EMB agar बनाम MacConkey agar: माध्यमको छनोट र व्याख्या

एक विद्यार्थीले एउटै पानीको नमुना दुईवटा प्लेटमा streak गर्छ। एउटामा हरियो धातुजस्तो चमक भएका गाढा कोलोनीहरू देखिन्छन्। अर्कोमा धमिलो halo भएका चहकिला गुलाबी कोलोनीहरू देखिन्छन्। दुवै प्लेट एउटै ट्युबबाट inoculate गरिएका थिए, सँगसँगै incubate गरिएका थिए, र एउटै समयमा पढिएका थिए। विद्यार्थीले कुन प्लेट सही हो भनेर सोध्छ।

दुवै प्लेट सही हुन्। तिनले फरक प्रश्नको उत्तर दिन्छन्। यी दुई माध्यमलाई आन्द्राका ब्याक्टेरियाका लागि परस्पर साटेर प्रयोग गर्न मिल्ने screening माध्यम ठान्दा भ्रम उत्पन्न हुन्छ। तिनको उद्देश्य साझा छ—Gram negative enteric जीवहरू छान्ने र lactose fermenter लाई nonfermenter बाट छुट्याउने—तर त्यो उद्देश्य फरक रसायन र फरक दृश्य तर्कमार्फत कार्यान्वयन हुन्छ। यी दुई आधारभूत अवधारणा बुझिसकेपछि प्लेट छनोट र कोलोनी पढाइ नियमित कामजस्तै सरल हुन्छ।

छोटो उत्तर

EMB agar ले eosin Y र methylene blue नामका दुई डाइ प्रयोग गर्छ, जसले दुईवटा काम गर्छन्: तिनले Gram positive वृद्धि दबाउँछन् र धेरै acid उत्पादन गर्ने जीवहरूको वरिपरि precipitate भएर गाढा कोलोनी बनाउँछन्, जसमा Escherichia coli का लागि परम्परागत रूपमा धातुजस्तो हरियो चमक देखिन्छ। MacConkey agar ले यी काम छुट्टाछुट्टै गर्छ: bile salts र crystal violet ले Gram positives दबाउँछन्, lactose ले fermentation का लागि substrate दिन्छ, र neutral red ले acid बनेको स्थानमा गुलाबी वा रातो कोलोनी देखाएर संकेत गर्छ। यदि उद्देश्य E. coli को स्पष्ट presumptive प्रदर्शन हो भने EMB उपयोगी हुन्छ। यदि उद्देश्य lactose fermenter लाई nonfermenter बाट स्पष्ट रूपमा गुलाबी बनाम रंगहीन छुट्याउनु हो, विशेष गरी stool वा urine workflow मा, MacConkey सामान्यतया पढ्न सजिलो हुन्छ। कुनै पनि प्लेटले केवल रङका आधारमा जीवको पहिचान गर्दैन।

EMB: एकैपटक चयन र संकेत गर्ने डाइ

EMB को अवधारणामा selection र indication एउटै अणुहरूले गर्छन्। ASM eosin methylene blue agar protocol ले EMB लाई चयनात्मक र विभेदकारी दुवै माध्यमका रूपमा वर्णन गर्छ, जहाँ डाइको जोडीले धेरै Gram positive जीवहरूलाई रोक्छ र lactose fermentation ले डाइ uptake तथा precipitation गराउँछ। मानक Levine formulation मा peptone, lactose, phosphate, eosin Y, methylene blue, र agar हुन्छन्, जसलाई Levine EMB agar का लागि FDA BAM method मा सूचीबद्ध गरिएको छ। पुराना EMB recipe हरूमा कहिलेकाहीँ lactose सँग sucrose पनि थपिन्थ्यो, जबकि Levine EMB मा lactose हुन्छ तर sucrose हुँदैन, त्यसैले तपाईंको प्रयोगशालामा कुन formulation प्रयोग हुन्छ भन्ने अभिलेख राख्नुहोस्।

EMB पढ्नु भनेको डाइको व्यवहार पढ्नु हो। तीव्र lactose fermentation ले पर्याप्त acid उत्पादन गर्छ, जसले धेरै डाइ precipitate गराउँछ र E. coli लाई गाढा नीलो-कालो केन्द्र तथा परम्परागत अवस्थामा reflected light मा धातुजस्तो हरियो चमक दिन्छ। Enterobacter र Klebsiella जस्ता कमजोर fermenter हरू सामान्यतया त्यस्तो चमक नभएका गुलाबीदेखि बैजनी, mucoid कोलोनीका रूपमा बढ्छन्। Salmonella, Shigella, र Proteus जस्ता nonfermenter हरूले डाइ precipitate गराउने तीव्र acid उत्पादन नगर्ने भएकाले सामान्यतया रंगहीन वा translucent कोलोनी बनाउँछन्। Gram positives सामान्यतया दबाइन्छन्, यद्यपि suppression को स्तर strain र product अनुसार फरक हुन्छ। methylene blue सुरुमा किन cationic stain का रूपमा व्यवहार गर्छ भन्ने विषयसहित डाइ तयारीको पूर्ण रसायन छुट्टै dye formulation सम्बन्धी छलफलको विषय हो, र सामान्य microscopy सन्दर्भ staining methods atlas मा समेटिएको छ। यो लेख प्लेट छनोट र पढाइमै केन्द्रित छ।

माथिको चित्र उदाहरणात्मक हो। यसले अपेक्षित दृश्य तर्क देखाउँछ: EMB मा गाढा चमक भएका कोलोनी, गुलाबी mucoid प्रकार, र फिक्का प्रकार; MacConkey मा भने गुलाबी बनाम फिक्का प्रकार। ढाँचा सिक्न यसलाई प्रयोग गर्नुहोस्, त्यसपछि प्रत्येक निष्कर्षलाई photographed controls र तपाईंको bench मा रहेको ठ्याक्कै सोही माध्यमको product insert सँग पुष्टि गर्नुहोस्।

MacConkey: छुट्टाछुट्टै काम, सरल दृश्य नियम

MacConkey को अवधारणाले प्रत्येक काम छुट्टै ingredient लाई दिन्छ। ASM MacConkey agar protocol ले पनि यसलाई चयनात्मक र विभेदकारी माध्यमकै रूपमा प्रस्तुत गर्छ, र MacConkey agar का लागि FDA BAM method ले मुख्य घटकहरू सूचीबद्ध गर्छ: peptones, lactose, bile salts, salt, neutral red, crystal violet, र agar। Bile salts र crystal violet ले Gram positives विरुद्ध चयन गर्छन्। Lactose ले fermentation substrate प्रदान गर्छ। Neutral red ले pH reporter को काम गर्छ र acid बनेको स्थानमा गुलाबीदेखि रातो हुन्छ, कहिलेकाहीँ तीव्र fermenter वरिपरि precipitated bile पनि देखिन्छ।

पढ्ने नियम जानाजानी सरल छ: गुलाबी भनेको lactose fermenter, रंगहीन वा फिक्का भनेको nonfermenter। E. coli गुलाबीदेखि रातो देखिन्छ, प्रायः bile precipitate halo सहित। Klebsiella र Enterobacter गुलाबी देखिन्छन् र capsule का कारण प्रायः mucoid हुन्छन्। Salmonella, Shigella, Proteus, र अन्य धेरै Gram negative rods रंगहीन देखिन्छन्। teaching lab मा अर्को उपयोगी पक्ष पनि छ: bile salts ले सामान्यतया Proteus swarming घटाउँछन्, त्यसैले nonselective media को तुलनामा MacConkey मा isolated colonies प्राप्त गर्न सजिलो हुन्छ, यद्यपि suppression पूर्ण हुँदैन र swarming नियन्त्रण नै प्राथमिकता भएको अवस्थामा salt free alternatives उपलब्ध छन्।

डाइले यस्तो व्यवहार गर्नुको आणविक कारण charge र structure सँग सम्बन्धित छ। Methylene blue एक cationic phenothiazine dye हो, जसको संरचना र गुणहरू ले acidic bacterial surfaces प्रति यसको affinity व्याख्या गर्छ; यही affinity EMB मा acid zone भित्र precipitate हुँदा पनि काम गर्छ।

एक नजरमा तुलना

तालिकालाई निर्णय प्रक्रिया जस्तै पढ्नुहोस्। अभ्यासमा विद्यार्थीले fermentation को तीव्रताको क्रम र एउटा स्पष्ट endpoint देख्नुपर्ने हो भने EMB ले त्यो देखाउँछ। biochemical confirmation अघि छिटो binary sort चाहिएको हो भने MacConkey ले त्यो देखाउँछ।

कुन नमुनाका लागि कुन माध्यम

presumptive fecal coliform वा E. coli पहिचान लक्षित पानीसम्बन्धी अभ्यासमा EMB आकर्षक हुन्छ, किनकि यसको चमक दृश्य रूपमा विशिष्ट हुन्छ। MacConkey ले पनि enteric Gram negatives सम्हाल्छ र ऐतिहासिक रूपमा पानी परीक्षणमा प्रयोग भएको छ, तर कुनै पनि प्लेट regulatory water method को विकल्प होइन; परीक्षणअनुसार modified mTEC वा MI जस्ता media निर्दिष्ट हुन सक्छन्। तपाईंको प्रयोगशालाले पालना गर्नुपर्ने method जाँच गर्नुहोस्।

fermenter लाई nonfermenter बाट छुट्याउने stool style separation का लागि, यी दुईमध्ये MacConkey सामान्यतया बढी उपयोगी हुन्छ। Salmonella वा Shigella का लागि व्यावहारिक stool work मा MacConkey मात्रमा निर्भर हुनुको सट्टा सामान्यतया XLD वा Hektoen enteric जस्ता अझ चयनात्मक enteric media थपिन्छन्।

clinical workflow अनुकरण गर्ने urine style teaching का लागि MacConkey लाई blood agar सँग जोडा बनाउनुहोस्। MacConkey ले प्रारम्भिक Gram negative sort दिन्छ, जबकि blood agar ले MacConkey ले दबाउने जीवहरूलाई recovery गर्न दिन्छ। urine culture setup का clinical विवरणहरूमा यो pairing सामान्य छ।

शुद्ध अवधारणा सिकाउन दुवै चलाउनुहोस्। EMB ले fermentation को तीव्रता महत्त्वपूर्ण हुन्छ र एउटै molecule ले दुई भूमिका निभाउन सक्छ भन्ने सिकाउँछ। MacConkey ले modular design सिकाउँछ: selector, substrate, र reporter छुट्टाछुट्टै राखिन्छन्। ज्ञात E. coli, ज्ञात Klebsiella aerogenes, र ज्ञात Salmonella लाई दुवै media मा छेउछाउ streak गर्ने विद्यार्थीहरूले यी दुई तर्कलाई फेरि विरलै गडबड गर्छन्।

हरेक अवधिमा दोहोरिने पढाइका त्रुटिहरू

सबैभन्दा सामान्य गल्ती केवल रङका आधारमा पहिचान गर्नु हो। MacConkey मा गुलाबी देखिने जीव E. coli, Klebsiella, Enterobacter, वा अर्को fermenter हुन सक्छ। रंगहीन देखिने जीव Salmonella, Shigella, Proteus, Pseudomonas, वा अर्को nonfermenter हुन सक्छ। रङ एउटा screening phenotype हो जसले Gram stain, oxidase, biochemical panels, वा instrument identification जस्ता confirmatory work तर्फ निर्देशित गर्छ; यो species name होइन।

दोस्रो गल्ती चमक नदेखिएको परिणामलाई अत्यधिक अर्थ दिनु हो। केही वास्तविक E. coli कोलोनीहरूमा, विशेष गरी isolated colonies मा, EMB मा धातुजस्तो चमक धेरै कम वा नदेखिन सक्छ। चमक नहुनुले E. coli लाई exclude गर्दैन, र चमक हुनुले त्यसलाई प्रमाणित पनि गर्दैन। चमकलाई presumptive clue का रूपमा लिनुहोस्।

तेस्रो गल्ती फरक उमेरका प्लेट तुलना गर्नु हो। ढिलो lactose fermenter हरू prolonged incubation पछि MacConkey मा गुलाबी हुन सक्छन्, जसले fermenter बनाम nonfermenter को स्पष्ट विभाजन धमिलो बनाउँछ। प्रयोगशालाले तोकेको समयमा पढ्नुहोस् र परिणामसँग incubation time अभिलेख गर्नुहोस्।

चौथो गल्ती mixed growth लाई एउटै जीव ठान्नु हो। रंगहीन कोलोनीको छेउमा रहेको गुलाबी कोलोनीले दुई phenotype देखाउँछ, बीचको अवस्था होइन। राम्रोसँग isolated colonies छान्नुहोस् र प्रत्येक morphotype लाई छुट्टाछुट्टै काम गर्नुहोस्। Mucoid texture ले पनि यस्तै भ्रम दिन सक्छ: Klebsiella र Enterobacter दुवै mucoid देखिन सक्छन्, त्यसैले capsule मात्रले नाम निश्चित गर्दैन। पहिले Enterobacter aerogenes भनेर पढाइने जीवलाई अहिले Klebsiella aerogenes का रूपमा वर्गीकृत गरिएको छ, जसले पुराना chart र नयाँ label किन फरक देखिन्छन् भन्ने स्पष्ट गर्छ।

Controls र अन्तिम नियम

हरेक session मा photographed वा fresh controls चलाउनुहोस्: बलियो fermenter reaction का लागि E. coli, परम्परागत चमकबिनाको mucoid fermentation का लागि Klebsiella aerogenes, रंगहीन nonfermenter reaction का लागि Salmonella strain, र तपाईंको ठ्याक्कै सोही product मा Gram positive suppression पुष्टि गर्न Staphylococcus aureus। strain numbers र acceptance criteria लाई manufacturer insert सँग मिलाउनुहोस्, किनकि bile, crystal violet, र dye content अनुसार selectivity परिवर्तन हुन्छ।

bench मा एउटा वाक्य सम्झनुहोस्। EMB ले चयन पनि गर्ने र संकेत पनि दिने डाइ प्रयोग गर्छ, जसले पढाइ केही सूक्ष्म बनाउने मूल्यमा E. coli को स्पष्ट संकेत दिन्छ। MacConkey ले selection र indication लाई छुट्याउँछ, जसले fermentation को कम विवरणको मूल्यमा सरल गुलाबी बनाम फिक्का विभाजन दिन्छ। प्रश्नसँग मेल खाने अवधारणा भएको माध्यम छान्नुहोस्, रङलाई उचित परीक्षणद्वारा पुष्टि गर्नुहोस्, अनि यी दुई प्लेट प्रतिस्पर्धी होइन, परस्पर पूरक बन्छन्।