مقاله
د مېتیلین بلو ساده رنګول او د ګرام رنګول: هره طریقه څه ثابتولای شي
یو زدهکوونکی له داسې کلتور څخه چې د E. coli نوم پرې لیکل شوی، پر سلایډ نری پوښ چمتو کوي، د یوې دقیقې لپاره یې په مېتیلین بلو پوښي، وینځي او د تېلو د ډوبېدنې له عدسیې څخه یې ګوري. آبي مېلهشکله حجرې د لید ساحه ډکوي. د لابراتوار راپور داسې لیکل شوی: «ګرام-منفي مېلهشکله باکتریاوې د E. coli په توګه وپېژندل شوې.» مشاهده سمه ده. خو دا سلایډ د دې پایلې لپاره کافي شواهد نه وړاندې کوي.
تېروتنه مفهومي ده، تخنیکي نه ده. زدهکوونکي ساده رنګول داسې ګڼلي لکه یوه تفریقي ازموینه چې وي. ساده رنګول او د ګرام رنګول بېلابېلو پوښتنو ته ځواب ورکوي، ځکه د رنګولو پر بېلابېلو مفاهیمو ولاړ دي. یوه پوښتي: کومه بڼه شته؟ بله پوښتي: حجروي دېوال د ازموینې پر مهال څنګه چلند کوي؟ که دواړه سره ګډ کړئ، نو سم رنګ شوی سلایډ به یو بېبنسټه راپور رامنځته کړي.
دا پرتله دواړه طریقې جلا ساتي، ښيي چې د هرې پایلې پر بنسټ څه ادعا کولای شئ، او هغو دوو پوښتنو ته ځواب ورکوي چې زدهکوونکي یې ډېرې کوي: ایا مېتیلین بلو د ګرام په رنګولو کې کارېدای شي، او د E. coli مېتیلین بلو رنګول په رښتیا څه ښيي؟
لنډ ځواب
د مېتیلین بلو ساده رنګول هره رنګ منونکې حجره په هماغه آبي رنګ رنګوي، نو مورفولوژي یا بڼه (مېلې، کرې، مارپیچونه) او ترتیب (یوهیوه، جوړې، ځنځیرونه) څرګندوي، خو د ګرام د کټګورۍ په اړه هېڅ نه ښيي. د ګرام رنګول آیوډین، د رنګ لرې کولو پړاو او متقابل رنګ ورزیاتوي؛ نو باکتریاوې په ګرام-مثبتو (بنفش) او ګرام-منفي (ګلابي یا سرو) وېشي، د دې له مخې چې حجروي پوښونه یې رنګ څنګه ساتي. له مېتیلین بلو وروسته آبي مېلې دا معنا لري چې «مېلهشکله حجرې شته». د ګرام له بشپړې لړۍ وروسته ګلابي مېلې دا معنا لري چې «ګرام-منفي مېلهشکله حجرې شته». دویمه خبره پیاوړې ده، ځکه په کړنلاره کې یوه اضافي ازموینه ترسره شوې ده.
د باکتریاوو د یو رنګ کاروونکو طریقو د هغې پراخې ډلې لپاره چې دا مقاله ورپورې اړه لري، د میکروسکوپي رنګولو اطلس وګورئ.
ساده رنګول: یو رنګ، یوه پوښتنه
مېتیلین بلو یو قاعدوي (کاتیوني) رنګ دی. رنګین آیون یې مثبت چارج لري او په حجره کې له منفي چارج لرونکو جوړښتونو سره نښلي، چې نیوکلیک اسیدونه او د سطحې اسیدي ګروپونه هم پکې شامل دي؛ نو حجرې د کمرنګې شالید پر وړاندې آبي ښکاري. OpenStax د رنګولو په خپل څپرکي کې د مثبت رنګولو دا اصل بیانوي. د رنګ کاتیون پخپله هماغه کوچنی هوار فینوتیازین آیون دی چې په د مېتیلین بلو د کیمیا مرجع کې تشریح شوی؛ مقابل کلوراید آیون د رنګولو دنده نه ترسره کوي.
یوه معیاري ښوونیزه کړنلاره په قصدي ډول ساده ده: پر سلایډ نری پوښ جوړ کړئ، په هوا یې وچ کړئ، په تودوخې یې ثابت کړئ، د شاوخوا یوې دقیقې لپاره یې د مېتیلین بلو په نږدې 1% اوبیز محلول پوښ کړئ، په اوبو یې په نرمۍ ووینځئ، په جاذب کاغذ یې وچ کړئ او د تېلو د ډوبېدنې په طریقه یې وګورئ. د LibreTexts یوه ښوونیزه کړنلاره همدا 1% او یوه دقیقه ټاکي، خو یادونه کوي چې ځینې لابراتوارونه وخت اوږدوي. نه د رنګ تثبیتوونکی شته، نه رنګ لرې کوونکی او نه دویم رنګ. همدا نشتوالی د طریقې اصل دی. یوازې د یوه رنګ په کارولو او د انتخابي لرې کولو له نشتوالي سره، هره حجره چې رنګ ورسره نښلي، په پای کې هماغه رنګ اخلي.
د E. coli لپاره تمه کېدونکې ساحه آبي مېلې (باسیلونه) دي، چې یوهیوه، په جوړو یا کوچنیو ډلو کې وي. آبي والی له رنګ څخه راځي. مېلهشکله بڼه له میکروب څخه راځي. خو دا دواړه یوځای میکروب نه پېژني، ځکه د ډېرو نوعو بڼه مېلهشکله ده او ډېرې مېلهشکله باکتریاوې په ساده رنګولو کې آبي کېږي. ATCC د مایکروبیولوژیک کلتور په خپل لارښود کې دا محدودیت په څرګند ډول بیانوي چې پایله یوازې مورفولوژي ښيي. سم راپور داسې دی: «آبي باسیلونه ولیدل شول.» له بڼې او ترتیب څخه هره زیاته ادعا نورو شواهدو ته اړتیا لري.
د ګرام رنګول: څلور معرفونه، د چلند یوه ازموینه
د ګرام رنګول تفریقي رنګول دي. ټولې حجرې له یوې لړۍ تېروي او څرګندوي چې کومې حجرې لومړی رنګ ساتي او کومې یې له لاسه ورکوي. د مایکروبیولوژۍ د امریکايي ټولنې د ګرام رنګولو کړنلارې معیاري څلور پړاویزه لړۍ ټاکي: کریسټال وایلیټ (لومړنی رنګ)، د ګرام آیوډین (د رنګ تثبیتوونکی)، الکول یا اسیتون-الکول (رنګ لرې کوونکی)، او بیا سفرانین (متقابل رنګ).
| پړاو | معرف | دنده | ګرام-مثبته پایله | ګرام-منفي پایله |
|---|---|---|---|---|
| 1 | کریسټال وایلیټ | لومړنی رنګ، ټولې حجرې بنفش رنګوي | بنفش | بنفش |
| 2 | د ګرام آیوډین | د رنګ تثبیتوونکی، له کریسټال وایلیټ سره کمپلکس جوړوي | بنفش | بنفش |
| 3 | رنګ لرې کوونکی | کمپلکس په انتخابي ډول لرې کوي | بنفش پاتې کېږي | بېرنګ کېږي |
| 4 | سفرانین | متقابل رنګ، بېرنګ شوې حجرې رنګوي | بنفش پاتې کېږي | ګلابي یا سور |
معیاري ښوونیز ماډل دا توپیر د حجروي پوښ د جوړښت له مخې تشریح کوي. ګرام-مثبتې حجرې پنډ پېپټېډوګلایکان دېوال لري چې د الکول د مینځلو پر مهال اوبه له لاسه ورکوي او د کریسټال وایلیټ او آیوډین کمپلکس ساتي. ګرام-منفي حجرې د پېپټېډوګلایکان نرۍ طبقه او په لیپیدونو بډایه بهرنۍ غشا لري چې رنګ لرې کوونکی یې ګډوډوي؛ نو کمپلکس په مینځلو وځي او حجرې بیا سفرانین اخلي. د NCBI Bookshelf د ګرام رنګولو بیاکتنه د حجروي دېوال دا تشریح وړاندې کوي. متخصصین زیاتوي چې بشپړ فزیکي-کیمیاوي بهیر یوازې د دېوال له پنډوالي څخه ډېر پېچلی دی، خو په لابراتوار کې د پایلو د تفسیر لپاره د چلند قاعده پر ځای پاتې ده: بنفش د رنګ ساتل ښيي، ګلابي د لومړني رنګ له لاسه ورکول او بیا په متقابل رنګ رنګېدل ښيي.
انځوریزې برخې. د طریقو د پرتله کولو لپاره سبکلرونکې رسمونې دي، د کمرې میکروسکوپي عکسونه نه دي. رنګونه د منطق د ښوولو لپاره ساده شوي دي: په ساده رنګولو کې یو رنګ، او د ګرام د رنګ لرې کولو له پړاو وروسته دوه رنګونه.
ایا مېتیلین بلو د ګرام په رنګولو کې کارېدای شي
دا پوښتنه دوه معناوې لري، او هره یوه بېل ځواب غواړي.
لومړۍ معنا: ایا یوازې یو ځل په مېتیلین بلو پوښل د ګرام د ټولې لړۍ ځای نیولای شي؟ نه. له آیوډین، رنګ لرې کوونکي او متقابل رنګ پرته هېڅ تفریقي پړاو نشته، نو د ګرام هېڅ کټګوري نه ازمویل کېږي. یوازې له مېتیلین بلو وروسته آبي ساحه د ساده رنګولو پایله ده، که څه هم بوتل یې د ګرام د معرفونو ترڅنګ ایښی وي. دا د ګرام د پایلې په توګه مه ثبتوئ.
دویمه معنا: ایا مېتیلین بلو په 4 پړاو کې د متقابل رنګ په توګه د سفرانین ځای نیولای شي؟ د دندې له پلوه، بېرنګ شوې حجرې رنګولای شي، او د درسي کتاب یو تمرین له داسې بدلولو وروسته د بنفشو ګرام-مثبتو حجرو او آبي ګرام-منفي حجرو اټکل کوي. منطق یې سم دی، ځکه په سمه توګه بېرنګ شوې ګرام-منفي حجرې نږدې بېرنګې وي او بل کاتیوني رنګ اخلي. خو دا معیاري کړنلاره نه ده. د ASM کړنلارې سفرانین ټاکي، او په ځینو بڼو کې یې منل شوي بدیلونه لکه قاعدوي فوکسین هم شته، خو مېتیلین بلو نه دی. یو عملي زیان هم لري: د بنفش پر وړاندې د آبي توپیر د بنفش پر وړاندې د ګلابي له توپیر څخه ستونزمن دی، په ځانګړي ډول د نوو زدهکوونکو لپاره او د میکروسکوپ د کمزورو څراغونو لاندې. د درسي کار او هرې مهمې پایلې لپاره هغه متقابل رنګ وکاروئ چې ستاسو کړنلاره یې ټاکي، معمولاً سفرانین، او د مېتیلین بلو متقابل رنګ د نندارې لپاره یوه بدله بڼه وګڼئ، نه یو برابر معیار.
دا اړونده پوښتنه چې مېتیلین بلو له نورو یو رنګ کاروونکو انتخابونو سره څنګه پرتله کېږي، د باکتریاوو د ساده رنګولو په پرتله کې څېړل شوې ده.
د E. coli مېتیلین بلو رنګول څه ثابتوي او څه نه ثابتوي
E. coli یوه ګرام-منفي مېلهشکله باکتریا ده، خو دا جمله د څو طریقو موندنې یوځای کوي: مورفولوژي له میکروسکوپي کتنې څخه، د ګرام غبرګون د ګرام له رنګولو څخه، او هویت له کلتور او بیوکیمیاوي یا مالیکولي ازموینو څخه. د مېتیلین بلو په وسیله رنګ شوی نری پوښ یوازې لومړۍ برخه وړاندې کوي. دا ثابتوي چې په رنګ شوې نمونه کې مېلهشکله حجرې شته او ښيي چې څنګه ترتیب شوې دي. د ګرام غبرګون نه ثابتوي، ځکه د رنګ لرې کولو ازموینه نه ده ترسره شوې. نوعه نه پېژني، ځکه د دې تفکیک په کچه د ډېرو نوعو مېلهشکله حجرې یو شان ښکاري.
همدلته راپورونه په یوه اټکل کېدونکې بڼه تېروځي. لیکوال مخکینۍ پوهه («دا کلتور باید E. coli وي، او E. coli ګرام-منفي ده») د مشاهدې کرښې ته راوړي، نو داسې ښکاري چې سلایډ هغه څه تاییدوي چې په اصل کې یوازې فرض شوي وو. یو روښانه راپور دا برخې سره بېلوي: «د مېتیلین بلو ساده رنګول: آبي باسیلونه ولیدل شول؛ یوازې مورفولوژي، د ګرام هېڅ کټګوري نه ده ازمویل شوې.» بیا، که د ګرام رنګول له کنټرولونو سره په سمه توګه ترسره شوي وي: «د ګرام رنګول: ګلابي مېلې، له ګرام-منفي پایلې سره سمون لري.» د نوعې هویت وروسته د پېژندنې له کاري بهیر څخه ترلاسه کېږي، نه یوازې له رنګ څخه.
د پایلو د تفسیر عملي لارښود
په لابراتوار کې دا پرېکړهییزه قاعده وکاروئ. که ټولې حجرې یو رنګ وي او کړنلارې له رنګ لرې کوونکي پرته یو رنګ کارولی وي، نو تاسو ساده رنګول ترسره کړي دي. بڼه، د اندازې اټکل او ترتیب راپور کړئ. همدلته ودرېږئ. که کړنلارې کریسټال وایلیټ، آیوډین، رنګ لرې کوونکی او متقابل رنګ له پېژندل شویو مثبتو او منفي کنټرولونو سره کارولي وي، نو تاسو د ګرام رنګول ترسره کړي دي. رنګ او مورفولوژي دواړه راپور کړئ: په ځنځیرونو کې بنفش کروي حجرې، ګلابي مېلې، او داسې نور.
درې تېروتنې د ډېرو ګډوډیو لامل کېږي. لومړۍ، آبي مېلې د E. coli د تایید په توګه تفسیرول. دویمه، په یادښتکتاب کې د مېتیلین بلو سلایډ د «ګرام رنګولو» تر سرلیک لاندې ثبتول، چې وروسته لوستونکي یې ناسم تعبیر کړي. درېیمه، متقابل رنګونه بېپروا بدلول او بیا د لابراتوارونو ترمنځ رنګونه داسې پرتله کول لکه د رنګونو ټولګې یې چې یو شان وي. د هرې تېروتنې حل یو دی: د هغې طریقې نوم ولیکئ چې په رښتیا ترسره شوې ده، او یوازې د هغه څه ادعا وکړئ چې هماغه طریقه یې ازمويي.
ساده رنګول دقیقاً ځکه خپل ځای لري چې لږ څه ثابتوي. دا چټک دي، وړې اجرایي تېروتنې یې پایله لږ اغېزمنوي، او هغه مهال بسنه کوي چې پوښتنه د مورفولوژۍ وي: ایا څه شته، او څه بڼه لري؟ کله چې پوښتنه د طبقهبندۍ وي، تفریقي ازموینه ترسره کړئ. آبي سلایډ درته وايي چې حجرې څه ډول ښکاري. بنفش یا ګلابي سلایډ درته وايي چې دېوالونه یې څنګه چلند کوي. هېڅ یو سلایډ په یوازې ځان نوعه نه درښيي.