EMB agar dhidi ya MacConkey agar: kuchagua na kutafsiri media

Mwanafunzi anapaka sampuli ileile ya maji kwenye sahani mbili. Kwenye moja, huonekana koloni nyeusi zenye mng'ao wa kijani wa kimetali. Kwenye nyingine, huonekana koloni za waridi angavu zenye duara hafifu linalozizunguka. Sahani zote mbili zilipandikizwa kutoka kwenye bomba lilelile, zikawekwa pamoja kwenye hali ya uatamiaji, na zikasomwa saa ileile. Mwanafunzi anauliza ni sahani ipi iliyo sahihi.

Sahani zote mbili ni sahihi. Zinajibu maswali tofauti. Mkanganyiko hutokana na kuzichukulia media hizi mbili kana kwamba ni vipimo vinavyoweza kubadilishana kwa bakteria wa utumbo. Zina lengo linalofanana, ambalo ni kuchagua viumbe enteriki vya Gram-hasi na kutenganisha vichachushaji vya lactose na visivyochachusha, lakini hutekeleza lengo hilo kwa kemia tofauti na mantiki tofauti ya mwonekano. Ukielewa dhana mbili za msingi, kuchagua sahani na kusoma koloni huwa jambo la kawaida.

Jibu fupi

EMB agar hutumia rangi mbili, eosin Y na methylene blue, ambazo hufanya kazi mbili kwa wakati mmoja: huzuia ukuaji wa Gram-chanya na huganda kuzunguka wazalishaji wakubwa wa asidi na kuunda koloni nyeusi, kwa kawaida zikiwa na mng'ao wa kijani wa kimetali kwa Escherichia coli. MacConkey agar hutenganisha kazi hizo: chumvi za nyongo pamoja na crystal violet huzuia Gram-chanya, lactose hutoa kiungo cha uchachushaji, na neutral red huonyesha asidi kwa koloni za waridi au nyekundu. Ikiwa kazi ni kuonyesha kwa uwazi utambuzi wa awali wa E. coli, EMB inafaa. Ikiwa kazi ni kutenganisha kwa urahisi vichachushaji vya lactose vya waridi na visivyochachusha visivyo na rangi, hasa katika taratibu za kinyesi au mkojo, MacConkey kwa kawaida huwa rahisi kusoma. Hakuna sahani inayotambua kiumbe kwa rangi pekee.

EMB: rangi zinazochagua na kuonyesha kwa wakati mmoja

Dhana ya EMB huunganisha uteuzi na uonyeshaji katika molekuli zilezile. Itifaki ya ASM ya eosin methylene blue agar inaeleza EMB kuwa ya teule na tofautishi, huku jozi ya rangi ikizuia viumbe wengi wa Gram-chanya na uchachushaji wa lactose ukichochea ufyonzwaji na ugandaji wa rangi. Mchanganyiko wa kawaida wa Levine una peptone, lactose, phosphate, eosin Y, methylene blue, na agar, kama ilivyoorodheshwa katika mbinu ya FDA BAM ya Levine EMB agar. Kumbuka kwamba baadhi ya mapishi ya zamani ya EMB yaliongeza sucrose pamoja na lactose, huku Levine EMB ikiwa na lactose bila sucrose, kwa hiyo andika ni mchanganyiko upi maabara yako huhifadhi.

Kusoma EMB kunamaanisha kusoma tabia ya rangi. Uchachushaji mkubwa wa lactose huzalisha asidi ya kutosha kusababisha ugandaji mwingi wa rangi, na kuipa E. coli sehemu za katikati za buluu-nyeusi na, katika hali ya kawaida, mng'ao wa kijani wa kimetali kwenye mwanga unaoakisiwa. Vichachushaji dhaifu zaidi kama Enterobacter na Klebsiella kwa kawaida hukua kama koloni za waridi hadi zambarau zenye ute bila mng'ao huo. Visivyochachusha kama Salmonella, Shigella, na Proteus kwa kawaida hukua kama koloni zisizo na rangi au zinazopitisha mwanga kwa sababu hazizalishi mlipuko wa asidi unaogandisha rangi. Gram-chanya kwa kawaida huzuiwa, ingawa kiwango cha uzuiaji hutofautiana kulingana na aina ya kiumbe na bidhaa. Kemia kamili ya utayarishaji wa rangi, ikiwa ni pamoja na sababu methylene blue kutenda kama rangi ya kikationi, inafaa kujadiliwa kando katika mada ya mchanganyiko wa rangi, na muktadha wa jumla wa hadubini unapatikana katika atlasi ya mbinu za kutia rangi. Makala haya yanabaki kwenye uchaguzi na usomaji wa sahani.

Mchoro hapo juu ni wa maelezo. Unaonyesha mantiki ya mwonekano unaotarajiwa: koloni nyeusi zenye mng'ao pamoja na aina za waridi zenye ute pamoja na aina hafifu kwenye EMB, zikilinganishwa na aina za waridi dhidi ya hafifu kwenye MacConkey. Utumie kujifunza mpangilio huo, kisha thibitisha kila tafsiri dhidi ya vidhibiti vilivyopigwa picha na kijikaratasi cha bidhaa cha media halisi iliyo kwenye benchi lako.

MacConkey: kazi zilizotenganishwa, kanuni rahisi ya mwonekano

Dhana ya MacConkey huipa kila kazi kiungo tofauti. Itifaki ya ASM ya MacConkey agar inaeleza mtazamo huohuo wa uteuzi na utofautishaji, na mbinu ya FDA BAM ya MacConkey agar inaorodhesha sehemu zinazofanya kazi: peptone, lactose, chumvi za nyongo, chumvi, neutral red, crystal violet, na agar. Chumvi za nyongo pamoja na crystal violet huchagua dhidi ya Gram-chanya. Lactose hutoa substrati ya uchachushaji. Neutral red hufanya kazi kama kiashiria cha pH, ikibadilika kuwa waridi hadi nyekundu mahali asidi inapoundwa, wakati mwingine ikiwa na nyongo iliyoganda kuzunguka vichachushaji vikubwa.

Kanuni ya usomaji imekusudiwa kuwa rahisi: waridi humaanisha kichachushaji cha lactose, na isiyo na rangi au hafifu humaanisha kisichochachusha. E. coli huonekana waridi hadi nyekundu, mara nyingi ikiwa na duara la nyongo iliyoganda. Klebsiella na Enterobacter huonekana waridi na mara nyingi zikiwa na ute kwa sababu ya kapsuli zao. Salmonella, Shigella, Proteus, na vijiti vingine vingi vya Gram-hasi huonekana bila rangi. Faida ya ziada ni muhimu katika maabara za kufundishia: chumvi za nyongo kwa ujumla hupunguza kusambaa kwa Proteus, kwa hiyo ni rahisi kupata koloni zilizotengwa kwenye MacConkey kuliko kwenye media zisizo teule, ingawa uzuiaji si kamili na kuna mbadala zisizo na chumvi pale ambapo kudhibiti kusambaa ndilo kipaumbele.

Sababu ya kimolekuli ya rangi hizi kutenda hivi inahusiana na chaji na muundo. Methylene blue ni rangi ya kikationi ya phenothiazine ambayo muundo na sifa zake hueleza mvuto wake kwa nyuso za bakteria zenye asidi, ambao ni mvuto huohuo unaofanya igande katika maeneo yenye asidi kwenye EMB.

Ulinganisho kwa muhtasari

Soma jedwali kama utaratibu wa kufanya uamuzi. Zoezi linapohitaji wanafunzi kuona mfululizo wa nguvu ya uchachushaji wenye mwisho mmoja unaojitokeza sana, EMB huonyesha hilo. Zoezi linapohitaji utenganishaji wa haraka wa aina mbili kabla ya uthibitishaji wa kibayokemia, MacConkey huonyesha hilo.

Ni media ipi kwa sampuli ipi

Kwa mazoezi ya maji yanayolenga utambuzi wa awali wa fecal coliform au E. coli, EMB huvutia kwa sababu mng'ao wake ni rahisi kutofautisha kwa macho. MacConkey pia hushughulikia viumbe enteriki vya Gram-hasi na imewahi kutumiwa kihistoria kwa maji, lakini hakuna kati ya sahani hizi inayochukua nafasi ya mbinu ya udhibiti wa maji, ambayo inaweza kubainisha media kama modified mTEC au MI kulingana na kipimo. Angalia mbinu ambayo maabara yako inatakiwa kufuata.

Kwa utenganishaji wa mtindo wa sampuli za kinyesi kati ya vichachushaji na visivyochachusha, MacConkey kwa ujumla ndiyo yenye manufaa zaidi kati ya hizi mbili. Kazi halisi ya kinyesi kwa Salmonella au Shigella kwa kawaida huongeza media enteriki zenye uteuzi mkali zaidi kama XLD au Hektoen enteric badala ya kutegemea MacConkey pekee.

Kwa ufundishaji wa mtindo wa mkojo unaoiga mtiririko wa kazi wa kliniki, tumia MacConkey pamoja na blood agar. MacConkey hutoa utenganishaji wa mapema wa Gram-hasi huku blood agar ikiruhusu ukuaji wa viumbe ambavyo MacConkey huzuia. Mchanganyiko huu ni wa kawaida katika maelezo ya kliniki ya uandaaji wa utamaduni wa mkojo.

Kwa kufundisha dhana yenyewe, tumia zote mbili. EMB hufundisha kwamba nguvu ya uchachushaji ni muhimu na kwamba molekuli moja inaweza kutekeleza majukumu mawili. MacConkey hufundisha muundo wa moduli: kichaguzi, substrati, na kiashiria vikiwa vimetenganishwa. Wanafunzi wanaopaka E. coli inayojulikana, Klebsiella aerogenes inayojulikana, na Salmonella inayojulikana sambamba kwenye media zote mbili mara chache huchanganya tena mantiki hizi mbili.

Mitego ya usomaji inayojirudia kila muhula

Kosa la kawaida zaidi ni kutambua kwa rangi pekee. Waridi kwenye MacConkey inaweza kuwa E. coli, Klebsiella, Enterobacter, au kichachushaji kingine. Isiyo na rangi inaweza kuwa Salmonella, Shigella, Proteus, Pseudomonas, au kisichochachusha kingine. Rangi ni fenotipu ya uchunguzi wa awali inayoelekeza kazi ya uthibitishaji kama Gram stain, oxidase, paneli za kibayokemia, au utambuzi kwa kifaa, si jina la spishi.

Kosa la pili ni kutafsiri kupita kiasi kutokuwepo kwa mng'ao. Baadhi ya koloni halisi za E. coli, hasa zilizotengwa, hutoa mng'ao mdogo sana au kutokuwa nao kabisa kwenye EMB. Kutokuwepo kwa mng'ao hakuondoi E. coli, na kuwepo kwa mng'ao hakuthibitishi. Chukulia mng'ao kama kidokezo cha awali.

Kosa la tatu ni kulinganisha sahani zenye umri tofauti. Vichachushaji vya lactose vinavyochelewa vinaweza kuwa waridi kwenye MacConkey baada ya uatamiaji wa muda mrefu, jambo linalofifisha mgawanyiko ulio wazi kati ya vichachushaji na visivyochachusha. Soma katika saa iliyobainishwa na maabara na uandike muda wa uatamiaji pamoja na matokeo.

Kosa la nne ni kusoma ukuaji mchanganyiko kama kiumbe kimoja. Koloni ya waridi iliyo karibu na koloni isiyo na rangi inaonyesha fenotipu mbili, si hali ya kati. Chagua koloni zilizotengwa vizuri na shughulikia kila morfotipu kivyake. Muundo wenye ute huleta mtego kama huo: Klebsiella na Enterobacter zote zinaweza kuonekana zenye ute, kwa hiyo kapsuli pekee haiwezi kuamua jina. Kiumbe kilichokuwa kikifundishwa kama Enterobacter aerogenes sasa kimeainishwa kama Klebsiella aerogenes, jambo linaloeleza kwa nini chati za zamani na lebo mpya zinaweza kuonekana kutokubaliana.

Vidhibiti na kanuni ya mwisho

Tumia vidhibiti vilivyopigwa picha au vipya kila kipindi: E. coli kwa mwitikio mkubwa wa kichachushaji, Klebsiella aerogenes kwa uchachushaji wenye ute bila mng'ao wa kawaida, aina ya Salmonella kwa mwitikio usio na rangi wa kisichochachusha, na Staphylococcus aureus kuthibitisha uzuiaji wa Gram-chanya kwenye bidhaa yako halisi. Linganisha namba za aina na vigezo vya kukubalika na kijikaratasi cha mtengenezaji, kwa sababu uteuzi hubadilika kulingana na kiwango cha nyongo, crystal violet, na rangi.

Kumbuka sentensi moja ukiwa kwenye benchi. EMB hutumia rangi ambazo huchagua na kuonyesha kwa wakati mmoja, jambo linalotoa ishara ya E. coli inayojitokeza sana lakini linahitaji usomaji wenye umakini zaidi. MacConkey hutenganisha uteuzi na uonyeshaji, jambo linalotoa utenganishaji rahisi wa waridi dhidi ya hafifu lakini kwa maelezo machache zaidi kuhusu uchachushaji. Chagua media ambayo dhana yake inalingana na swali, thibitisha rangi kwa vipimo sahihi, na sahani hizi mbili zitaacha kuonekana kama washindani na kuanza kufanya kazi pamoja.