Шарҳи рангкунандаҳои ишқорӣ ва полихромии кабуди метилени Лёффлер

Дар рӯйи мизи рангкунӣ се шиша метавонанд паҳлуи ҳам истанд, ки ҳар кадом бо номи яке аз навъҳои кабуди метилен тамғагузорӣ шудааст. Дар яке «кабуди метилени обии 1%» навишта шудааст. Дар дигаре «кабуди метилени ишқории Лёффлер». Дар сеюмӣ «кабуди метилени полихромӣ». Корманди серкор шишаи наздиктаринро мегирад. Сипас молишнома аз ҳад камранг, ё саросар яксон кабуд, ё бо тобишҳои ғайричашмдошти бунафш ранг мегирад ва сабаби натиҷаро дар намуна меҷӯянд.

Ин мушкили таркиби маҳлул аст, на мушкили намуна. Ин се маҳлул рангкунандаҳои ба ҳам наздик доранд, вале ба принсипҳои гуногуни рангкунӣ асос ёфтаанд. Яке рангкунандаи одии катионӣ бо pH-и қариб нейтралӣ аст. Дигаре ҳамон рангкунандаест, ки ишқор таъсири онро пурзӯр кардааст. Сеюмӣ дигар умуман як рангкунандаи ягона нест, балки омехтаи қасдан оксидшуда аст. Агар навъи нодурустро истифода баред, принсипи рангкунӣ дар ҷараёни кори шумо дигар мешавад.

Ҷавоби кӯтоҳ

Кабуди метилени обии одӣ нуқтаи ибтидоӣ аст: тақрибан 1% рангкунанда дар об, яъне рангкунандаи одии катионӣ барои омӯзиши морфологияи бактерияҳо ва микроскопияи умумӣ. Дар кабуди метилени ишқории Лёффлер ба маҳлули захиравии спиртӣ, ки бо об тунук карда шудааст, миқдори ками ченшудаи ишқори тунук илова мекунанд. Ин pH-ро баланд карда, пайвастшавии рангкунандаи катиониро ба сохторҳои кислотагии бактерияҳо пурзӯр мекунад. Кабуди метилени полихромӣ кабуди метиленест, ки бо оксидшавӣ дар муҳити ишқорӣ қасдан расонида шудааст. Аз ин рӯ, дар шиша дар баробари кабуди метилени боқимонда омехтаи гомологҳои деметилшуда (azure A, azure B, azure C), тионин ва бунафши метилен мавҷуд аст ва ин омехта сохторҳои гуногунро бо тобишҳои гуногун ранг мекунад.

Агар танҳо як ҷумларо дар хотир нигоҳ доред: ишқоришавӣ шиддати рангкуниро дигар мекунад, дар ҳоле ки полихромсозӣ рангҳои ҳосилшударо дигар мекунад.

Кабуди метилени обии одӣ: нуқтаи муқоиса

Таркиби содатарин кабуди метилени дар об ҳалшуда аст, ки одатан бо консентратсияи 1% w/v, бе ишқор ва бе оксидшавӣ омода мешавад. Зарраи рангдор катиони метилтиониний бо хлорид ҳамчун иони муқобил мебошад. Ин рангкунандаи хурду ҳамвори фенотиазинӣ дар маълумотномаи PubChem оид ба кабуди метилен ҳамчун хлориди метилтиониний тавсиф шудааст. Ҳамчун катион он ба занҷирҳои фосфатии кислотаҳои нуклеинӣ ва гурӯҳҳои кислотагии девораҳои ҳуҷайраи бактерияҳо пайваст шуда, ҳуҷайраҳоро дар заминаи равшан кабуд мекунад.

Бартарии он пешгӯишаванда будани натиҷа аст. Ҳастаҳо ва бактерияҳо кабуд менамоянд. Контраст мӯътадил аст. Микроорганизмҳои камнамо метавонанд суст ранг гиранд ва маҳз ҳамин маҳдудиятро Лёффлер мехост бартараф кунад. Барои шиносоӣ бо гурӯҳи васеътари рангкунандаҳои одии бактериявӣ, ки ин маҳлул ба он дохил мешавад, ба шарҳи рангкунии одии бактерияҳо нигаред. Дар ин ҷо низ дақиқ муайян кардани модда муҳим аст: кабуди метил молекулаи тамоман дигар аст, чунон ки дар мақолаи фарқи кабуди метил ва кабуди метилен шарҳ дода шудааст. Аз ин рӯ, ҷустуҷӯ дар феҳрист танҳо аз рӯйи номи ранг метавонад шуморо ба синфи нодурусти рангкунандаҳо барад.

Кабуди метилени ишқории Лёффлер: ҳамон рангкунанда бо таъсири пурзӯртар

Дастури классикии Лёффлер маҳлули захиравии спиртии кабуди метиленро бо ишқори тунук дар об якҷо мекунад. Дар дастурҳои китобҳои дарсӣ 0.3 g рангкунанда дар 30 mL этаноли 95% бо иловаи 100 mL маҳлули обии 0.01%-и гидроксиди калий пешбинӣ шудааст. Варианти муодили он 30 mL маҳлули спиртии сершудаи кабуди метилен, 100 mL оби муқаттар ва 1 mL маҳлули 1%-и KOH аст. Дар натиҷа маҳлули корӣ бо тақрибан 0.3% рангкунанда ва pH-и ба таври возеҳ ишқорӣ ҳосил мешавад. Навъҳои тиҷоратӣ низ ба ҳамин принсип асос ёфтаанд ва феҳристи рангкунандаҳои микробиологии Thermo Fisher кабуди метилени ишқории Лёффлерро дар баробари навъҳои полихромӣ ва обӣ ҳамчун маҳсулоти алоҳида бо мақсадҳои гуногуни истифода номбар мекунад.

Нақши асосиро ишқор мебозад. Баланд шудани pH гурӯҳҳои карбоксилӣ ва фосфатии намунаро депротонӣ карда, зичии ҷойҳои заряди манфидорро зиёд мекунад. Дар ҳамин ҳол, маҳлули захиравии этанолӣ рангкунандаро пурра ҳалшуда нигоҳ медорад, то он ба ин ҷойҳо дар шакли мономерӣ расад. Дар натиҷа бактерияҳо нисбат ба истифодаи рангкунандаи обии нейтралӣ зудтар ва пуршиддаттар ранг мегиранд ва дар молишномаи муқаррарии бактериологӣ чӯбчашаклҳо ва коккҳои кабуди тира намоён мешаванд. Вақти рангкунӣ одатан аз як то се дақиқа аст ва баъд намуна бо об шуста мешавад.

Истифодаи классикии он барои Corynebacterium diphtheriae аст, ки дар муҳити зардобии Лёффлер парвариш шудааст: бактерияҳои борики чӯбчашакл, ки аксаран нӯгҳои гурзмонанд доранд ва доначаҳои метахроматии Бабеш–Эрнст аз полифосфати захирашуда дар онҳо шадидан ранг мегиранд. Пайвастагии ин муҳит ва рангкунанда таърихӣ аст: ҳар ду ба ҳамон як бактериолог нисбат дода мешаванд ва контрасти доначаҳо бартарии ташхисии онҳост. Ғайр аз корҳои марбут ба дифтерия, ин рангкунанда ҳамчун рангкунандаи умумии бактериологӣ барои молишномаҳои киштҳо, барои омӯзиши морфологияи Neisseria дар молишномаҳои клиникӣ ва дар ҳар мавриде истифода мешавад, ки рангкунии Грам зарур нест, вале кабуди обии одӣ аз ҳад камранг аст. Ин рангкунандаи якранг аст. Ҳамаи сохторҳои кислотагӣ яке аз тобишҳои кабудро мегиранд. Агар протокол фарқгузориро бо ранг талаб кунад, танҳо ишқор онро таъмин карда наметавонад.

Як огоҳии амалӣ: маҳлулҳои ишқории рангкунанда ҳангоми нигоҳдорӣ ва ҷаббиши диоксиди карбон вайрон шуда, таҳшин медиҳанд. Озмоишгоҳҳо ё ҳаҷмҳои кам омода мекунанд, ё маҳлули феҳристиро мехаранд ва муҳлати нигоҳдории онро риоя мекунанд, ба ҷойи он ки шишаи кӯҳнаро нигоҳ доранд, ки акнун ба ҳар шишаи ашёӣ таҳшин меандозад.

Кабуди метилени полихромӣ: як ном, чанд рангкунанда

Кабуди метилени полихромӣ аз ҳамон рангкунанда ҳосил мешавад, вале он дар муҳити ишқорӣ ба оксидшавии назоратшаванда дучор мегардад. Ин равандро таърихан расонидан ё полихромсозӣ меномиданд. Нигоҳдории дарозмуддат дар муҳити ишқорӣ, гармкунӣ бо карбонат ё оксидкунӣ бо моддаҳое чун дихромат гурӯҳҳои метилиро аз ҷойгузинҳои диметиламинӣ зина ба зина ҷудо мекунад. Маҳсулот омехта аст: кабуди метилени боқимонда, azure B (бо як гурӯҳи метили ҷудошуда), azure A ва azure C (бо деметилшавии минбаъда), тионин (пурра деметилшуда) ва маҳсулоти иловагии оксидшавӣ аз гурӯҳи бунафши метилен. Ҳар ҷузъ тобиши худ ва майли хоси пайвастшавӣ ба бофтаҳоро дорад. Аз ин рӯ, омехта ба таври метахроматӣ ранг мекунад: ҳастаҳо, доначаҳо, мусинҳо ва тағояк ҳар кадом тобишҳои фарқкунандаро аз кабуд то сурху бунафш мегиранд.

Ҳамин равандҳои кимиёвӣ асоси рангкунандаҳои машҳури хун мебошанд. Муҳаққиқони аввал дарёфтанд, ки кабуди метилени ишқоришуда ҳастаҳои паразити вараҷаро бо тобишҳои бунафш ранг мекунад, вале маҳлулҳои обии расонидаи онҳо ноустувор буданд ва дар давоми чанд рӯз таҳшин медоданд. Шарҳи чӣ гуна рангкунандаи бунафши хун ихтироъ шуд нишон медиҳад, ки чӣ тавр Малаховский ва Романовский дар соли 1891 мустақилона аз ин таъсир истифода бурданд, чӣ тавр метанол барои устувор кардани таҳшини рангкунанда ва бе гармӣ собит кардани молишномаҳо ҷорӣ шуд ва чӣ тавр Гимза баъдтар омехтаро дар асоси миқдорҳои ченшудаи azure B ва эозин бо устуворсозӣ тавассути глитсерол стандартӣ кард. Рангкунандаҳои муосири навъи Гимза бевосита аз кабуди метилени полихромӣ бо эозин бармеоянд — омезише, ки таъсири Романовскийро ба вуҷуд меорад. Барои маълумоти муфассал дар бораи омезиш бо эозин ва ҷузъи azure B, ба мақолаи рангкунандаҳои навъи Романовский ва таъсири мутақобилаи azure B бо эозин нигаред.

Азбаски кабуди метилени полихромӣ омехта аст, табиатан дар байни ин се навъ камтар стандартӣ мебошад. Таносуби дақиқи тобишҳои он аз усул ва дараҷаи оксидшавӣ вобаста аст. Аз ҳамин сабаб таъминкунандагони маҳсулоти гистологӣ онро ҳамчун маҳсулоти алоҳида бо санҷиши хоси коршоямӣ мефурӯшанд, на ҳамчун маҳлули кӯҳнашудаи Лёффлер. Истифодаҳои маъмул намоиши метахроматии доначаҳои ҳуҷайраҳои мастӣ, мусинҳо ва тағояк, нишон додани ҷузъиёти ҳуҷайраҳои плазмавӣ ва Helicobacter pylori дар буришҳои бофта бо усулҳои полихромии навъи Гудпасчурро дар бар мегиранд. Ин интихоби дуруст аст, агар мақсад фарқгузорӣ бо ранг бошад, ва интихоби нодуруст аст, агар протокол намои равшани якранги бактерияҳоро талаб кунад.

Муқоисаи таркиб ва мақсад

Ҷадвалро ҳамчун тартиби қабули қарор хонед. Агар намуна аз ҳад камранг шавад, муносибатро ба pH дигар кунед ва маҳлули Лёффлерро интихоб кунед. Агар ҳама чиз ранг гирад, вале ҳеҷ сохтор аз дигаре фарқ накунад, навъи рангкунандаро дигар кунед ва маҳлули полихромиро интихоб кунед. Агар дар молишномаи бо маҳлули Лёффлер рангшуда доначаҳо хеле хуб намоён бошанд, вале роҳбар пурсад, ки чаро ҳастаҳо ва ситоплазма яксон кабуданд, ҷавоб ин аст, ки ҳеҷ рангкунандаи ишқории якранг наметавонад онҳоро бо рангҳои гуногун нишон диҳад. Ин вазифа ба гурӯҳи полихромӣ ва ҳосилаҳои он барои рангкунии хун дахл дорад.

Пешгирии иштибоҳҳои маъмул

Ду иштибоҳ сабаби қисми зиёди нофаҳмиҳо мешаванд. Якум, маҳлули Лёффлерро бо кабуди метилени одӣ ивазшаванда шуморидан аст, зеро ҳар ду дар шиша кабуд менамоянд. Онҳо аз ҷиҳати pH ва шиддати рангкунӣ фарқ мекунанд. Агар дар ҷойе, ки маҳлули Лёффлер таъин шудааст, рангкунандаи нейтралӣ истифода шавад, маҳз ҳамон контрасти доначаҳо аз даст меравад, ки протокол барои он таҳия шудааст. Дуюм, ҳар гуна кабуди ишқории кӯҳна ё тасодуфан дароз нигоҳдошташударо полихромӣ шуморидан аст. Нигоҳдории дарозмуддати беназорат омехтаи номаълумро бо консентратсияи номаълум ҳосил мекунад. Маҳлулҳои ҳақиқии полихромӣ бошанд, бо усулҳои муайяни оксидкунӣ омода мешаванд ва дар гурӯҳи рангкунандаҳои хун бо миқдори ченшудаи эозин якҷо карда мешаванд. Таърих дар ин ҷо омӯзанда аст: маҳлулҳои обии расонидаи ноустувори солҳои 1890 ҷойи худро ба таркибҳои метанолии устуворшуда доданд, маҳз аз он сабаб, ки омехтаҳои беназоратро бо ҳамон хусусиятҳо такроран ҳосил кардан имкон надошт. Пеш аз ранг кардани шишаи ашёии ташхисӣ аз шишаи маҳлуле, ки синну солаш номаълум аст, ин дарсро ба ёд овардан бамаврид аст.

Дақиқкорӣ дар номгузорӣ ин масъаларо ҷамъбаст мекунад. Навъи маҳсулоти феҳристӣ (обӣ, Лёффлер ё полихромӣ), миқдори рангкунанда ва мақсади истифодаро аз тамға санҷед, на аз рӯйи ранг хулоса кунед. Ин се таркиб манбаи умумии хромофорӣ доранд. Вале мақсади истифодаашон яксон нест.