نوی مېتیلین بلو او د رېټیکولوسایټ رنګول: جلا رنګ او د ژوندیو حجرو طریقه

یو زده‌کوونکی د رېټیکولوسایټ شمېرنې ته تیاری نیسي، مېتیلین بلو فرمایش کوي، له وینې سره یې ګډوي او تقریباً هېڅ نه ویني. یو ټولګیوال یې داسې بوتل کاروي چې د نوي مېتیلین بلو نوم پرې لیکل شوی او د سرو حجرو په یوه برخه کې روښانه نیلي تارونه ویني. لومړی زده‌کوونکی ګومان کوي چې دویم بوتل تازه دی یا لوړ غلظت لري. له دې دواړو څخه یو هم نه دی. په هغه کې یو بل مالیکول شته.

په دې برخه کې د ډېرو ګډوډیو تر شا همدا مفهومي تېروتنه ده. نوم داسې انګېرنه پیدا کوي چې نوی مېتیلین بلو د مېتیلین بلو یوه ښه شوې جوپه ده. خو کیمیا بل څه وایي. نوی مېتیلین بلو N د فینوتیازین یو جلا رنګ دی چې خپل د رنګ شاخص شمېره، د کیمیاوي ځایناستو خپله بڼه او په هیماتولوژۍ کې خپل معیاري رول لري. کله چې دا توپیر روښانه شي، د طریقې پاتې برخې هم اسانه کېږي: ولې حجرې د رنګولو پر مهال باید ژوندۍ وي، کومه حجره رېټیکولوسایټ ګڼل کېږي، د هاینز اجسام پکې څه ځای لري او بریلیانټ کریسیل بلو کله مطرح کېږي.

لنډ ځواب

نوی مېتیلین بلو N، چې د هیماتولوژۍ یو ریجنټ دی، عموماً د نوي مېتیلین بلو د PubChem په ثبت کې د Basic Blue 24 په نوم پېژندل کېږي، C.I. 52030، CAS 1934-16-3، فورمول C18H22ClN3S. عادي مېتیلین بلو د PubChem په خپل ثبت کې مېتیل‌تیونینیم کلورایډ، Basic Blue 9 دی، C.I. 52015، CAS 61-73-4، فورمول C16H18ClN3S. د جوړښت له مخې، نوی مېتیلین بلو پر حلقه دوه مېتیل ګروپونه او د اېتیل‌امینو اړخیز ځنځیرونه لري، په داسې حال کې چې مېتیلین بلو ډای‌مېتیل‌امینو ګروپونه لري. دا توپیر د رنګولو چلند بدلوي. د هیماتولوژۍ متنونه عادي مېتیلین بلو د رېټیکولوسایټ لپاره نسبتاً کمزوری رنګ او نوی مېتیلین بلو ژور او یوشان رنګوونکی بولي؛ دا پرتله د نوي مېتیلین بلو په اړه د ScienceDirect په موضوع کې لنډه شوې ده.

هو، نوی مېتیلین بلو سوپراوایټل رنګ دی. سوپراوایټل رنګول له بدن څخه تر ایستلو وروسته او تر تثبیت مخکې د ژوندیو حجرو رنګول دي، لکه څنګه چې د سوپراوایټل رنګولو د اصولو په اړه د NCBI بیاکتنه یې تعریفوي. نوی مېتیلین بلو او بریلیانټ کریسیل بلو دواړه په دې کټګورۍ کې راځي، او د رېټیکولوسایټ د CLSI معیار نوی مېتیلین بلو په څرګنده د سوپراوایټل رنګ په توګه رانغاړي. زده‌کوونکي کله ناکله دا د تثبیت شویو فلمونو له رومانوفسکي رنګولو سره یوځای ګڼي. دا ذهني تصور دلته سم نه دی. که لومړی تثبیت وکړئ، طریقه نور کار نه کوي.

د هغو لوستونکو لپاره چې ورته رنګ نومونه تعقیبوي، مېتیل بلو د مېتیلین بلو په مقابل کې د انیوني ټرای‌اریل‌مېتان رنګ او د کاتیوني فینوتیازین کورنۍ ترمنځ یوه بله او لویه ګډوډي تشریح کوي. د لابراتواري رنګولو عمومي کتنه د تثبیت شوي فلم د طریقو ترڅنګ سوپراوایټل کار هم ځایوي، او د وینې د حجرو د مورفولوژۍ لارښود ښيي چې د رېټیکولوسایټ ارزونه د حجرو په پراخه تفریقي ارزونه کې کوم ځای لري.

د کتلاګ په اړه یوه یادونه: د نوي مېتیلین بلو د زینک کلورایډ د دوه‌ګونې مالګې جلا بڼه هم د CAS 6586-05-6 لاندې شته. له همدې امله د طریقو په برخه کې باید یوازې عام نوم نه، بلکې د مالګې بڼه او عرضه کوونکی هم یاد شي.

سوپراوایټل رنګول په حقیقت کې څه کوي

رېټیکولوسایټ د وینې ځوانه سره حجره ده چې خپله هسته یې له لاسه ورکړې، خو پاتې ریبوزومي RNA لا پکې شته. په نارنګول شوي لوند چمتو شوي نمونه کې دا RNA نه لیدل کېږي. سوپراوایټل رنګ ژوندۍ حجرې ته ننوځي او دا RNA په نیلي دانو او تارونو کې رسوب یا راټولوي؛ همدا جال‌ته ورته تارین مواد دي چې د تېلو په ډوبولو سره تر مایکروسکوپ لاندې لیدل کېږي. نو دا جال د رنګولو محصول دی، نه یو له مخکې جوړ شوی چوکاټ چې رنګ ته منتظر وي. له همدې امله د پروتوکول متغیرونه، لکه د رنګ غلظت، بفر، د وینې او رنګ نسبت، تودوخه او وخت، د رنګ د نوم هومره اهمیت لري.

عملي پایله یې د کړنو یو ټاکلی ترتیب دی: لومړی د وینې د ټینګېدو ضد مادې لرونکې وینه له رنګ سره ګډه کړئ، انکیوبېټ یې کړئ، بیا فلمونه جوړ کړئ او بې له تثبیت او متقابل رنګ څخه یې معاینه کړئ. تر رنګولو مخکې تثبیت، یا داسې متقابل رنګ چې کم‌رنګ تارونه پټوي، هغه معلومات له منځه وړي چې شمېرنه پرې تکیه لري.

له نوي مېتیلین بلو سره د رېټیکولوسایټ یو عملي پروتوکول

یو واحد نړیوال فورمول نشته، نو هغه فورمول راپور کړئ چې کارول شوی وي. درې مستندې بڼې د دې تنوع کچه ښيي.

د بریخر کلاسیکه طریقه نږدې 0.5 سلنه نوی مېتیلین بلو له پوتاشیم اوکسالېټ سره کاروي؛ دا د ښه ګډې شوې EDTA وینې له مساوي حجم سره ګډېږي او د خونې په تودوخه کې شاوخوا 10 تر 15 دقیقو انکیوبېټ کېږي. له نرم بیا ګډولو وروسته، نري پچر ته ورته فلمونه جوړېږي، په هوا وچېږي او بې له تثبیت څخه د تېلو د 100x آبجکټیف عدسیې لاندې معاینه کېږي. د رېټیکولوسایټ شمېرنې لپاره د NCBI کړنلاره دا کاري بهیر او ورسره کارېدونکی د شمېرنې چوکاټ تشریح کوي.

د ډېسي او لوېس بڼه په سیټرېټ مالګین محلول کې 1.0 سلنه نوی مېتیلین بلو کاروي، له 2 تر 4 حجمو وینې سره یې ګډوي او د فلم تر جوړولو مخکې یې په 37 C کې د 15 تر 20 دقیقو پورې ساتي. د CLSI H44 کړنلارې د همغږۍ په یوه وروستي تطبیق کې د فاسفېټ په بفر لرونکي مالګین محلول کې، په pH 7.4 کې، د 0.1 سلنې لږ غلیظ محلول کارول شوی و؛ انکیوبېشن په 20 C کې د 10 دقیقو لپاره او بې له تثبیت څخه و، لکه څنګه چې د NMB د همغږۍ د 2026 کال په څېړنه کې راپور شوی دی.

د شمېرنې اصول په ټولو بڼو کې یو شان دي. یوه حجره هغه وخت رېټیکولوسایټ وشمېرئ چې لږ تر لږه دوه جلا نیلي رنګ شوې دانې یا د تار ټوټې ولري؛ په دې سره د رنګ یوازېنی رسوب له شمېرنې وځي. په عادي کار کې لږ تر لږه 1,000 سرې حجرې وشمېرئ او رېټیکولوسایټونه د سلنې په توګه راپور کړئ. په ټیټو سلنو کې احصایه د ډېرو حجرو شمېرنې ته اړتیا لري. د CLSI H44 د میتودولوژۍ یوه بیاکتنه یادونه کوي چې د رېټیکولوسایټونو شاوخوا 1 سلنه کچه کې نږدې 4,400 حجرو ته اړتیا ده، څو د شمېرنې بدلون 5 سلنې ته راکم شي؛ دا خبره په De Gruyter کې د CLSI H44 په بیاکتنه کې راغلې ده. د میلر د سترګیزې عدسیې ډیسک لویې شمېرنې عملي کوي. رنګ فلټر کړئ یا یې تازه چمتو کړئ، ځکه رسوب د حجرو دننه دانو ته ورته ښکاري.

په همدې چمتو شوې نمونه کې د هاینز اجسام

همدا سوپراوایټل فلم د هاینز اجسام هم ښودلای شي؛ دا د پاتې RNA پر ځای د اکسید شوي او د طبیعي جوړښت له لاسه ورکړي هیموګلوبین ټولګې دي. د نوي مېتیلین بلو په چمتو شویو نمونو کې د ګردو اجسامو په توګه ښکاري، ډېری وخت یو وي او د غشا ترڅنګ پروت وي، او له جال‌ته ورته تارینو موادو څخه په سپک نیلي رنګ رنګېږي. د تثبیت او متقابل رنګولو پر مهال ښه نه پاتې کېږي، نو ناتثبیت شوی فلم معاینه کړئ. په یوه وروستي پروتوکول کې 20 مایکرولیټره EDTA وینه له 20 مایکرولیټره 1 سلنه نوي مېتیلین بلو سره کارول شوې او 15 دقیقې انکیوبېشن ورکړل شوی و؛ د 250 اېرېتروسایټونو په منځ کې د هاینز اجسامو لرونکې حجرې شمېرل شوې وې، لکه څنګه چې د دې کړنلارې راپور ورکوونکې د PMC څېړنه بیانوي.

دوه توپیرونه د ناسم لوستلو مخه نیسي. لومړی، مېتیل وایولېټ او کرسټل وایولېټ د نوي مېتیلین بلو په پرتله د هاینز اجسام په ډېر شدید رنګ رنګوي، لکه څنګه چې په ScienceDirect کې د هاینز اجسامو موضوع یادونه کوي. نوی مېتیلین بلو هغه وخت اسانه انتخاب دی چې رېټیکولوسایټونه او د هاینز اجسام یوځای ارزول کېږي؛ خو یوازې د هاینز اجسامو لپاره تر ټولو پیاوړی ځانګړی رنګ نه دی. دویم، د الفا تالاسیمیا د حامل حالت کې د HbH شامل اجسام تر سوپراوایټل رنګولو وروسته د حجرې په ټوله سطحه ډېرې وړې نقطې جوړوي، په داسې حال کې چې کلاسیک هاینز اجسام لږ، لوی او ډېری وخت له غشا سره تړلي وي. د رنګ رسوب درېیم ورته‌والی دی: دا د حجرو له فوکسي سطحې بهر پروت وي او له یوې لید ساحې څخه بلې ته توپیر کوي.

بریلیانټ کریسیل بلو د نوي مېتیلین بلو په مقابل کې

دواړه د رېټیکولوسایټونو سوپراوایټل رنګونه دي، خو معیاري کول یې له یوه ملاتړ کوي. د رېټیکولوسایټ CLSI H44-A2 طریقه، چې په هیماتولوژۍ کې د معیاري کولو له نړیوالې شورا سره په ګډه جوړه شوې او د CLSI H44 معیار په پاڼه کې ثبت ده، د EDTA وینې په نوي مېتیلین بلو رنګول د لاسي پرتلیزې طریقې په توګه ټاکي. د هیماتولوژۍ کلاسیکه ښوونه هم د ظاهري بڼې په اړه همغږې ده: نوی مېتیلین بلو تارونه ژور او یوشان رنګوي، خو بریلیانټ کریسیل بلو د بېلابېلو جوپو او نمونو ترمنځ ډېر توپیر ښيي.

دا دریځ یو قید ته اړتیا لري. د انالایزر د ارزونې د ICSH لارښود د نوي مېتیلین بلو لاسي مایکروسکوپي معاینه د مرجع پرتله کولو د لارې په توګه مني، خو هغه د کتونکې پر قضاوت متکي او نسبتاً کم‌دقته بولي؛ چېرې چې شونې وي، د فلو سایتومېټري مرجع کړنلارې غوره ګڼي. د 2022 کال د 100 نمونو په یوه پرتله کې، له نوي مېتیلین بلو سره د پرتله کولو په نسبت، بریلیانټ کریسیل بلو د کارول شوي انالایزر پر وړاندې لږ سیستماتیک انحراف درلود؛ دا موندنه د رنګولو د طریقو د PMC په پرتله کې راپور شوې ده. د زده‌کوونکو لپاره د دفاع وړ لنډیز دا دی: نوی مېتیلین بلو د معیاري لاسي پرتلیز معیار په توګه وکاروئ، د بریلیانټ کریسیل بلو هره محلي طریقه د هغه یا د اتومات شمېرنې پر وړاندې تایید کړئ، او په هر حالت کې د لاسي مایکروسکوپۍ په پایلو کې د پراخ تیتوالي تمه ولرئ. د معیاري کولو پخوانیو لیکنو هم تصفیه شوی Azure B د کیمیاوي پلوه د پاک بدیل په توګه وړاندیز کړی و، ځکه د سوداګریزو رنګونو جوپو توپیر درلود؛ دا خبره د Azure B په اړه د مارشال په څېړنه کې راغلې ده او روښانوي چې ولې د ریجنټ درجه لا هم د طریقو په بحثونو کې مطرح کېږي.

له عامو تېروتنو څخه ډډه کول

څلور تېروتنې د ډېرو ناکامو چمتو شویو نمونو لامل کېږي. د نوي مېتیلین بلو N پر ځای د عادي مېتیلین بلو فرمایش کول د کیمیا له امله کمزوری رنګول رامنځته کوي، نه د تخنیک له امله. تر لوستلو مخکې تثبیت یا متقابل رنګول سوپراوایټل نښه له منځه وړي. د رنګ رسوب د دانو په توګه شمېرل پایله په مصنوعي ډول لوړه کوي؛ د دوو دانو اصل او فلټر شوی رنګ د دې مخه نیسي. د رېټیکولوسایټ په ټیټو سلنو کې د ډېرو لږو حجرو شمېرل داسې شمېره تولیدوي چې دقیقه ښکاري، خو د باور پراخ حدود لري. هره تېروتنه یوه ګډه نښه لري: مایکروسکوپ کاروونکی د هغې پایلې پړه پر مایکروسکوپ اچوي چې د ریجنټ پړاو ټاکلې وه.