Bartonella baradaky bu synyň esasy wezipesi hut şu tapawudy saklamakdyr. Bir ylmy toparyň iki laboratoriýa barlagy metilen gögüni ösmeýän ýagdaýdaky Bartonella henselae garşy synady. Ikisi-de aýna we plastik gaplarda güýçli işjeňlik barada habar berdi. Olaryň hiç birinde adamda synag geçirilmedi.
Näme üçin alymlar stasionar fazany barlaýarlar
Antibiotik synaglarynyň köpüsinde ösýän öýjükler ulanylýar. Bu model has kyn ýagdaýy gözden salýar: bölünmegini bes eden we özleriniň ösýän görnüşlerini öldürýän dermanlara çydam edýän öýjükleri.
Bartonella bedende, şol sanda eritrositleriň we endotelial öýjükleriň içinde uzak wagtlap saklanyp biler. Şonuň üçin topar B. henselae stasionar faza geçenden soň ony haýsy tassyklanan dermanlaryň öldürip biljekdigini öwrenýärdi. Ösýän öýjüklere garşy pes MIC stasionar fazadaky öýjükleriň öldürilmegini öňünden görkezmeýärdi. Rifampiniň MIC görkezijisi örän pes bolsa-da, ol stasionar öýjükleri gowşak öldürýärdi; MIC görkezijisi has ýokary bolan birleşmeler bolsa olary gowy öldürýärdi. Şeýle makalalary okamagyň umumy usulyny gözleýän okyjylar ony metilen gögi baradaky ylmy barlaglary okamak boýunça gollanmadan tapyp bilerler.
Ilkinji skrining: Li we kärdeşleri, 2019
Antibiotics žurnalynda çap edilen 2019-njy ýylyň stasionar faza skrininginde bir ştamm — B. henselae JK53 — ulanyldy. Ol 10 göterim düwünçek göle syworotkasy goşulan Schneider iýmit gurşawynda, 37 C temperaturada we 5 göterim CO2 şertlerinde ösdürildi. Bir günlük kulturalar esasan dargyn ýerleşýän, bölünýän öýjüklerden ybaratdy. mL başyna takmynan 10-yň 8-nji derejesine deň koloniýa emele getiriji birlikleri bolan bäş günlük kulturalar stasionar faza hökmünde kabul edildi we olarda görünýän öýjük toplumlary bardy.
Synagda propidiý ýodidi bilen SYBR Green I ulanyldy; ol janly we izopropanol bilen öldürilen öýjükleriň garyndylary boýunça kalibrlenildi. Metilen gögi güýçli reňkli bolany üçin, işjeňlik görkezen maddalaryň netijeleri mikroskopiýa bilen, soňra bolsa has berk ahyrky ölçeg bolan ganly agardaky koloniýalary sanamak arkaly tassyklanyldy.
50 micromolar konsentrasiýada barlanan 1,581 tassyklanan dermanyň arasynda metilen gögi planşet okaýjy enjamyň ölçegine görä öýjükleriň 16 göterimini, mikroskopiýa görä bolsa 25 göterimini diri galdyrdy. Daptomisin üçin bu görkeziji 21 göterim, birnäçe azol üçin 22-den 27 göterime çenli, gentamisin üçin 32 göterim, eritromisin üçin 66 göterim, siprofloksasin üçin 74 göterim boldy. Pirwiniý pamoaty okaýjy enjamda has güýçli görünýärdi, ýöne öz floresensiýasy sebäpli ony mikroskopiýa arkaly bahalandyrmak mümkin bolmady.
Ösýän B. henselae garşy metilen gögüniň MIC görkezijisi 0.08 bilen 0.16 micrograms per mL aralygyndady. Bäş günlük stasionar öýjüklere 5 micrograms per mL konsentrasiýada täsir edilende, bir günden soň ýüze çykaryp bolýan koloniýa galmady. Bu netije synalan konsentrasiýalarda daptomisiniň we pirwiniý pamoatynyň netijelerine deň geldi. Wagta bagly öldüriji täsiriň aýratyn synagynda 10 micrograms per mL ulanyldy. Bular doza däl-de, laboratoriýada täsir etdiriş derejeleridir we makalada hem şeýle görkezilýär. Makalada salgylanylýan, adamyň plazmasyndaky iň ýokary konsentrasiýanyň takmynan 3.9 micrograms per mL bolandygy baradaky maglumat diňe umumy düşündiriş hökmünde berilýär. Metilen gögüniň farmakokinetikasy baradaky syn plazmadaky görkezijiniň näme üçin dokumadaky görkeziji hökmünde kabul edilip bilinmejekdigini düşündirýär.
Makalada iki çäklendirme açyk görkezilýär. Biofilm modeli-de, metilen gögüniň kombinasiýalarynyň synagy-da ýokdy. Bäş günlük öýjük toplumlary stasionar suwuk kulturadaky toparlardy, biofilm boýunça tassyklanan tejribe däldi. Awtorlar haýwanlarda, kombinasiýalar we biofilmler boýunça barlaglary, şeýle hem Bartonella-nyň beýleki görnüşlerinde synaglary geçirmegi teklip etdiler.
Kombinasiýalar we biofilmden alnan öýjükler: Zheng we kärdeşleri, 2020
BMC Microbiology žurnalyndaky 2020-nji ýylyň dowam etdiriji barlagynda şol bir ştamm we iýmit gurşawy saklandy, ýöne alty günlük stasionar kulturalara geçildi we ilkinji makalada bolmadyk iki zat goşuldy: iki dermanly kombinasiýalar we biofilmden alnan öýjükleriň modeli.
Aýry-aýry dermanlar birmeňzeş 5 micrograms per mL konsentrasiýada 24 sagat ulanylanda, metilen gögi mL başyna 3.2 gezek 10-yň 4-nji derejesine deň koloniýa emele getiriji birlikleri galdyrdy; gözegçilik toparynda bolsa bu görkeziji takmynan 2.8 gezek 10-yň 10-njy derejesine deňdi. Şol pursatda siprofloksasin, gentamisin we nitrofurantoin has az koloniýa galdyrdy. Bu 2019-njy ýylyň netijesinden tapawutlanýar: onda şol bir nominal derejede bir günden soň ýüze çykaryp bolýan koloniýa galmandy. Kulturalaryň ýaşy, dykyzlygy we olar bilen işlemek usullary tapawutlydy, şonuň üçin öldüriji täsiriň ugry gaýtalandy, emma onuň ululygy birmeňzeş bolmady. Synaglaryň arasyndaky bu üýtgeşiklik adaty howpsuzlyk we özara täsir barlaglarynda laboratoriýadaky güýçlüligiň kliniki täsirden aýratyn seredilmeginiň sebäplerinden biridir.
Kombinasiýalaryň skriningi makalanyň iň köp salgylanylýan bölegidir. Her düzüm bölegi 5 micrograms per mL derejesinde saklandy. Azitromisin bilen metilen gögüniň hem-de rifampin bilen metilen gögüniň kombinasiýalarynda 24 sagatdan soň ýüze çykaryp bolýan stasionar faza koloniýalary galmady. Siprofloksasinli iki jübütde hem şeýle boldy. Synalan 25 jübütiň arasynda diňe şu dört kombinasiýa şeýle netije berdi. Resmi sinergiýa seljermesi geçirilmedi, şonuň üçin dogry adalga subut edilen sinergiýa däl-de, şu şertlerde işjeň kombinasiýadyr.
Biofilm tejribesinde bitewi, ýetişen biofilme aralaşma däl-de, ýaş, dargadylan biofilmden alnan öýjükler synaldy. Kulturalar bäş gün ösdürildi, soňra suwuklandyrylyp, öýjükli planşetlerde ýene bäş gün ösdürildi. Biofilm kristal melewşe bilen boýamak arkaly tassyklandy we derman täsirinden öň gyrylyp alyndy. 5 micrograms per mL konsentrasiýada diňe metilen gögi ulanylanda, 6-njy güne çenli görkeziji 2.3 gezek 10-yň 2-nji derejesine düşdi. Bu aýry ulanylan serişdeleriň arasynda iň gowy netijeleriň biridi, ýöne nol däldi. Metilen gögi bolan iki kombinasiýa-da 6-njy güne çenli nola ýetdi; siprofloksasinli iki kombinasiýa-da şeýle boldy.
Awtorlar ünsli okyjynyň hem belläp biljek çäklendirmelerini görkezdiler: köne, bitewi biofilmiň ýerine ýaş, gyrylyp alnan biofilm; her dermanyň öz hakyky iň ýokary derejesiniň ýerine ähli dermanlar üçin bir amatly konsentrasiýa; diňe azitromisine ýa-da rifampine esaslanýan saýlanan jübütler; bir ştamm; haýwanlaryň we näsaglaryň bolmazlygy. Soňraky üç dermanly barlaglar teklip edildi, emma olaryň netijeleri habar berilmedi.
Barlaglaryň gurluşyny deňeşdirmek
| Barlag gurluşynyň aýratynlygy | Li 2019 | Zheng 2020 | Kliniki subutnama hökmünde näme kabul edilýär |
|---|---|---|---|
| Organizmiň görnüşi | Diňe B. henselae JK53 | Diňe B. henselae JK53 | Bartonellozy tassyklanan näsaglar, kesgitlenen ahyrky görkezijiler |
| Ösýän öýjükler üçin metilen gögüniň MIC görkezijisi | 0.08 bilen 0.16 micrograms per mL aralygynda | Şol bir, 0.08 bilen 0.16 aralygynda | Degişli däl |
| Stasionar model | 5 günlük kultura, aýry dermanlar | 6 günlük kultura, aýry dermanlar we 25 jübüt | Dokumalardaky we öýjükleriň içindäki işjeňlik, farmakokinetika |
| Biofilm modeli | Ýok, öýjük toplumlary biofilm däl | Gyrylyp alnan 5 günlük biofilmden alnan öýjükler | Bitewi biofilm ýa-da janly organizmde uzak saklanyş baradaky maglumatlar |
| Metilen gögüniň esasy netijesi | 5 micrograms per mL, 1-nji günde koloniýa ýok | Şol bir dereje, 24 sagatda 3.2 gezek 10-yň 4-nji derejesi; azitromisin ýa-da rifampin bilen jübütlerde nol | Bejergä jogap beriş derejesi, gaýtalanma derejesi, ýaramaz hadysalar |
| Resmi sinergiýa synagy | Geçirilmedi | Geçirilmedi | Dozany kesgitlemek we gözegçilikli deňeşdirme |
Tablisa bu makalanyň esasy pikirini gysga görnüşde görkezýär. Soňky sütüniň çep tarapyndaky zatlaryň hemmesi kultura barlagydyr. Iki makalanyň hiç birindäki maglumat soňky sütüne degişli däl.
Bartonella Borrelia däl
Iki makalada-da Laým keselini döredýän spiroheta bolan Borrelia burgdorferi agzalýar. Sebäbi boýagly synag usuly şol laboratoriýada öň geçirilen Borrelia-nyň stasionar fazasy baradaky barlaglardan alnan. Şol barlaglarda metilen gögi we daptomisin hem işjeň maddalar hökmünde ýüze çykarylypdy. Bu taryh peýdaly umumy maglumatdyr, ýöne ýalňyşlygyň hem giňden ýaýran çeşmesidir.
Bartonella baradaky iki makalanyň hiç bir tejribesinde Borrelia bilen Bartonella gapdal-gaplada synalmaýar. Organizmler, iýmit gurşawlary we konsentrasiýalar tapawutlanýar. Metilen gögüniň Bartonella-nyň membranasyna çak edilýän täsiri bolsa goşmaça barlagy talap edýän çaklama hökmünde görkezildi. Netijeler bir görnüşden beýlekisine geçirilip kabul edilmeli däldir we iki makalanyň hiç biri parazitler baradaky giňişleýin tassyklamalary goldamaýar. Hut şu sebäpli Borrelia-nyň we Bartonella-nyň persistirleýän öýjüklerini deňeşdirýän syn bu iki ugurdaky ylmy edebiýaty aýratyn saklaýar.
Näme üçin kultura netijeleri protokola öwrülmeýär
Metilen gögi bilen Bartonella üçin bejergi protokolyny gözlemäge gyzyklanma düşnüklidir. Bu makalalar şol söz düzümini satyn alynmaly zatlaryň sanawy däl-de, duýduryş alamaty hökmünde kabul etmegiň sebäbini görkezýär.
Birinjiden, planşetiň öýjügindäki 5 micrograms per mL lukmanyň resepti däldir. Bu görkeziji siňdirilişi, paýlanyşy, beloklar bilen baglanyşygy, öýjükleriň içine aralaşmagy ýa-da bedeniň ony göterip bilşini öz içine almaýar. Awtorlar ony antibiotikleriň iň ýokary konsentrasiýalarynyň takmynan ortaça derejesi hökmünde saýladylar we geljekki barlaglarda her dermanyň öz hakyky derejesiniň ulanylmalydygyny aýtdylar.
Ikinjiden, nol koloniýa şol ekim şertlerinde koloniýanyň ýokdugyny aňladýar, dokumanyň steril bolandygyny däl. Persistirleýän öýjükler, öýjükleriň içindäki bakteriýalar we nusga almagyň çäklendirmeleri agar plastinkasynyň daşynda galýar.
Üçünjiden, planşetiň öýjügini steril ýagdaýa getirýän kombinasiýalar bedende netije bermän ýa-da zyýan ýetirip biler. Azitromisin bilen metilen gögi we rifampin bilen metilen gögi laboratoriýa täsir derejelerinde synalan laboratoriýa jübütleridir. Haýwanlardaky farmakokinetika we adamlardan alnan gözegçilikli maglumatlar bolmasa, ne doza, ne dowamlylyk, ne-de peýda bilen töwekgelçiligiň gatnaşygy kesgitlenendir. Mümkinçilikleri seljerýän her bir adam olary lukman bilen maslahatlaşmaly we gapdaky maglumatlardan netije çykarmazdan öň metilen gögüni ulanmagyň haçan lukmançylyk gözegçiligini talap edýändigini öwrenmeli.
Bu makalalaryň goldaýan çäkli netijesi şudur: metilen gögi ösmeýän B. henselae JK53 garşy in vitro, şol sanda iki dermanly laboratoriýa kombinasiýalarynda gaýtadan görkezilip bolýan işjeňlige eýedir. Kombinasiýalar we biofilmden alnan öýjükler boýunça iň güýçli netijeler 2020-nji ýylyň barlagyndan gelip çykýar. Galan zatlaryň hemmesi, şol sanda bu işjeňligiň adamlardaky bartonelloz üçin ähmiýetiniň bardygy ýa-da ýokdugy heniz synalmady.