مقاله
د لوفلر قلوي او پوليکروم مېتیلین بلو رنګونو تشریح
د رنګولو پر مېز درې بوتلونه څنګ په څنګ اېښودل کېدای شي، چې پر هر یوه د مېتیلین بلو د کوم ډول نوم لیکل شوی وي. پر یوه لیکلي وي: اوبیز مېتیلین بلو 1%. پر بل: د لوفلر قلوي مېتیلین بلو. او پر درېیم: پوليکروم مېتیلین بلو. یو بوخت کارکوونکی تر ټولو نږدې بوتل رااخلي. بیا پر سلایډ غوړول شوې نمونه یا ډېره کمرنګېږي، یا په یوشان ډول ټوله آبي کېږي، یا د ارغواني رنګ ناڅاپي سیوري اخلي؛ او پړه یې پر نمونه اچول کېږي.
دا د محلول د ترکیب ستونزه ده، نه د نمونې. په دغو دریو محلولونو کې سره تړلي رنګونه شته، خو د رنګولو بېلابېل اصول پکې کارول شوي دي. یو یې په نږدې خنثی pH کې ساده کاتیوني رنګ دی. بل هماغه رنګ دی چې د قلوي په وسیله یې د رنګولو ځواک زیات شوی دی. درېیم بیا نور یو واحد رنګ نه دی، بلکې په قصدي ډول اکسید شوی مخلوط دی. که ناسم ډول وکاروئ، د رنګولو اصل مو د کار په جریان کې بدلېږي.
لنډ ځواب
ساده اوبیز مېتیلین بلو د پرتله کولو بنسټ دی: په اوبو کې شاوخوا 1% رنګ، چې د باکتریاوو د بڼې او عمومي مایکروسکوپي کتنې لپاره یو ساده کاتیوني رنګ دی. د لوفلر قلوي مېتیلین بلو په اوبو کې رقیق شوي الکولي اصلي محلول ته د رقیقې قلوي یوه لږه، اندازه شوې کچه ورزیاتوي. دا pH لوړوي او کاتیوني رنګ د باکتریاوو له اسیدي جوړښتونو سره په پیاوړي ډول نښلوي. پوليکروم مېتیلین بلو هغه مېتیلین بلو دی چې په قلوي چاپېریال کې د اکسیدېشن له لارې په قصدي ډول پوخ شوی وي. له همدې امله، په بوتل کې د پاتې مېتیلین بلو ترڅنګ د مېتیل ګروپونو د لرې کېدو له امله جوړ شوي هومولوګونه (azure A، azure B، azure C)، تیونین او مېتیلین وایولېټ شته، او دا مخلوط بېلابېل جوړښتونه په بېلابېلو رنګونو رنګوي.
که یوازې یوه جمله په یاد ساتئ: قلوي کول د رنګولو شدت بدلوي، خو پوليکروم کول د رنګولو رنګونه بدلوي.
عادي اوبیز مېتیلین بلو: د پرتله کولو مرجع
تر ټولو ساده ترکیب په اوبو کې حل شوی مېتیلین بلو دی، چې عموماً 1% w/v وي، نه قلوي ورسره وي او نه اکسیدېشن پرې شوی وي. رنګ لرونکې کیمیاوي بڼه یې د مېتیلتیونینیم کاتیون دی چې ورسره د مخالف چارج لرونکی کلوراید ایون مل وي. دا یو کوچنی، هوار فینوتیازیني رنګ دی چې د PubChem د مېتیلین بلو په ثبت کې د مېتیلتیونینیم کلوراید په نوم تشریح شوی دی. د کاتیون په توګه، دا د نوکلیک اسیدونو له فاسفاتي ملاتړونو او د باکتریاوو د حجروي دېوالونو له اسیدي ګروپونو سره نښلي او حجرې د روښانه شالید پر وړاندې آبي رنګوي.
ګټه یې د پایلې اټکل کېدل دي. هستې او باکتریاوې آبي ښکاري. د رنګ توپیر منځنی وي. کم څرګندېدونکي موجودات ښايي کمرنګ شي، او همدا هغه محدودیت و چې لوفلر یې د حل هڅه کړې وه. د باکتریاوو د ساده رنګونو د هغې پراخې ډلې لپاره چې دا محلول پکې راځي، د باکتریاوو د ساده رنګولو عمومي کتنه وګورئ. دلته هم د رنګ د هویت دقیق پېژندل مهم دي: مېتیل بلو په بشپړ ډول یو بل مالیکول دی، لکه څنګه چې د مېتیل بلو او مېتیلین بلو پرتله یې تشریح کوي؛ نو یوازې د رنګ د نوم پر بنسټ په کتلاګ کې لټون ښايي د رنګ ناسمه ډله درته وړاندې کړي.
د لوفلر قلوي مېتیلین بلو: هماغه رنګ، خو په زیات ځواک
د لوفلر دودیزه نسخه د مېتیلین بلو الکولي اصلي محلول په اوبو کې له رقیقې قلوي سره ګډوي. د درسي کتابونو نسخې په 30 mL د 95% اېتانول کې 0.3 g رنګ، ورسره 100 mL د 0.01% اوبیز پوتاشیم هایدروکساید سپارښتنه کوي؛ یا یې معادل، 30 mL د مېتیلین بلو مشبوع الکولي محلول، 100 mL مقطرې اوبه او 1 mL د 1% KOH. په دې توګه د کارولو محلول په څرګند قلوي pH کې نږدې 0.3% رنګ لري. سوداګریز ډولونه هم له همدې اصل څخه پیروي کوي، او د Thermo Fisher د مایکروبیولوژۍ د رنګونو کتلاګ د لوفلر قلوي مېتیلین بلو، پوليکروم او اوبیز ډولونه د جلا توکو په توګه، له جلا ټاکل شوو کارونو سره لېست کوي.
اصلي اغېزمن عامل قلوي ده. د pH لوړول د نمونې له کاربوکسیل او فاسفاتي ګروپونو څخه پروتونونه لرې کوي او د منفي چارج لرونکو ځایونو کثافت زیاتوي. په همدې وخت کې، الکولي اصلي محلول رنګ په بشپړ ډول حل شوی ساتي، څو دغو ځایونو ته په مونومري بڼه ورسېږي. پایله یې د خنثی اوبیز رنګ په پرتله د باکتریاوو چټک او پیاوړی رنګول دي، چې د عادي باکتریولوژیکې غوړول شوې نمونې پېژندل شوې ژورې آبي میلهډوله او کروي باکتریاوې څرګندوي. د رنګولو وخت عموماً له یوې تر دریو دقیقو وي، او وروسته په اوبو پرېمنځل کېږي.
د دې دودیز استعمال هغه Corynebacterium diphtheriae دی چې د لوفلر پر سیرومي محیط روزل شوی وي: نری، ډېری وخت د لرګي د ډبولي په څېر د پنډو سرونو لرونکی میلهډول جوړښت، چې د زېرمه شوي پوليفاسفېټ میټاکروماتیکې بابېس–اېرنست دانې یې په پیاوړي ډول رنګېږي. د محیط او رنګ دا جوړه تاریخي ده؛ دواړه هماغه یوه باکتریولوژیست ته منسوب دي، او د دانو څرګند رنګیز توپیر یې تشخیصي ګټه ده. د دیفتریا له کارونو پرته، دا رنګ له کلتورونو څخه د غوړول شوو نمونو د عمومي باکتریولوژیک رنګ په توګه، په کلینیکي غوړول شوو نمونو کې د Neisseria د بڼې لپاره، او هر هغه ځای کې کارېږي چې ګرام رنګولو ته اړتیا نه وي، خو ساده اوبیز آبي رنګ ډېر کمرنګ ثابتېږي. دا یو تکرنګیز رنګ دی. هر اسیدي جوړښت د آبي رنګ یو سیوری اخلي. کله چې کړنلاره د توپیر ښودلو لپاره بېلابېل رنګونه غواړي، یوازې قلوي یې نه شي برابرولای.
یو عملي احتیاط: قلوي رنګیز محلولونه د ساتلو او د کاربن ډایاکساید د جذب له امله خرابېږي او رسوب کوي. لابراتوارونه یا لږې کچې چمتو کوي، یا د کتلاګ محلول اخلي او د ساتنې ټاکلې موده یې مراعاتوي، د دې پر ځای چې یو زوړ بوتل په زحمت کارېدونکی وساتي چې اوس پر هر سلایډ رسوب اچوي.
پوليکروم مېتیلین بلو: یو نوم، څو رنګونه
پوليکروم مېتیلین بلو له هماغه رنګ څخه پیلېږي، خو په قلوي چاپېریال کې پرې کنټرول شوی اکسیدېشن ترسره کېږي، چې په تاریخي اصطلاح کې پخول یا پوليکروم کول بلل کېږي. په قلوي چاپېریال کې د وخت په تېرېدو بدلون، له کاربونېټ سره تودول، یا د ډایکرومېټ په څېر موادو په وسیله اکسیدېشن د ډایمېتیلامینو له ځایناستو ګروپونو څخه مېتیل ګروپونه پړاو په پړاو لرې کوي. محصول یې یو مخلوط دی: پاتې مېتیلین بلو، ورسره azure B (یو مېتیل ترې لرې شوی)، azure A او azure C (نور مېتیل ګروپونه ترې لرې شوي)، تیونین (ټول مېتیل ګروپونه ترې لرې شوي)، او د مېتیلین وایولېټ د کورنۍ د اکسیدېشن جانبي محصولات. هره برخه خپل رنګ او له نسج سره د نښلېدو ځانګړې میلان لري، نو مخلوط په میټاکروماتیک ډول رنګوي: هستې، دانې، میوسینونه او غضروف هر یو له آبي څخه تر سور–ارغواني پورې جلا سیوري اخلي.
دا هماغه کیمیا ده چې د وینې د نامتو رنګونو تر شا پرته ده. لومړنیو څېړونکو وموندله چې قلوي شوی مېتیلین بلو د ملاریا د پرازیت هستې په ارغواني سیورو رنګوي، خو د هغوی اوبیز پوخ شوي محلولونه ناثابت وو او په څو ورځو کې یې رسوب کاوه. د وینې ارغواني رنګ څنګه اختراع شو بیاکتنه دا بهیر تعقیبوي چې مالاخوفسکي او رومانوفسکي څنګه په 1891 کې په خپلواکه توګه له دې اغېز څخه ګټه واخیسته، مېتانول څنګه د رنګ د رسوب د ثابت ساتلو او له تودوخې پرته د نریو غوړول شوو نمونو د تثبیت لپاره وکارول شو، او ګیمسا څنګه وروسته مخلوط د اندازه شوي azure B او ایوزین پر بنسټ، د ګلیسرول په مرسته له ثبات ورکولو سره، معیاري کړ. د ګیمسا ډوله اوسني رنګونه نېغ په نېغه له پوليکروم مېتیلین بلو او ایوزین څخه راوتلي دي؛ دا هغه ترکیب دی چې د رومانوفسکي اغېز رامنځته کوي. له ایوزین سره د ګډولو او د azure B برخې د تفصیل لپاره، د رومانوفسکي ډوله رنګونه او د azure B او ایوزین تعامل وګورئ.
ځکه چې دا یو مخلوط دی، پوليکروم مېتیلین بلو په خپل ماهیت کې د دغو دریو تر ټولو لږ معیاري شوی ډول دی. د رنګونو دقیق توازن یې د اکسیدېشن پر لارې او کچې پورې تړلی دی. له همدې امله، د نسجپوهنې توکي برابروونکي دا د خپل فعالیت له ازموینو سره د یوه جلا محصول په توګه پلوري، نه د زاړه شوي لوفلر محلول په توګه. په عامو استعمالونو کې یې د ماسټ حجرو د دانو، میوسینونو او غضروف میټاکروماتیک څرګندول، د پلازما حجرو د جزئیاتو ښودل، او د ګوډپاسچر ډوله پوليکروم طریقو په وسیله د نسج په پرې شوو برخو کې د Helicobacter pylori څرګندول شامل دي. کله چې موخه د رنګ له مخې توپیر کول وي، دا سم انتخاب دی؛ خو کله چې کړنلاره د باکتریاوو روښانه تکرنګیزه بڼه غواړي، ناسم انتخاب دی.
د ترکیب او موخې پرتله
| ترکیب | په بوتل کې څه دي | د pH ځانګړنه | د رنګولو اصل | کله یې وکاروئ |
|---|---|---|---|---|
| اوبیز مېتیلین بلو (~1%) | په اوبو کې مېتیلین بلو | نږدې خنثی | یو واحد کاتیوني رنګ له نوکلیک اسیدونو او د دېوال له اسیدي ګروپونو سره نښلي؛ تکرنګیز آبي | د بڼې عادي کتنه، ښوونیزې غوړول شوې نمونې، عمومي مایکروسکوپي کتنه چې د رنګیز توپیر اړتیا پکې کمه وي |
| د لوفلر قلوي مېتیلین بلو (~0.3% رنګ او رقیقه KOH) | له الکولي اصلي محلول څخه رقیق شوی مېتیلین بلو، ورسره ~0.01% قلوي | قلوي | هماغه کاتیون له پروتونونو بېبرخې شوو اسیدي ځایونو سره په پیاوړي ډول نښلي؛ چټک او زیات شدت لرونکی تکرنګیز رنګول | عمومي باکتریولوژي، د دیفتریا غوړول شوې نمونې د دانو له رنګیز توپیر سره، کم څرګندېدونکي موجودات چې خنثی رنګ یې په څرګندولو کې پاتې راځي |
| پوليکروم مېتیلین بلو | د اکسیدېشن له لارې د مېتیل ګروپونو له لرې کېدو جوړ شوی مخلوط: azure A، azure B، azure C، تیونین، مېتیلین وایولېټ، پاتې مېتیلین بلو | د چمتو کولو پر مهال قلوي؛ د مخلوط په بڼه عرضه کېږي | ګڼ هومولوګونه د نښلېدو له بېلابېلو میلانونو سره میټاکروماتیک او څو رنګه سیوري جوړوي؛ له ایوزین سره د رومانوفسکي رنګونو بنسټ | ماسټ حجرې، میوسینونه، د نسج میټاکرومازیا، د ګیمسا ډوله مشتقونو له لارې د وینې او پرازیتونو کارونه |
جدول د پرېکړې کولو د یوې کړنلارې په توګه ولولئ. که نمونه ډېره کمرنګېږي، د pH اصل بدل کړئ او د لوفلر رنګ وکاروئ. که هر څه رنګېږي خو هېڅ شی له بل څخه نه بېلېږي، د رنګ اصل بدل کړئ او پوليکروم ته مخه کړئ. که د لوفلر په وسیله رنګ شوې غوړول شوې نمونه دانې په ښکلي ډول څرګندوي، خو څارونکی پوښتنه کوي چې ولې هستې او سایتوپلازم دواړه یو آبي رنګ لري، ځواب دا دی چې هېڅ قلوي تکرنګیز رنګ دا کار نه شي کولای. دا پوښتنه د پوليکروم کورنۍ او د هغې د وینې د رنګ مشتقونو پورې اړه لري.
له معمول ګډوډیو څخه مخنیوی
د ډېری ګډوډیو لامل دوه تېروتنې دي. لومړۍ دا ده چې د لوفلر رنګ له ساده مېتیلین بلو سره د یو بل پر ځای د کارولو وړ وګڼل شي، ځکه دواړه په بوتل کې آبي ښکاري. دوی په pH او شدت کې توپیر لري، او چېرې چې د لوفلر رنګ ټاکل شوی وي، پر ځای یې د خنثی رنګ کارول هماغه د دانو رنګیز توپیر له منځه وړي چې کړنلاره پرې جوړه شوې ده. دویمه تېروتنه دا ده چې هر زوړ یا په ناڅاپي ډول د وخت په تېرېدو بدل شوی قلوي آبي رنګ پوليکروم وګڼل شي. بېکنټروله زړېدل په نامعلوم غلظت کې یو نامعلوم مخلوط جوړوي، خو ریښتیني پوليکروم محلولونه د اکسیدېشن په ټاکلو لارو چمتو کېږي او د وینې د رنګونو په لړۍ کې له اندازه شوي ایوزین سره ګډېږي. تاریخ دلته ښوونکی دی: د 1890s ناثابتو اوبیزو پوخ شوو محلولونو ځای مېتانولي ثابتو ترکیبونو ونیو، کټ مټ ځکه چې بېکنټروله مخلوطونه په ورته ډول بیا نه شوای جوړېدای. دا هغه درس دی چې د نامعلوم عمر له بوتل څخه د یوه تشخیصي سلایډ تر رنګولو مخکې یې په یاد راوړل ارزښت لري.
د نومونو په دقیق پېژندلو سره دا لړۍ بشپړېږي. د رنګ له بڼې د اټکل کولو پر ځای، پر لېبل د کتلاګ توکی (اوبیز، د لوفلر یا پوليکروم)، د رنګ مقدار او ټاکل شوی استعمال تایید کړئ. دا درې ترکیبونه د رنګ رامنځته کوونکي جوړښت ګډه سرچینه لري. خو موخه یې ګډه نه ده.