அமிலத்தாங்கு சாயமேற்றலில் மெத்திலீன் நீலம் ஏன் எதிர்ச்சாயமாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது

முழு சாயமேற்றல் செயல்முறைக்குப் பிறகு ஒரு தொழில்நுட்பப் பணியாளர் சளித் தடவலை ஆய்வு செய்கிறார். நீலப் பின்னணியில் சிவப்புக் குச்சிகள் தெளிவாகத் தெரிகின்றன; அமிலத்தாங்கு பாசில்லிகள் காணப்பட்டன என்று அறிக்கை வழங்கப்படுகிறது. மறுநாள், வேறொரு கண்ணாடித் தகட்டில் சிவப்புக் குச்சிகள் இல்லாமல் ஒரே சீரான நீலப் பின்னணி தெரிகிறது; காசநோய்க்கான முடிவு எதிர்மறை என்று அறிக்கையிடப்படுகிறது. இந்த இரண்டு அறிக்கைகளில் ஒன்று, தகடு ஆதரிக்கும் முடிவுக்கு அப்பாற்பட்ட கூற்றை முன்வைக்கிறது; அது முதலாவது அறிக்கை அல்ல.

இந்தக் குழப்பம் கருத்தியல் சார்ந்தது. மைக்கோபாக்டீரியாக்களைக் கண்டறிய மெத்திலீன் நீலம் உதவுவது போல, நீலச் சாயத்தைக் கண்டறியும் வேதியியலின் ஒரு பகுதியாக அந்தப் பணியாளர் கருதினார். அது அவ்வாறு உதவவில்லை. மெத்திலீன் நீலம் தகட்டில் சேர்க்கப்படும்போதே சோதனை முடிந்துவிட்டது. முடிவைத் தெளிவாகப் பார்க்க முடிவதற்காகச் சாயம் பின்னணிக்கு மட்டும் நிறமூட்டுகிறது. அமிலத்தாங்கு சாயமேற்றலில் மெத்திலீன் நீலத்தின் நோக்கம் என்ன, வேறு நிறத்திற்குப் பதிலாக ஏன் நீலம் பயன்படுத்தப்படுகிறது, நீலப் பின்னணியில் சிவப்பு தெரிவதிலிருந்து எந்த முடிவுகளை எடுக்கலாம் என்பதை இந்தக் கட்டுரை விளக்குகிறது.

சுருக்கமான பதில்

அமிலத்தாங்கு சாயமேற்றல் என்பது மூன்று கருத்துகளை அடிப்படையாகக் கொண்ட வேறுபடுத்தும் சோதனை. முதன்மைச் சாயமான கார்பால் ஃபுச்சின், மெழுகுத்தன்மையுள்ள மைக்கோபாக்டீரியாக்கள் உட்பட ஒவ்வொரு செல்லுக்குள்ளும் செலுத்தப்படுகிறது. நிறநீக்கியான அமில-ஆல்கஹால், சாதாரண செல்களிலிருந்து சிவப்புச் சாயத்தை அகற்றுகிறது; ஆனால் அமிலத்தாங்கு செல்களிலிருந்து அதை அகற்ற முடியாது. பின்னர், எதிர்ச்சாயமான மெத்திலீன் நீலம், நிறநீக்கி சாயத்தை அகற்றிய அனைத்திற்கும் நிறமூட்டுகிறது. இதனால் அமிலத்தாங்கு அல்லாத செல்கள், புரவலன் செல்கள், சிதைவுத் துகள்கள் ஆகியவை நீலமாகத் தெரிகின்றன; அமிலத்தாங்கு பாசில்லிகள் சிவப்பாகவே இருக்கின்றன. எதிர்ச்சாயம் நிற வேறுபாட்டை வழங்குகிறது. ஒரு செல்லுக்கு அமிலத்தாங்குத் தன்மையை அளிக்கும் வேதியியலில் அதற்கு எந்தப் பங்கும் இல்லை.

ஒவ்வொரு படியும் என்ன செய்கிறது

கீழுள்ள வரைபடம் பணிப் பகிர்வைக் காட்டுகிறது. செயல்முறையாக அதனை இடமிருந்து வலமாகப் படியுங்கள். ஒவ்வொரு சாயமேற்றல் வகையும் வெவ்வேறு கேள்விக்கு விடை தேடுகிறது என்பதை நினைவூட்டுவதாகக் கீழ்ப்பகுதியைப் படியுங்கள்.

முதலில் ஊடுருவல் நடைபெறுகிறது. மைக்கோபாக்டீரியாக்களின் உறை வழக்கத்திற்கு மாறாக நீர்விலக்கும் தன்மை கொண்டிருப்பதால், சாதாரண நீர்சார் சாயங்கள் அவற்றுக்குள் எளிதாக நுழையாது. எனவே செய்முறை சாயத்தை வலுக்கட்டாயமாக உள்ளே செலுத்துகிறது. சீல்-நீல்சன் முறையில், வெப்பமூட்டி நீராவி எழச் செய்வது, பீனால் கொண்ட கார்பால் ஃபுச்சினை மெழுகுத்தன்மையுள்ள சுவர் வழியாகச் செலுத்துகிறது. கின்யூன் குளிர் முறையில், வெப்பத்திற்குப் பதிலாக மிக அதிகச் செறிவுள்ள முதன்மைச் சாயக் கலவை பயன்படுத்தப்படுகிறது; வெப்பமில்லாத சில மாற்றியமைக்கப்பட்ட முறைகளில் மேற்பரப்புச் செயற்பொருட்களும் சேர்க்கப்படுகின்றன. அமெரிக்க நுண்ணுயிரியல் சங்கத்தின் அமிலத்தாங்கு சாயமேற்றல் செய்முறைகள் இந்த இரு கலவைகளையும் அருகருகே ஆவணப்படுத்துகின்றன. செறிவு வேறுபாடு குறிப்பிடத்தக்கது: வெப்பமூட்டும் முறையில் 100 mL-க்கு ஏறத்தாழ 0.3 g கார ஃபுச்சின்; குளிர் முறையில் சுமார் 4 g.

இரண்டாவதாக வேறுபடுத்தல் நடைபெறுகிறது. பொதுவாக 97 mL 95 சதவீத எத்தனாலில் 3 mL செறிவூட்டப்பட்ட ஹைட்ரோகுளோரிக் அமிலம் கொண்ட அமில-ஆல்கஹால், சிறப்பான எதிர்ப்புத் தன்மை இல்லாத சுவரைக் கொண்ட ஒவ்வொரு செல்லிலிருந்தும் சிவப்புச் சாயத்தைக் கழுவி அகற்றுகிறது. சேதமடையாத மைக்கோபாக்டீரிய கொழுப்புறையைக் கொண்ட செல்கள் சாயத்தைத் தக்கவைத்துக்கொள்கின்றன. முழு முறையும் சார்ந்திருப்பது இந்தப் படியைத்தான்; கீழே விவாதிப்பதுபோல், செய்நுட்ப வேறுபாடுகளால் அதிகம் பாதிக்கப்படும் படியும் இதுவே.

இறுதியாக நிற வேறுபாடு உருவாக்கப்படுகிறது. இப்போது தகட்டில், சாயம் அகற்றப்பட்ட செல்களாலான ஏறத்தாழ நிறமற்ற பின்னணியில் சிவப்பு அமிலத்தாங்கு செல்கள் உள்ளன. 0.3 சதவீத w/v மெத்திலீன் நீலம், சிவப்பிலிருந்து மிகவும் வேறுபட்ட நிறத்தில் அந்தப் பின்னணியை மீண்டும் காணும்படி செய்கிறது. எதிர்ச்சாயமேற்றல் குறுகிய நேரமே நடைபெறும்: வெப்பமூட்டும் முறையில் பொதுவாக 20 முதல் 30 வினாடிகள்; சில குளிர் முறை வகைகளில் சில நிமிடங்கள் வரை. இந்த நேரம் செய்முறையைச் சார்ந்தது; சாயத்தின் இயல்பான பண்பு அல்ல.

ஏன் இந்தச் சாயம், ஏன் நீலம்

மெத்திலீன் நீலம் ஒரு நேர் மின்னூட்டமுள்ள காரச் சாயம். அதாவது, அதன் நிறமுள்ள அயனி நேர் மின்னூட்டத்தைக் கொண்டிருப்பதால், நிறம் நீக்கப்பட்ட பாக்டீரியாக்கள், புரவலன் செல்கள், சிதைவுத் துகள்கள் ஆகியவற்றின் எதிர் மின்னூட்டமுள்ள மேற்பரப்புகளுடன் பிணைகிறது. OpenStax நுண்ணுயிரியல் இந்த மின்னூட்ட அடிப்படையை காரச் சாயங்களின் பொதுக் கோட்பாடாக விவரிக்கிறது. ஆனால் இங்கு மெத்திலீன் நீலத்திற்கெனத் தனித்துவமான வேதியியல் இல்லை. கிரிஸ்டல் வயலட்டும் சாஃப்ரனினும் காரச் சாயங்கள்தான். இந்தத் தேர்வு ஒளியியல் சார்ந்தது; வேதியியல் சார்ந்தது அல்ல.

சிவப்புக் குச்சிகளுக்கு மாறுபட்ட நிறமுள்ள பின்னணி தேவை. பிரகாசப் புல நுண்ணோக்கியில், சிவப்பிலிருந்து பயனுள்ள வகையில் வேறுபடும் நிறமாக நீலம் அமைகிறது. சாஃப்ரனின் நல்ல எதிர்ச்சாயமாக இருக்காது; ஏனெனில் அதன் இறுதி இளஞ்சிவப்பு-சிவப்பு நிறம், தக்கவைக்கப்பட்ட கார்பால் ஃபுச்சினின் நிறத்திற்கு மிக நெருக்கமாக இருப்பதால், செயல்முறை உருவாக்கிய வேறுபாட்டையே மறைத்துவிடும். கிரிஸ்டல் வயலட் உருவாக்கும் அடர் ஊதாப் பின்னணி, மெல்லிய சிவப்பு பாசில்லிகளுடன் கவனத்திற்காகப் போட்டியிடும். இங்கு செய்யப்படும் பணி வேதியியல் அல்ல, நிற வேறுபாட்டை உருவாக்குவதே என்பதற்கான வலுவான சான்று மாற்றுச் சாயங்களைப் பயன்படுத்துவதுதான்: மலாக்கைட் பச்சை, பிரில்லியன்ட் பச்சை போன்ற பச்சை எதிர்ச்சாயங்கள் சில கால்நடை மருத்துவ மற்றும் மாற்றியமைக்கப்பட்ட செய்முறைகளில் பயன்படுத்தப்படுகின்றன; சோதனை அப்போதும் செயல்படுகிறது. ஏனெனில் தெளிவாக வேறுபடும் எந்த நிறமும் அதே பணியைச் செய்கிறது.

இதிலிருந்து இரண்டு நடைமுறை முடிவுகள் கிடைக்கின்றன. முதலாவதாக, நிலையான தயாரிப்பு முறையில் pH சரிசெய்தல் குறிப்பிடப்படவில்லை. இந்தச் சாதாரண 0.3 சதவீத நீர்க்கரைசலை, வேறொரு சாயமேற்றல் கருத்தைச் சார்ந்த லோஃப்லரின் மெத்திலீன் நீலம் போன்ற காரத்தன்மையுள்ள கலவைகளுடன் குழப்ப வேண்டாம். இரண்டாவதாக, அளவுக்கு மீறிய சாயமேற்றல் தீங்கு தரும். மிக அடர்த்தியான நீலப் பின்னணி, குறைந்த எண்ணிக்கையிலுள்ள பாசில்லிகளை மறைக்கக்கூடும் என்று திசுவியல் இலக்கியங்கள் குறிப்பாக எச்சரிக்கின்றன. எனவே செய்முறை அனுமதிக்கும் நேரத்தைவிட அதிக நேரம் தகட்டைச் சாயத்தில் வைத்திருப்பது, எந்தப் பயனுமின்றித் தெளிவைக் குறைக்கிறது.

சோதனையைச் சாத்தியமாக்கும் செல் சுவரின் வேதியியல்

அமில-ஆல்கஹால் வேறுபடுத்திச் செயல்படுவதற்கான காரணம் மைக்கோபாக்டீரிய உறையில் உள்ளது. அதன் கட்டமைப்பு மையம் மைக்கோலைல்-அரபினோகலக்டான்-பெப்டிடோகிளைக்கான் கூட்டமைப்பாகும்: அரபினோகலக்டானுடன் இணைந்த பெப்டிடோகிளைக்கான்; அரபினோகலக்டானின் வெளிப்புற முனைகளில் மிக நீண்ட சங்கிலியுள்ள மைக்கோலிக் அமிலங்கள் உள்ளன. இவை கொழுப்பு நிறைந்த, வழக்கத்திற்கு மாறாக மிகக் குறைந்த ஊடுருவுதிறன் கொண்ட வெளிப்புற மைக்கோசவ்வை உருவாக்குகின்றன. மைக்கோபாக்டீரிய வெளிப்புறச் சவ்வு பற்றிய ஆய்வுச் சுருக்கம் இந்தக் கட்டமைப்பை விரிவாக விளக்குகிறது. இந்தத் தடுப்பு இரு திசைகளிலும் செயல்படுகிறது. சாயம் உள்ளே நுழைவதைத் தடுக்கிறது; அதனால்தான் ஊடுருவலுக்கு வெப்பம் அல்லது அதிகச் செறிவுள்ள முதன்மைச் சாயம் தேவைப்படுகிறது. சாயம் வெளியே அகற்றப்படுவதையும் தடுக்கிறது; அதனால்தான் உள்ளே சென்ற கார்பால் ஃபுச்சினை அமில-ஆல்கஹாலால் அகற்ற முடியாது. சாதாரண பாக்டீரியாக்களில் இந்த உறை இல்லை; அவை சாயத்தை இழக்கின்றன. எனவே அமிலத்தாங்குத் தன்மையை, மைக்கோலிக் அமிலத்துடன் ஃபுச்சின் வேதியியல் முறையில் பிணைவதாக அல்லாமல், கொழுப்புத் தடுப்பின் விளைவாகப் புரிந்துகொள்வதே சிறந்தது.

மைக்கோபாக்டீரியாக்கள் கிராம் முறையில் ஏன் சரியாகவும் சீராகவும் சாயமேற்பதில்லை என்ற பொதுவான புதிருக்கும் இந்த வேதியியல் விளக்கமளிக்கிறது. அவை சில நேரங்களில் மங்கலான மணித்தொடர் போன்ற வடிவங்களாகவோ சாயமேற்காத நிழல் வடிவங்களாகவோ தோன்றுகின்றன. அவற்றின் நீர்விலக்கும் சுவர், கிரிஸ்டல் வயலட் ஊடுருவுவதைக் கட்டுப்படுத்துகிறது. அமிலத்தாங்கு சாயமேற்றல் என்பது மாற்றியமைக்கப்பட்ட கிராம் சாயமேற்றல் அல்ல. அது வேறொரு சுவர் பண்பை அடிப்படையாகக் கொண்ட, வேறுபட்ட வேறுபடுத்தல் கோட்பாடு. மற்ற இரு முறைகளுக்கான எளிய சாயமேற்றல் மற்றும் கிராம் சாயமேற்றல் ஒப்பீடு இதை விளக்குகிறது.

மூன்று முறைகள், மூன்று கேள்விகள்

ஒரே சாயத்தைப் பயன்படுத்தும் பாக்டீரிய முறைகளின் விரிவான தொகுப்புக்கு, நுண்ணோக்கிச் சாயமேற்றல் படத்தொகுப்பைப் பார்க்கவும்.

நீலப் பின்னணியில் சிவப்பு தெரிவது எதை நிரூபிக்க முடியாது

சிவப்புக் குச்சிகள் தெரிவது, அமில-ஆல்கஹால் பயன்படுத்தப்பட்ட பின்னரும் அந்த உயிரிகள் கார்பால் ஃபுச்சினைத் தக்கவைத்துள்ளன என்பதைக் குறிக்கிறது. இந்தக் கண்டுபிடிப்பு மைக்கோபாக்டீரியம் டியூபர்குலோசிஸுடன் ஒத்துப்போகிறது. ஆனால் மற்ற மைக்கோபாக்டீரியாக்களும் அமிலத்தாங்குத் தன்மையுள்ளவை என்று CDC காசநோய் கண்டறிதல் வழிகாட்டுதல் தெளிவாகக் குறிப்பிடுகிறது. எனவே இனத்தை அடையாளம் காண வளர்ப்புச் சோதனையும் நியூக்ளிக் அமிலச் சோதனையும் தேவை; நிறம் மட்டும் போதாது.

செய்நுட்பப் பிழைகள் பெரும்பாலும் இரண்டு கழுவும் படிகளைச் சுற்றியே ஏற்படுகின்றன. போதிய நிறநீக்கம் இல்லாவிட்டால் பின்னணிப் பொருட்கள் சிவப்பாகவே இருந்து, தவறான நேர்மறை முடிவுகளுக்கு வழிவகுக்கும். அளவுக்கு மீறிய நிறநீக்கம், பலவீனமாகத் தக்கவைக்கப்பட்ட முதன்மைச் சாயத்தை அகற்றி, தவறான எதிர்மறை முடிவுகளுக்குப் பங்களிக்கிறது. மிக அதிகமாக இடப்பட்ட எதிர்ச்சாயம், குறைந்த எண்ணிக்கையிலுள்ள பாசில்லிகளை நீலத்தில் மறைத்துவிடுகிறது. தடிமனான தடவல்கள், படிவுகளாகிய வினைப்பொருட்கள், மாசடைந்த கழுவுநீர் ஆகியவையும் தத்தமது செயற்கைத் தோற்றங்களை உருவாக்குகின்றன.

செய்நுட்பம் எவ்வளவு துல்லியமாக இருந்தாலும், கண்டறியும் உணர்திறனை உயிரிகளின் எண்ணிக்கை வரையறுக்கிறது. வழக்கமான தடவல் நுண்ணோக்கிப் பரிசோதனைக்கு, ஒரு மில்லிலிட்டர் சளியில் ஏறத்தாழ 5,000 முதல் 10,000 பாசில்லிகள் தேவை. முந்தைய CDC ஆதார மதிப்பாய்வுகள், வளர்ப்புச் சோதனையால் உறுதிப்படுத்தப்பட்ட நுரையீரல் காசநோய் நேர்வுகளில் தடவல் பரிசோதனையின் உணர்திறனை சுமார் 45 முதல் 80 சதவீதமாகக் குறிப்பிட்டன. எனவே எதிர்மறைத் தடவல் முடிவு ஒருபோதும் காசநோய் இல்லை என்பதை உறுதிப்படுத்தாது. தற்போதைய CDC வழிகாட்டுதல், ஒவ்வொரு தடவல் பரிசோதனையுடனும் வளர்ப்புச் சோதனையையும் மேற்கொள்ளுமாறு கூறுகிறது. நுரையீரல் காசநோய் இருக்கலாம் என்று கருதப்படும்போது, முடிவு மருத்துவ மேலாண்மையை மாற்றக்கூடியதாக இருந்தால், குறைந்தது ஒரு சுவாச மாதிரியில் நியூக்ளிக் அமிலப் பெருக்கச் சோதனை செய்யவும் பரிந்துரைக்கிறது.

நடைமுறைப் பணிக்கு அங்கீகரிக்கப்பட்ட செய்முறைகளே அடிப்படை

இந்தக் கட்டுரை உள்ளிட்ட கற்பித்தல் விளக்கங்கள், மருத்துவ ஆய்வகப் பணிகளை மேற்கொள்ள அனுமதி வழங்குவதில்லை. ஆய்வகப் பணிக்கு, தற்போதைய CDC, APHL அல்லது CLSI ஆவணங்களுடன் ஒத்துப்போகும், ஆய்வகத்தால் சரிபார்க்கப்பட்ட நிலையான செயல்பாட்டு நடைமுறையைப் பின்பற்றுங்கள். CDC-யின் Stacks காப்பகத்தில் உள்ள அமிலத்தாங்கு சாயமேற்றல் குறிப்பாவணம், இத்தகைய நடைமுறைகள் வினைப்பொருட்களையும் முடிவுப் பதிவுகளையும் எவ்வாறு வரையறுக்கின்றன என்பதைக் காட்டுகிறது. காசநோய் மாதிரிகளுடன் பணிபுரியும்போது பாதுகாப்புக் கட்டுப்பாடு தேவை: தயாரிப்பின்போது காற்றில் மிதக்கும் நுண்துகள்களும் தெறிப்புகளும் உருவாவதால், தடவல்கள் உயிரியல் பாதுகாப்புப் பெட்டிக்குள் தயாரிக்கப்படுகின்றன. வெப்பத்தால் நிலைப்படுத்தப்பட்ட தடவல்களில்கூட உயிருள்ள காசநோய் பாசில்லிகள் இருக்கக்கூடும்; எனவே அவற்றையும் மாசடைந்தவையாகவே கையாள வேண்டும் என்று CDC ஆய்வகப் பாதுகாப்பு வழிகாட்டுதல் கூறுகிறது. M. leprae-ஐத் தேடுவதற்காக ஆய்வு செய்யப்பட்ட கார்பால் ஃபுச்சின் மற்றும் மெத்திலீன் நீலத் தடவலுக்கான CDC பொது சுகாதாரப் பட நூலகப் பதிவு, இந்த முறையின் பயன்பாடு காசநோயைத் தாண்டியும் விரிகிறது என்பதை நினைவூட்டுகிறது: அமிலத்தாங்கு உயிரிகள் தேடப்படும் எல்லா இடங்களிலும் அதே நீலப் பின்னணியில் சிவப்பு நிற வேறுபாடு பயன்படுகிறது. கவனமாக ஆய்வு செய்து பெறப்பட்ட எதிர்மறை முடிவும் பதிவு செய்யத் தகுந்த முடிவுதான்.

சாயமேற்றப்பட்ட தகட்டை வாசித்தல்

முதற்கட்ட ஆய்வின்போது எதிர்ச்சாயத்தின் பயன் தெளிவாகிறது. குறைந்த உருப்பெருக்கத்தில் தகட்டை ஆய்வு செய்யும் நுண்ணோக்கி நிபுணர், முதலில் நீலப் பின்னணியைக் கொண்டு தடவலின் தரத்தை மதிப்பிடுகிறார்: செல்கள் சீராகப் பரவியுள்ளனவா, கவனக் குவிப்புக்கு உதவும் சேதமடையாத புரவலன் செல்கள் உள்ளனவா, அதிகமான படிவுகள் இல்லையா என்பவற்றைப் பார்க்கிறார். தகட்டில் வேறெதுவும் சிவப்பாக இல்லாததால், சந்தேகத்திற்குரிய சிவப்பு வடிவங்கள் கவனத்தை ஈர்க்கின்றன. எண்ணெய் மூழ்கல் உருப்பெருக்கத்தில் உறுதிப்படுத்தல் நடைபெறுகிறது. அங்கு உண்மையான பாசில்லிகள், சீரான சாயத் துகள்களாக அல்லாமல், எதிர்பார்க்கப்படும் மெல்லிய, சில நேரங்களில் சற்றே வளைந்த அல்லது மணித்தொடர் போன்ற குச்சிகளாகத் தெரிகின்றன.

பின்னணிச் சாயமேற்றல் அறிக்கையின் சொற்களையும் நிர்ணயிக்கிறது. சிவப்பு பாசில்லிகள் உள்ள தகடு, அமிலத்தாங்கு பாசில்லிகள் காணப்பட்டன என்று அறிக்கையிடப்படுகிறது; பெரும்பாலும் ஆய்வகத்தின் அளவுகோலின்படி அரை-அளவியல் தரமும் சேர்க்கப்படுகிறது. சிவப்பு உயிரிகள் இல்லாத தகடு, அமிலத்தாங்கு பாசில்லிகள் காணப்படவில்லை என்றே அறிக்கையிடப்படுகிறது; காசநோய்க்கான முடிவு எதிர்மறை என்று ஒருபோதும் அறிக்கையிடப்படுவதில்லை. இந்த வேறுபாடு முக்கியமானது. ஏனெனில் நீலப் பின்னணி, சாயமேற்றல் செயல்பட்டது, செல்கள் எதிர்ச்சாயத்தை ஏற்றுக்கொண்டன, ஒளியியல் நிலை போதுமானதாக இருந்தது என்பவற்றை நிரூபிக்கிறது; ஆனால் கண்டறிதல் வரம்புக்குக் கீழுள்ள உயிரிகளைப் பற்றி எதுவும் கூறுவதில்லை. சிவப்பு உயிரிகள் இல்லாத நீலப் பின்னணி என்பது தகட்டைப் பற்றிய செல்லுபடியாகும் முடிவு; நோயாளியைப் பற்றிய இறுதித் தீர்ப்பு அல்ல.

பணிப் பகிர்வை நினைவில் வைத்துக்கொண்டால், அறிக்கைகளைச் சரியாக எழுதுவது எளிதாகிவிடும். கார்பால் ஃபுச்சின் சந்தேகத்திற்குரிய உயிரிகளை வெளிப்படுத்துகிறது. அமில-ஆல்கஹால் சோதனையைச் செய்கிறது. மெத்திலீன் நீலம் விடையைத் தெளிவாகப் பார்க்க மட்டும் உதவுகிறது: சிவப்பு, அமிலத்தை எதிர்த்துச் சாயத்தைத் தக்கவைத்தது; நீலம், அதை இழந்தது. இனம், உயிரிகளின் எண்ணிக்கை, மருத்துவப் பொருள் உள்ளிட்ட மற்ற அனைத்தும் தகட்டுக்கு அப்பாற்பட்ட ஆய்வுகளிலிருந்தே கிடைக்கின்றன.