ولې میتیلین بلو په اسید-فاسټ رنګولو کې د متقابل رنګ په توګه کارول کېږي

یو تخنیکر د رنګولو د بشپړې لړۍ له پای ته رسېدو وروسته د بلغم سمیر معاینه کوي. سرې میله‌نما باکتریاوې پر نیلي ساحې څرګندې ښکاري، او راپور داسې ورکول کېږي چې اسید-فاسټ باسیلونه لیدل شوي دي. بله ورځ، په بل سلایډ کې یوه یوشان نیلي ساحه ښکاري چې هېڅ سرې میله‌نما باکتریاوې پکې نشته، او راپور یې د نري رنځ لپاره منفي بلل کېږي. له دې دوو راپورونو څخه یو یې تر هغه څه زیاته ادعا کوي چې سلایډ یې ملاتړ کوي، او هغه لومړی راپور نه دی.

ګډوډي په مفهوم کې ده. تخنیکر نیلي رنګ د کشف د کیمیا یوه برخه ګڼلې وه، لکه میتیلین بلو چې د مایکوباکتریاوو په موندلو کې مرسته کوي. داسې نه ده. تر هغه وخته چې میتیلین بلو له سلایډ سره تماس نیسي، ازموینه لا دمخه پای ته رسېدلې وي. رنګ یوازې شالید رنګوي، څو پایله د لوستلو وړ شي. دا مقاله په اسید-فاسټ رنګولو کې د میتیلین بلو موخه تشریح کوي، دا چې ولې نیلي دی او بل رنګ نه دی، او دا چې د نیلي پر وړاندې سور رنګ د کومې پایلې اخیستلو اجازه درکوي.

لنډ ځواب

اسید-فاسټ رنګول یوه تفریقي ازموینه ده چې پر درې مفکورو ولاړه ده. کاربول فوکسین، چې لومړنی رنګ دی، په زور هرې حجرې ته ننویستل کېږي، د مومي مایکوباکتریاوو په ګډون. اسید-الکول، چې رنګ لرې کوونکی دی، له عادي حجرو سور رنګ باسي، خو له اسید-فاسټ حجرو یې نه شي ایستلی. بیا میتیلین بلو، چې متقابل رنګ دی، ټول هغه مواد رنګوي چې رنګ لرې کوونکي ترې رنګ ایستلی وي؛ نو غیر اسید-فاسټ حجرې، د کوربه حجرې او پاتې شوني نیلي ښکاري، خو اسید-فاسټ باسیلونه سره پاتې کېږي. متقابل رنګ د رنګونو توپیر برابروي. دا په هغه کیمیا کې هېڅ ونډه نه لري چې یوه حجره اسید-فاسټ کوي.

هر پړاو څه کوي

لاندې انځور د دندو وېش ښيي. د کړنلارې په توګه یې له کیڼ څخه ښي لوري ته ولولئ، او لاندې پټه د دې یادونې په توګه ولولئ چې د رنګولو هره ډله بېله پوښتنه مطرح کوي.

نفوذ لومړی راځي. مایکوباکتریاوې د عادي اوبنیو رنګونو پر وړاندې مقاومت کوي، ځکه پوښ یې په غیرمعمولي ډول اوبه دفع کوي؛ نو پروتوکول رنګ په زور ورننوي. د زیل-نیلسن په طریقه کې، په تودوخې سره بخار ورکول د فینول لرونکی کاربول فوکسین له مومي دیواله تېروي. د کینیون په سړه طریقه کې، د تودوخې پر ځای د لومړني رنګ ډېر پیاوړی ترکیب کارول کېږي، او په ځینو بدلو شوو بې‌تودوخې بڼو کې سرفکټنټونه ورزیاتېږي. د امریکا د مایکروبیولوژۍ ټولنې د اسید-فاسټ رنګولو پروتوکولونه دواړه ترکیبونه یو د بل ترڅنګ ثبتوي، او د غلظت توپیر یې څرګند دی: د تودې طریقې لپاره په هر 100 mL کې شاوخوا 0.3 g بنسټیز فوکسین، په داسې حال کې چې د سړې طریقې لپاره شاوخوا 4 g دی.

تفریق دویم راځي. اسید-الکول، چې معمولاً په 97 mL د 95 سلنه ایتانول کې 3 mL غلیظ هایدروکلوریک اسید وي، له هرې هغې حجرې سور رنګ مینځي چې دیوال یې ځانګړی مقاومت نه لري. هغه حجرې چې د مایکوباکتریاوو سالم شحمي پوښ لري، رنګ ساتي. ټوله طریقه پر همدې پړاو ولاړه ده، او همدا پړاو د کار د طریقې پر وړاندې تر ټولو حساس دی، لکه لاندې چې بحث پرې کېږي.

د رنګونو توپیر په پای کې راځي. اوس پر سلایډ سرې اسید-فاسټ حجرې د رنګ تشو شوو حجرو پر نږدې بې‌رنګه شالید پرتې دي. د 0.3 سلنه w/v میتیلین بلو دغه شالید بیا په داسې رنګ څرګندوي چې له سره رنګ څخه تر ټولو ډېر توپیر لري. متقابل رنګول لنډ وي؛ په توده طریقه کې عموماً 20 تر 30 ثانیو پورې او د سړې طریقې په ځینو بڼو کې تر څو دقیقو پورې وي. وخت د پروتوکول تابع دی، نه د رنګ د خپل ذاتي خاصیت.

ولې دا رنګ، او ولې نیلي

میتیلین بلو یو کاتیوني بنسټیز رنګ دی؛ یعنې رنګ لرونکی ایون یې مثبت چارج لري او د بې‌رنګه شوو باکتریاوو، د کوربه حجرو او پاتې شونو له منفي چارج لرونکو سطحو سره نښلي. د OpenStax مایکروبیولوژي د چارج دا منطق د بنسټیزو رنګونو عمومي اصل بولي. خو دلته میتیلین بلو له کیمیاوي پلوه ځانګړی نه دی. کرسټال وایولیټ او سفرانین هم بنسټیز رنګونه دي. انتخاب د لید له مخې دی، نه د کیمیا له مخې.

سرې میله‌نما باکتریاوې داسې شالید ته اړتیا لري چې رنګ یې ورسره توپیر ولري، او نیلي د روښانه ساحې په مایکروسکوپۍ کې له سره رنګ سره په تر ټولو ګټور ډول مخالف واقع کېږي. سفرانین به نامناسب متقابل رنګ وي، ځکه وروستی ګلابي-سور رنګ یې له ساتل شوي کاربول فوکسین سره ډېر نږدې دی او هغه توپیر له منځه وړي چې کړنلارې رامنځته کړی دی. کرسټال وایولیټ به تیاره بنفش شالید جوړ کړي چې د پام راجلبولو لپاره له نریو سرو باسیلونو سره سیالي کوي. تر ټولو پیاوړی ثبوت چې دنده د رنګونو توپیر دی، نه کیمیا، د رنګ بدیلول دي: شنه متقابل رنګونه، لکه مالاکایټ ګرین او بریلینټ ګرین، په ځینو وترنري او بدلو شوو پروتوکولونو کې کارول کېږي او ازموینه بیا هم کار کوي، ځکه هر څرګند توپیر لرونکی رنګ همدا دنده ترسره کوي.

له دې څخه دوه عملي پایلې راوځي. لومړی، معیاري ترکیب د pH هېڅ سمون نه ټاکي؛ دا ساده اوبنی 0.3 سلنه محلول له قلوي ترکیبونو، لکه د لوفلر میتیلین بلو، سره مه ګډوئ، ځکه هغه د رنګولو له یوې بلې مفکورې سره تړاو لري. دویم، ډېر رنګ اچول زیان لري. د نسج‌پوهنې لیکنې په ځانګړي ډول خبرداری ورکوي چې ډېر غلیظ نیلي شالید لږ شمېر باسیلونه پټولی شي؛ نو تر هغه ډېر وخت د سلایډ په رنګ لوند ساتل چې پروتوکول یې اجازه ورکوي، د لوستلو وړتیا کموي او هېڅ ګټه نه لري.

د دیوال هغه کیمیا چې ازموینه ممکنوي

د اسید-الکول د تفریق لامل د مایکوباکتریاوو په پوښ کې دی. د دې پوښ جوړښتي هسته د مایکولیل-ارابینوګالکټان-پېپټایډوګلایکان کمپلکس دی: پېپټایډوګلایکان له ارابینوګالکټان سره تړلی وي، چې بهرنۍ پایې یې ډېر اوږد ځنځیر لرونکي مایکولیک اسیدونه لري او له شحمو بډایه بهرنۍ مایکوممبران جوړوي، چې نفوذپذیري یې په غیرمعمولي ډول ټیټه ده. د مایکوباکتریاوو د بهرنۍ غشا بیاکتنه دا جوړښت په تفصیل بیانوي. دا خنډ په دواړو لورو کې کار کوي. د رنګ د ننوتلو مقاومت کوي، له همدې امله نفوذ تودوخې یا پیاوړي شوي لومړني رنګ ته اړتیا لري؛ او د رنګ د ایستلو مقاومت هم کوي، له همدې امله اسید-الکول د کاربول فوکسین له ننوتلو وروسته هغه نه شي لرې کولی. عادي باکتریاوې دا پوښ نه لري او رنګ له لاسه ورکوي. نو اسید-فاسټ والی تر ټولو ښه د شحمي خنډ د یوې پدیدې په توګه درک کېږي، نه له مایکولیک اسید سره د فوکسین د کیمیاوي تړلو په توګه.

دا کیمیا یوه عامه معما هم تشریح کوي: مایکوباکتریاوې د ګرام په طریقه کمزورې او په غیر اټکل کېدونکي ډول رنګېږي، او کله ناکله د کم‌رنګو دانه‌دانه بڼو یا بې‌رنګه سیورو په څېر ښکاري. د دوی اوبه دفع کوونکی دیوال د کرسټال وایولیټ نفوذ محدودوي. اسید-فاسټ رنګول د ګرام رنګولو بدله شوې بڼه نه ده. دا یو بېل تفریقي اصل دی چې د دیوال پر بل خاصیت ولاړ دی، لکه د ساده رنګولو او ګرام رنګولو پرتله چې د هغو دوو نورو طریقو په اړه ښيي.

درې طریقې، درې پوښتنې

د باکتریاوو د یو رنګ کاروونکو طریقو د پراخې ډلې لپاره، د مایکروسکوپي رنګولو اطلس وګورئ.

د نیلي پر وړاندې سور څه نه شي ثابتولی

سرې میله‌نما باکتریاوې دا معنا لري چې موجوداتو د اسید-الکول له پړاو څخه د تېرېدو پر مهال کاربول فوکسین ساتلی دی. دا موندنه له Mycobacterium tuberculosis سره سمون لري، خو د CDC د نري رنځ د تشخیص لارښود په څرګنده یادونه کوي چې نورې مایکوباکتریاوې هم اسید-فاسټ دي؛ نو د نوعې پېژندنه کلتور او د نوکلیک اسید ازموینو ته اړتیا لري، نه رنګ ته.

د کار د طریقې تېروتنې تر ډېره د مینځلو د دوو پړاوونو شاوخوا راټولېږي. نیمګړی بې‌رنګه کول د شالید مواد سره پرېږدي او د کاذبو مثبتو پایلو د لوستلو لامل کېږي. له حده ډېر بې‌رنګه کول په کمزوري ډول ساتل شوی لومړنی رنګ باسي او په کاذبو منفي پایلو کې ونډه لري. په ډېر مقدار لګول شوی متقابل رنګ لږ شمېر باسیلونه په نیلي کې پټوي. غلیظ سمیرونه، رسوب شوي ریجنټونه او د مینځلو ککړې اوبه خپل ناسمې نښې ورزیاتوي.

د کار طریقه که هر څومره سمه وي، حساسیت د موجوداتو په شمېر محدودېږي. دودیزه سمیر مایکروسکوپي د بلغم په هر ملي‌لیتر کې شاوخوا 5,000 تر 10,000 باسیلونو ته اړتیا لري، او د CDC د شواهدو پخوانیو بیاکتنو په هغو سږنیو پېښو کې چې په کلتور تایید شوې وې، د سمیر حساسیت شاوخوا 45 تر 80 سلنې ښودلی و. نو منفي سمیر هېڅکله نری رنځ نه ردوي. د CDC اوسنی لارښود له هر سمیر سره کلتور هم اړین ګڼي او سپارښتنه کوي چې لږ تر لږه پر یوې تنفسي نمونې د نوکلیک اسید د زیاتولو ازموینه ترسره شي، کله چې د سږو نری رنځ په پام کې وي او پایله یې د ناروغ د پاملرنې تګلاره بدلولی شي.

عملي کار باید د منظور شوو پروتوکولونو له مخې وي

ښوونیزې تشریحګانې، د دې مقالې په ګډون، د کلینیکي کار اجازه نه ورکوي. د لابراتواري عملي کار لپاره، د لابراتوار تایید شوې معیاري کاري کړنلاره تعقیب کړئ چې د CDC، APHL یا CLSI له اوسنیو اسنادو سره برابره وي؛ د CDC د اسید-فاسټ رنګولو مرجع چې په Stacks آرشیف کې ساتل شوې ښيي چې دا ډول کړنلارې ریجنټونه او د پایلو لوستل څنګه ټاکي. د نري رنځ پر نمونو کار د خپرېدو مخنیوي تدابیرو ته اړتیا لري: سمیرونه د بیولوژیکي خوندیتوب په کابینه کې چمتو کېږي، ځکه چمتو کول په هوا کې معلق ذرات او د څاڅکو شیندل رامنځته کوي. د CDC د لابراتواري خوندیتوب لارښود وايي چې حتی په تودوخې تثبیت شوي سمیرونه هم ښايي ژوندي د نري رنځ باسیلونه ولري او لا هم باید د ککړو موادو په توګه ورسره چلند وشي. د CDC د عامې روغتیا د انځورونو د کتابتون هغه ثبت چې د M. leprae لپاره معاینه شوی، په کاربول فوکسین او میتیلین بلو رنګ شوی سمیر ښيي، له نري رنځ هاخوا د دې طریقې د پراخ استعمال یوه ګټوره یادونه ده: پر نیلي شالید همدا سور توپیر په هر ځای کې کار کوي چې اسید-فاسټ موجودات لټول کېږي، او په دقت لوستل شوې منفي پایله پخپله د ثبتولو وړ پایله ده.

د بشپړ شوي سلایډ لوستل

متقابل رنګ د لومړنۍ پلټنې پر مهال خپله ګټه څرګندوي. مایکروسکوپ کاروونکی چې په کم لویوالي کې سلایډ ګوري، لومړی نیلي شالید د سمیر د کیفیت د ارزولو لپاره کاروي: د حجرو یوشان وېش، د فوکس لپاره سالمې کوربه حجرې، او د ډېر رسوب نشتوالی. بیا د احتمال وړ سرې بڼې پام ځان ته رااړوي، ځکه پر سلایډ نور هېڅ څه سره نه دي. تایید په تېلو کې د ډوبولو د طریقې لاندې کېږي، چېرته چې رښتیني باسیلونه د تمې مطابق نرۍ، کله ناکله لږ کږې یا دانه‌دانه میله‌نما بڼې ښيي، نه د رنګ یوشان پاتې شوني.

د شالید رنګول د راپور اصطلاحات هم ټاکي. د سرو باسیلونو لرونکی سلایډ داسې راپور کېږي چې اسید-فاسټ باسیلونه لیدل شوي دي، او ډېری وخت د لابراتوار د کچې له مخې ورسره نیمه‌کمي درجه هم ورکول کېږي. هغه سلایډ چې هېڅ سره موجودات پکې نه وي، داسې راپور کېږي چې هېڅ اسید-فاسټ باسیلونه نه دي لیدل شوي، او هېڅکله د نري رنځ لپاره منفي نه بلل کېږي. دا توپیر مهم دی، ځکه نیلي ساحه ثابتوي چې رنګولو کار کړی، حجرو متقابل رنګ اخیستی او د لید شرایط مناسب وو، خو د کشف له حد څخه د کم شمېر موجوداتو په اړه هېڅ نه وايي. یوه تشه نیلي ساحه د سلایډ په اړه معتبره پایله ده، نه د ناروغ په اړه پرېکړه.

د دندو وېش په یاد وساتئ، او د راپور لیکل به پخپله روښانه شي. کاربول فوکسین احتمالي موجودات په نښه کوي. اسید-الکول ازموینه ترسره کوي. میتیلین بلو یوازې ځواب د لوستلو وړ کوي: سرو د اسید پر وړاندې رنګ ساتلی، نیلي یې له لاسه ورکړی دی. نور هر څه، یعنې نوعه، د موجوداتو شمېر او کلینیکي معنا، له سلایډ هاخوا له کار څخه ترلاسه کېږي.