EMB agar bilen MacConkey agar: gurşawy saýlamak we netijeleri düşündirmek

Talyp şol bir suw nusgasyny iki Petri käsesine ştrih usuly bilen ekýär. Birinde ýaşyl metal öwüşginli gara koloniýalar peýda bolýar. Beýlekisinde bolsa dumanly haloly açyk gülgüne koloniýalar görünýär. Iki käse-de şol bir probirkadan inokulirlenip, gapdal-gapala inkubasiýa edildi we şol bir sagatda okaldy. Talyp haýsy käsäniň netijesiniň dogrudygyny soraýar.

Iki käsäniň hem netijesi dogry. Olar dürli soraglara jogap berýär. Bulaşyklyk bu iki gurşawy içege bakteriýalary üçin biri-biriniň ornuny tutýan skrining serişdeleri hökmünde kabul etmekden döreýär. Olaryň maksady umumy: Gram-negatiw enterik organizmleri saýlamak we laktozany fermentleýänleri fermentlemeýänlerden tapawutlandyrmak. Emma bu maksady dürli himiýa we dürli wizual logika arkaly ýerine ýetirýärler. Esasy iki düşünjäni özleşdireniňizden soň, gurşawy saýlamak we koloniýalary okamak adaty işe öwrülýär.

Gysga jogap

EMB agar iki boýagy — eosin Y we methylene blue — ulanýar we olar bir wagtda iki işi ýerine ýetirýär: Gram-pozitiw ösüşi basýar hem-de köp kislota öndürýän organizmleriň töwereginde çökmek arkaly gara koloniýalary döredýär; Escherichia coli üçin munuň klassik görnüşi ýaşyl metal öwüşgindir. MacConkey agar bu wezipeleri bölýär: öt duzlary bilen crystal violet Gram-pozitiwleri basýar, laktoza fermentasiýa üçin substrat berýär, neutral red bolsa kislotanyň emele gelendigini gülgüne ýa-da gyzyl koloniýalar görnüşinde görkezýär. Wezipe E. coli-ni çaklama esasynda aýdyň görkezmek bolsa, EMB öz ornuny tapýar. Wezipe, aýratyn-da täret ýa-da peşew iş akymlarynda, laktozany fermentleýänleri fermentlemeýänlerden gülgüne we reňksiz görnüşde arassa bölmek bolsa, MacConkey adatça has aňsat okalýar. Hiç bir gurşaw diňe reňk boýunça organizmi anyklamaýar.

EMB: bir wagtda saýlaýan we görkezýän boýaglar

EMB düşünjesinde saýlaýjylyk bilen indikasiýa şol bir molekulalarda birleşýär. ASM eosin methylene blue agar protokoly EMB-ni hem saýlaýjy, hem differensial gurşaw hökmünde häsiýetlendirýär: boýaglaryň jübüti köp Gram-pozitiw organizmleri basýar, laktozanyň fermentasiýasy bolsa boýagyň öýjüklere siňmegine we çökmegine getirýär. Adaty Levine formulasynda pepton, laktoza, fosfat, eosin Y, methylene blue we agar bolýar; bu düzüm Levine EMB agar üçin FDA BAM usulynda görkezilýär. Köne EMB reseptleriniň käbirinde laktoza bilen birlikde saharoza hem goşulandygyny, Levine EMB-de bolsa saharozasyz diňe laktozanyň bardygyny unutmaň; şonuň üçin laboratoriýaňyzda haýsy formulanyň ulanylýandygyny belläň.

EMB-ni okamak boýagyň özüni alyp barşyny okamak diýmekdir. Laktozanyň güýçli fermentasiýasy boýagyň köp mukdarda çökmegine ýeterlik kislota döredýär. Netijede E. coli gara gök-gara merkezleri we klassik ýagdaýda şöhlelendirilen ýagtylykda ýaşyl metal öwüşgini döredýär. Enterobacter we Klebsiella ýaly has gowşak fermentleýjiler, adatça, şol öwüşginsiz gülgüne-benevşe mukoid koloniýalar görnüşinde ösýär. Salmonella, Shigella we Proteus ýaly fermentlemeýänler, adatça, reňksiz ýa-da dury koloniýalar görnüşinde ösýär, sebäbi olar boýaglary çökerder ýaly güýçli kislota tolkunyny döretmeýär. Gram-pozitiwler köplenç basylýar, ýöne bu basyş absolýut däldir we ştamma hem-de önüme görä üýtgeýär. Boýaglary taýýarlamagyň doly himiýasy, şol sanda methylene blue-nyň näme üçin ilkinji nobatda kation boýagy hökmünde hereket edýändigi, boýag formulalary hakyndaky aýratyn ara alyp maslahatlaşmaga degişli; umumy mikroskopiýa konteksti bolsa boýama usullarynyň atlasynda ýerleşýär. Bu makala gurşawy saýlamak we netijeleri okamak bilen çäklenýär.

Ýokardaky şekil illýustratiwdir. Ol gara öwüşginli koloniýalary, gülgüne mukoid görnüşleri we EMB-däki solgun görnüşleri, MacConkey-däki gülgüne we solgun görnüşler bilen deňeşdirip, garaşylýan wizual logikany görkezýär. Ony nagşy öwrenmek üçin ulanyň, soňra her bir netijäni fotosuratly kontrol nusgalary we iş stoluňyzdaky takyk gurşawyň önüm gollanmasy bilen tassyklaň.

MacConkey: wezipeler bölünýär, wizual düzgün has ýönekeý

MacConkey düşünjesi her bir wezipäni aýratyn ingrediente berýär. ASM MacConkey agar protokoly hem şol bir saýlaýjy we differensial gurluşy görkezýär, MacConkey agar üçin FDA BAM usuly bolsa işjeň bölekleri sanap geçýär: peptonlar, laktoza, öt duzlary, duz, neutral red, crystal violet we agar. Öt duzlary bilen crystal violet Gram-pozitiwlere garşy saýlaýjylyk döredýär. Laktoza fermentasiýa üçin substrat berýär. Neutral red pH indikatory hökmünde hereket edip, kislota emele gelen ýerlerde gülgüne-gyzyl reňke geçýär; güýçli fermentleýjileriň töwereginde käte öt hem çökýär.

Okamak düzgüni bilkastlaýyn ýönekeýdir: gülgüne reňk laktozany fermentleýjini, reňksiz ýa-da solgun görnüş bolsa fermentlemeýäni aňladýar. E. coli gülgüne-gyzyl görünýär we köplenç onuň töwereginde öt çökündisinden halo bolýar. Klebsiella we Enterobacter gülgüne bolýar we kapsulalary sebäpli köplenç mukoid görünýär. Salmonella, Shigella, Proteus we başga-da köp Gram-negatiw taýajyk görnüşli bakteriýalar reňksiz görünýär. Okuw laboratoriýalary üçin goşmaça peýdasy hem bar: öt duzlary, adatça, Proteus-yň ýaýrap ösmegini azaldýar, şonuň üçin MacConkey-de izolirlenen koloniýalary saýlaýjy däl gurşawlara garanyňda almak aňsat bolýar. Şeýle-de bolsa, bu basyş absolýut däldir we esasy maksat ýaýrap ösmegi dolandyrmak bolsa, duzsuz alternatiwalar hem bar.

Boýaglaryň beýle hereket etmeginiň molekulýar sebäbi olaryň zarýadyna we gurluşyna bagly. Methylene blue kation fenotiazin boýagydyr; onuň gurluşy we häsiýetleri turşy bakteriýa ýüzlerine bolan ýakynlygyny düşündirýär. Hut şol ýakynlyk EMB-de kislotaly zolaklarda onuň çökmeginde hem işleýär.

Bir seredişde deňeşdirme

Tablisany karar bermek tertibi hökmünde okaň. Sapakda okuwçylaryň fermentasiýa güýjüniň gradiýentini bir aýdyň ahyrky nokat bilen görmegi zerur bolsa, muny EMB görkezýär. Sapakda biohimiki tassyklamadan öň çalt ikilik görnüşde bölmek zerur bolsa, muny MacConkey görkezýär.

Haýsy nusga üçin haýsy gurşaw

Çaklama esasynda fekal koliformlary ýa-da E. coli-ni tanamaga gönükdirilen suw tejribelerinde EMB özüne çekijidir, sebäbi öwüşgin wizual taýdan aýdyň tapawutlanýar. MacConkey hem enterik Gram-negatiwler üçin ulanylýar we taryhy taýdan suw barlaglarynda hem ulanylypdyr, ýöne bu gurşawlaryň hiç biri kadalaşdyryjy suw barlag usulynyň ornuny tutmaýar; barlagyň görnüşine görä şeýle usullar modified mTEC ýa-da MI ýaly gurşawlary talap edip biler. Laboratoriýaňyzyň ýerine ýetirmeli usulyny barlaň.

Fermentleýjileri fermentlemeýänlerden täret nusgasy görnüşinde bölmek üçin bu ikisiniň arasynda, adatça, MacConkey has peýdalydyr. Salmonella ýa-da Shigella üçin amaly täret barlaglarynda diňe MacConkey-e daýanman, köplenç XLD ýa-da Hektoen enteric ýaly has saýlaýjy enterik gurşawlar hem ulanylýar.

Kliniki iş akymyna meňzeýän peşew nusgasy boýunça okuw üçin MacConkey-ni blood agar bilen jübütläň. MacConkey irki döwürde Gram-negatiwleri bölmäge kömek edýär, blood agar bolsa MacConkey-niň basýan organizmlerini ösdürýär. Bu jübüt kliniki peşew medeniýetini taýýarlamak baradaky beýanylarda adaty usuldyr.

Diňe düşünjäni öwretmek üçin ikisini hem ulanyň. EMB fermentasiýanyň güýjüniň möhüm bolup biljekdigini we bir molekulanyň iki wezipäni ýerine ýetirip biljekdigini öwredýär. MacConkey modul dizaýny öwredýär: saýlaýjy, substrat we indikator biri-birinden aýry saklanýar. Belli E. coli-ni, belli Klebsiella aerogenes-i we belli Salmonella-ny iki gurşawda hem gapdal-gapala ekýän okuwçylar bu iki logikany soňra seýrek bulaşdyrýar.

Her okuw döwründe gaýtalanýan okama ýalňyşlyklary

Iň köp duş gelýän ýalňyşlyk diňe reňk boýunça identifikasiýa etmekdir. MacConkey-däki gülgüne koloniýa E. coli, Klebsiella, Enterobacter ýa-da başga bir fermentleýji bolup biler. Reňksiz koloniýa Salmonella, Shigella, Proteus, Pseudomonas ýa-da başga bir fermentlemeýän organizm bolup biler. Reňk görnüşiň ady däl; ol Gram boýagy, oxidase, biohimiki paneller ýa-da enjam arkaly identifikasiýa ýaly tassyklaýjy işleri ugrukdyrýan skrining fenotipidir.

Ikinji ýalňyşlyk öwüşginiň ýoklugyna aşa ähmiýet bermekdir. Hakyky E. coli koloniýalarynyň käbiri, aýratyn-da izolirlenen koloniýalar, EMB-de metal öwüşgini örän az döredýär ýa-da asla döretmeýär. Öwüşginiň ýoklugy E. coli-ni aradan aýyrmaýar, öwüşginiň bolmagy hem onuň hökmany E. coli bolandygyny subut etmeýär. Öwüşgine çaklama alamaty hökmünde garaň.

Üçünji ýalňyşlyk dürli ýaşdaky plastinkalary deňeşdirmekdir. Gijikdirilen laktoza fermentleýjiler uzaldylan inkubasiýadan soň MacConkey-de gülgüne bolup biler, bu bolsa fermentleýjiler bilen fermentlemeýänleriň arasyndaky arassa tapawudy bulaşdyrýar. Laboratoriýa tarapyndan görkezilen sagatda okaň we inkubasiýa wagtyny netije bilen bilelikde belläň.

Dördünji ýalňyşlyk garyşyk ösüşi bir organizm hökmünde okamakdyr. Reňksiz koloniýanyň ýanyndaky gülgüne koloniýa aralyk ýagdaýy däl, iki fenotipi görkezýär. Gowy izolirlenen koloniýalary saýlaň we her morfotip bilen aýratyn işläň. Mukoid tekstura hem şuňa meňzeş duzak döredýär: Klebsiella hem, Enterobacter hem mukoid görünip biler, şonuň üçin diňe kapsula atlandyrmagy çözmeýär. Öň Enterobacter aerogenes hökmünde öwredilen organizm häzirki wagtda Klebsiella aerogenes hökmünde klassifikasiýa edilýär; köne tablisalar bilen täze atlaryň näme üçin gabat gelmeýän ýaly görünýändigini hem şu düşündirýär.

Kontrol nusgalary we jemleýji düzgün

Her sessiýada fotosuratly ýa-da täze kontrol nusgalaryny ulanyň: güýçli fermentleýji reaksiýa üçin E. coli, klassik öwüşginsiz mukoid fermentasiýa üçin Klebsiella aerogenes, reňksiz fermentlemeýän reaksiýa üçin Salmonella ştammy we takyk ulanýan önümiňizde Gram-pozitiw basyşy tassyk etmek üçin Staphylococcus aureus. Ştamm belgilerini we kabul ediş kriteriýalaryny öndürijiniň gollanmasyna laýyklaşdyryň, sebäbi saýlaýjylyk öt, crystal violet we boýag mukdaryna görä üýtgeýär.

Iş stolunda bir sözlemi ýatda saklaň. EMB hem saýlaýan, hem signal berýän boýaglary ulanýar; munuň artykmaçlygy E. coli üçin aýdyň signal, öwezine bolsa has inçe okama zerurlygy bolýar. MacConkey saýlamak bilen signal bermegi biri-birinden aýyrýar; munuň artykmaçlygy ýönekeý gülgüne bilen solgun görnüşiň arasyndaky bölünişik, öwezine bolsa fermentasiýa barada azrak jikme-jiklikdir. Soraga laýyk düşünjeli gurşawy saýlaň, reňki degişli barlaglar bilen tassyklaň, şonda iki gurşaw biri-biri bilen bäsleşmän, biri-birini tamamlar.