Мақола
Рангкунии одӣ бо кабуди метилен дар муқоиса бо рангкунӣ аз рӯйи Грам: ҳар усул чиро исбот карда метавонад
Донишҷӯ аз кишти бо нишони E. coli молишак тайёр мекунад, онро як дақиқа бо кабуди метилен мепӯшонад, мешӯяд ва аз объективи иммерсионии равғанӣ менигарад. Майдони бинишро ҳуҷайраҳои чӯбчашакли кабуд фаро гирифтаанд. Дар гузориши лабораторӣ навишта шудааст: «Бактерияҳои чӯбчашакли Грам-манфӣ ҳамчун E. coli муайян шуданд». Мушоҳида дуруст аст. Аммо ин препарати микроскопӣ барои чунин хулоса асос намедиҳад.
Хато мафҳумӣ аст, на техникӣ. Донишҷӯ рангкунии одиро ҳамчун санҷиши тафриқавӣ қабул кардааст. Рангкунии одӣ ва рангкунӣ аз рӯйи Грам ба саволҳои гуногун ҷавоб медиҳанд, зеро ба принсипҳои гуногуни рангкунӣ такя мекунанд. Яке мепурсад: кадом шакл мавҷуд аст? Дигаре мепурсад: девораи ҳуҷайра ҳангоми санҷиш чӣ гуна рафтор мекунад? Агар ин дуро омехта кунед, аз препарати дуруст рангшуда гузориши беасос ҳосил мешавад.
Ин муқоиса ду усулро аз ҳам ҷудо нигоҳ медорад, нишон медиҳад, ки ҳар натиҷа барои кадом хулоса асос медиҳад ва ба ду саволи маъмултарини донишҷӯён ҷавоб медиҳад: оё кабуди метиленро дар рангкунӣ аз рӯйи Грам истифода бурдан мумкин аст ва рангкунии E. coli бо кабуди метилен воқеан чиро нишон медиҳад.
Ҷавоби кӯтоҳ
Рангкунии одӣ бо кабуди метилен ҳамаи ҳуҷайраҳои рангпазирро бо як ранги кабуд ранг мекунад. Аз ин рӯ, он морфология (чӯбчаҳо, кураҳо, спиралҳо) ва тарзи ҷойгиршавӣ (алоҳида, ҷуфтҳо, занҷирҳо)-ро нишон медиҳад, аммо дар бораи гурӯҳи Грам маълумот намедиҳад. Рангкунӣ аз рӯйи Грам йод, марҳилаи берангкунӣ ва ранги иловагиро дар бар мегирад. Бинобар ин, бактерияҳоро аз рӯйи қобилияти пардаву девораи онҳо барои нигоҳ доштани ранг ба Грам-мусбат (бунафш) ва Грам-манфӣ (гулобӣ ё сурх) ҷудо мекунад. Чӯбчаҳои кабуд пас аз истифодаи кабуди метилен маънои «ҳуҷайраҳои чӯбчашакл мавҷуданд»-ро доранд. Чӯбчаҳои гулобӣ пас аз пайдарпайии пурраи рангкунӣ аз рӯйи Грам маънои «бактерияҳои чӯбчашакли Грам-манфӣ мавҷуданд»-ро доранд. Изҳороти дуюм асоси қавитар дорад, зеро дар рафти амал санҷиши иловагӣ гузаронида шудааст.
Барои шиносоӣ бо маҷмӯи васеътари усулҳои якрангаи рангкунии бактерияҳо, ки ин мақола ба он тааллуқ дорад, ба атласи рангкунӣ барои микроскопия нигаред.
Рангкунии одӣ: як рангкунанда, як савол
Кабуди метилен рангкунандаи асосӣ (катионӣ) аст. Иони рангаи он заряди мусбат дорад ва ба сохторҳои дорои заряди манфии ҳуҷайра, аз ҷумла кислотаҳои нуклеинӣ ва гурӯҳҳои кислотавии сатҳӣ, мепайвандад. Аз ин рӯ, ҳуҷайраҳо дар заминаи камранг кабуд менамоянд. OpenStax ин принсипи рангкунии мусбатро дар боби рангкунӣ шарҳ медиҳад. Худи катиони рангкунанда иони хурду ҳамвори фенотиазин аст, ки дар маълумотномаи химияи кабуди метилен муфассал тавсиф шудааст; муқобилиони хлорид ранг намедиҳад.
Протоколи стандартии таълимӣ қасдан сода аст: молишаки тунук тайёр кунед, дар ҳаво хушк кунед, бо гармӣ собит кунед, тақрибан як дақиқа бо маҳлули обии тақрибан 1%-и кабуди метилен пӯшонед, бо об нарм бишӯед, бо коғази ҷаббанда хушк кунед ва бо иммерсияи равғанӣ таҳқиқ намоед. Протоколи таълимии LibreTexts маҳз ҳамин тартиби 1% ва якдақиқаиро пешниҳод мекунад ва ҳамзамон қайд мекунад, ки баъзе лабораторияҳо вақти рангкуниро дароз мекунанд. На мустаҳкамкунандаи ранг, на берангкунанда ва на рангкунандаи дуюм истифода мешавад. Маҳз набудани онҳо муҳим аст. Вақте танҳо як рангкунанда истифода мешавад ва ранг ба таври интихобӣ хориҷ намегардад, ҳар ҳуҷайрае, ки рангро мебандад, дар ниҳоят якранг мешавад.
Барои E. coli дар майдони биниш чӯбчаҳои кабуд (батсиллаҳо) интизор мешаванд, ки алоҳида, ҷуфт ё дар гурӯҳҳои хурд ҷойгиранд. Кабудӣ аз рангкунанда меояд. Шакли чӯбчамонанд хусусияти организм аст. Аммо ин маҷмӯи аломатҳо организмро муайян намекунад, зеро бисёр намудҳо чӯбчашакланд ва бисёр чӯбчаҳо ҳангоми рангкунии одӣ кабуд мешаванд. ATCC ин маҳдудиятро, ки натиҷа танҳо ба морфология дахл дорад, дар дастури кишти микроорганизмҳо ошкоро баён мекунад. Гузориши дуруст чунин аст: «Батсиллаҳои кабуд мушоҳида шуданд». Ҳар хулосае берун аз шакл ва тарзи ҷойгиршавӣ далелҳои бештарро талаб мекунад.
Рангкунӣ аз рӯйи Грам: чор реактив, як санҷиши рафтор
Рангкунӣ аз рӯйи Грам рангкунии тафриқавӣ аст. Ҳамаи ҳуҷайраҳо аз як пайдарпайӣ мегузаранд ва муайян мешавад, ки кадом ҳуҷайраҳо ранги аввалро нигоҳ медоранд ва кадомҳо онро аз даст медиҳанд. Протоколҳои рангкунӣ аз рӯйи Грами Ҷамъияти амрикоии микробиология тартиби стандартии чормарҳилаиро муайян мекунанд: бунафши кристаллӣ (рангкунандаи аввалия), йоди Грам (мустаҳкамкунандаи ранг), спирт ё омехтаи ацетону спирт (берангкунанда), сипас сафранин (рангкунандаи иловагӣ).
| Марҳила | Реактив | Вазифа | Натиҷаи Грам-мусбат | Натиҷаи Грам-манфӣ |
|---|---|---|---|---|
| 1 | Бунафши кристаллӣ | Рангкунандаи аввалия, ҳамаи ҳуҷайраҳоро бунафш мекунад | Бунафш | Бунафш |
| 2 | Йоди Грам | Мустаҳкамкунандаи ранг, бо бунафши кристаллӣ комплекс ҳосил мекунад | Бунафш | Бунафш |
| 3 | Берангкунанда | Комплексро ба таври интихобӣ хориҷ мекунад | Бунафш мемонад | Беранг мешавад |
| 4 | Сафранин | Рангкунандаи иловагӣ, ҳуҷайраҳои берангшударо ранг мекунад | Бунафш мемонад | Гулобӣ ё сурх |
Модели стандартии таълимӣ ин ҷудошавиро бо сохтори пардаву девораи ҳуҷайра шарҳ медиҳад. Ҳуҷайраҳои Грам-мусбат девораи ғафси пептидогликанӣ доранд, ки ҳангоми шустан бо спирт обро аз даст дода, комплекси бунафши кристаллӣ ва йодро нигоҳ медорад. Ҳуҷайраҳои Грам-манфӣ қабати тунуки пептидогликан ва мембранаи берунии аз липидҳо бой доранд. Берангкунанда ин мембранаро вайрон мекунад, бинобар ин комплекс шуста мешавад ва баъдан ҳуҷайраҳо сафранинро мегиранд. Шарҳи рангкунӣ аз рӯйи Грам дар NCBI Bookshelf ҳамин тавзеҳи девораи ҳуҷайраро пешниҳод мекунад. Мутахассисон илова мекунанд, ки маҷмӯи пурраи равандҳои физикию химиявӣ аз ғафсии девора мураккабтар аст. Аммо барои тафсир дар лаборатория қоидаи рафторӣ амал мекунад: бунафш маънои нигоҳ доштани рангро дорад, гулобӣ маънои аз даст додани ранги аввал ва баъдан гирифтани ранги иловагиро дорад.
Панелҳои тасвирӣ. Расмҳои услубӣ барои муқоисаи усулҳо мебошанд, на микрофотографияҳои бо камера гирифташуда. Рангҳо барои омӯзонидани мантиқ содда карда шудаанд: як ранг дар рангкунии одӣ, ду ранг пас аз берангкунӣ дар усули Грам.
Оё кабуди метиленро дар рангкунӣ аз рӯйи Грам истифода бурдан мумкин аст
Ин савол ду маъно дорад ва барои ҳар кадом ҷавоби дигар лозим аст.
Маънои якум: оё як бор пӯшондан бо кабуди метилен метавонад тамоми пайдарпайии Грамро иваз кунад? Не. Бе йод, берангкунанда ва рангкунандаи иловагӣ марҳилаи тафриқавӣ вуҷуд надорад, бинобар ин ягон гурӯҳи Грам санҷида намешавад. Майдони кабуд пас аз истифодаи танҳо кабуди метилен натиҷаи рангкунии одӣ аст, ҳатто агар шиша дар паҳлуи реактивҳои Грам истода бошад. Онро ҳамчун натиҷаи рангкунӣ аз рӯйи Грам сабт накунед.
Маънои дуюм: оё кабуди метилен метавонад сафранинро ҳамчун рангкунандаи иловагӣ дар марҳилаи 4 иваз кунад? Аз ҷиҳати вазифа он метавонад ҳуҷайраҳои берангшударо ранг кунад ва машқи китобӣ пас аз чунин ивазкунӣ ҳуҷайраҳои Грам-мусбати бунафш ва ҳуҷайраҳои Грам-манфии кабудро пешбинӣ мекунад. Ин мантиқ дуруст аст, зеро ҳуҷайраҳои Грам-манфии дуруст берангшуда қариб беранганд ва рангкунандаи дигари катиониро мегиранд. Аммо ин протоколи стандартӣ нест. Протоколҳои ASM сафранинро муайян мекунанд ва дар баъзе вариантҳо алтернативаҳои эътирофшуда, аз қабили фуксини асосӣ, истифода мешаванд, на кабуди метилен. Нуқсони амалӣ низ вуҷуд дорад: фарқ кардани кабуд аз бунафш нисбат ба фарқ кардани гулобӣ аз бунафш душвортар аст, махсусан барои навомӯзон ва ҳангоми суст шудани равшании лампаҳои микроскоп. Барои корҳои таълимӣ ва ҳар натиҷаи муҳим рангкунандаи иловагиеро истифода баред, ки протоколи шумо нишон медиҳад — одатан сафранин. Кабуди метиленро ҳамчун рангкунандаи иловагӣ варианти намоишӣ ҳисоб кунед, на стандарти баробарвазн.
Саволи вобаста ба муқоисаи кабуди метилен бо дигар вариантҳои якранга дар муқоисаи рангкуниҳои одии бактерияҳо баррасӣ мешавад.
Рангкунии E. coli бо кабуди метилен чиро исбот мекунад ва чиро не
E. coli бактерияи чӯбчашакли Грам-манфӣ аст, аммо ин ҷумла далелҳои чанд усулро муттаҳид мекунад: морфология аз микроскопия, вокуниши Грам аз рангкунӣ аз рӯйи Грам ва муайянкунии намуд аз кишт дар якҷоягӣ бо санҷишҳои биохимиявӣ ё молекулавӣ. Молишаки бо кабуди метилен рангшуда танҳо қисми аввалро таъмин мекунад. Он нишон медиҳад, ки дар намунаи рангшуда ҳуҷайраҳои чӯбчашакл мавҷуданд ва чӣ гуна ҷойгир шудаанд. Он вокуниши Грамро муайян намекунад, зеро санҷиши берангкунӣ гузаронида нашудааст. Он намудро муайян намекунад, зеро чӯбчаҳои намудҳои гуногун дар ин сатҳи қобилияти тафриқаи микроскоп ба ҳам монанданд.
Маҳз дар ҳамин ҷо гузоришҳо ба хатои маъмул роҳ медиҳанд. Муаллиф маълумоти пешакиро («ин кишт бояд E. coli бошад ва E. coli Грам-манфӣ аст») ба сатри мушоҳида ворид мекунад. Дар натиҷа, чунин менамояд, ки препарат он чизеро тасдиқ кардааст, ки дар асл танҳо фарз шуда буд. Гузориши дақиқтар ин сатҳҳоро ҷудо мекунад: «Рангкунии одӣ бо кабуди метилен: батсиллаҳои кабуд мушоҳида шуданд; танҳо морфология, гурӯҳи Грам санҷида нашуд». Сипас, агар рангкунӣ аз рӯйи Грам бо намунаҳои назоратӣ дуруст гузаронида шуда бошад: «Рангкунӣ аз рӯйи Грам: чӯбчаҳои гулобӣ, ки ба натиҷаи Грам-манфӣ мувофиқанд». Муайянкунии намуд баъдтар аз раванди шиносоӣ ба даст меояд, на аз ранг танҳо.
Дастури амалии тафсир
Дар лаборатория аз ин қоидаи қароргирӣ истифода баред. Агар ҳамаи ҳуҷайраҳо якранг бошанд ва дар протокол як рангкунанда бе берангкунанда истифода шуда бошад, шумо рангкунии одӣ гузаронидаед. Шакл, андозаи тахминӣ ва тарзи ҷойгиршавиро гузориш диҳед. Бо ҳамин маҳдуд шавед. Агар дар протокол бунафши кристаллӣ, йод, берангкунанда ва рангкунандаи иловагӣ бо намунаҳои назоратии мусбат ва манфии маълум истифода шуда бошанд, шумо рангкунӣ аз рӯйи Грам гузаронидаед. Ранг ва морфологияро якҷоя гузориш диҳед: коккҳои бунафш дар занҷирҳо, чӯбчаҳои гулобӣ ва ғайра.
Се хато сабаби аксари нофаҳмиҳо мешаванд. Якум, аз ҳад зиёд тафсир кардани чӯбчаҳои кабуд ҳамчун тасдиқи E. coli. Дуюм, сабт кардани препарати бо кабуди метилен рангшуда зери сарлавҳаи «Рангкунӣ аз рӯйи Грам» дар дафтар, ки хонандагони баъдӣ онро нодуруст мефаҳманд. Сеюм, беэҳтиётона иваз кардани рангкунандаҳои иловагӣ ва сипас муқоиса кардани рангҳо байни лабораторияҳо, гӯё маҷмӯи рангҳо яксон бошад. Роҳи ислоҳи ҳар се хато як аст: усулеро номбар кунед, ки воқеан гузаронида шудааст, ва танҳо он чизеро хулоса кунед, ки ин усул месанҷад.
Рангкунии одӣ маҳз аз он сабаб ҷойгоҳи худро дорад, ки даъвои зиёд намекунад. Он зуд аст, ба иштибоҳҳои хурд таҳаммулпазир аст ва вақте савол ба морфология дахл дорад, кофист: оё чизе мавҷуд аст ва он чӣ шакл дорад? Вақте савол ба гурӯҳбандӣ дахл дорад, санҷиши тафриқавиро гузаронед. Препарати кабуд ба шумо мегӯяд, ки ҳуҷайраҳо чӣ гуна менамоянд. Препарати бунафш ё гулобӣ мегӯяд, ки девораҳои онҳо чӣ гуна рафтор мекунанд. Ҳеҷ кадоме аз ин препаратҳо танҳо худаш намудро муайян намекунад.