Bluu ya methilini na Bartonella: matokeo ya maabara na mipaka ya ushahidi wa kliniki

Chombo cha ukuzaji na mgonjwa vinahusishwa na neno moja, maambukizi, lakini si dhana moja. Kwenye chombo, maambukizi ni idadi ya koloni kwenye agari. Kwa mgonjwa, ni bakteria ndani ya seli na mishipa, dawa zinazosafiri kupitia damu na tishu, na mfumo wa kinga unaofanya sehemu ya kazi. Ukichanganya hali hizo mbili, namba ya maabara inayovutia huanza kuonekana kama tiba. Ukizitenganisha, namba hiyo hiyo hubaki kuwa kile ilicho: sababu ya kufanya jaribio linalofuata.

Kutenganisha hali hizo ndiyo kazi kuu ya mapitio haya kuhusu bluu ya methilini na Bartonella. Tafiti mbili za maabara kutoka kundi moja la watafiti zilijaribu bluu ya methilini dhidi ya Bartonella henselae katika hali zisizo za ukuaji. Zote ziliripoti shughuli kubwa katika vyombo vya kioo na plastiki. Hakuna iliyofanya majaribio kwa binadamu.

Kwa nini watafiti hujaribu awamu tuli

Majaribio mengi ya antibiotiki hutumia seli zinazokua. Mfano huo hukosa hali ngumu zaidi: seli ambazo zimeacha kugawanyika na huvumilia dawa zinazoua seli wenzao zinazokua.

Bartonella inaweza kudumu mwilini, ikiwa ni pamoja na ndani ya seli nyekundu za damu na seli za endotheliamu. Kwa hiyo, kundi hilo lilichunguza ni dawa zipi zilizoidhinishwa zinazoweza kuua B. henselae baada ya kuingia katika awamu tuli. MIC ya chini dhidi ya seli zinazokua haikutabiri uwezo wa kuua seli katika awamu tuli. Rifampin ilikuwa na MIC ya chini sana, lakini haikuua vizuri seli katika awamu tuli, ilhali misombo yenye thamani za juu zaidi za MIC iliziua vizuri. Wasomaji wanaotaka mbinu ya jumla ya kutathmini makala ya aina hii wataipata katika mwongozo wa kusoma utafiti kuhusu bluu ya methilini.

Uchunguzi wa kwanza: Li na wenzake, 2019

Uchunguzi wa awamu tuli wa 2019 katika Antibiotics ulitumia aina ndogo moja, B. henselae JK53, iliyokuzwa katika kiowevu cha Schneider chenye 10 percent ya seramu ya kijusi cha ng'ombe kwenye 37 C pamoja na 5 percent CO2. Sampuli zilizokuzwa kwa siku moja zilikuwa hasa seli zilizotawanyika zilizokuwa zikigawanyika. Sampuli zilizokuzwa kwa siku tano, zenye takriban 10 kwa kipeo cha 8 cha vitengo vinavyounda koloni kwa mL, zilichukuliwa kuwa katika awamu tuli na zilikuwa na mikusanyiko inayoonekana.

Kipimo kilitumia SYBR Green I pamoja na iodidi ya propidium, na kilisawazishwa kwa kutumia michanganyiko ya seli hai na seli zilizouawa kwa isopropanoli. Kwa sababu bluu ya methilini ina rangi kali, matokeo yaliyoonyesha shughuli yalithibitishwa kwa hadubini, kisha kwa kuhesabu koloni kwenye agari ya damu, ambayo ndiyo kipimo cha mwisho chenye masharti makali zaidi.

Kati ya dawa 1,581 zilizoidhinishwa zilizojaribiwa kwenye 50 micromolar, bluu ya methilini iliacha uhai wa seli wa 16 percent kwa kisomaji cha sahani na 25 percent kwa hadubini. Daptomycin ilipata 21 percent, azoli kadhaa zilipata 22 hadi 27 percent, gentamicin 32 percent, erythromycin 66 percent, na ciprofloxacin 74 percent. Pyrvinium pamoate ilionekana kuwa na nguvu zaidi kwa kisomaji, lakini haikuweza kutathminiwa kwa hadubini kwa sababu ya floresensi yake yenyewe.

Dhidi ya B. henselae inayokua, MIC ya bluu ya methilini ilikuwa 0.08 hadi 0.16 micrograms per mL. Dhidi ya seli za awamu tuli zilizokuzwa kwa siku tano, kwenye 5 micrograms per mL, idadi ya koloni ilipungua hadi kutokuwa na koloni zinazogundulika baada ya siku moja ya kuathiriwa na dawa, sawa na daptomycin na pyrvinium pamoate katika viwango vilivyojaribiwa. Jaribio tofauti la kupima kasi ya kuua lilitumia 10 micrograms per mL. Hivi ni viwango vya kuathiriwa na dawa maabarani, si dozi, na makala inavieleza hivyo. Thamani iliyotajwa ya kilele katika plazma ya binadamu, karibu 3.9 micrograms per mL, inaonekana kwenye makala kama muktadha wa msingi tu. Muhtasari wa farmakokinetiki ya bluu ya methilini unaeleza kwa nini thamani ya plazma haiwezi kuchukuliwa kuwa thamani ya tishu.

Makala inaeleza wazi mipaka miwili. Hakukuwa na mfano wa biofilamu wala majaribio ya mchanganyiko wa bluu ya methilini. Mikusanyiko ya siku tano ilikuwa makundi katika sampuli ya kiowevu ya awamu tuli, si jaribio la biofilamu lililothibitishwa. Waandishi walipendekeza majaribio kwa wanyama, majaribio ya michanganyiko, majaribio ya biofilamu, na upimaji katika spishi nyingine za Bartonella.

Michanganyiko na seli zilizotokana na biofilamu: Zheng na wenzake, 2020

Utafiti wa ufuatiliaji wa 2020 katika BMC Microbiology uliendelea kutumia aina ndogo ileile na kiowevu kilekile cha ukuzaji, lakini ukahamia kwenye sampuli za awamu tuli zilizokuzwa kwa siku sita na kuongeza mambo mawili yaliyokosekana katika makala ya kwanza: michanganyiko ya dawa mbili na mfano wa seli zilizotokana na biofilamu.

Kwa dawa moja moja katika kiwango sawa cha 5 micrograms per mL kwa saa 24, bluu ya methilini iliacha 3.2 mara 10 kwa kipeo cha 4 cha vitengo vinavyounda koloni kwa mL, ikilinganishwa na sampuli ya udhibiti yenye karibu 2.8 mara 10 kwa kipeo cha 10. Ciprofloxacin, gentamicin, na nitrofurantoin ziliacha koloni chache zaidi wakati huo huo. Hili linatofautiana na matokeo ya 2019, ambapo kiwango kilekile kilichotajwa hakikuacha koloni zinazogundulika baada ya siku moja. Umri wa sampuli zilizokuzwa, msongamano, na namna ya kuzishughulikia vilitofautiana, kwa hiyo uwezo wa kuua ulirudiwa kwa mwelekeo lakini haukuwa sawa kwa ukubwa. Tofauti hii kati ya majaribio ni sababu mojawapo inayofanya ukaguzi wa kawaida wa usalama na mwingiliano wa dawa utenganishe nguvu ya maabara na athari ya kliniki.

Uchunguzi wa michanganyiko ndio sehemu inayotajwa zaidi. Kila kiambato kiliwekwa katika kiwango cha 5 micrograms per mL. Azithromycin pamoja na bluu ya methilini na rifampin pamoja na bluu ya methilini hazikuacha koloni za awamu tuli zinazogundulika baada ya saa 24, kama ilivyokuwa kwa michanganyiko yote miwili ya ciprofloxacin. Ni michanganyiko hiyo minne tu kati ya jozi 25 zilizojaribiwa iliyofikia matokeo hayo. Hakuna uchanganuzi rasmi wa sinergia uliofanywa, kwa hiyo istilahi sahihi ni mchanganyiko wenye shughuli katika hali hizi, si sinergia iliyothibitishwa.

Jaribio la biofilamu lilipima seli zilizotolewa kwenye biofilamu changa iliyovunjwa, si kupenya ndani ya biofilamu iliyokomaa na iliyo nzima. Sampuli zilikuzwa kwa siku tano, zikapunguzwa ukolezi na kuwekwa kwenye sahani zenye visima kwa siku tano zaidi, zikathibitishwa kwa kupakwa rangi ya crystal violet, kisha zikakwanguliwa kabla ya kuathiriwa na dawa. Kwenye 5 micrograms per mL, bluu ya methilini peke yake ilipunguza idadi hadi 2.3 mara 10 kwa kipeo cha 2 kufikia siku ya 6, na hivyo kuwa miongoni mwa dawa bora zaidi zilizotumiwa moja moja, lakini haikufikia sifuri. Michanganyiko yote miwili ya bluu ya methilini ilifikia sifuri kufikia siku ya 6, kama ilivyokuwa kwa michanganyiko yote miwili ya ciprofloxacin.

Waandishi walibainisha mipaka ileile ambayo msomaji makini angeona: biofilamu changa iliyokwanguliwa badala ya biofilamu ya zamani iliyo nzima, ukolezi mmoja uliochaguliwa kwa urahisi kwa dawa zote badala ya kila dawa kutumiwa katika kiwango chake halisi cha kilele, jozi zilizochaguliwa tu zinazohusisha azithromycin au rifampin, aina ndogo moja, hakuna wanyama, na hakuna wagonjwa. Utafiti wa baadaye wa dawa tatu ulipendekezwa, haukuripotiwa.

Ulinganisho wa muundo wa tafiti

Jedwali linaonyesha hoja ya makala hii kwa ufupi. Kila kitu kilicho kushoto mwa safu ya mwisho ni kazi ya ukuzaji maabarani. Hakuna chochote katika makala yoyote kati ya hizo mbili kinachojaza safu ya mwisho.

Bartonella si Borrelia

Makala zote mbili zinataja Borrelia burgdorferi, bakteria wa umbo la ond wanaosababisha ugonjwa wa Lyme, kwa sababu kipimo cha rangi kilitokana na kazi ya awali ya awamu tuli ya Borrelia katika maabara hiyo hiyo, ambapo bluu ya methilini na daptomycin pia zilionyesha shughuli. Historia hiyo ni muktadha muhimu na pia chanzo cha makosa ya mara kwa mara.

Hakuna jaribio katika makala yoyote ya Bartonella linalopima Borrelia sambamba na Bartonella. Viumbe vinatofautiana, viowevu vya ukuzaji vinatofautiana, viwango vya ukolezi vinatofautiana, na athari inayodhaniwa ya bluu ya methilini kwenye utando wa Bartonella ilielezwa kuwa dhana inayohitaji utafiti zaidi. Matokeo hayapaswi kuhamishwa kutoka spishi moja kwenda nyingine, na hakuna kati ya makala hizo inayounga mkono madai mapana kuhusu vimelea. Ulinganisho wa seli zinazodumu za Borrelia na Bartonella hutenganisha machapisho ya utafiti wa viumbe hivyo viwili kwa sababu hii.

Kwa nini sampuli zilizokuzwa haziwezi kubadilishwa kuwa protokali

Ni jambo linaloeleweka kwamba watu hutafuta protokali ya bluu ya methilini kwa Bartonella. Makala hizi zinaonyesha kwa nini kauli hiyo inapaswa kuchukuliwa kama ishara ya tahadhari badala ya orodha ya ununuzi.

Kwanza, 5 micrograms per mL katika kisima si agizo la dawa. Kiwango hicho hakijumuishi ufyonzwaji, usambazaji, kufungamana na protini, kupenya ndani ya seli, au uwezo wa mwili kustahimili dawa. Waandishi walikichagua kama wastani wa kukadiria wa viwango vya kilele vya antibiotiki na kusema kuwa kazi ya baadaye inapaswa kutumia kila dawa katika kiwango chake halisi.

Pili, koloni sifuri humaanisha hakuna koloni katika hali hizo za ukuzaji kwenye sahani, si tishu zisizo na vijidudu. Seli zinazodumu, bakteria walio ndani ya seli, na mipaka ya uchukuaji wa sampuli vyote viko nje ya kile kinachoonyeshwa na sahani ya agari.

Tatu, michanganyiko inayofanya kisima kisiwe na vijidudu inaweza kushindwa kufanya kazi au kudhuru ndani ya mwili. Azithromycin pamoja na bluu ya methilini na rifampin pamoja na bluu ya methilini ni jozi za maabara zinazotumiwa katika viwango vya maabara. Bila farmakokinetiki kwa wanyama na data za majaribio yanayodhibitiwa kwa binadamu, hakuna dozi, hakuna muda wa matumizi, wala uwiano wa manufaa dhidi ya hatari. Mtu yeyote anayezingatia chaguo hizi anapaswa kuzijadili na mtaalamu wa afya na kupitia hali ambazo matumizi ya bluu ya methilini yanahitaji usimamizi wa kitabibu kabla ya kufikia hitimisho lolote kutokana na data za vyombo vya ukuzaji.

Hitimisho finyu ambalo makala hizi zinaunga mkono ni hili: bluu ya methilini ina shughuli inayoweza kurudiwa dhidi ya B. henselae JK53 isiyokua katika majaribio nje ya kiumbe hai, ikiwemo katika michanganyiko ya dawa mbili maabarani, huku matokeo yenye nguvu zaidi ya michanganyiko na ya seli zilizotokana na biofilamu yakitoka katika utafiti wa 2020. Kila jambo jingine, ikiwa ni pamoja na iwapo shughuli hiyo ina umuhimu kwa bartonellosis ya binadamu, bado halijajaribiwa.