Il-blu tal-metilen u Bartonella: sejbiet fil-laboratorju u limiti tal-evidenza klinika

Dixx tal-kultura u pazjent għandhom kelma komuni, infezzjoni, iżda mhux kunċett komuni. Fid-dixx, l-infezzjoni hija għadd ta' kolonji fuq l-agar. Fil-pazjent, hija batterji ġewwa ċ-ċelloli u l-vini, mediċini li jgħaddu mid-demm u mit-tessuti, u sistema immunitarja li tagħmel parti mix-xogħol. Jekk tħawwad it-tnejn, numru impressjonanti mil-laboratorju jibda jidher qisu trattament. Jekk iżżommhom separati, l-istess numru jsir dak li hu: raġuni biex isir l-esperiment li jmiss.

Din is-separazzjoni hija l-għan ewlieni ta' din ir-reviżjoni dwar il-blu tal-metilen u Bartonella. Żewġ studji fil-laboratorju minn grupp wieħed ta' riċerka ttestjaw il-blu tal-metilen kontra Bartonella henselae fi stati mingħajr tkabbir. It-tnejn irrappurtaw attività qawwija fil-ħġieġ u fil-plastik. L-ebda wieħed ma ttestja persuna.

Għaliex ir-riċerkaturi jittestjaw il-fażi stazzjonarja

Il-biċċa l-kbira tat-testijiet tal-antibijotiċi jużaw ċelloli li qed jikbru. Dan il-mudell ma jkoprix każ aktar diffiċli: ċelloli li waqfu jinqasmu u jittolleraw mediċini li joqtlu ċelloli simili li għadhom jikbru.

Bartonella tista' tippersisti fil-ġisem, inkluż ġewwa l-eritroċiti u ċ-ċelloli endoteljali. Għalhekk il-grupp staqsa liema mediċini approvati jistgħu joqtlu B. henselae wara li tidħol fil-fażi stazzjonarja. MIC baxxa kontra ċelloli li qed jikbru ma bassritx il-qtil fil-fażi stazzjonarja. Ir-rifampin kellu MIC baxxa ħafna iżda ftit qatel ċelloli stazzjonarji, filwaqt li komposti b'valuri MIC ogħla qatluhom sew. Qarrejja li jixtiequ metodu ġenerali għal dan it-tip ta' artiklu jsibuh fil-gwida għall-qari tar-riċerka dwar il-blu tal-metilen.

L-ewwel skrinjar: Li u kollegi, 2019

L-iskrinjar tal-fażi stazzjonarja tal-2019 f'Antibiotics uża razza waħda, B. henselae JK53, imkabbra f'mezz Schneider b'10 percent serum fetali bovin f'37 C b'5 percent CO2. Kulturi ta' jum wieħed kienu jikkonsistu l-aktar f'ċelloli mxerrda li kienu qed jinqasmu. Kulturi ta' ħamest ijiem, b'madwar 10 għall-qawwa ta' 8 unitajiet li jiffurmaw kolonji għal kull mL, tqiesu bħala fil-fażi stazzjonarja u kien fihom aggregati viżibbli.

L-analiżi użat SYBR Green I ma' jodur tal-propidju, ikkalibrata ma' taħlitiet ta' ċelloli ħajjin u ċelloli maqtula bl-isopropanol. Minħabba li l-blu tal-metilen għandu kulur qawwi, ir-riżultati promettenti ġew ikkonfermati bil-mikroskopija u mbagħad permezz tal-għadd ta' kolonji fuq agar bid-demm, il-kejl finali aktar strett.

Minn 1,581 mediċina approvata f'50 micromolar, il-blu tal-metilen ħalla vijabbiltà ta' 16 percent skont il-qarrej tal-pjanċi u 25 percent skont il-mikroskopija. Id-daptomycin kellu riżultat ta' 21 percent, diversi azoli kellhom bejn 22 u 27 percent, il-gentamicin 32 percent, l-erythromycin 66 percent, u ċ-ciprofloxacin 74 percent. Il-pyrvinium pamoate deher aktar qawwi fuq il-qarrej iżda ma setax jiġi evalwat bil-mikroskopija minħabba l-fluworexxenza tiegħu stess.

Kontra B. henselae li kienet qed tikber, il-MIC tal-blu tal-metilen kienet bejn 0.08 u 0.16 micrograms per mL. Kontra ċelloli stazzjonarji ta' ħamest ijiem f'5 micrograms per mL, l-għadd tal-kolonji niżel għal ebda kolonja li setgħet tinstab wara jum wieħed ta' espożizzjoni, riżultat li qabbel ma' dak tad-daptomycin u tal-pyrvinium pamoate fil-konċentrazzjonijiet ittestjati tagħhom. Test separat tal-qtil tul iż-żmien uża 10 micrograms per mL. Dawn huma livelli ta' espożizzjoni fil-laboratorju, mhux dożi, u l-artiklu jippreżentahom bħala tali. Valur ikkwotat tal-ogħla konċentrazzjoni fil-plażma umana qrib 3.9 micrograms per mL jidher fl-artiklu biss bħala kuntest ta' sfond. Il-ħarsa ġenerali lejn il-farmakokinetika tal-blu tal-metilen tispjega għaliex valur fil-plażma ma jistax jitqies bħala valur fit-tessuti.

Żewġ limiti huma espliċiti fl-artiklu. Ma kien hemm l-ebda mudell ta' bijofilm u l-ebda ttestjar ta' kombinazzjonijiet bil-blu tal-metilen. L-aggregati ta' ħamest ijiem kienu raggruppamenti f'kultura likwida stazzjonarja, mhux esperiment validat ta' bijofilm. L-awturi talbu studji fuq l-annimali, studji ta' kombinazzjonijiet, studji ta' bijofilm, u ttestjar fi speċijiet oħra ta' Bartonella.

Kombinazzjonijiet u ċelloli minn bijofilm: Zheng u kollegi, 2020

L-istudju ta' segwitu tal-2020 f'BMC Microbiology żamm l-istess razza u mezz iżda għadda għal kulturi stazzjonarji ta' sitt ijiem u żied żewġ affarijiet li kienu neqsin mill-ewwel artiklu: kombinazzjonijiet ta' żewġ mediċini u mudell ta' ċelloli minn bijofilm.

Għal mediċini waħedhom f'konċentrazzjoni uniformi ta' 5 micrograms per mL għal 24 siegħa, il-blu tal-metilen ħalla 3.2 darbiet 10 għall-qawwa ta' 4 unitajiet li jiffurmaw kolonji għal kull mL, meta mqabbel ma' kontroll qrib 2.8 darbiet 10 għall-qawwa ta' 10. Iċ-ciprofloxacin, il-gentamicin, u n-nitrofurantoin ħallew inqas kolonji fl-istess punt. Dan huwa differenti mir-riżultat tal-2019, fejn l-istess livell nominali ma ħalla ebda kolonja li setgħet tinstab wara jum wieħed. L-età, id-densità, u l-immaniġġjar tal-kulturi kienu differenti, għalhekk il-qtil seta' jiġi riprodott fid-direzzjoni tar-riżultat iżda mhux b'mod identiku fil-kobor tiegħu. Din il-bidla minn test għal ieħor hija raġuni waħda għaliex il-kontrolli standard tas-sikurezza u tal-interazzjonijiet jittrattaw il-qawwa fil-laboratorju bħala separata mill-effett kliniku.

L-iskrinjar tal-kombinazzjonijiet huwa l-aktar parti kkwotata. Kull komponent inżamm f'5 micrograms per mL. Kemm l-azithromycin mal-blu tal-metilen kif ukoll ir-rifampin mal-blu tal-metilen ma ħallew ebda kolonja tal-fażi stazzjonarja li setgħet tinstab wara 24 siegħa, bħalma għamlu ż-żewġ pari biċ-ciprofloxacin. Dawn kienu l-uniċi erba' pari minn 25 par ittestjat li taw dan ir-riżultat. Ma saret l-ebda analiżi formali tas-sinerġija, għalhekk it-terminu korrett huwa kombinazzjoni attiva taħt dawn il-kundizzjonijiet, mhux sinerġija pprovata.

L-esperiment tal-bijofilm ittestja ċelloli miġbura minn bijofilm żgħir fl-età li kien ġie mfarrak, mhux il-penetrazzjoni f'bijofilm matur intatt. Il-kulturi tkabbru għal ħamest ijiem, ġew dilwiti fi pjanċi bil-bjar għal ħamest ijiem oħra, ġew ikkonfermati permezz ta' tbajja' bil-vjola kristallina, u mbagħad ġew mibruxa qabel l-espożizzjoni għall-mediċini. F'5 micrograms per mL, bil-blu tal-metilen waħdu l-għadd niżel għal 2.3 darbiet 10 għall-qawwa ta' 2 sa jum 6, fost l-aħjar riżultati għal aġenti waħedhom, iżda mhux żero. Iż-żewġ kombinazzjonijiet bil-blu tal-metilen laħqu żero sa jum 6, bħalma għamlu ż-żewġ kombinazzjonijiet biċ-ciprofloxacin.

L-awturi enfasizzaw l-istess limiti li jinnota qarrej attent: bijofilm żgħir fl-età u mibrux minflok bijofilm antik intatt, konċentrazzjoni waħda konvenjenti għall-mediċini kollha minflok kull mediċina fl-ogħla livell realistiku tagħha stess, pari magħżula biss li kellhom l-azithromycin jew ir-rifampin bħala komponent komuni, razza waħda, ebda annimal, ebda pazjent. Ġew proposti studji sussegwenti bi tliet mediċini, iżda ma ġewx irrappurtati.

Tqabbil tad-disinn tal-istudji

It-tabella tiġbor il-punt ta' dan l-artiklu fil-qosor. Kollox fuq ix-xellug tal-aħħar kolonna huwa xogħol fuq kulturi. Xejn fiż-żewġ artikli ma jidħol fl-aħħar kolonna.

Bartonella mhijiex Borrelia

Iż-żewġ artikli jsemmu Borrelia burgdorferi, l-ispiroketi tal-marda ta' Lyme, għaliex l-analiżi biż-żebgħa ġiet minn xogħol preċedenti fuq il-fażi stazzjonarja ta' Borrelia fl-istess laboratorju, fejn il-blu tal-metilen u d-daptomycin ukoll taw riżultati promettenti. Dik l-istorja hija kuntest utli u sors komuni ta' żball.

L-ebda esperiment fiż-żewġ artikli dwar Bartonella ma jittestja Borrelia flimkien ma' Bartonella. L-organiżmi huma differenti, il-mezzi huma differenti, il-konċentrazzjonijiet huma differenti, u l-effett ipotetiku tal-blu tal-metilen fuq il-membrana f'Bartonella ġie ppreżentat bħala spekulazzjoni li teħtieġ aktar studju. Ir-riżultati m'għandhomx jiġu applikati minn speċi għal oħra, u l-ebda artiklu ma jappoġġja stqarrijiet ġenerali dwar il-parassiti. It-tqabbil tal-batterji persistenti ta' Borrelia u Bartonella jżomm iż-żewġ oqsma tal-letteratura separati għal din ir-raġuni.

Għaliex il-kulturi ma jsirux protokoll

L-interess fit-tiftix għal protokoll tal-blu tal-metilen għal Bartonella jinftiehem. Dawn l-artikli huma r-raġuni għaliex dik il-frażi għandha titqies bħala sinjal ta' twissija minflok lista tax-xiri.

L-ewwel nett, 5 micrograms per mL f'bir mhumiex preskrizzjoni. Ma hemm ebda informazzjoni marbuta magħhom dwar assorbiment, distribuzzjoni, rabta mal-proteini, penetrazzjoni ġewwa ċ-ċelloli, jew tollerabbiltà. L-awturi għażlu dan il-livell bħala medja approssimattiva tal-ogħla konċentrazzjonijiet tal-antibijotiċi u qalu li x-xogħol futur għandu juża kull mediċina fil-livell realistiku tagħha stess.

It-tieni, żero kolonji jfisser ebda kolonja taħt dawk il-kundizzjonijiet ta' kultivazzjoni fuq pjanċi, mhux tessut sterili. Batterji persistenti, batterji ġewwa ċ-ċelloli, u limiti tat-teħid tal-kampjuni kollha jinsabu barra l-pjanċa tal-agar.

It-tielet, kombinazzjonijiet li jisterilizzaw bir jistgħu jfallu jew jagħmlu ħsara fil-ġisem. L-azithromycin mal-blu tal-metilen u r-rifampin mal-blu tal-metilen huma pari tal-laboratorju f'livelli ta' espożizzjoni tal-laboratorju. Mingħajr farmakokinetika fl-annimali u data kkontrollata fil-bnedmin ma hemm ebda doża, ebda tul ta' żmien, u ebda proporzjon bejn il-benefiċċju u r-riskju. Kull min qed jiżen l-għażliet għandu jiddiskutihom ma' kliniku u jirrevedi meta l-użu tal-blu tal-metilen jeħtieġ superviżjoni medika qabel ma jasal għal xi konklużjoni minn data tad-dixxijiet.

Il-konklużjoni limitata li dawn l-artikli jappoġġjaw hija din: il-blu tal-metilen għandu attività riproduċibbli kontra B. henselae JK53 li mhijiex qed tikber in vitro, inkluż f'kombinazzjonijiet ta' żewġ mediċini fil-laboratorju, bl-aktar riżultati qawwija tal-kombinazzjonijiet u taċ-ċelloli minn bijofilm ġejjin mill-istudju tal-2020. Kull ħaġa oħra, inkluż jekk dik l-attività hijiex rilevanti għall-bartonellożi fil-bnedmin, għadha ma ġietx ittestjata.