மெத்திலீன் ப்ளூ மூலம் கன்னச் செல்களுக்கு நிறமூட்டுதல்: எவற்றைக் கவனிக்க வேண்டும்

ஒரு மாணவி கன்னச் செல்கள் கலந்த திரவத்தின் ஒரு துளியை நழுவத்தில் வைத்து, நுண்ணோக்கியில் பார்க்கிறாள். ஏறக்குறைய எதுவுமே தெரியவில்லை. ஒளிமிக்க பார்வைப் புலத்தில் சில வெளிறிய நிழலுருவங்கள் மிதக்கின்றன. அவள் குவியத்தைச் சரிசெய்கிறாள், பிறகு ஒளியை அதிகரிக்கிறாள், இறுதியில் நழுவம் காலியாக இருப்பதாக முடிவுசெய்கிறாள். நழுவம் காலியாக இல்லை. செல்கள் அங்கே இருக்கின்றன. அவை கிட்டத்தட்ட ஒளிபுகக்கூடியவை; இந்த ஒளிபுகும் தன்மை ஏற்படுத்தும் சிக்கலைத் தீர்ப்பதற்காகத்தான் இந்த நிறமூட்டல் பயன்படுகிறது.

எதிர்பார்ப்புக்கும் படத்திற்கும் இடையிலான அந்த வேறுபாட்டைச் செய்முறை தொடங்குவதற்கு முன்பே விளக்குவது பயனுள்ளது. தொலைவில் இருக்கும் அறிவிப்புப் பலகையைப் புகைப்படக் கருவியின் பெரிதாக்கல் தெளிவாகக் காட்டுவதுபோல, நுண்ணோக்கியும் விவரங்களை வெளிப்படுத்தும் என்று தொடக்கநிலை மாணவர்கள் எதிர்பார்க்கிறார்கள். ஒளிப்புல நுண்ணோக்கி செய்வது அதைவிடக் குறிப்பிட்ட ஒன்று: ஒளி உறிஞ்சுதலில் உள்ள வேறுபாடுகளைக் காட்டுகிறது. நிறமூட்டப்படாத கன்னச் செல் ஏறக்குறைய ஒளியை உறிஞ்சுவதில்லை; அதனால் அது தோற்றத்தில் ஏறக்குறைய எந்த வேறுபாட்டையும் ஏற்படுத்துவதில்லை. மெத்திலீன் ப்ளூ அந்த வேறுபாட்டைச் சேர்க்கிறது. அது செல்லுக்குள் சீரற்ற முறையில் பிணைந்து, அமைப்பைத் தோற்ற வேறுபாடாக மாற்றுகிறது. மாணவர்கள் இந்தக் கருத்தைப் புரிந்துகொண்டதும், அடுத்தடுத்த படிகள் அனைத்தும் வெறுமனே பின்பற்ற வேண்டிய வழிமுறைகளாக இல்லாமல், அந்தக் கருத்தின் விளைவுகளாகப் புரியும்.

பள்ளி ஆய்வகத்தில் எளிய நிறமூட்டல்கள் எவ்வாறு தோற்ற வேறுபாட்டை ஏற்படுத்துகின்றன என்பது பற்றிய பின்னணி இங்கே உதவும். மேலும், நிறமூட்டுவதற்கு முன் ஒளிப்புல நுண்ணோக்கியை அமைத்தல் பற்றிய மீள்பார்வை, தோல்வியடையும் நழுவத் தயாரிப்புகளில் பாதியைத் தவிர்க்க உதவும். இந்த நிறத்திற்குப் பின்னால் இருக்கும் வேதியியல், நுண்ணோக்கியலில் மெத்திலீன் ப்ளூ பற்றிய அறிமுகத்தில் விளக்கப்பட்டுள்ளது. இந்தக் குறிப்பிட்ட சாயம் ஏன் ஆய்வக மேசையில் அடிக்கடி பயன்படுத்தப்படுகிறது என்பதையும் அது எடுத்துரைக்கிறது.

வகுப்பறைச் செய்முறை

கீழே கொடுக்கப்பட்டுள்ள ஈரத் தயாரிப்பு முறை பொதுவான வகுப்புகளுக்கான எளிய இயல்புநிலைத் தேர்வாகும். இதற்குத் தீச்சுடரோ நிலைப்படுத்தும் படியோ தேவையில்லை. சில கல்லூரிக் கையேடுகளில் பயன்படுத்தப்படும் நிலைப்படுத்தப்பட்ட பூச்சுத் தயாரிப்பு முறையில், காற்றில் உலர்த்துதலும் சிறிது நேர வெப்ப நிலைப்படுத்துதலும் சேர்க்கப்படுகின்றன. Biology LibreTexts வழியாக வெளியிடப்பட்ட North Central Texas College கன்னச் செல் பூச்சுச் செயல்பாட்டில் இதைக் காணலாம். ஆனால் வெப்ப நிலைப்படுத்துதல் என்பது நுண்ணுயிரியலில் வழக்கமான ஒரு நடைமுறையே தவிர, மேல்திசுச் செல்களைக் காண்பதற்கான அவசியம் அல்ல.

தேவையானவை: சுத்தமான நழுவங்கள் மற்றும் மூடுகண்ணாடிகள், கிருமியற்ற ஒருமுறைப் பயன்பாட்டுப் பஞ்சுக் குச்சிகள் (முன்னுரிமைத் தேர்வு) அல்லது புதிய தட்டையான பற்குச்சிகள், 0.5 முதல் 1 சதவீத நீர்க்கரைசல் மெத்திலீன் ப்ளூ கொண்ட சொட்டிப் பாட்டில், காய்ச்சி வடித்த அல்லது அயனிகள் நீக்கப்பட்ட நீர், உறிஞ்சுதாள், கையுறைகள், மொத்த உருப்பெருக்கம் 100x மற்றும் 400x கொண்ட கூட்டு நுண்ணோக்கி.

1. சாதாரண நீரால் வாயைக் கொப்பளிக்கவும். பின்னர் அதிகமாக நிறமேற்று, செல்களிலிருந்து கவனத்தைத் திசைதிருப்பக்கூடிய உணவுத் துகள்களை இது அகற்றுகிறது.
2. ஒவ்வொரு மாணவரும் தமது கன்னத்திலிருந்து மட்டுமே மாதிரி எடுக்க வேண்டும். புதிய கிருமியற்ற பஞ்சுக் குச்சியால் கன்னத்தின் உட்புறத்தை மெதுவாகத் தேய்க்கவும். அழுத்தவும்; சுரண்ட வேண்டாம். அசௌகரியம் அல்லது இரத்தக்கசிவு ஏற்படுவதற்கு வெகுமுன்பே நிறுத்தவும்.
3. சுத்தமான நழுவத்தின் நடுப்பகுதியில் பஞ்சுக் குச்சியை உருட்டி, மெல்லிய படலமாகப் பரப்பவும். தெளிவாகக் கவனிக்கக்கூடிய நழுவம் கிடைப்பதை நிர்ணயிக்கும் மிக முக்கியமான காரணி மெல்லிய படலமே. தடித்த வெள்ளைப் படிவு, நிறமூட்டப்பட்ட பிறகு தெளிவாகப் பார்க்க முடியாத நீலத் திரளாக மாறிவிடும்.
4. பூச்சின் மேல் ஒரு துளி மெத்திலீன் ப்ளூ சேர்க்கவும். 1 முதல் 3 நிமிடங்கள் அப்படியே விடவும். பல கல்லூரிச் செய்முறைகளில் ஒரு நிமிடம் போதுமானது; NCERT வகுப்பு IX அறிவியல் ஆய்வகக் கையேடு தற்காலிகத் தயாரிப்பிற்கு சுமார் 3 நிமிடங்களைப் பயன்படுத்துகிறது. அதிக நேரம் வைத்திருப்பது சிறந்ததல்ல; மிகையாக நிறமூட்டுவதே நேர அளவில் ஏற்படும் மிகவும் பொதுவான பிழை.
5. உங்கள் ஆய்வகச் செய்முறையைப் பின்பற்றி, காய்ச்சி வடித்த நீரால் மெதுவாகக் கழுவவும் அல்லது உறிஞ்சுதாளால் அதிகப்படியான சாயத்தை உறிஞ்சி அகற்றவும். பின்னணி வெளிர் நீலமாக இருக்க வேண்டும்; அடர் கருநீலமாக இருக்கக்கூடாது.
6. மூடுகண்ணாடியைச் சாய்வாக இறக்கி, முதலில் அதன் ஒரு விளிம்பு தொடும்படி செய்து, பின்னர் மெதுவாகக் கீழே படியவிடவும். இது காற்றுக் குமிழ்கள் உள்ளே சிக்காமல் தடுக்கிறது.
7. செல்களைக் கண்டறிய குறைந்த உருப்பெருக்கத்தில் தொடங்கவும். குவியமும் மையப்படுத்தலும் சரியாக இருப்பதை உறுதிசெய்து, பின்னர் 100x அளவிற்கும் இறுதியில் 400x அளவிற்கும் செல்லவும். 400x அளவில் நுண் குவியச் சரிசெய்தலை மட்டுமே பயன்படுத்தவும்.

சாயச் செறிவைப் பற்றி ஒரு துல்லியமான விளக்கம் தேவை. பள்ளிச் செய்முறைகளில் பெரும்பாலும் சுமார் 1 சதவீத நீர்க்கரைசல் மெத்திலீன் ப்ளூ பயன்படுத்தப்படுகிறது. அதிகச் செறிவுள்ள இருப்புக் கரைசலோ நீண்ட நேரச் சாயத் தொடர்போ, உட்கருவை அடர்த்தியாக்குவதைவிட விரைவாகப் பின்னணியை அடர்த்தியாக்குகிறது. இதனால் இந்தப் பயிற்சி சார்ந்திருக்கும் தோற்ற வேறுபாடு தலைகீழாகிறது.

கன்ன மாதிரிகளைப் பாதுகாப்பாகக் கையாளுதல்

கன்ன மாதிரிகளில் உமிழ்நீரும் வாயில் இயல்பாக இருக்கும் நுண்ணுயிரிகளும் உள்ளன. எனவே, மாதிரி அளிப்பவர்கள் ஆரோக்கியமான வகுப்புத் தோழர்களாக இருந்தாலும், ஒவ்வொரு புதிய பூச்சையும் தொற்றை ஏற்படுத்தக்கூடிய பொருளாகக் கருதிக் கையாளவும். கற்பித்தல் ஆய்வகங்களுக்கான American Society for Microbiology உயிரியல் பாதுகாப்பு வழிகாட்டுதல்கள் பொதுவான கொள்கைகளைத் தெரிவிக்கின்றன: அமர்வுக்கு முன் அபாயத்தை மதிப்பிடுதல், கையுறைகள் அணிதல், தெறிக்க வாய்ப்புள்ள இடங்களில் கண்களைப் பாதுகாத்தல், முடித்த பிறகு கைகளைக் கழுவுதல், ஆய்வக மேசைகளைக் கிருமிநீக்கம் செய்தல், மாசுபட்ட ஒருமுறைப் பயன்பாட்டுப் பொருட்களை அங்கீகரிக்கப்பட்ட உயிரியல் கழிவு முறையில் அகற்றுதல்.

நான்கு வகுப்பறை விதிகள் பெரும்பாலான அபாயங்களைக் கட்டுப்படுத்துகின்றன. ஒவ்வொரு பஞ்சுக் குச்சிக்கும் ஒவ்வொரு நழுவத்திற்கும் ஒரே ஒரு நபரின் மாதிரி மட்டுமே; ஒருபோதும் பகிரக்கூடாது. தாமாகவே மாதிரி எடுக்க வேண்டும்; அருகிலிருப்பவரிடமிருந்து மாதிரி எடுக்கக்கூடாது. ஒருமுறைப் பயன்பாட்டுப் பஞ்சுக் குச்சிகளையும் பற்குச்சிகளையும் நேரடியாகக் குறிப்பிட்ட கழிவுத் தொட்டியில் போட வேண்டும்; மீண்டும் மேசையில் வைக்கக்கூடாது. மெத்திலீன் ப்ளூ தோலிலும் ஆடைகளிலும் கறை ஏற்படுத்துவதோடு கண்களில் எரிச்சலையும் ஏற்படுத்துகிறது. எனவே கையுறைகளும் வழக்கமான சாயக் கையாளல் சுகாதார முறைகளும் அவசியம். இந்தப் பயிற்சியை நீட்டித்து, பூச்சிலிருந்து எதையும் வளர்ப்பதற்கு முயல வேண்டாம். பள்ளியின் பாதுகாப்புச் செய்முறைக்கு வெளியே புதிய மனித மாதிரியைத் தன்னிச்சையாக வெப்ப நிலைப்படுத்தவும் வேண்டாம்.

எவற்றைக் கவனிக்க வேண்டும், அவை ஏன் அப்படித் தோன்றுகின்றன

100x அளவில், ஒழுங்கற்ற நீள்வட்ட அல்லது பலகோண வெளிக்கோடுகளைக் கொண்ட, அகன்ற, தட்டையான, வெளிர் நீலச் செல்களைத் தேடவும். அவை தனித்தனியாகவோ தளர்வாக ஒன்றன்மேல் ஒன்று படிந்த அடுக்குகளாகவோ இருக்கும். ஒவ்வொரு செல்லிலும் பொதுவாக ஒரு அடர் நீலப் புள்ளி இருக்கும். அந்தப் புள்ளியே உட்கரு. அவற்றின் அமைவையும் கவனிக்கவும்: தட்டையான மேல்திசுச் செல்கள் மெல்லிய ஓடுகளைப் போன்றவை; கோளங்கள் அல்ல. அதனால்தான் அவற்றின் விளிம்புகள் வட்டமான பலூன்களைப் போலல்லாமல், விரிசலடைந்த மெருகுப்பூச்சைப் போலத் தோன்றுகின்றன.

400x அளவில் மூன்று அம்சங்கள் தெளிவாகப் பிரித்தறியப்படுகின்றன. செல்லைச் சூழ்ந்த மெல்லிய, சற்றே அடர்ந்த கோடாகச் செல் எல்லை தோன்றுகிறது. சைட்டோபிளாசம் உட்பகுதியைச் சீரான வெளிர் நீலத்தில் நிரப்புகிறது. உட்கரு அதிக அடர்த்தியுடனும் செறிவுடனும் காணப்படுகிறது; பெரும்பாலும் நீள்வட்டமாகவும், பொதுவாக மையத்திற்கு அருகிலும் இருக்கும், ஆனால் எப்போதும் அவ்வாறு இருக்காது. இந்த மூன்றையும், செல்லின் வடிவத்தையும் உருப்பெருக்கத்தையும் பதிவு செய்யுமாறு மாணவர்களிடம் கூறவும். ஏனெனில் பணித்தாள் கேட்பது இவற்றைத்தான்.

இங்கே துல்லியம் சார்ந்த ஒரு முக்கியமான விஷயம் உள்ளது; பல பணித்தாள்கள் அதைத் தவறாகக் குறிப்பிடுகின்றன. காணக்கூடிய எல்லை பிளாஸ்மா சவ்வு இருக்கும் பகுதிக்கு ஒத்திருக்கிறது. ஆனால் சவ்வே, சுமார் 7 முதல் 10 நானோமீட்டர் தடிமனுள்ள கொழுப்பு இரட்டையடுக்கு என்பதால், பள்ளி நுண்ணோக்கி பிரித்தறியக்கூடிய அளவைவிட மிகச் சிறியது. மாணவர்கள் காண்பது செல்லின் ஒளியியல் விளிம்பும் அங்கே திரண்டுள்ள சாயமும்தான். செல் நுண்ணுறுப்புகளுக்கும் இதே எச்சரிக்கை பொருந்தும். மைட்டோகாண்ட்ரியா, எண்டோபிளாச வலைப்பின்னல், கோல்கி உறுப்புகள், ரைபோசோம்கள் ஆகியவை இந்தத் தயாரிப்பில் தெரியாது. நல்ல சூழ்நிலைகளில் வழக்கமான ஒளி நுண்ணோக்கி சுமார் 0.2 மைக்ரோமீட்டர் வரையிலான விவரங்களைப் பிரித்தறியும் என்று நுண்ணோக்கிக் கருவிகள் பற்றிய NCBI செல் உயிரியல் பின்னணி விளக்கம் தெரிவிக்கிறது. பெரும்பாலான நுண்ணமைப்பு விவரங்கள் அந்த வரம்புக்குக் கீழோ அதன் அருகிலோ உள்ளன. கூடுதல் விவரங்களைத் தராத அதிக உருப்பெருக்கம், படத்தைப் பெரிதாக்குமே தவிர விவரங்களைச் சேர்க்காது.

உட்கரு ஏன் மிக அடர்த்தியாக நிறமேற்கிறது? மெத்திலீன் ப்ளூ ஒரு நேர்மின் அயனிச் சாயம்; கரைசலில் அது நேர்மின்னூட்டம் கொண்டிருக்கும். செல்லில் உள்ள எதிர்மின்னூட்டம் கொண்ட பொருட்களுடன், குறிப்பாக நியூக்ளிக் அமிலங்களுடன், அது இணைகிறது. குரோமாட்டின், உட்கருவில் DNA-வைச் செறிவாக வைத்திருப்பதால், உட்கரு அதிகமான சாயத்தைச் சேகரிக்கிறது. சைட்டோபிளாசத்தில் RNA-வும் பிற மின்னூட்டமுள்ள மூலக்கூறுகளும் இருப்பதால் அதுவும் நிறமேற்கிறது; ஆனால் அதிகம் பரவிய நிலையிலும் குறைந்த அடர்த்தியிலும் நிறமேற்கிறது. முக்கியமான வரையறை இதுதான்: மெத்திலீன் ப்ளூ, DNA-வுக்கு மட்டுமே குறிப்பான சாயம் அல்ல. உட்கருப் படமெடுப்பில் மெத்திலீன் ப்ளூ பரவல் பற்றிய ஆய்வு, இந்த நேர்மின் அயனி நியூக்ளிக் அமிலங்கள் நிறைந்த பகுதிகளுடன் இணைவதை விவரிக்கிறது. மேலும், செல் தயாரிப்புகளில் மெத்திலீன் ப்ளூ பிணைதல் பற்றிய பழைய அளவியல் ஆய்வு, பிணைந்த சாயத்தின் பெரும்பகுதி நியூக்ளிக் அமிலங்களுடன் தொடர்புடையதாக இருப்பதைக் கண்டறிந்தது. ஆகவே அடர்ந்த உட்கருவும் வெளிர் சைட்டோபிளாசமும் ஒரு தோற்ற வேறுபாட்டு வடிவமே தவிர, மூலக்கூறு அளவிலான பரிசோதனை அல்ல.

மாணவர்கள் செய்யக்கூடிய தவறுகளும் அவற்றைப் புரிந்துகொள்ளும் முறையும்

தோல்வியடையும் ஏறக்குறைய ஒவ்வொரு நழுவத் தயாரிப்பும் ஐந்து வகைகளில் ஒன்றுக்குள் அடங்குகிறது. காரணம் புரியாமல் மீண்டும் செய்வதற்குப் பதிலாக, நழுவத்தில் உள்ள சிக்கலைக் கண்டறிய மாணவர்களுக்குக் கற்பிக்கவும்.

மிகையான நிறமூட்டல் செல்களையும் பின்னணியையும் ஒரேபோல் அடர்த்தியாக்குவதால், உட்கரு பார்வைப் புலத்தில் மறைந்துவிடுகிறது. நிறமூட்டும் நேரத்தைக் குறைத்தோ நன்றாகக் கழுவியோ இதைச் சரிசெய்யவும். குறைவான நிறமூட்டல், ஒளியை அதிகரிக்கும்போது மறைந்துவிடும் நிழலுருவங்களை மட்டுமே விட்டுச்செல்கிறது; முப்பது வினாடி இடைவெளிகளாக நேரத்தை அதிகரிக்கவும். தடித்த பூச்சுகள், எந்த வெளிக்கோட்டையும் தொடர முடியாத அளவுக்கு அடர்த்தியான ஒன்றன்மேல் ஒன்று படிந்த திரள்களை உருவாக்குகின்றன. இதற்கான திருத்தம் பரப்பும் முறையில்தான் உள்ளது: அடுத்த முறை இன்னும் மெல்லியதாகப் பரப்பவும். செல்களின் குவியலை எவ்வளவு கழுவினாலும் சரிசெய்ய முடியாது. காற்றுக் குமிழ்கள் கூர்மையான அடர் விளிம்புகளுடன் சரியான வட்டங்களாகத் தோன்றுகின்றன. அவற்றைச் செல் அமைப்புகளாகத் தவறாக எண்ணும் தொடக்கநிலை மாணவர்களின் கவனத்தை அவை திசைதிருப்புகின்றன; மூடுகண்ணாடியை மீண்டும் சாய்வாக, மெதுவாகப் படியவைக்கவும். செல்களின் மேலோ அவற்றைச் சுற்றியோ சிதறியிருக்கும் மிகச் சிறிய அடர் புள்ளிகள் பொதுவாக வாயில் இயல்பாக இருக்கும் பாக்டீரியாக்களே என்று Ingrid Science கன்னச் செல் செய்முறை போன்ற பள்ளிச் செய்முறைகள் குறிப்பிடுகின்றன. வாயில் நுண்ணுயிரிகள் வாழ்கின்றன என்பதை அவை உறுதிப்படுத்துகின்றன; இது மாணவர்களின் நினைவில் நிற்கலாம். ஆனால் இந்தப் பயிற்சியில் அவற்றின் இனத்தை அடையாளம் காண முடியாது; அவற்றைச் செல்லின் பாகங்களாக வரையக்கூடாது. உணவுத் துகள்களும் சளி இழைகளும் ஒழுங்கற்ற முறையிலும் அதிக அடர்த்தியிலும் நிறமேற்கின்றன; அவற்றைக் குறைப்பதற்காகவே தொடக்கத்தில் வாயைக் கொப்பளிக்கிறோம்.

இந்தப் பயிற்சியால் செய்ய முடியாதவை

இது கல்வி நோக்கிலான உற்றுநோக்கல்; நோயறிதல் பரிசோதனை அல்ல. வகுப்பறை நிறமூட்டலில் செல்களின் தோற்றத்தை வைத்து தொற்று, புற்றுநோய் அல்லது வேறு எந்த நோயையும் கண்டறிய முடியாது. அதற்கு மாறாக இந்தக் கட்டுரை எதையும் குறிப்பதாகப் புரிந்துகொள்ளக்கூடாது. இந்தத் தயாரிப்பு வடிவம், எல்லை, சைட்டோபிளாசம், உட்கரு ஆகியவற்றை இரண்டு உருப்பெருக்க அளவுகளில் காட்டுகிறது. இது சவ்வின் நுண்ணமைப்பையோ செல் நுண்ணுறுப்புகளின் விவரங்களையோ மூலக்கூறு அடையாளத்தையோ காட்டாது. இந்த வரம்பை வெளிப்படையாகக் கூறுவது அறிவியலையும் மாணவர்களையும் பாதுகாக்கிறது: உருப்பெருக்கமும் பயன்படுத்திய சாயமும் பதிவு செய்யப்பட்டு, பாகங்கள் சரியாகக் குறிக்கப்பட்ட ஒரு வரைபடமே நல்ல முடிவு; உடல்நலம் பற்றிய முடிவல்ல.

மாணவர் பணித்தாளும் பாகங்கள் குறிக்கப்பட்ட நுண்ணோக்கிப் படங்களும்

இந்தப் பக்கத்திற்கான இரண்டு செயல்பாட்டு வளங்கள் மேலுள்ள பாகங்கள் குறிக்கப்பட்ட நுண்ணோக்கிப் படமும் கீழுள்ள பணித்தாளும்தான். ஒவ்வொரு மாணவருக்கும் ஒரு பணித்தாளை அச்சிடவும் அல்லது அதைத் திரையில் காட்டி, அதிலுள்ள பெட்டிகளை மாணவர்கள் தங்கள் குறிப்பேடுகளில் நகலெடுக்கச் செய்யவும்.

45 நிமிட அமர்வில் இதைப் பயன்படுத்தும் முறை: பாதுகாப்பு விளக்கத்திற்கும் மாதிரி எடுப்பதற்கும் பத்து நிமிடங்கள், நிறமூட்டுவதற்கும் நழுவத் தயாரிப்பிற்கும் பத்து நிமிடங்கள், இரு உருப்பெருக்க அளவுகளிலும் உற்றுநோக்கி வரைவதற்குப் பதினைந்து நிமிடங்கள், சரிபார்ப்புப் பட்டியலை நிறைவு செய்து பாகங்கள் குறிக்கப்பட்ட நுண்ணோக்கிப் படத்துடன் ஒப்பிடுவதற்குப் பத்து நிமிடங்கள். சரிபார்ப்புப் பட்டியலின் அம்சங்கள் திட்டமிட்டே நேரடியாகச் சரிபார்க்கக்கூடியவையாக அமைக்கப்பட்டுள்ளன. மெல்லிய பூச்சு, சரியான நிறமூட்டும் நேரம், சைட்டோபிளாசத்தைவிட அடர்ந்த உட்கரு, பதிவு செய்யப்பட்ட உருப்பெருக்கம். இந்த நான்கையும் சரிபார்த்து உறுதிப்படுத்தக்கூடிய மாணவர், இந்தப் பாடம் கற்பிக்க விரும்பும் கருத்தைப் புரிந்துகொண்டுள்ளார்: நுண்ணோக்கிகள் வேறுபாடுகளைக் காட்டுகின்றன; நிறமூட்டல்கள், காட்டத் தகுந்த வேறுபாடுகளை உருவாக்குகின்றன.