ලිපිය
EMB agar සහ MacConkey agar: මාධ්‍ය තෝරාගැනීම සහ අර්ථකථනය
ශිෂ්‍යයෙක් එකම ජල සාම්පලය තැටි දෙකක streak කරයි. එකක හරිත ලෝහමය දීප්තියක් ඇති අඳුරු කොලනි පෙනේ. අනෙකේ මඳ අඳුරු halo එකක් සහිත දීප්තිමත් රෝස කොලනි පෙනේ. තැටි දෙකටම එකම නළයෙන් inoculate කර, එකිනෙකට පසෙකින් incubate කර, එකම පැයේදී කියවා ඇත. ශිෂ්‍යයා අසන්නේ නිවැරදි තැටිය කුමක්ද යන්නයි.
තැටි දෙකම නිවැරදියි. ඒවා පිළිතුරු දෙන්නේ වෙනස් ප්‍රශ්නවලටය. අවුල ඇතිවන්නේ අන්ත්‍ර බැක්ටීරියා සඳහා එකිනෙකට හුවමාරු කළ හැකි screening මාධ්‍ය දෙකක් ලෙස මේවා සැලකීමෙනි. Gram negative enteric ජීවීන් තෝරාගැනීම සහ lactose fermenters, nonfermenters වලින් වෙන් කිරීම යන අරමුණ දෙකටම පොදුය. එහෙත් එම අරමුණ ක්‍රියාත්මක කරන්නේ වෙනස් රසායනයකින් සහ වෙනස් දෘශ්‍ය තර්කයකිනි. මූලික සංකල්ප දෙක තේරුම් ගත් පසු තැටි තෝරාගැනීම සහ කොලනි කියවීම සාමාන්‍ය ක්‍රියාවලියක් බවට පත්වේ.
කෙටි පිළිතුර
EMB agar හි eosin Y සහ methylene blue යන වර්ණක දෙකම ද්විත්ව කාර්යයක් ඉටු කරයි: ඒවා Gram positive වර්ධනය මර්දනය කරන අතර ප්‍රබල අම්ල නිෂ්පාදකයන් වටා අවක්ෂේප වී අඳුරු කොලනි සාදයි; Escherichia coli සඳහා සම්භාව්‍යව ලෝහමය හරිත දීප්තියක් දක්නට ලැබේ. MacConkey agar කාර්යයන් වෙන් කරයි: bile salts සහ crystal violet Gram positives මර්දනය කරයි, lactose fermentation සඳහා substrate සපයයි, neutral red අම්ලය ඇතිවීම රෝස හෝ රතු කොලනි ලෙස පෙන්වයි. කාර්යය E. coli පිළිබඳ පැහැදිලි presumptive demonstration එකක් නම් EMB ප්‍රයෝජනවත්ය. විශේෂයෙන් stool හෝ urine workflow වලදී lactose fermenters සහ nonfermenters පැහැදිලිව රෝස හා වර්ණ රහිත ලෙස වෙන් කිරීම කාර්යය නම් MacConkey සාමාන්‍යයෙන් කියවීමට පහසුය. කිසිදු තැටියක් වර්ණය පමණක් මත ජීවියෙකු හඳුනා නොගනී.
EMB: එකවර තෝරාගන්නා සහ ප්‍රතිඵල පෙන්වන වර්ණක
EMB සංකල්පයේ තෝරාගැනීම සහ දර්ශක කාර්යය එකම අණු තුළ එක් කර ඇත. ASM eosin methylene blue agar protocol අනුව EMB යනු තෝරාගැනීමේ සහ විභේදක මාධ්‍ය දෙකම වන අතර, එහි වර්ණක යුගලය බොහෝ Gram positive ජීවීන් මර්දනය කරයි; lactose fermentation නිසා වර්ණක අවශෝෂණය සහ අවක්ෂේපණය වැඩි වේ. FDA BAM method for Levine EMB agar හි දැක්වෙන සාමාන්‍ය Levine සංයුතියට peptone, lactose, phosphate, eosin Y, methylene blue සහ agar ඇතුළත් වේ. පැරණි EMB recipes සමහරවිට lactose සමඟ sucrose ද එක් කළ අතර Levine EMB හි sucrose නොමැතිව lactose පමණක් ඇති බව සලකන්න. එබැවින් ඔබේ රසායනාගාරයේ stock කර ඇති formulation එක සටහන් කරන්න.
EMB කියවීම යනු වර්ණක හැසිරීම කියවීමයි. ශක්තිමත් lactose fermentation මඟින් අධික වර්ණක අවක්ෂේපණයක් ඇති කිරීමට තරම් අම්ලයක් නිපදවයි. එමඟින් E. coli සඳහා අඳුරු නිල්-කළු මධ්‍යයන් සහ, සම්භාව්‍ය අවස්ථාවේදී, පරාවර්තන ආලෝකයේ හරිත ලෝහමය දීප්තියක් ඇති වේ. Enterobacter සහ Klebsiella වැනි දුර්වල fermenters සාමාන්‍යයෙන් එම දීප්තිය නොමැති රෝස සිට දම් පැහැය දක්වා වූ mucoid කොලනි ලෙස වර්ධනය වේ. Salmonella, Shigella සහ Proteus වැනි nonfermenters සාමාන්‍යයෙන් වර්ණ රහිත හෝ පාරදෘශ්‍ය කොලනි ලෙස වර්ධනය වේ, මන්ද වර්ණක අවක්ෂේප කිරීමට අවශ්‍ය හදිසි අම්ල නිෂ්පාදනය ඒවා සිදු නොකරන බැවිනි. Gram positives සාමාන්‍යයෙන් මර්දනය වේ, නමුත් මර්දනයේ ප්‍රමාණය strain සහ product අනුව වෙනස් වේ. Methylene blue මුලින්ම cationic stain එකක් ලෙස හැසිරෙන්නේ ඇයිද යන්න ඇතුළුව සම්පූර්ණ dye preparation chemistry වෙනම dye formulation සාකච්ඡාවකට අයත් වන අතර, සාමාන්‍ය microscopy සන්දර්භය staining methods atlas එකක ඇත. මෙම ලිපිය තැටි තෝරාගැනීම සහ කියවීම පිළිබඳව පමණක් අවධානය යොමු කරයි.
ඉහත රූපය නිදර්ශනමය එකකි. එය අපේක්ෂා කළ යුතු දෘශ්‍ය තර්කය පෙන්වයි: EMB මත අඳුරු දීප්තියක් ඇති කොලනි, රෝස mucoid වර්ග සහ පැහැදිලි වර්ග; MacConkey මත රෝස සහ පැහැදිලි වර්ග. රටාව ඉගෙන ගැනීමට එය භාවිතා කරන්න. ඉන්පසු සෑම තීරණයක්ම ඡායාරූපගත controls සහ ඔබේ bench එකේ භාවිත කරන නිශ්චිත මාධ්‍යයේ product insert එක සමඟ තහවුරු කරන්න.
MacConkey: වෙන් කළ කාර්යයන්, සරල දෘශ්‍ය නියමය
MacConkey සංකල්පයේ එක් එක් කාර්යය වෙනම ingredient එකකට පවරයි. ASM MacConkey agar protocol ද එය තෝරාගැනීමේ සහ විභේදක මාධ්‍යයක් ලෙසම විස්තර කරන අතර, FDA BAM method for MacConkey agar හි ක්‍රියාකාරී කොටස් ලෙස peptones, lactose, bile salts, salt, neutral red, crystal violet සහ agar ලැයිස්තුගත කරයි. Bile salts සහ crystal violet එක්ව Gram positives වලට එරෙහිව තෝරාගැනීම සිදු කරයි. Lactose fermentation substrate එක සපයයි. Neutral red pH reporter එක ලෙස ක්‍රියා කරමින් අම්ලය සෑදෙන ස්ථාන රෝස සිට රතු දක්වා පෙන්වයි; ප්‍රබල fermenters වටා සමහරවිට precipitated bile ද පෙනේ.
කියවීමේ නියමය හිතාමතාම සරලය: රෝස පැහැය lactose fermenter එකක් අදහස් කරයි; වර්ණ රහිත හෝ පැහැදිලි වීම nonfermenter එකක් අදහස් කරයි. E. coli රෝස සිට රතු පැහැයෙන් පෙනෙන අතර බොහෝවිට bile precipitate halo එකක් ද ඇත. Klebsiella සහ Enterobacter රෝස පැහැයෙන් පෙනෙන අතර ඒවායේ capsules නිසා නිතර mucoid ස්වභාවයක් දක්වයි. Salmonella, Shigella, Proteus සහ තවත් බොහෝ Gram negative rods වර්ණ රහිතව පෙනේ. Teaching labs සඳහා තවත් ප්‍රයෝජනයක් ඇත: bile salts සාමාන්‍යයෙන් Proteus swarming අඩු කරන බැවින් nonselective මාධ්‍යවලට වඩා MacConkey මත isolated colonies ලබා ගැනීම පහසුය. එහෙත් මර්දනය සම්පූර්ණ නොවන අතර swarming control ප්‍රධාන අවශ්‍යතාවය වන විට salt free alternatives ද ඇත.
වර්ණක මෙසේ හැසිරීමට අණුක හේතුව charge සහ structure සමඟ සම්බන්ධ වේ. Methylene blue යනු cationic phenothiazine dye එකක් වන අතර එහි structure සහ properties acidic bacterial surfaces සඳහා ඇති affinity එක පැහැදිලි කරයි. EMB මත acidic zones තුළ එය අවක්ෂේප වන විට ක්‍රියා කරන්නේද එම affinity එකමය.
එක් බැල්මකින් සැසඳීම
| ලක්ෂණය | EMB agar | MacConkey agar |
|---|---|---|
| තෝරාගැනීමේ පද්ධතිය | Eosin Y සහ methylene blue | Bile salts සහ crystal violet |
| විභේදක substrate | Lactose (Levine හි sucrose නැත) | Lactose |
| දර්ශකය | වර්ණක අවක්ෂේපණයම (අඳුරු කොලනි, හරිත දීප්තිය) | Neutral red (රෝස සිට රතු දක්වා අම්ල කොලනි) |
| ප්‍රබල E. coli signal | අඳුරු නිල්-කළු කොලනි, බොහෝවිට ලෝහමය හරිත දීප්තිය | රෝස සිට රතු කොලනි, බොහෝවිට bile precipitate |
| Klebsiella සහ Enterobacter | රෝස සිට දම්, mucoid, සාමාන්‍යයෙන් දීප්තිය නැත | රෝස සිට රතු, බොහෝවිට mucoid |
| Salmonella, Shigella, Proteus | සාමාන්‍යයෙන් වර්ණ රහිත හෝ පාරදෘශ්‍ය | සාමාන්‍යයෙන් වර්ණ රහිත හෝ පැහැදිලි |
| Gram positives | සාමාන්‍යයෙන් මර්දනය වේ | crystal violet formulas මත සාමාන්‍යයෙන් මර්දනය වේ |
| ඉගැන්වීමේ ප්‍රධාන ප්‍රයෝජනය | ප්‍රබල සහ දුර්වල fermentation දෘශ්‍යමාන කිරීම | fermenter සහ nonfermenter අතර සරලම වෙන් කිරීම |
වගුව තීරණ ක්‍රියාවලියක් ලෙස කියවන්න. අභ්‍යාසයේදී fermentation ශක්තියේ පරාසයක් සහ එක් පැහැදිලි අන්ත ප්‍රතිඵලයක් ශිෂ්‍යයන්ට දැකීමට අවශ්‍ය නම් EMB එය පෙන්වයි. Biochemical confirmation කිරීමට පෙර වේගවත් ද්විමය වෙන් කිරීමක් අවශ්‍ය නම් MacConkey එය පෙන්වයි.
කුමන සාම්පලයට කුමන මාධ්‍යයද
Presumptive fecal coliform හෝ E. coli හඳුනාගැනීම අරමුණු කරන ජල අභ්‍යාස සඳහා EMB ආකර්ෂණීය වන්නේ එහි දීප්තිය දෘශ්‍යමය වශයෙන් පැහැදිලි බැවිනි. MacConkey ද enteric Gram negatives සමඟ භාවිත කළ හැකි අතර ජල පරීක්ෂණවල ඓතිහාසික භාවිතයක් ද ඇත. එහෙත් පරීක්ෂණය අනුව modified mTEC හෝ MI වැනි නිශ්චිත මාධ්‍ය නියම කළ හැකි regulatory water method එකකට මේ තැටි දෙකෙන් කිසිවක් ආදේශකයක් නොවේ. ඔබේ රසායනාගාරය අනුගමනය කළ යුතු method එක පරීක්ෂා කරන්න.
Fermenters සහ nonfermenters වෙන් කරන stool ආකාරයේ කාර්යයන් සඳහා මේ දෙකෙන් සාමාන්‍යයෙන් වැඩි ප්‍රයෝජනවත් වන්නේ MacConkey ය. Salmonella හෝ Shigella සඳහා ප්‍රායෝගික stool work සාමාන්‍යයෙන් MacConkey පමණක් මත රඳා නොසිට XLD හෝ Hektoen enteric වැනි තවත් තෝරාගැනීමේ enteric මාධ්‍ය එක් කරයි.
Clinical workflow එකක් අනුකරණය කරන urine ආකාරයේ teaching සඳහා MacConkey, blood agar සමඟ යුගල කරන්න. MacConkey මුල් Gram negative වෙන් කිරීම ලබා දෙන අතර blood agar මඟින් MacConkey මර්දනය කරන ජීවීන් ද recover කරයි. මෙම pairing එක urine culture setup පිළිබඳ clinical descriptions වල සාමාන්‍යය.
පිරිසිදු සංකල්ප ඉගැන්වීම සඳහා දෙකම භාවිත කරන්න. EMB මඟින් fermentation ශක්තිය වැදගත් බවත් එක් molecule එකකට roles දෙකක් ඉටු කළ හැකි බවත් උගන්වයි. MacConkey modular design එක උගන්වයි: selector, substrate සහ reporter වෙන වෙනම තබා ඇත. දන්නා E. coli, දන්නා Klebsiella aerogenes සහ දන්නා Salmonella දෙකම මාධ්‍යවල පසෙකින් streak කරන ශිෂ්‍යයන් සාමාන්‍යයෙන් නැවත මේ තර්ක දෙක ගැළපීමේ වැරැද්ද නොකරයි.
සෑම වාරයකම නැවත පෙනෙන කියවීමේ වැරදි
වඩාත් පොදු අසාර්ථකත්වය වන්නේ වර්ණය පමණක් මත හඳුනාගැනීමයි. MacConkey මත රෝස පැහැය E. coli, Klebsiella, Enterobacter හෝ වෙනත් fermenter එකක් විය හැක. වර්ණ රහිත වීම Salmonella, Shigella, Proteus, Pseudomonas හෝ වෙනත් nonfermenter එකක් විය හැක. වර්ණය යනු Gram stain, oxidase, biochemical panels හෝ instrument identification වැනි confirmatory work වෙත මඟ පෙන්වන screening phenotype එකකි; එය species name එකක් නොවේ.
දෙවන අසාර්ථකත්වය වන්නේ දීප්තිය නොපෙනීම අධික ලෙස අර්ථකථනය කිරීමයි. සමහර සත්‍ය E. coli කොලනි, විශේෂයෙන් isolated කොලනි, EMB මත ලෝහමය දීප්තිය ඉතා සුළු ලෙස හෝ කිසිසේත් නොපෙන්විය හැක. දීප්තිය නොමැති වීම E. coli බැහැර නොකරන අතර, දීප්තිය තිබීමෙන් එය තහවුරු ද නොවේ. දීප්තිය presumptive clue එකක් ලෙස සලකන්න.
තුන්වන අසාර්ථකත්වය වන්නේ වෙනස් වයස්වල තැටි සැසඳීමයි. Delayed lactose fermenters දිගු incubation එකකින් පසු MacConkey මත රෝස විය හැකි අතර, එමඟින් fermenter සහ nonfermenter අතර පැහැදිලි වෙන් කිරීම අඳුරු වේ. රසායනාගාරය නියම කළ පැයේදී කියවා, ප්‍රතිඵලය සමඟ incubation time එක ද සටහන් කරන්න.
සිව්වන අසාර්ථකත්වය වන්නේ mixed growth එකක් එකම ජීවියෙකු ලෙස කියවීමයි. වර්ණ රහිත කොලනියක් අසල ඇති රෝස කොලනියක් මඟින් අතරමැදි ස්වභාවයක් නොව phenotypes දෙකක් සටහන් වේ. හොඳින් isolated colonies තෝරා, සෑම morphotype එකක්ම වෙන වෙනම පරීක්ෂා කරන්න. Mucoid texture එකත් සමාන උගුලක් නිර්මාණය කරයි: Klebsiella සහ Enterobacter දෙකම mucoid පෙනුමක් ගත හැකි බැවින් capsule එක පමණක් species name එක තීරණය නොකරයි. කලින් Enterobacter aerogenes ලෙස උගන්වනු ලැබූ ජීවියා දැන් Klebsiella aerogenes ලෙස වර්ගීකරණය කර ඇති බැවින් පැරණි charts සහ නව labels අතර පෙනෙන නොගැළපීම පැහැදිලි වේ.
Controls සහ අවසාන නියමයක්
සෑම session එකකම ඡායාරූපගත හෝ fresh controls භාවිත කරන්න: ප්‍රබල fermenter reaction සඳහා E. coli, සම්භාව්‍ය දීප්තිය නොමැති mucoid fermentation සඳහා Klebsiella aerogenes, වර්ණ රහිත nonfermenter reaction සඳහා Salmonella strain එකක්, සහ ඔබ භාවිත කරන නිශ්චිත product එකේ Gram positive suppression තහවුරු කිරීමට Staphylococcus aureus. Selectivity එක bile, crystal violet සහ dye content අනුව වෙනස් වන බැවින් strain numbers සහ acceptance criteria manufacturer insert එකට ගළපන්න.
Bench එකේදී එක් වාක්‍යයක් මතක තබාගන්න. EMB තෝරාගැනීමත් ප්‍රතිඵල පෙන්වීමත් කරන වර්ණක භාවිත කරන බැවින්, වඩා සූක්ෂ්ම කියවීමක් අවශ්‍ය වුවද පැහැදිලි E. coli signal එකක් ලබා දෙයි. MacConkey තෝරාගැනීම සහ ප්‍රතිඵල පෙන්වීම වෙන් කරන බැවින්, fermentation පිළිබඳ අඩු විස්තරයක් ලැබුණද සරල රෝස සහ පැහැදිලි වෙන් කිරීමක් ලබා දෙයි. ප්‍රශ්නයේ සංකල්පයට ගැළපෙන මාධ්‍යය තෝරන්න, නිසි පරීක්ෂණ මඟින් වර්ණය තහවුරු කරන්න; එවිට තැටි දෙක තරඟකරුවන් නොව එකිනෙකට සහාය වන මෙවලම් බවට පත්වේ.