آرٽيڪل
EMB agar بمقابله MacConkey agar: ميڊيا جي چونڊ ۽ تعبير
هڪ شاگرد ساڳئي پاڻي جي نموني کي ٻن پليٽن تي streak ڪري ٿو. هڪ تي، سائي ڌاتي چمڪ وارا ڪارا ڪالونيون ظاهر ٿين ٿيون. ٻي تي، ڌنڌلي halo سان چمڪدار گلابي ڪالونيون ظاهر ٿين ٿيون. ٻئي پليٽون ساڳئي ٽيوب مان inoculate ڪيون ويون، گڏوگڏ incubate ڪيون ويون، ۽ ساڳئي ڪلاڪ تي پڙهيون ويون. شاگرد پڇي ٿو ته ڪهڙي پليٽ صحيح آهي.
ٻئي پليٽون صحيح آهن. اهي مختلف سوالن جا جواب ڏين ٿيون. مونجهارو تڏهن پيدا ٿئي ٿو جڏهن ٻنهي ميڊيا کي آنتن جي بيڪٽيريا لاءِ هڪ ٻئي جي بدلي استعمال ٿيندڙ screens سمجهيو وڃي ٿو. انهن جو هڪ گڏيل مقصد آهي، يعني Gram negative enteric جاندارن کي چونڊڻ ۽ lactose fermenters کي nonfermenters کان الڳ ڪرڻ، پر اهي اهو مقصد مختلف ڪيمسٽري ۽ مختلف بصري منطق سان پورو ڪن ٿيون. جڏهن توهان انهن ٻن بنيادي تصورن کي سمجهي وٺو ٿا، تڏهن پليٽ جي چونڊ ۽ ڪالوني پڙهڻ معمولي ڪم بڻجي وڃي ٿو.
مختصر جواب
EMB agar ٻه dyes، eosin Y ۽ methylene blue، استعمال ڪري ٿو جيڪي ٻٽو ڪم ڪن ٿا: اهي Gram positive واڌ کي دٻائن ٿا ۽ تيزاب جي مضبوط پيدا ڪندڙن جي چوڌاري precipitate ٿي ڪاريون ڪالونيون ٺاهين ٿا، جن ۾ روايتي طور Escherichia coli لاءِ ڌاتي سائي چمڪ ڏٺي وڃي ٿي. MacConkey agar ڪم الڳ ڪري ٿو: bile salts ۽ crystal violet Gram positives کي دٻائن ٿا، lactose fermentation لاءِ خوراڪ ڏئي ٿو، ۽ neutral red تيزاب کي گلابي يا ڳاڙهين ڪالونين طور ظاهر ڪري ٿو. جيڪڏهن ڪم E. coli جو نمايان presumptive مظاهرو ڪرڻ آهي، ته EMB مناسب آهي. جيڪڏهن ڪم lactose fermenters کي nonfermenters کان صاف گلابي بمقابله بي رنگ طريقي سان الڳ ڪرڻ آهي، خاص طور stool يا urine workflows ۾، ته MacConkey عام طور پڙهڻ ۾ وڌيڪ سادو آهي. رڳو رنگ جي بنياد تي ڪا به پليٽ ڪنهن جاندار جي سڃاڻپ نٿي ڪري.
EMB: dyes جيڪي ساڳئي وقت چونڊين ۽ نتيجو ظاهر ڪن ٿا
EMB جو تصور چونڊ ۽ indication ٻنهي کي ساڳين molecules ۾ گڏ ڪري ٿو. ASM eosin methylene blue agar protocol EMB کي چونڊيندڙ ۽ تفريقي ٻنهي طور بيان ڪري ٿو، جتي dye جو جوڙو ڪيترن Gram positive جاندارن کي روڪي ٿو، جڏهن ته lactose fermentation dye uptake ۽ precipitation کي وڌائي ٿو. هڪ معياري Levine formulation ۾ peptone، lactose، phosphate، eosin Y، methylene blue، ۽ agar شامل آهن، جيئن FDA BAM method for Levine EMB agar ۾ درج ٿيل آهي. ڌيان ڏيو ته ڪجهه پراڻين EMB recipes ۾ lactose سان گڏ sucrose به شامل ڪيو ويندو هو، جڏهن ته Levine EMB ۾ lactose هوندو آهي پر sucrose نه، تنهنڪري اهو رڪارڊ ڪريو ته توهان جي laboratory ۾ ڪهڙي formulation stock ڪئي وڃي ٿي.
EMB پڙهڻ جو مطلب dye جي رويي کي پڙهڻ آهي. تيز lactose fermentation ايترو تيزاب پيدا ڪري ٿو جو وڏي مقدار ۾ dye precipitation ٿئي ٿي، جنهن سان E. coli جا مرڪز ڪارا نيري ڪارا ٿين ٿا ۽، روايتي حالت ۾، reflected light ۾ ڌاتي سائي چمڪ نظر اچي ٿي. ڪمزور fermenters جهڙوڪ Enterobacter ۽ Klebsiella عام طور گلابي کان واڱڻائي، mucoid ڪالونين طور وڌن ٿا ۽ انهن ۾ اها چمڪ نه هوندي آهي. Nonfermenters جهڙوڪ Salmonella، Shigella، ۽ Proteus عام طور بي رنگ يا شفاف ڪالونين طور وڌن ٿا، ڇاڪاڻ ته اهي اهو تيزابي burst پيدا نٿا ڪن جيڪو dyes کي precipitate ڪري. Gram positives عام طور دٻجي وڃن ٿا، جيتوڻيڪ suppression درجي جو معاملو آهي ۽ strain ۽ product موجب بدلجي سگهي ٿو. مڪمل dye preparation chemistry، جنهن ۾ اهو به شامل آهي ته methylene blue بنيادي طور cationic stain ڇو آهي، dye formulations بابت الڳ بحث جو موضوع آهي، ۽ عام microscopy context staining methods atlas ۾ موجود آهي. هي مضمون پليٽ جي چونڊ ۽ پڙهڻ تائين محدود آهي.
مٿي ڏنل شڪل illustrative آهي. اها اهو بصري منطق ڏيکاري ٿي جنهن جي توقع ڪرڻ گهرجي: EMB تي ڪارا چمڪدار ڪالونيون، گلابي mucoid قسم، ۽ هلڪا قسم؛ جڏهن ته MacConkey تي گلابي بمقابله هلڪا قسم. هن کي pattern سکڻ لاءِ استعمال ڪريو، پوءِ هر نتيجي کي photographed controls ۽ توهان جي bench تي موجود عين medium جي product insert سان تصديق ڪريو.
MacConkey: الڳ ڪيل ڪم، وڌيڪ سادو بصري قاعدو
MacConkey جو تصور هر ڪم کي الڳ ingredient ڏئي ٿو. ASM MacConkey agar protocol به ساڳيو چونڊيندڙ ۽ تفريقي فريم پيش ڪري ٿو، ۽ FDA BAM method for MacConkey agar ڪم ڪندڙ حصا درج ڪري ٿو: peptones، lactose، bile salts، salt، neutral red، crystal violet، ۽ agar. Bile salts ۽ crystal violet گڏجي Gram positives جي خلاف چونڊ ڪن ٿا. Lactose fermentation لاءِ substrate مهيا ڪري ٿو. Neutral red pH reporter طور ڪم ڪري ٿو ۽ جتي تيزاب ٺهي ٿو اتي گلابي کان ڳاڙهي رنگ ۾ بدلجي ٿو، ڪڏهن ڪڏهن مضبوط fermenters جي چوڌاري precipitated bile سان گڏ.
پڙهڻ جو قاعدو ڄاڻي واڻي سادو رکيو ويو آهي: گلابي جو مطلب lactose fermenter، ۽ بي رنگ يا هلڪو جو مطلب nonfermenter. E. coli گلابي کان ڳاڙهي نظر اچي ٿي، اڪثر bile precipitate halo سان. Klebsiella ۽ Enterobacter گلابي نظر اچن ٿا ۽ سندن capsules سبب گهڻو ڪري mucoid هوندا آهن. Salmonella، Shigella، Proteus، ۽ ڪيترائي ٻيا Gram negative rods بي رنگ نظر اچن ٿا. Teaching labs ۾ هڪ اضافي فائدو به اهم آهي: bile salts عام طور Proteus swarming کي گهٽائين ٿا، تنهنڪري MacConkey تي isolated colonies حاصل ڪرڻ nonselective media جي ڀيٽ ۾ آسان هوندو آهي، جيتوڻيڪ suppression مڪمل نه آهي ۽ جتي swarming control بنيادي مقصد هجي اتي salt free alternatives به موجود آهن.
Dyes هن نموني ڇو ورتاءُ ڪن ٿا، ان جو molecular سبب charge ۽ structure سان لاڳاپيل آهي. Methylene blue هڪ cationic phenothiazine dye آهي، جنهن جي structure and properties ان جي acidic bacterial surfaces سان affinity کي سمجهائين ٿيون، ۽ ساڳي affinity EMB تي acid zones ۾ ان جي precipitation دوران به ڪم ڪري ٿي.
هڪ نظر ۾ مقابلو
| خصوصيت | EMB agar | MacConkey agar |
|---|---|---|
| چونڊيندڙ نظام | Eosin Y plus methylene blue | Bile salts plus crystal violet |
| تفريقي substrate | Lactose (Levine has no sucrose) | Lactose |
| Indicator | Dye precipitation itself (dark colonies, green sheen) | Neutral red (pink to red acid colonies) |
| مضبوط E. coli signal | Dark blue black colony, often metallic green sheen | Pink to red colony, often bile precipitate |
| Klebsiella and Enterobacter | Pink to purple, mucoid, usually no sheen | Pink to red, often mucoid |
| Salmonella, Shigella, Proteus | Usually colorless or translucent | Usually colorless or pale |
| Gram positives | Usually suppressed | Usually suppressed on crystal violet formulas |
| بهترين teaching payoff | Strong versus weak fermentation made visible | Simplest fermenter versus nonfermenter sort |
ٽيبل کي فيصلي جي طريقيڪار طور پڙهو. جڏهن مشق ۾ شاگردن کي fermentation جي طاقت جو gradient هڪ نمايان آخري نقطي سان ڏسڻو هجي، EMB اهو ڏيکاري ٿو. جڏهن مشق ۾ biochemical confirmation کان اڳ تيز binary sort گهرجي، MacConkey اهو ڏيکاري ٿو.
ڪهڙي نموني لاءِ ڪهڙو medium
پاڻي جي اهڙين مشقن لاءِ جن جو مقصد presumptive fecal coliform يا E. coli recognition هجي، EMB پرڪشش آهي ڇاڪاڻ ته sheen بصري طور منفرد آهي. MacConkey به enteric Gram negatives کي سنڀالي ٿو ۽ تاريخي طور پاڻي جي ڪم ۾ استعمال ٿيو آهي، پر ڪا به پليٽ regulatory water method جو متبادل نه آهي، جيڪو test موجب modified mTEC يا MI جهڙا media مقرر ڪري سگهي ٿو. اهو method ڏسو جنهن جي پيروي ڪرڻ توهان جي laboratory لاءِ لازمي آهي.
Stool style separations ۾ fermenters کي nonfermenters کان الڳ ڪرڻ لاءِ، MacConkey عام طور انهن ٻنهي مان وڌيڪ ڪارائتو آهي. Salmonella يا Shigella لاءِ عملي stool work ۾ عام طور وڌيڪ چونڊيندڙ enteric media جهڙوڪ XLD يا Hektoen enteric شامل ڪيا ويندا آهن، بجاءِ صرف MacConkey تي ڀروسو ڪرڻ جي.
Urine style teaching لاءِ جيڪا clinical workflow جي نقل ڪري ٿي، MacConkey کي blood agar سان گڏ استعمال ڪريو. MacConkey شروعاتي Gram negative sort مهيا ڪري ٿو، جڏهن ته blood agar اهي جاندار recover ڪري ٿو جن کي MacConkey دٻائي ٿو. هي pairing urine culture setup جي clinical descriptions ۾ معياري آهي.
صرف concept teaching لاءِ، ٻئي هلائو. EMB سيکاري ٿو ته fermentation جي طاقت اهم آهي ۽ هڪ molecule ٻه ڪردار ادا ڪري سگهي ٿو. MacConkey modular design سيکاري ٿو: selector، substrate، ۽ reporter کي الڳ رکڻ. جيڪي شاگرد هڪ ڄاتل E. coli، هڪ ڄاتل Klebsiella aerogenes، ۽ هڪ ڄاتل Salmonella کي ٻنهي media تي گڏوگڏ streak ڪن ٿا، اهي پوءِ انهن ٻنهي منطقن کي گهٽ ئي گڏي ويهندا آهن.
پڙهڻ جون غلطيون جيڪي هر term ۾ ورجائن ٿيون
سڀ کان عام ناڪامي رڳو رنگ جي بنياد تي سڃاڻپ ڪرڻ آهي. MacConkey تي گلابي E. coli، Klebsiella، Enterobacter، يا ڪو ٻيو fermenter ٿي سگهي ٿو. بي رنگ Salmonella، Shigella، Proteus، Pseudomonas، يا ڪو ٻيو nonfermenter ٿي سگهي ٿو. رنگ هڪ screening phenotype آهي جيڪو confirmatory work جهڙوڪ Gram stain، oxidase، biochemical panels، يا instrument identification ڏانهن رهنمائي ڪري ٿو؛ اهو species جو نالو نه آهي.
ٻي ناڪامي غائب sheen کي حد کان وڌيڪ اهميت ڏيڻ آهي. ڪجهه حقيقي E. coli ڪالونيون، خاص طور isolated ڪالونيون، EMB تي ٿوري يا بلڪل به metallic sheen پيدا نٿيون ڪن. Sheen جي غيرموجودگي E. coli کي خارج نٿي ڪري، ۽ sheen جي موجودگي به ان کي ثابت نٿي ڪري. Sheen کي presumptive clue طور استعمال ڪريو.
ٽين ناڪامي مختلف عمر جي پليٽن جو مقابلو ڪرڻ آهي. Delayed lactose fermenters ڊگهي incubation کان پوءِ MacConkey تي گلابي ٿي سگهن ٿا، جنهن سان صاف fermenter بمقابله nonfermenter فرق ڌنڌلو ٿي وڃي ٿو. Laboratory طرفان مقرر ڪيل hour تي پڙهو ۽ نتيجي سان incubation time به رڪارڊ ڪريو.
چوٿين ناڪامي mixed growth کي هڪ جاندار طور پڙهڻ آهي. هڪ گلابي ڪالوني جي ڀرسان هڪ بي رنگ ڪالوني ٻه phenotypes ڏيکاري ٿي، نه ڪي وچولي حالت. چڱيءَ طرح isolated ڪالونيون چونڊيو ۽ هر morphotype تي الڳ ڪم ڪريو. Mucoid texture به ساڳيو trap پيدا ڪري ٿي: Klebsiella ۽ Enterobacter ٻئي mucoid نظر اچي سگهن ٿا، تنهنڪري capsule اڪيلو ڪڏهن به نالو طئي نٿو ڪري. جيڪو جاندار اڳ Enterobacter aerogenes طور پڙهايو ويندو هو، هاڻي Klebsiella aerogenes طور classified آهي، جنهن سان سمجهه ۾ اچي ٿو ته پراڻا charts ۽ نوان labels ڇو مختلف لڳن ٿا.
Controls ۽ آخري قاعدو
هر session ۾ photographed يا fresh controls هلائو: مضبوط fermenter reaction لاءِ E. coli، classic sheen کان سواءِ mucoid fermentation لاءِ Klebsiella aerogenes، بي رنگ nonfermenter reaction لاءِ Salmonella strain، ۽ توهان جي عين product تي Gram positive suppression جي تصديق لاءِ Staphylococcus aureus. Strain numbers ۽ acceptance criteria کي manufacturer insert سان ملهايو، ڇاڪاڻ ته selectivity bile، crystal violet، ۽ dye content سان بدلجي ٿي.
Bench تي هڪ جملو ياد رکو. EMB اهڙا dyes استعمال ڪري ٿو جيڪي چونڊ به ڪن ٿا ۽ نتيجو به ظاهر ڪن ٿا، جنهن جي نتيجي ۾ وڌيڪ subtle read جي قيمت تي نمايان E. coli signal ملي ٿو. MacConkey چونڊ ڪرڻ ۽ نتيجو ظاهر ڪرڻ جا ڪم الڳ ڪري ٿو، جنهن جي نتيجي ۾ fermentation جي گهٽ تفصيل جي قيمت تي سادو گلابي بمقابله هلڪو sort ملي ٿو. اهو medium چونڊيو جنهن جو تصور سوال سان ملي، رنگ جي مناسب tests سان تصديق ڪريو، ۽ پوءِ ٻئي پليٽون مقابلو ڪرڻ بدران گڏجي ڪم ڪرڻ لڳن ٿيون.